携带小鼠白细胞介素-12 siRNA基因重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞中的表达

目的:构建载有白细胞介素-12干扰RNA(IL-12si RNA)基因的,能在树突状细胞(DC)表达的重组腺病毒载体,为免疫耐受提供基础。方法:将IL-12p35si RNA和IL-12p40si RNAcDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle2,得到重组质粒,并与腺病毒骨架质粒BD Adeno-XTM体外连接后代共转化大肠杆菌DH5α菌株,重组腺病毒质粒经过293细胞的包装扩增及氯化铯(CsCl)纯化,生成带有IL-12p35和IL-12p40si RNA基因的重组腺病毒载体,感染DC细胞。结果:经形态学、病毒DNA酶切、聚合酶链反应(PCR)和逆转录(RT)等方法的鉴定,证实了载体构建的正确性;经测定,病毒滴度为2.5×1010efu/ml。结论:成功构建带有IL-12p35si RNA和IL-12p40si RNAcDNA的重组腺病毒载体,其所携带的载体能够转染小鼠DC并干扰其在DC中表达,为进一步的研究奠定了基础。

三个与肉质相关候选基因的研究进展

随着人们生活水平的提高,消费者对肉制品的特性要求也越来越高,畜禽的肉制品研究已经成为当今育种的一个热点,分子育种手段的快速发展,加快了育种速度,与畜禽相关的候选基因是现代育种学关注的焦点。笔者对三个与畜禽肉品质性状相关的候选基因在分子及其肉品质育种中的研究进展进行综述,为今后的育种方向提供参考。

RhBMP2/7和rhBMP2、rhBMP7诱导MC3T3-E1细胞成骨分化相关基因表达的比较研究

目的鉴于骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)异源二聚体较BMP同源二聚体有更高效的诱导成骨作用,比较研究纯化的重组人BMP2/7(rhBMP2/7)异源二聚体与rhBMP2和/或rhBMP7同源二聚体在诱导细胞成骨分化上相关基因的表达变化。方法以不同浓度的3种rhBMPs作用于成骨前体细胞MC3T3-E1,检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phos-phatase,ALP)活性变化,比较研究成骨分化相关基因ALP、骨钙素(osteocalcin,OCN)、I型胶原蛋白(collagen type Iα1,Col1)以及核心结合因子(runt-related transcription factor 2,Runx2/core binding factorα1,Cbfα1)的表达变化。结果 RhBMP2/7异源二聚体上调细胞ALP活性的浓度效应呈钟形曲线;其诱导细胞成骨相关基因的表达也呈类似的钟形曲线;而相应的同源二聚体则呈现浓度依赖效应递增曲线。此外,rhBMP2/7异源二聚体与rhBMPs同源二聚体相比,诱导的Runx2的基因表达变化不同于ALP、OCN或Col1基因表达,提示后3种基因的表达并不完全依赖于Runx2基因的表达转录。结论 RhBMP2/7异源二聚体在诱导细胞成骨分化基因表达上仅在早期以及较低浓度范围内与相应rhBMPs同源二聚体有显著性差异;基因表达转录后,成骨相关蛋白的合成、修饰及活化程度不同更可能是造成rhBMP2/7异源二聚体与相应同源二聚体生物学活性差异的主要原因。

担子菌交配型基因的克隆及功能研究进展

担子菌中已有２０多个交配型基因被克隆，Ａ、Ｂ位点的交配型基因具有明显不同的结构特征。Ａ位点的交配型基因编码两类含相似同源结构域的蛋白质，两种蛋白质形成异源二聚体，调节依赖Ａ因子的发育过程；而Ｂ位点的交配型基因编码信息素及其受体。交配型基因编码的同源结构域蛋白质在植物、动物和菌类中都具有广泛的保守性。

核糖体失活蛋白的研究进展

核糖体失活蛋白是一类作用于rRNA而抑制核糖体功能的毒蛋白,广泛存在于高等植物体内。核糖体失活蛋白分为3类:第1类是单肽链蛋白,分子量大约30kD,一般为碱性糖蛋白,具有RNAN-糖苷酶活性;第2种类型是异源二聚体蛋白,分子量大约为60kD,A链具有RNAN-糖苷酶活性,B链是一个对半乳糖专一的凝集素,B链可以分别或同时与真核细胞表面的糖蛋白或糖脂的半乳糖部分结合,介导A链逆向进入胞质溶胶;第3种类型是先合成无活性的核糖体失活蛋白前体,然后在涉及形成活性位点的氨基酸之间进行酶解加工。核糖体失活蛋白通过对核糖体大亚基RNA的3'端茎环结构中一个高度保守的核苷酸区域的作用,破坏核糖体大亚基RNA的结构,使核糖体失活。核糖体失活蛋白的功能主要通过2个方面产生,即RNA的N-糖苷酶活性和RNA水解酶的活性。核糖体失活蛋白不仅对病毒具有广谱抗性,而且对真菌和昆虫也有抗性。核糖体失活蛋白可以给植物提供对病毒和真菌的广谱抗性,这为我们利用有关的核糖体失活蛋白基因提高植物对病毒和真菌的抗性提供了一条新的途径。

PCR-限制性酶切片段-单链构象多态合并异源二聚体分析中国人群的Kell血型系统

目的分析中国人群的Keu血型系统的多态性，寻找合适的筛选方法。方法建立聚合酶链反应-限制性酶切片段-单链构象多态性方法（polymerase chain reaction-restriction fragment-single strand conformation polymorphism，PCR-RF-SSCP）合并异源二聚体分析，筛选找出KEL基因第7～9外显子区域中具有不同格局的样品，并对其测序，找出突变位点。结果500份标本中发现两个突变，分别是KEL基因第9外显子上966G〉A和第7内含子的第67位C〉A点突变，但没有涉及氨基酸序列的变化；突变率为4／1000；没有发现PCR-RF-SSCP合并异源二聚体分析有漏检情况。结论PCR-RF-SSCP合并异源二聚体分析可以作为有效的经济简便的筛选方法，适用于基因背景不明了、没有阳性对照品的群体。中国人群的Keu血型系统有自己的特征，多态性有别于其他民族，值得进一步研究。

中国人群KEL等位基因2例新突变的检出

目的研究中国人群中KEL基因多态性。方法用聚合酶链反应-限制性酶切片段-单链构象多态性分析(PCR-RF-SSCP)合并异源二聚体分析,筛选找出具有不同格局的样本并对其测序,找出突变位点。结果在500份随机的中国人群样本中,发现2份样本格局与正常格局不同,测序显示其核苷酸发生了突变,分别是KEL基因外显子9上1086G>A和内含子7的第67位C>A点突变,外显子9上碱基突变是同义突变。结论在中国人群中检出2例新突变的KEL基因。

SHP基因与新生儿出生体重关系的探讨

目的评价微小异源二聚体伙伴基因(small heterodi mer partner gene,SHP)基因与新生儿出生体重的关系。方法应用队列研究的方法,收集191例无妊娠合并症及并发症的母血及新生儿脐血标本,利用PCR-RFLP的方法研究SHP基因的单核苷酸多态性,(single nucleotide poly-morphism,SNP)位点rs7504的基因多态性。结果(1)随出生体重的增加新生儿携带C等位基因和TC+CC基因型频率增加,且有统计学差异(P=0.004;P=0.005);孕妇C等位基因和TC+CC基因型频率亦随新生儿出生体重增加而增加,有统计学差异(P=0.013,P=0.013)。(2)此位点携带C等位基因者新生儿体重增加,携带TC+CC基因型的新生儿比携带TT基因型的新生儿体重平均增加246.3g[(3658.7±400.9)g和(3412.4±444.4)g,P=0.005)]。同时孕妇携带C等位基因者其分娩新生儿体重比不携带C等位基因孕妇分娩的新生儿体重平均增加210.3g[(3418.6±449.0)g和(3628.9±405.5)g,P=0.011)]。(3)比较脐血TC+CC基因型与TT基因型的临床参数,发现SHP基因与血糖和胰岛素不相关;与母亲的体重、孕前BMI、父亲的身高、体重相关。孕妇携带TC+CC基因型者体重和孕前BMI略有增加,但无统计学差异;且与血糖和胰岛素水平无明显相关。(4)多因素分析结果表明孕妇身高、孕期增重、孕前BMI、分娩孕周、脐血胰岛素、母血胰岛素水平均与新生儿体重相关,调整以上因素之后,脐血SHP基因仍与新生儿体重显著相关(P=0.0354),母血SHP基因与新生儿体重无明显相关(P>0.05)。结论SHP基因与新生儿出生体重相关,在胎儿宫内发育中起一定的作用。

Bcl-2、 Bax在急性白血病表达中的研究进展

白血病细胞对化疗耐药是当前成功治疗白血病的主要障碍之一,细胞耐药存在多种机制,近年来较多学者将研究的重点放在了细胞凋亡的抑制剂上.在诸多细胞凋亡的"抑制剂"中最引人注目的是Bcl-2基因,它是用以研究细胞凋亡抑制的最佳模型,它的表达状态在一定程度上决定肿瘤的发生、发展及癌细胞对化疗药物的敏感性.