人分化抑制因子3基因靶向微小分子RNA表达载体的构建及筛选

目的人分化抑制因子3(inhibitor of differentination 3,Id3)基因在A549细胞中的外源性表达能抑制细胞生长并诱导细胞凋亡。文中旨在构建靶向人Id3基因的微小分子RNA(miRNA)表达载体,观察miRNA对A549细胞中Id3表达的下调作用,为进一步探讨Id3基因在A549细胞生长调控中的作用机制提供一定实验依据。方法依据miRNA设计原则,针对人Id3基因的mRNA序列,设计并合成编码miRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体中,构建含靶向人Id3基因的miRNA表达质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3),DNA测序验证后,采用Lipofectamine2000TM脂质体转染技术将该质粒导入A549细胞。荧光倒置显微镜下观察miRNA干扰质粒转染A549细胞后EGFP的表达情况,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测miRNA干扰后Id3mRNA及蛋白水平的表达。结果DNA测序表明重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3构建正确,将其成功导入A549细胞后,在Id3mRNA水平和蛋白表达水平均有不同程度的抑制作用。结论成功构建了针对人Id3基因的4组pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Id3miRNA表达载体,其中,SRId3-1干扰组在mRNA水平和蛋白表达水平均能有效抑制A549细胞Id3的表达。

微小分子RNA与慢性髓性白血病关系的研究进展

慢性髓性白血病(CML)是一种常见的血液恶性肿瘤,尽管酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)极大地改善了CML患者的预后,但目前仍然存在许多缺陷,主要表现在:TKI耐药、TKI不良反应导致的患者不耐受等。微小分子RNA(miRNA)是一类由内源性基因编码的,长度约为19~24个核苷酸的非编码单链小分子RNA,与多种肿瘤的发生、发展和预后密切相关。近年来miRNA与CML的研究不断增多,文章就miR-139-5p、miR-320a、miR-362-5p、miR-126、miR-199a/b-5p、miR-451等miRNAs与CML的关系进行综述。

MicroRNA在胶质瘤形成及靶向治疗中的作用

Micro RNA(mi RNA)即小分子非编码RNA作为内源性干扰RNA的代表,能够显著改变靶蛋白表达,其在脑组织生理功能及神经母细胞瘤(GBM)发生、发展中的作用已引起广泛关注,并引起针对其治疗潜力及放化疗增敏方面的大量研究。本综述主要针对mi RNA在胶质瘤发生中的多重作用以及对病人的生存预后可能存在的临床意义进行讨论,并进一步阐述所选mi RNA在GBM以及其他中枢神经系统肿瘤临床研究中,作为治疗靶位的潜在应用价值。

miR-1和AMI后室性心律失常的相关性研究

目的探讨临床患者循环微小RNA分子-1（miR-1）与AMI后心肌缺血程度和急性期室性心律失常的相关性。方法入选符合2012年全球统-心肌梗死定义、均按照2013年ACCF／AHA急性ST段抬高心肌梗死（STsegmentelevationmyocardialinfarction，STEMI）指南统-临床路径处理并实施经皮冠状动脉腔内血管成形术（percutaneoustransluminalcoronaryangioplasty，PTCA）再灌注治疗的STEMI患者，按照急性期有无室性心律失常发生分为两组，对两组病例在发病2h和6h且PTCA术前分别采集血液标本，采用qPCR技术检测miR-1表达水平。同时测量QTC离散度，进行ACC／AHA冠脉造影评分，分析比较两组miR-1表达水平、QTC离散度和ACC／AHA冠脉造影评分的相关性和差异。结果共入选21例STEMI患者，其中室性心律失常组5例，无室性心律失常组16例，两组临床特征比较差异无统计学意义（P〈0．05）。两组miR-1相对表达量、QTc离散度及ACC／AHA冠脉评分之间存在明显正相关性（P〈0．01）；室性心律失常组miR-1表达水平明显高于无室性心律失常组（P〈0．01）；室性心律失常组QTC离散度明显大于无室性心律失常组（P〈0．01）；室性心律失常组ACC／AHA冠脉评分明显高于无室性心律失常组（P〈0．01）。结论miR-1与AMI后心肌缺血程度和急性期室性心律失常间存在明显正相关。

基因调控在脓毒症患者中的应用

目前，脓毒症发病率高，临床上缺乏快速有效地救治手段，已经成为我国重症监护病房（ICU）的主要死亡原因之一。而近年来，对于基因调控研究范围也在逐渐扩大，随着对于脓毒症发病机制的进一步认识，人们开始从分子水平上探索治疗脓毒症的新方法。核转录因子-κB（NF-κB）是重要的转录调控因子，被激活后可以调节炎性介质的表达，并且与脓毒症肺损伤关系密切。微小RNA分子（miRNA）主要在转录后水平发挥作用，miRNA很早以前就被发现，并在近十年的研究中取得丰硕的成果，尤其是在机体免疫调节及脓毒症等感染相关性疾病等研究方面。另外，加工修饰后的蛋白质也可以调节脓毒症的炎症反应。但由于蛋白质加工修饰的方式及位点不同，因此，对于炎症反应发挥的调控作用也不尽相同。本文对于脓毒症基因调控的研究热点及其作用机制做一综述，为研究脓毒症治疗提供新的方向。

miRNA-21在子宫颈鳞癌组织中表达的初步研究

目的探讨微小分子RNA(microRNA-21,miR-21)在宫颈癌患者组织中的表达情况。方法选择宫颈鳞癌20例作为宫颈癌组,其中12例HPV16阳性,8例HPV16阴性;正常宫颈16例作为对照组,采用实时定量PCR方法检测miR-21在各组中的表达情况。结果 MiR-21在宫颈癌和对照组中的相对表达量为4.019±0.002;MiR-21在HPV16阳性宫颈癌组和阴性组的相对表达量分别为2.376±0.034和2.002±0.024,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-21在宫颈癌组织中呈高表达,可能与宫颈癌发生、发展有关。

非编码RNA作为疾病诊断标志物

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是不具备编码蛋白质功能的基因组转录产物。研究逐步发现,ncRNA的表达失调与人类疾病的发生密切相关。由于ncRNA表达失调具有组织特异性,同时,在人类组织和体液中可被便捷、稳定地检测,许多研究开始关注ncRNA作为临床疾病诊断标志物的应用潜能。现主要围绕微小分子RNA(miRNA)和长非编码RNA(lncRNA)在恶性肿瘤、自身免疫性疾病及神经系统疾病诊断中的作用进行综述;同时,也从ncRNA失调与疾病发生的相互关系的角度展示了ncRNA相较其他生物分子作为疾病诊断标志物的优势。

环状RNA的研究进展

环状RNA(circular RNA,circ RNA)是广泛存在于各种生物体中一类区别于传统线性RNA的新型形式,是特殊的内源性RNA分子,并具有调控基因表达的作用。circ RNA首次在RNA病毒中被发现。近年来,研究人员在人、鼠、线虫、植物、古生菌生物体内发现存在大量circ RNA。在真核生物体中,大部分circ RNA是由外显子构成,富集在胞浆中,并具有牢固的环状结构,大量存在于真核转录组中,具有良好的物种保守性以及组织特异性,不易被核酸酶裂解。研究发现,circ RNA可作为一类新型的竞争性内源RNA分子(competing endogenous RNA,ce RNA)调节物,发挥RNA海绵功能,竞争性抑制micro RNA(mi RNA)的表达,阻断mi RNA对其靶基因表达的抑制作用。目前发现,circ RNA在肿瘤、阿兹海默症等疾病的发生上起重要作用,其作为新型临床诊断标记物具有明显的优势。本文就circ RNA的研究进展作一综述。

microRNA在肺纤维化中的作用

肺纤维化是机体在应对各种因素引发的肺损伤时发生的修复功能失调，造成肺间质损伤、成纤维化及丧失弹性，并以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质沉积为病理组织学特征的一类难治性疾病。近十年来微小分子RNA显露出其在器官表型调节中的关键作用，在肺纤维化的作用受到关注，有望成为肺纤维化诊疗潜在新靶点。

胃肠胰神经内分泌肿瘤循环生物标记物研究进展

胃肠胰神经内分泌肿瘤（GEP-NEN）是一类少见肿瘤，近年报道的发病率在不断上升。由于大多数GEP-NEN临床表现出现较晚以及常规肿瘤标记物在GEP-NEN中的局限性，约50%的患者在诊断时肿瘤已为晚期。因此，寻找能对GEP-NEN早期诊断以及准确评价肿瘤生物学行为的循环生物标记物十分重要。本文概述了用于GEP-NEN诊断及疗效评估的循环生物标记物的研究进展。传统循环生物标记物包括特异性循环生物标记物和非特异性循环生物标记物，其中非特异性循环生物标记物包括嗜铬素A（CgA）、胰抑素（PST）、嗜铬素B（CgB）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胰多肽（PP）。新型生物标记物包括循环肿瘤细胞（CTC）和微小分子RNA（miRNA）等，其中NETest可能是一种具有较好临床应用前景的生物标记物。但新型生物标记物广泛应用于临床仍有较长的路要走。