基于重组截短蛋白mp-tGAPDH的微小支原体抗体间接ELISA检测方法建立和应用

猪源嗜血支原体(Hemotropic mycoplasma,HM)寄生于猪红细胞表面及骨髓中,引起猪传染性贫血,给我国养猪产业造成危害。近年来病原流行病学调查发现我国流行三种HM,猪支原体(Mycoplasma suis,M.suis猪附红细胞体),微小支原体(M.parvum)和新种Candidate Mycoplasma hemosuis(CMh)。且M.parvum在是我国浙江和海南猪群中的主要流行嗜血支原体,目前仅M.suis有血清抗体检测方法报道。本研究根据M.parvum ZJ9330株的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计引物扩增404 bp的部分基因片段、原核表达纯化15 ku截短蛋白mp-tGAPDH,Western-blot表明纯化蛋白mp-tGAPDH与小鼠抗mp-tGAPDH血清有较好的反应性。以mp-tGAPDH为包被抗原,建立了检测M.parvum抗体的间接ELISA方法。特异性实验表明,建立的ELISA方法不与猪圆环病毒病、猪瘟、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和弓形虫阳性血清交叉反应。重复性实验表明,该ELISA方法批间和批内重复性低于18.4%,表明该法有较好的重复性。用建立的ELISA方法对浙江省上虞地区5个猪场248份临床送检血清进行了检测,M.parvum血清抗体阳性率为36.69%(91/248)。本研究建立的间接ELISA方法为猪微小支原体的检测和流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法。

血清学和分子生物学流行病学调查揭示了微小支原体/附红细胞体是海南岛主要猪嗜血支原体

猪支原体Mycoplasma suis和微小支原体M.parvum是猪附红细胞体病的两种常见病原。迄今为此,海南省未见猪附红细胞体病的病原类型和流行病学的报道。本研究为了调查海南省猪附红细胞体病的流行情况和病原类型,利用普通PCR、实时定量PCR和免疫诊断快速检测试纸条对猪附红细胞体病进行了检测。利用通用引物对附红细胞体/支原体的16S rRNA和23S rRNA基因进行PCR扩增和测序,并做进一步的系统发育树分析,以此鉴定猪附红细胞体/支原体的种类。结果表明,海南的样品中6.4%(15/233)的猪感染了M.parvum,而中国大陆地区如北京、贵州、福建省感染的猪附红细胞体/支原体种类为M.suis,感染率分别为2.1%(2/95)、0.4%(1/218)和4.2%(2/47),海南岛猪感染的猪附红细胞体/支原体的优势种类与中国其他地区的优势种类不同。三种诊断方法中,实时定量PCR和免疫诊断快速检测试纸条检测比普通PCR检测更为灵敏。然而,尽管鉴定了海南省的猪携带了M.parvum,但需要进一步的研究来了解该病原的进化、致病性和疾病传播特性。