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人组织型纤溶酶原激活剂突变体微小基因的构建 被引量:3
1
作者 谭晓红 周江 +3 位作者 陈红星 邓继先 杨晓 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2001年第1期9-11,共3页
tPA基因全长约 36kb ,至少由 13个内含子分隔为 14个外显子。根据tPA的第一、二外显子的编码情况 ,考虑建立从第二至第六外显子序列在内的tPA微小基因。
关键词 组织型纤维酶原激活剂 测序 微小基因 突变体
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微小基因疫苗抗肿瘤免疫治疗策略的设计与评价
2
作者 李煜 《国外医学(肿瘤学分册)》 2002年第2期92-94,共3页
目前对抗原肽微小基因的研究集中在单表位疫苗上 。
关键词 肿瘤 免疫治疗 微小基因疫苗 抗肿瘤免疫治疗 设计 评价
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环状RNA ACAP2调节微小RNA-421与B细胞易位基因2轴对心肌梗死大鼠心肌损伤的影响
3
作者 黎姗姗 许文 +2 位作者 杨熙 涂琳 周海燕 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期688-693,共6页
目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、... 目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circACAP2组、pcDNA3.1-circACAP2+模拟物(mimic)NC组、pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,每组各10只。将缺氧H9c2细胞置于24孔板中,瞬时转染细胞,分为缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+mimic NC组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,另取正常培养的H9c2细胞作为对照组。检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌梗死情况、心肌组织病理变化、circACAP2、miR-421、BTG2 mRNA表达情况、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、H9c2细胞活力和凋亡、心肌组织BTG2蛋白表达、H9c2细胞BTG2蛋白表达。结果MI组circACAP2、BTG2 mRNA表达高于假手术组(1.84±0.21 vs 1.00±0.10,1.68±0.17 vs 1.00±0.10),miR-421表达低于假手术组(0.49±0.05 vs 1.00±0.11,P<0.05);与假手术组比较,MI组梗死面积、CK-MB、LDH活性升高,LVFS、LVEF降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circACAP2组心肌损伤减轻,LVFS、LVEF升高,梗死面积、CK-MB、LDH活性降低(P<0.05);与缺氧+si-NC组比较,缺氧+si-circACAP2组细胞活力升高,凋亡率、CK-MB和LDH活性降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-circACAP2组心肌损伤加重,LVFS、LVEF降低,梗死面积、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组细胞活力降低,凋亡率、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05)。结论circACAP2在MI大鼠和H9c2细胞中表达上调,沉默circACAP2可能通过调节miR-421/BTG2轴改善心脏功能,减少心肌损伤,提高心肌细胞活力。 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 心肌损伤 微小RNA-421/B细胞易位基因2轴 环状RNA ACAP2 心肌梗死大鼠
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广西壮族人群微小RNA-30基因多态性分布特征及其与血脂水平的关系
4
作者 罗艳萍 刘潮 +3 位作者 谷嬉嬉 陈健明 蓝艳 韦叶生 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期400-404,共5页
目的 探讨微小RNA(miR)-30基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs1192037A/T在广西壮族人群中的分布特点,比较其与其他人群的多态性差异,并统计分析不同基因型的常见血脂检测项目水平。方法 采用SNPscan技术检测236例广西壮族人群志愿者rs11920... 目的 探讨微小RNA(miR)-30基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs1192037A/T在广西壮族人群中的分布特点,比较其与其他人群的多态性差异,并统计分析不同基因型的常见血脂检测项目水平。方法 采用SNPscan技术检测236例广西壮族人群志愿者rs1192037A/T位点基因型,分析其基因型和等位基因频率在不同性别和组间的分布差异,用罗氏全自动生化仪检测研究对象的常见血脂水平。结果 rs1192037A/T存在AA、AT和TT 3种基因型,其分布频率分别为11.0%、38.6%和50.4%;rs1192037A/T的基因型和等位基因频率在不同性别间差异均无统计学意义(P>0.05);与人类基因组计划(HapMap)公布的欧洲人、日本人、非洲人、印第安人和墨西哥人分型数据相比较的SNP分型数据相比,其差异均具有统计学意义(P<0.05);而与日本人和北京汉族人相比,其差异无统计学意义(P>0.05)。rs1192037 A/T 3种基因型间TG的差异有统计学意义(P<0.05),且携带AT和TT基因型人群TG水平显著高于携带AA基因型人群。结论 广西壮族人群miR-30基因rs1192037多态性在不同人群间存在不同程度差异;rs1192037A/T多态性与TG水平高低有关。 展开更多
关键词 微小RNA-30基因 基因多态性 广西人群 血脂 SNPscan技术 成人
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CMV与T7启动子对仙台病毒微小基因组拯救效率的比较 被引量:8
5
作者 魏国超 田文洪 +5 位作者 王刚 柳云帆 尉迟捷 董小岩 凌虹 吴小兵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期237-245,共9页
构建一种以分泌型荧光素酶基因(Gluc)作为报告基因的仙台病毒BB1株微小基因组质粒,比较了CMV启动子与T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率。首先设计并合成锤头状核酶序列,仙台病毒trailer、L基因非编码区、N基因非编码区和leader... 构建一种以分泌型荧光素酶基因(Gluc)作为报告基因的仙台病毒BB1株微小基因组质粒,比较了CMV启动子与T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率。首先设计并合成锤头状核酶序列,仙台病毒trailer、L基因非编码区、N基因非编码区和leader序列以及丁型肝炎病毒核酶序列,插入含有CMV和T7双启动子的质粒pVAX1中,获得仙台微小基因组的通用型载体pVAX-miniSeV。将Gluc基因插入pVAX-miniSeV中,分别获得正向插入的仙台病毒微小基因组载体pVAX-miniSeV-Gluc(+)和反向插入的pVAX-miniSeV-Gluc(-)。用pVAX-miniSeV-Gluc(+)转染BHK21细胞能在上清中检测到高水平的Gluc活性,表明其中的CMV启动子具有正常转录功能。将pVAX-miniSeVGluc(-)和仙台病毒N、P、L蛋白表达质粒共转染BSR T7/5细胞(稳定表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞)检测到Gluc的高效表达,表明pVAX-miniSeV-Gluc(-)能够被有效拯救;但在BHK-21细胞中却未检测到Gluc的有效表达,提示该载体中的CMV启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率可能没有明显作用。为了进一步了解CMV与T7启动子各自对于仙台病毒微小基因组拯救的作用,本研究又构建了单独含有CMV或T7启动子的仙台病毒微小基因组载体pCMV-miniSeV-Gluc(-)和pT7-miniSeV-Gluc(-)。将这两种载体和仙台病毒N、P、L蛋白表达质粒分别共转染BSR T7/5细胞,结果pT7-miniSeV-Gluc(-)共转染组检测到了Gluc的高效表达,而pCMV-miniSeV-Gluc(-)共转染组未检测到,证实了通用型载体pVAX-miniSeV中仅T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救起了关键作用,而CMV启动子作用不明显。本研究成功构建了一种通用型双启动子仙台病毒微小基因组载体pVAX-miniSeV,并证明了T7启动子系统对仙台病毒微小基因组拯救的关键作用。本研究为下一步构建仙台病毒全基因感染性克隆打下了基础。 展开更多
关键词 T7启动子 CMV启动子 仙台病毒 微小基因
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含hFⅨ微小基因的杂合型逆转录病毒载体在小鼠成肌细胞中高效表达的研究 被引量:1
6
作者 侯军 王健民 闵碧荷 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期121-124,共4页
目的 探讨不同载体结构在成肌细胞中表达hFⅨ蛋白的效果 ,优化载体结构 ,为血友病B基因治疗提供实验依据。方法 制备带有两拷贝肌酸激酶增强子 (Me2 )和内含子m2 的三种逆转录病毒载体pLMe2Ⅸm2 SN (Me2正向插入 3′LTR的增强子区域 )... 目的 探讨不同载体结构在成肌细胞中表达hFⅨ蛋白的效果 ,优化载体结构 ,为血友病B基因治疗提供实验依据。方法 制备带有两拷贝肌酸激酶增强子 (Me2 )和内含子m2 的三种逆转录病毒载体pLMe2Ⅸm2 SN (Me2正向插入 3′LTR的增强子区域 )、pLMe2Ⅸm2 SN(Me2反向插入 )及pLⅨm2 SN ,筛选高效表达hFⅨ的PA317细胞克隆 ,稳定转染成肌细胞 ,分别对单克隆及混合克隆的上清和细胞进行ELISA、PCR等检测及鉴定 ,并与pLⅨSN载体相比较。结果 不同逆转录病毒载体转染靶细胞后hFⅨ表达水平依次为LMe2Ⅸm2 SN(正向 ) >LMe2Ⅸm2 SN(反向 ) >LⅨm2 SN >LⅨSN ;增强子方向不同的两个载体表达水平差异有显著性 ,正向插入者蛋白表达量较反向插入者高 ;靶细胞中反向插入的Me2在 5′LTR中有不同程度的缺失 ,其方向未发生变化。结论 选择组织特异性增强子及优化FⅨ微小基因结构是提高表达水平的有效手段 。 展开更多
关键词 血友病B 成肌细胞 因子Ⅸ 基因治疗 hFⅨ微小基因 逆转录病毒载体
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人血清白蛋白微小基因的构建
7
作者 张红梅 蒋小玲 +6 位作者 王火生 李丽雄 徐六妹 林萍 李美忠 王敏 周伯平 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期461-462,共2页
人血清白蛋白(Alb)是人血浆中的主要蛋白质成分,由肝脏合成后分泌到血液中,具有运输脂类物质、维持血浆渗透压和增强机体免疫力等多种生物功能。临床上广泛应用,几乎全部来源于人血,由于血源受限及血液中可能存在肝炎病毒、人类... 人血清白蛋白(Alb)是人血浆中的主要蛋白质成分,由肝脏合成后分泌到血液中,具有运输脂类物质、维持血浆渗透压和增强机体免疫力等多种生物功能。临床上广泛应用,几乎全部来源于人血,由于血源受限及血液中可能存在肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等各类病原的污染,限制了Alb的临床应用。用基因工程技术生产重组人血清白蛋白是有发展前景的。因此构建人血清白蛋白的微小基因,为利用乳腺生物反应器生产A1b打下基础。 展开更多
关键词 白蛋白类 微小基因
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人微小抗肌萎缩蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞及其基因表达 被引量:2
8
作者 王淑辉 张成 +7 位作者 陈松林 于美娟 张雅妮 李美山 熊符 尚延昌 冯善伟 申本昌 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期261-265,共5页
目的构建人微小抗肌萎缩蛋白基因(microdystrophin)的真核表达载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),研究其体外表达情况。方法限制性酶切PBSK-MICRO质粒的微小抗肌萎缩蛋白基因片段,插入到真核表达质粒pcD-NA3.1(+)的NotI位点内,克隆... 目的构建人微小抗肌萎缩蛋白基因(microdystrophin)的真核表达载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),研究其体外表达情况。方法限制性酶切PBSK-MICRO质粒的微小抗肌萎缩蛋白基因片段,插入到真核表达质粒pcD-NA3.1(+)的NotI位点内,克隆出真核表达载体pcDNA3.1(+)/micro dystrophin。通过酶切和测序对质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染入rMSCs中,经过G418筛选后,用RT-PCR及间接免疫荧光技术检测表达产物。结果pcDNA3.1(+)/micro dystrophin经过NotI、Hind III酶切鉴定及测序证实插入片断正确。提取转染重组质粒rMSCs的总RNA,进行RT-PCR可见mRNA的转录;对G418筛选后rMSCs进行免疫荧光检测可见细胞内亮丽的红色荧光,说明转染后的rMSCs有微小抗肌萎缩蛋白的表达。结论成功构建了人microdystrophin基因真核表达载体,将其转染入rMSCs内有微小抗肌萎缩蛋白的表达,为进一步研究体外修饰自体干细胞移植治疗DMD奠定了基础。 展开更多
关键词 微小抗肌萎缩蛋白基因 真核表达 转染 骨髓间充质干细胞
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USH1C基因内含子新突变导致一耳聋家系的研究
9
作者 赵涛涛 马秀丽 +2 位作者 林垦 明澄 马静 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2023年第5期300-304,共5页
目的 对一个耳聋家系,应用高通量测序技术、Minigene实验,对其听力损失病因及分子生物学致病原因进行探究。方法 首先采集先证者及家系成员的病史、绘制家系图,并进行听力学评估及耳部影像学检查。获取该家系2代3人外周血提取基因组DNA... 目的 对一个耳聋家系,应用高通量测序技术、Minigene实验,对其听力损失病因及分子生物学致病原因进行探究。方法 首先采集先证者及家系成员的病史、绘制家系图,并进行听力学评估及耳部影像学检查。获取该家系2代3人外周血提取基因组DNA,对患儿采用高通量测序方法对406个耳聋基因编码区的全部外显子及部分内含子和启动子进行检测,筛选疑似致病突变,针对变异位点对家系成员进行Sanger测序验证,应用Minigene实验进行验证。结果 患儿表现为双侧极重度聋,高通量测序结果为USH1C纯合突变c.388-1G>A,导致氨基酸发生剪接突变,根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南,该变异初步判定为疑似致病性变异;Sanger测序验证其父母均为该位点的杂合携带者。Minigene实验表明该位点突变会导致m RNA异常剪接。结论 本家系中发现的USH1C基因内含子新突变为致病性突变,该突变导致先证者耳聋。 展开更多
关键词 USHER综合征 耳聋 内含子 突变 USH1C基因 微小基因
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胰岛素样生长因子Ⅱ受体基因微小卫星不稳定性在肝细胞癌的表现
10
作者 赵荫农 杨尔滨 《广西医科大学学报》 CAS 2000年第2期190-191,共2页
了解胰岛素样生长因子 受体 (IGF R)微小卫星不稳定性 (MI)在肝细胞癌的表现。方法 :用 QIAam p方法提取肝细胞癌 DNA,选择 7对引物 ,经 PCR扩增 ,走 DNA序列胶电泳 ,测定其 MI的阳性率及有无 IGF R基因的突变。结果 :肝细胞癌 MI阳性... 了解胰岛素样生长因子 受体 (IGF R)微小卫星不稳定性 (MI)在肝细胞癌的表现。方法 :用 QIAam p方法提取肝细胞癌 DNA,选择 7对引物 ,经 PCR扩增 ,走 DNA序列胶电泳 ,测定其 MI的阳性率及有无 IGF R基因的突变。结果 :肝细胞癌 MI阳性率 44 .1% (15 / 34) ,癌旁组织细胞 MI阳性率 2 3.5 % (8/ 34) ,二者之间有明显差异 (P<0 .0 5 )。IGF R基因有丢失、插入、替换等突变。结论 :肝癌细胞 MI阳性率明显高于癌旁组织 ,表明其 DNA错配修复功能有缺陷或丧失 ,遗传性不稳定 ,基因易突变 ,并可观察到 IGF R基因的三种突变。 展开更多
关键词 肝细胞癌 IGFⅡR 基因突变微小卫星不稳定性
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微小RNA-1靶基因多态性与蒙古族早发冠心病发生风险的关联研究
11
作者 贺利平 《现代消化及介入诊疗》 2019年第A02期1736-1737,共2页
目的:研究内蒙古地区蒙古族人群微小RNA-1靶基因多态性与蒙古族早发冠心病发生风险的关联。方法:此次研究选取50例蒙古族早发冠心病患者和同期检查确定无冠心病人员50例作为研究对象,调查分析两组患者的基本信息以及其微小RNA-1靶基因... 目的:研究内蒙古地区蒙古族人群微小RNA-1靶基因多态性与蒙古族早发冠心病发生风险的关联。方法:此次研究选取50例蒙古族早发冠心病患者和同期检查确定无冠心病人员50例作为研究对象,调查分析两组患者的基本信息以及其微小RNA-1靶基因型。结果:两组患者的性别组成、平均年龄以及TC水平无明显差别(P>0.05);研究组的糖尿病和吸烟人数占比、TG、BMI、CRP、LDL-C指标水平显著高于对照组,HDL-C水平显著低于对照组(P<0.05)。研究组的CC、CT基因型频率均显著低于对照组(P<0.05);对年龄、性别等因素进行调整后,TT基因型的冠心病风险未降低(P>0.05),CT和CT/TT基因型相较于CC基因型的冠心病风险显著降低(P<0.05)。以对照组中位值作为界值分析,高于TC、HDL-C中位水平患者的冠心病风险显著低于低于中位水平患者(P<0.05),高于TG、LDL-C中位水平患者的冠心病风险未见明显提升(P>0.05)。对照组的基因型分布具有代表性。结论:微小RNA-1靶基因分型的变化和蒙古族早发冠心病的发生风险具有密切关联,携带CT和CT/TT基因型人群出现早发冠心病的风险明显降低。 展开更多
关键词 内蒙古 微小RNA-1靶基因 多态性 早发冠心病 关联性
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CASQ2基因c.381C>T突变致儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速的分子机制 被引量:2
12
作者 李翠兰 袁越 +1 位作者 刘文玲 胡大一 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2021年第7期692-699,共8页
目的:对心电图上有U波,首诊怀疑长QTU综合征(LQTU)的两个家系进行基因筛查和功能检验,以期找到致病突变并结合临床信息作出疾病诊断。方法:筛查对象是2004~2005年来我院就诊的两个初诊为LQTU的家系L79和L104。诊断依据包括临床特征,如... 目的:对心电图上有U波,首诊怀疑长QTU综合征(LQTU)的两个家系进行基因筛查和功能检验,以期找到致病突变并结合临床信息作出疾病诊断。方法:筛查对象是2004~2005年来我院就诊的两个初诊为LQTU的家系L79和L104。诊断依据包括临床特征,如交感神经兴奋相关的晕厥,心电图记录到QT间期(或QU间期)延长及室性心动过速,且无器质性心脏病。记录先证者及其父母和一级亲属的病史、心电图和家族史,包括12导联静息心电图、24 h动态心电图和运动试验等。采用全外显子及Sanger测序法进行基因筛查。对发现的突变利用微小基因(minigene)技术进行功能验证。结果:两个家系中共有3例女性患者,皆为5岁左右首次发生晕厥。儿时心电图上有显著U波,随年龄增加U波幅度降低或消失。校正QT间期正常或临界值。基因筛查发现3例患者携带有CASQ2基因上的c.381C>T(p.Gly127=)纯合突变,父母杂合携带。其中L79家系先证者同时携带KCNQ1/c.921+1G>T杂合突变。Minigene实验证实,CASQ2/c.381C>T(p.Gly127=)突变虽未引起编码氨基酸改变,但其改变了3号外显子后面的生理性剪接位点并在380_381位点引入了一个新的剪切位点,致使其后41个核苷酸缺失,并在第128位置产生提前终止密码子。3例患者服用普萘洛尔或联合使用美西律,近3~15年无晕厥。结论:基因筛查及minigene功能验证结合家系临床表现,可确诊这3例患者为CASQ2/c.381C>T(p.Gly127=)纯合突变引起的儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速(CPVT)2型,L79先证者同时伴有KCNQ1/c.921+1G>T杂合突变所致的长QT综合征1型。本研究在中国CPVT患者中发现CASQ2基因编码区内的核苷酸同义变异可导致剪接突变效应。 展开更多
关键词 儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速 U波 CASQ2基因 c.381C>T 剪接突变 微小基因功能验证
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lncRNA MIR17HG调节miR-214-3p/RNF38信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响
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作者 孙伟涛 石彦科 +2 位作者 封俊连 陈志飞 张存岭 《现代消化及介入诊疗》 2024年第5期565-571,共7页
目的探究长链非编码RNA(lncRNA)人类微小RNA17簇宿主基因(MIR17HG)调节微小RNA(miR)-214-3p/环指蛋白38(RNF38)信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2022年5月至2023年10月于本院行手术切除的46例肝癌患者的癌组织及癌旁组织... 目的探究长链非编码RNA(lncRNA)人类微小RNA17簇宿主基因(MIR17HG)调节微小RNA(miR)-214-3p/环指蛋白38(RNF38)信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2022年5月至2023年10月于本院行手术切除的46例肝癌患者的癌组织及癌旁组织,检测lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达。体外培养HepG2、Bel-7402、SMMC-7721、HL-7702细胞,并比较lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达,选择Bel-7402细胞继续研究,随机分为sh-NC组、sh-MIR17HG组、anti-NC组、anti-miR-214-3p组和Bel-7402组。探究各组Bel-7402细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,蛋白质印迹法分析RNF38、半胱天冬酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白表达,双荧光素酶验证lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38的关系。结果肝癌组织中lncRNA MIR17HG、RNF38的mRNA表达较高,miR-214-3p的mRNA表达较低,RNF38的蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。细胞SMMC-7721、HepG2、Bel-7402中lncRNA MIR17HG mRNA、RNF38 mRNA和RNF38蛋白表达高于HL-7702细胞,miR-214-3p mRNA表达低于HL-7702细胞(P<0.05)。与Bel-7402组、sh-NC组比较,sh-MIR17HG组OD 450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达减少,凋亡率和caspase-3表达增加(P<0.05);与sh-MIR17HG组、anti-NC组比较,anti-miR-214-3p组OD 450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达增加,凋亡率和caspase-3表达减少(P<0.05)。lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38分别存在靶向关系。miR-214-3p+WT-MIR17HG组荧光素酶活性低于miR-NC+WT-MIR17HG组(P<0.05),miR-214-3p+WT-RNF38组荧光素酶活性低于miR-NC+WT-RNF38组(P<0.05)。结论lncRNA MIR17HG可能通过调控miR-214-3p/RNF38轴促进肝癌细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 人类微小RNA17簇宿主基因 miR-214-3p/环指蛋白38 肝癌 恶性生物学
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Micro-dsytrophin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植后mdx鼠腓肠肌病理改变及micro-dystrophin的表达 被引量:4
14
作者 王淑辉 张成 +4 位作者 尚延昌 于美娟 张雅妮 冯善伟 李美山 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2008年第6期404-407,473,共5页
目的探讨自体骨髓间充质干细胞(mMSCs)携带micro-dystrophin基因在移植鼠体内分化为有功能肌细胞的可能性。方法采用脂质体介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠mMSCs,通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠,在移植后不同时间点对腓肠肌进行HE染... 目的探讨自体骨髓间充质干细胞(mMSCs)携带micro-dystrophin基因在移植鼠体内分化为有功能肌细胞的可能性。方法采用脂质体介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠mMSCs,通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠,在移植后不同时间点对腓肠肌进行HE染色、计数核中心移位纤维(CNF)比例,并用免疫荧光法检测micro-dystrophin的表达。结果移植后各时间点腓肠肌病理改变较对照组有所改善,CNF比例下降,差异有统计学意义,部分肌细胞膜能表达micro-dystrophin蛋白,并随移植时间延长micro-dystrophin阳性肌纤维比例增加,分别达到3%(8周时)、6%(12周时)和8%(16周时)。结论自体mMSCs可携带外源性micro-dys-trophin基因在受体鼠体内分化为micro-dystrophin阳性肌细胞。 展开更多
关键词 DUCHENNE型肌营养不良症 MDX 骨髓间充质干细胞 微小dystrophin基因
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经micro-dystrophin基因修饰后的自体骨髓间充质干细胞移植治疗mdx鼠的实验研究 被引量:3
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作者 于美娟 张雅妮 +3 位作者 冯善伟 王淑辉 熊符 张成 《临床医学工程》 2010年第1期1-4,共4页
目的探讨携带micro-dystrophin基因的自体骨髓间充质干细胞(mMSCs)在移植鼠体内分化为有功能肌细胞的可能性。方法采用逆转录病毒介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠MSCs(mMSCs),通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠,在移植后不同时间点并检... 目的探讨携带micro-dystrophin基因的自体骨髓间充质干细胞(mMSCs)在移植鼠体内分化为有功能肌细胞的可能性。方法采用逆转录病毒介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠MSCs(mMSCs),通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠,在移植后不同时间点并检测血清激酶(CK)值,对腓肠肌进行HE染色、计数核中心移位纤维(CNF)比例,并用免疫荧光法,、逆转录-聚合酶链反应、Westernblot检测测micro-dystrophin的表达。结果移植后各时间点血CK值下降,腓肠肌病理改变较对照组有所改善,CNF比例下降,差异有统计学意义,部分肌细胞膜能表达micro-dystrophin蛋白,并随移植时间延长micro-dys-trophin阳性肌纤维比例增加,分别达到1%(8周时)、7%(12周时)和15%(16周时)。RT-PCR和Westernblot也发现,随着移植时间的延长,micro-dystrophin表达增加。结论自体mMSCs可携带外源性micro-dystrophin基因在受体鼠体内分化为micro-dystrophin阳性肌细胞。 展开更多
关键词 DUCHENNE型肌营养不良症 MDX 骨髓间充质干细胞 微小dystrophin基因
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Micro-dsytrophin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植后mdx鼠膈肌病理改变 被引量:1
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作者 王淑辉 尚延昌 +4 位作者 于美娟 张雅妮 冯善伟 熊符 张成 《临床和实验医学杂志》 2013年第16期1257-1260,1264,F0003,共6页
目的探讨自体骨髓间充质干细胞(mMSCs)携带外源micro-dystrophin基因移植治疗mdx鼠对膈肌的影响。方法采用脂质体介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠mMSCs(microdys-mMSCs),通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠,对照组移植等量的PBS液。在移... 目的探讨自体骨髓间充质干细胞(mMSCs)携带外源micro-dystrophin基因移植治疗mdx鼠对膈肌的影响。方法采用脂质体介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠mMSCs(microdys-mMSCs),通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠,对照组移植等量的PBS液。在移植后4周、8周、12周和16周测定受体鼠血清肌酸激酶(CK)值、对膈肌进行HE染色、计数核中心移位纤维(CNF)比率,并用免疫荧光及RT-PCR法检测micro-dystrophin的表达。结果移植后血清CK值持续下降,各时间点膈肌病理改变较对照组有所改善,CNF比率下降,差异有统计学意义。免疫荧光可以检测到部分肌细胞膜能表达micro-dystrophin蛋白,并随移植时间延长micro-dystrophin阳性肌纤维比率增加,RT-PCR检测micro-dystrophin的mRNA有相同的趋势。结论 microdys-mMSCs移植治疗mdx鼠可以在受体鼠膈肌检测到micro-dystrophin的表达,减轻肌肉损伤并且改善mdx鼠膈肌的病理改变。 展开更多
关键词 MDX鼠 DUCHENNE型肌营养不良症 骨髓间充质干细胞移植 微小dystrophin基因 膈肌
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三个与肉质相关候选基因的研究进展
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作者 周国利 曹阳 +2 位作者 张立春 刘晓辉 金海国 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期23-25,共3页
随着人们生活水平的提高,消费者对肉制品的特性要求也越来越高,畜禽的肉制品研究已经成为当今育种的一个热点,分子育种手段的快速发展,加快了育种速度,与畜禽相关的候选基因是现代育种学关注的焦点。笔者对三个与畜禽肉品质性状相关的... 随着人们生活水平的提高,消费者对肉制品的特性要求也越来越高,畜禽的肉制品研究已经成为当今育种的一个热点,分子育种手段的快速发展,加快了育种速度,与畜禽相关的候选基因是现代育种学关注的焦点。笔者对三个与畜禽肉品质性状相关的候选基因在分子及其肉品质育种中的研究进展进行综述,为今后的育种方向提供参考。 展开更多
关键词 苹果酸酶基因 尿黑酸1 2加双氧酶基因 微小异源二聚体伙伴基因 肉质性状
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淫羊藿苷对激素诱导损伤骨微血管内皮细胞微小RNA表达的影响 被引量:9
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作者 赵丁岩 郭万首 +2 位作者 俞庆声 程立明 王佰亮 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第15期2140-2147,共8页
背景:近年来研究证实微小RNA广泛参与调控人体发育、细胞增殖分化及凋亡、血管生成、脂质代谢等生理过程,同样微小RNA在股骨头坏死的病理过程中也具有重要的调控作用。作者所在实验室前期研究证实淫羊藿苷具有抑制激素诱导骨微血管内皮... 背景:近年来研究证实微小RNA广泛参与调控人体发育、细胞增殖分化及凋亡、血管生成、脂质代谢等生理过程,同样微小RNA在股骨头坏死的病理过程中也具有重要的调控作用。作者所在实验室前期研究证实淫羊藿苷具有抑制激素诱导骨微血管内皮细胞凋亡的作用,并且可以显著提高骨微血管内皮细胞促血管生成蛋白粒细胞集落刺激因子的表达。但目前关于淫羊藿苷对骨微血管内皮细胞微小RNA的研究仍处于探索阶段,其具体作用靶点、可能的调节机制及信号通路尚不明确。目的:探索淫羊藿苷对激素诱导人股骨头骨微血管内皮细胞微小RNA表达的影响及其可能的机制。方法:采用作者所在实验室建立的方法分离、培养及鉴定人股骨头骨微血管内皮细胞,取第3代骨微血管内皮细胞,建立激素诱导损伤模型及淫羊藿苷预处理模型,采用微小RNA基因芯片对激素组和正常组进行差异性转录,运用实时定量PCR法对明显表达差异mi R-339及mi R-23b进行验证,同时探讨淫羊藿苷对mi R-339及mi R-23b表达的影响。结果与结论:(1)对微小RNA基因芯片结果进行差异性分析,与正常组相比较,激素组中差异倍数﹥2的微小RNA共有5个,其中1个表达上调,4个表达下调;(2)实时定量PCR检测结果显示:与正常组相比,激素组中mi R-339及mi R-23b出现明显变化,与基因芯片结果一致。与激素组相比,淫羊藿苷预处理可以显著提高mi R-23b的表达;(3)结果表明:淫羊藿苷可以有效预防激素诱导骨微血管内皮细胞损伤引起的mi R-23b表达失衡,推测淫羊藿苷可能通过介导骨微血管内皮细胞mi R-23b的表达参与激素性股骨头坏死病理过程的调控。 展开更多
关键词 微血管 内皮细胞 芯片分析技术 组织工程 组织构建 血管内皮细胞 淫羊藿苷 激素性股骨头坏死 骨微血管内皮细胞 微小RNA基因芯片 微小RNA miR-23b miR-339 国家自然科学基金
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miR-34与survivin基因在人结肠癌组织中的表达及意义
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作者 王红芳 余细球 +1 位作者 叶静 范昭 《中国现代药物应用》 2021年第11期53-55,共3页
目的探讨微小核糖核酸-34(miR-34)与其靶基因生存素(survivin)在人结肠癌中的表达及意义。方法收集32例手术患者切除的新鲜组织,其中32份结肠癌组织标本(均为腺癌)作为癌症组,32份癌旁组织标本(据切缘>2 cm)作为癌旁组。采用荧光定... 目的探讨微小核糖核酸-34(miR-34)与其靶基因生存素(survivin)在人结肠癌中的表达及意义。方法收集32例手术患者切除的新鲜组织,其中32份结肠癌组织标本(均为腺癌)作为癌症组,32份癌旁组织标本(据切缘>2 cm)作为癌旁组。采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测miR-34和survivin基因在癌症组和癌旁组中的转录表达水平,并进行比较。结果miR-34a和miR-34b/c基因表达在癌症组组织中均低于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05);在癌症组组织中miR-34b/c表达较miR-34a水平降低更显著,survivin表达增加较癌旁组增高,差异有统计学意义(P<0.05);miR-34a和miR-34b/c与survivin在结肠癌癌组织中表达水平呈显著负相关(r=-0.43、-0.51,P<0.05)。结论miR-34家族在结肠腺癌中作为抑癌基因发挥作用,可以负性调节survivin的表达,为结肠癌的临床诊治提供新的靶点和思路。 展开更多
关键词 人结肠癌组织 微小核糖核酸-34基因 生存素基因
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人软骨肉瘤中miR-140-5p靶基因预测验证及对靶基因表达的调控作用观察 被引量:1
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作者 李竟源 许凯 +6 位作者 刘时璋 刘宗智 易智 杜青芳 王坤正 李建辉 祖超 《山东医药》 CAS 2019年第6期13-16,共4页
目的预测并验证人软骨肉瘤中miR-140-5p的靶基因,观察人软骨肉瘤中miR-140-5p对靶基因的调控作用。方法①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因预测及验证:采用microRNA. org软件检索miR-140-5p序列,miRBase、miRWalk靶基因预测分析数据库... 目的预测并验证人软骨肉瘤中miR-140-5p的靶基因,观察人软骨肉瘤中miR-140-5p对靶基因的调控作用。方法①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因预测及验证:采用microRNA. org软件检索miR-140-5p序列,miRBase、miRWalk靶基因预测分析数据库预测miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因,认为miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因可能为葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)。通过NCBI Gen Bank检索GLUT-1 3'UTR序列。构建野生型(WT,正常表达)、突变型(MUT,抑制表达) GLUT-1 3'UTR双荧光素酶报告载体。取人胚肾细胞HEK 293T分为A、B组,分别转染miR-140-5p mimics(促进miR-140-5p表达)+WT型GLUT-1 3'UTR荧光素报告载体、miR-140-5p mimics+MUT型GLUT-1 3'UTR荧光素报告载体,利用荧光素酶活性检测试剂盒测算萤火虫荧光素酶相对活性。②转染miR-140-5p对人软骨肉瘤细胞株JJ012的GLUT-1 mRNA及蛋白表达影响:取对数生长期JJ012细胞分为观察组、对照组,分别转染miR-140-5p mimics、NC mimics(空白无意义),转染24 h时采用qRT-PCR法检测两组细胞GLUT-1 mRNA,采用Western blotting法检测两组细胞GLUT-1蛋白。结果①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的直接靶基因可能为GLUT-1。A、B组荧光素酶活性分别为0. 37±0. 03、0. 93±0. 01,二者比较,P <0. 05。②观察组、对照组细胞GLUT-1 mRNA相对表达量分别为0. 31±0. 10、0. 95±0. 06,二者比较,P <0. 05。观察组、对照组细胞GLUT-1蛋白相对表达量分别为0. 42±0. 13、0. 93±0. 07,二者比较,P <0. 05。结论 miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因可能为GLUT-1。miR-140-5p主要通过靶向结合GLUT-1 3'UTR区域进行mRNA转录后调控。miR-140-5p主要通过直接靶向作用于GLUT-1 3'UTR进而抑制蛋白翻译过程。 展开更多
关键词 微小RNA-140-5p 微小RNA-140-5p靶基因 葡萄糖转运蛋白1基因 葡萄糖转运蛋白1 软骨肉瘤
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