微孔比色法在猪胰腺PLA_2制备中的应用

微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物，在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应，并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值．同时应用此法及滴定法检测酶活力，从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ），对热、酸稳定，活性依赖Ｃａ２＋的ＰＬＡ２．两种方法检测结果具有可比性，而微孔比色法同时可测多个样品，有节约样品，灵敏度较高等优点．微孔比色法特别适用于大量的样品测定，如拮抗剂筛选、临床样品及制备酶时层析级分的检测等．

9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量微孔板蒽酮-硫酸检测方法的建立及验证

目的建立微孔板蒽酮-硫酸法检测9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量的检测方法,并对其进行验证和初步应用。方法通过对蒽酮-硫酸方法的改进,建立检测9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量稳定可靠的微孔板蒽酮-硫酸法。分别对蒽酮-硫酸法中硫酸溶液浓度、加热时间进行优化,并对建立的方法进行特异性、线性、精密度及准确度的验证。结果最佳硫酸溶液比例为6∶1（浓硫酸∶水）,最佳加热时间为10 min。在检测9V型肺炎球菌多糖、多糖衍生物及多糖蛋白结合物中多糖含量时,此方法特异性强;在20~120μg/m L范围内,标准曲线线性良好（r2〉0.995）;实验内及实验间均具有良好的精密度（CV值分别为2.92%~3.32%和3.10%~4.06%）;准确度试验中3个质量浓度的回收率均在96.17%~106.63%之间。结论微孔板蒽酮-硫酸法可被用来有效、准确、稳定地检测9V型肺炎球菌多糖、多糖衍生物及多糖蛋白结合物中多糖的含量,该方法较传统蒽酮-硫酸法操作简便快捷,节约样品、试剂等材料,非常适用于相关的疫苗生产过程中的质量控制。

甘草、桔梗总皂苷对体外磷脂酶A_2活性的影响

目的:建立一种体外磷脂酶A2活性测定的方法,并观察甘草总皂苷、桔梗总皂苷体外对磷脂酶A2活性的影响。方法:以指示剂法为基础,将反应转移至96孔微孔板,用酶标仪在492nm处测定吸收值,以判定药物对PLA2活性的影响。结果:在一定范围内,酶浓度、反应时间与pH值呈良好线性关系。甘草皂苷和桔梗皂苷对PLA2活性有明显抑制作用,其IC50分别是:0.784mg/m l和1.824mg/m。

棉酚抗生育新机制——对磷脂酶A_2活力的抑制作用(英文)

采用微孔比色法及荧光分析法 ,研究抗男性生育化合物棉酚与猪胰腺磷脂酶A2 (phospho lipaseA2 ,PLA2 ,EC3 1 1 4 )温育并透析前后对酶活力及荧光的影响 .结果表明 ,棉酚与PLA2 不可逆地结合明显地降低了PLA2 活力及荧光强度 .棉酚对酶活力抑制作用的IC50 为 35μmol L ;当其浓度达到 80 μmol L时 ,能够完全抑制PLA2 ( 4 11μmol L)对合成底物 2 硫代十六酰乙基磷酸胆碱(HEPC ,0 .2 5mmol L)的水解作用 .PLA2 的最大激发波长与发射波长分别为 2 75nm ,34 3nm ,荧光强度与酶浓度呈良好的线性关系 .棉酚对PLA2 的荧光具有较强的淬灭作用 .由于PLA2 与男性生育密切相关 ,棉酚对PLA2