微孔板法测定乳粉中叶酸含量的不确定度分析

目的:对微孔板法测定乳粉中叶酸含量的不确定度进行分析评估。方法:按GB 5009.211—2022中微孔板法测定婴儿配方乳粉中叶酸含量,依据JJF 1059.1—2012、CNAS-CL01-G003:2021和CNAS-GL05:2011等不确定度评定方法和指南对影响检测结果的各种试验因素进行分析、计算,得到合成标准不确定度及扩展不确定度。结果:扩展不确定度U 95=22.08μg/100 g(k=2),样品中叶酸含量为(282.33±22.08)μg/100 g。不确定度主要来源于接种微孔板过程、标准曲线拟合和测量重复性。结论:移液器的准确度和微生物因素对试验结果影响较大,需保证仪器质量并严格按照标准化流程操作以降低不确定度。

分枝杆菌液体培养与微孔板法分枝杆菌药敏试验对结核感染的检测效果分析

目的:分枝杆菌液体培养与微孔板法分枝杆菌药敏试验对结核感染的检测效果。方法:选取2022年5月—2023年5月贵阳市公共卫生救治中心收治的结核感染患者痰标本52例为观察对象,对所有标本均采取分枝杆菌液体培养与传统固体罗氏培养法,采用微孔板法完成分枝杆菌药敏试验,分析微孔板法药敏结果检测效能。结果:微孔板法药敏法对乙胺丁醇特异性高于传统比例法药敏法,差异有统计学意义(P=0.022);两种药敏试验方法对利福平、异烟肼及链霉素的敏感性、特异性、准确性,对乙胺丁醇的敏感性、准确性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:微孔板法分枝杆菌药敏试验可为多种药物进行药敏试验,为临床药物疗效提供重要参考依据,有助于结核病防控。

微孔板法检测番茄灰霉病菌对杀菌剂的敏感性

【目的】利用酶标仪建立番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)对杀菌剂敏感性的快速、高效测定方法。【方法】以OD增加值作为评价指标,确立微孔板法检测灰霉病菌敏感性的测试条件,并对啶酰菌胺、嘧菌酯、乙霉威、甲基硫菌灵、异菌脲、苯醚甲环唑6种常用杀菌剂对灰霉病菌孢子萌发和菌丝生长的抑制效果进行评价,将结果与孢子萌发法和菌丝生长速率法所得结论进行比对。【结果】微孔板法测定条件为:酶标仪测定波长为630nm,测试培养基为灰霉分生孢子萌发刺激液(PDE),孢子悬浮液浓度为8×105—1.6×106个/mL,培养条件为21℃黑暗条件下振荡(150 r/min),孔中加入孢子悬浮液与药剂培养24 h作为药剂对孢子萌发抑制作用的测试时间,孔中孢子悬浮液培养12 h后再加入药剂培养12—24 h为药剂对菌丝生长抑制作用的测试时间。测试结果与孢子萌发法和菌丝生长速率法所得结论基本一致。用该方法测得啶酰菌胺对山东省3个地区57株灰霉病菌分生孢子萌发及菌丝生长的EC50均值分别为1.9311和5.6488μg.mL-1。【结论】微孔板法综合了孢子萌发法和菌丝生长速率法的优势,测试速度快、结果准确、重现性好,具有良好的实用性。

激光共聚焦显微镜和改良微孔板法观察细菌生物膜形成

目的利用激光共聚焦显微镜(CLSM)和改良微孔板法观察细菌生物膜形成,探索细菌生物膜检测的有效手段。方法烧伤患者植入性导管分离的金葡菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌,经体外分别培育24、48、72h和5d后,先后用CLSM和改良微孔板法,观察细菌生物膜形成和黏附的过程与特点。结果鲍曼不动杆菌、金葡菌、铜绿假单胞菌形成生物膜的时间、生物膜的形态与特点都有显著的差异。结论 CLSM和改良微孔板法是观察和检测细菌生物膜形成过程的有效手段。

自动加样快速微孔板法在疑难配血中的应用

目的 在疑难配血中建立一种自动化、快速、准确的供血者标本血型抗原筛查方法.方法 使用自动加样快速微孔板法对188个供血者全血标本进行C、e、M、Fya、Jka抗原检测,同时使用手工试管法进行平行实验;记录并对比上述两种方法筛查总过程使用的时间,筛查出的供者标本数.用微板法和试管法对抗-C、抗-e、抗-M、抗-Fya、抗-Jka试剂进行抗体效价测定.结果 微孔板法、试管法均筛查出相同血型抗原阴性供者,微孔板筛查所需要的总时间较短.效价测定显示微板法灵敏度与手工试管法相同.结论 微孔板法在疑难配血中筛查特定抗原阴性的供者,具有快速、准确的效果.

刃天青微孔板法在本科实验教学中的应用

刃天青微孔板法是一种新近开发的快速测定抑菌活性的方法,已广泛应用于杀菌剂的高通量筛选及活性评价。文章以代表性病原真菌灰霉病菌为供试菌,应用刃天青微孔板法,设计了嘧菌酯杀菌剂对灰霉病菌的抑菌活性测定实验。与传统菌丝生长速率法相比,该方法具有样品消耗少、观察便捷、反应灵敏等优点,可用于杀菌剂活性定量测定实验,也可与农药化学、天然产物化学的杀菌剂合成或提取分离相关实验相结合,设计探究式实验,更好地培养学生的科研创新思维和综合实践能力,提高教学质量。

结核杆菌(TB)PCR微孔板法诊断试剂盒的临床应用

目的探讨ＴＢ－ＰＣＲ微孔板法诊断试剂盒的临床应用价值。方法以痰厚涂片法、结核菌培养法和 ＴＢ－ＰＣＲ微孔板法同步检测临床痰标本１７５份（结核病人标本１２０份，非结核病人标本５５份），比较其敏感性和特异性。结果三种方法的敏感性分别为３５％，６０．８％，７１．７％，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；但三者的特异性相近。结论上海复星公司生产的ＴＢ－ＰＣＲ微孔板法诊断试剂盒具有临床推广价值。

微孔板法与传统方法对比测定花菇、猴头菇和茶树菇的抗氧化活性

目的对比微孔板法和传统方法分光光度法测定花菇、猴头菇和茶树菇体外抗氧化活性的差异。方法超声波法提取3种菇的水提物和醇提物,以VC为对照品,均与底物1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)反应,其中微孔板法为微孔板结合酶标仪于517 nm波长处快速测定菇类提取物的DPPH·抑制率,传统分光光度法于紫外-可见分光光度计517 nm波长处检测。对2种方法的测定结果进行曲线拟合,并进行方法重复性对比。结果 2种方法抗氧化结果 IC50基本一致,曲线拟合度较好,差异无统计学意义(P>0.05);其中对照品VC的微孔板法拟合模型公式为y=23.872Lnx+152.526,分光光度法模型公式为y=22.469Lnx+146.044,2种方法的模型中系数和常数经t检验差异有统计学意义(P<0.01),提示重叠率高。分别对3种样品的提取液进行曲线拟合,结果显示3种菇提取液2种抗氧化活性测定结果的曲线拟合度均较好,差异有统计学意义(P<0.05)。实验中微孔板法试剂用量较小,精密度更高。结论 2种菇类体外抗氧化活性测定方法实验结果一致,差异不明显,微孔板法在试剂用量和精密度方面略具优势。

微孔板法筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的条件优化

研究以微孔板检测法为基础,对α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制能力进行检测,以达到有效筛选适宜浓度的α-葡萄糖苷酶抑制剂用于制备降血糖类功能性食品的目的。试验针对酶浓度、检测波长、蔗糖底物浓度及酶反应时间进行反应条件优化。结果表明：试验中所用批次酶的最适浓度范围为2.0-3.0 mg/mL;在405,450,492,520,630nm 5种波长条件下,520nm和492nm波长检测信号最强;蔗糖底物浓度的合适范围应为20-40mmol/L;适宜的酶反应时间范围为20-30min。

饮用水中亚硝酸盐高通量检测微孔板法的研究

亚硝酸盐与间苯二胺在强酸性条件下发生重氮化偶联反应,生成橙红色偶联产物环偶氮亚氨基苯。本研究基于该原理,以微孔板为载体,确定最佳测定波长,通过单因素实验、正交实验优化工作条件,建立一种高通量检测饮用水中亚硝酸盐含量的方法。结果表明,最佳测定波长为451 nm,最佳工作条件:盐酸浓度为0.4 mol/L、间苯二胺浓度为30 g/L、反应时间为10 min。该方法的检出限为0.017 mg/L,线性范围为0~5 mg/L,线性相关系数r为0.9997,空白加标回收率在95.24%~103.98%之间,变异系数小于5%。该方法快速、灵敏,抗干扰能力强,操作简便,可进行高通量筛选,用于饮用水等食品样品中亚硝酸盐残留量的定量测定。

微孔板法检测结核分枝杆菌对利福平的药物敏感性分析

目的分析微孔板法检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平(RIF)的药物敏感性。方法选取2017年6月~2019年6月本院收治的40例肺结核患者,分别对其痰标本中的MTB进行微孔板法检测与罗氏比例法检测,分离培养后行药敏试验。并且以罗氏比例法检测为"金标准",分析微孔板法检测在MTB对RIF的药物敏感性分析中的检测价值,并统计该检测法中RIF的最低抑茵浓度(MIC),判断其界值。结果微孔板法检测MTB临床分离出来的菌株最佳耐药阈值在0.5ug/ml;微孔板检测法MTB对RIF的药物敏感性的准确性为97.50%(39/40)、灵敏度为97.05%(33/34)、特异度为100%(6/6)。结论微孔板检测法检测的准确性、灵敏度、特异度均高,检测价值较好。

分枝杆菌液体培养和微孔板法分枝杆菌药敏实验在结核感染中的应用

目的:探究分枝杆菌液体培养和微孔板法分枝杆菌药敏实验在结核感染中的应用价值。方法:选取医院2021年6~8月肺结核门诊疑似和确诊后复发结核感染患者痰标本共60例,所有标本分别予以分枝杆菌液体培养与传统固体罗氏培养法,并采用微孔板法进行分枝杆菌药敏实验,对比分枝杆菌培养报阳时间、阳性符合率,并分析微孔板法药敏结果检测效能。结果:分枝杆菌液体培养法对疑似新发病例、复诊患者报阳天数均短于传统固体罗氏培养法;疑似新发患者及复诊患者分枝杆菌液体培养阳性率高于传统固体罗氏培养法,差异有统计学意义(P<0.05);微孔板法药敏结果显示,利福平耐药16个,异烟肼耐药14个,阿米卡星耐药1个,左氧沙星耐药2个。微孔板法药敏法对阿米卡星耐药检测特异性高于传统比例法药敏法,差异显著(P<0.05)。结论:分枝杆菌液体培养能够缩短检测周期,提高阳性检出率,微孔板法分枝杆菌药敏试验灵敏度、特异性高。微孔板法分枝杆菌药物试验可以提供多种药物敏感试验,且能检测到最小抑菌浓度,可以为临床监测药物疗效以及精准治疗提供客观依据,助力结核病耐药防控。

聚凝胺-微孔板法不规则抗体筛选方法的建立

目的建立聚凝胺-微孔板法筛查献血者不规则抗体的自动化检测方法。方法通过对红细胞浓度、聚凝胺试剂中各试剂量的加入比例、CUTOFF值的选择等,确定筛查方法的最佳参数与过程。结果确定的试验方法经实际工作检测,准确率高、灵敏度好,并实现了操作的自动化、标准化与批量化。结论聚凝胺-微孔板法适用于血站系统对献血者不规则抗体的大批量筛查。

微孔板法检测痰标本结核分枝杆菌及耐药多因素分析

目的:评价微孔板法用于检测痰标本结核分枝杆菌(MTB)耐药的临床价值及探讨结核分枝杆菌耐药的影响因素。方法:采用MGIT960快速药敏法(MGIT法)和微孔板法对298例肺结核患者痰标本中的MTB进行药敏试验,并对其耐药多因素进行Logistic回归分析。结果:298例痰液标本中有人结核分枝杆菌293例,牛结核分枝杆菌5例,对比差异无统计学意义(P>0.05)。与MGIT法测定结果比较,微孔板法检测利福平耐药性的敏感度为95.2%,特异度为97.4%;异烟肼耐药性的敏感度为91.8%,特异度为92.3%,Kappa值分别为0.689及0.653。多因素Logistic回归分析结果显示,吸烟史、诊断延误与合并HIV对MTB耐药性影响显著(P<0.05)。结论:微孔板法检测痰标本中MTB耐药性与MGIT960快速药敏法有较高一致性。

微孔板法测定功能性饮料中的维生素B_(12)

通过样品处理比较试验、色素影响评价、回收率试验和重复性试验，得到了微孔板法测定功能性饮料中维生素B12的有效方法。经测定，该方法测定限可达到0．005μg/L，1．0、2．0、20．0μg/L三个梯度水平的加标回收率为94．4％～101．8％，实际样品测定中相对标准偏差为0．35％～4．34％（n＝6），灵敏度和重复性很高，可用于测定功能性饮料中微量的维生素B12。

微孔板法全自动血型仪性能确认及参数优化

目的:通过对微孔板法全自动血型仪性能确认进行探讨,对仪器的参数进行优化,提高血型检测的准确性。方法:采用试管法,分别配制弱A、弱B及弱D抗原,检测正定型和Rh(D)血型;筛选滴度为1:32的人源抗-A、抗-B,用生理盐水稀释配成相应的弱抗体,检测反定型。用单克隆Ig-M抗D进行稀释,模拟血型弱抗体标本。上述标本用微孔板法全自动血型仪进行检测,对设备参数作出评估和优化。结果:通过制备弱抗原和弱抗体的对比实验,调整了正定型及Rh(D)血型检测参数,血型可疑率由调整前0.09%下降到调整后0.009%,有显著性差异(P<0.01)结论:设备参数经调整后,能有效提高血型检测准确性和效率,该方法也适用于同类微孔板法全自动血型仪性能确认。

微孔板杂交法测定椰毒假单胞酵米面亚种的DNA-DNA同源性

采用一种新的DNA DNA杂交方法—微孔板法对椰毒假单胞菌酵米面亚种及伯克霍尔德氏菌属中 1 1个种的DNA DNA同源性进行测定。结果发现椰毒假单胞菌酵米面亚种与唐菖蒲伯克霍尔德氏菌及椰毒伯克霍尔德氏菌的DNA DNA同源性均大于 75% ,建议这 3个种应合并为同一个种 ,命名为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌 (Burkholderiagladioli)。

微孔板法评价碘伏的消毒效果研究

目的利用微孔板建立微量试验法检测碘伏的抑菌和杀菌效果。方法用微孔板法鉴定中和剂对碘伏的中和效果;用微孔板悬液定量杀菌试验检测碘伏对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的杀灭效果;用微量肉汤法检测碘伏对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的最小抑菌浓度,平板划线后计算最小杀菌浓度。结果微孔板悬液定量杀灭实验显示,310~2 500 mg/L的碘伏随作用时间(30 s^5 min)延长,对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的杀灭作用逐渐增强。碘伏对两种细菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为625 mg/L。结论微孔板法可用于检测碘伏对常见细菌的抑菌和杀菌效果。