氟对成骨细胞中微小染色体维系蛋白3表达的影响

目的探讨氟对体外培养成骨细胞中微小染色体维系蛋白3（minichromosome maintenance deficient3，MCM3）表达的影响。方法采用免疫组织化学技术、原位杂交技术以及SYBR GreenI嵌合荧光实时定量PCR（realtime RT-PCR）方法，检测不同剂量氟（0、5、10、20、40mg／L，处理10d）对体外培养成骨细胞中MCM3表达的影响。结果0、5、10、20、40mg／L各组细胞中均有MCM3蛋白及其mRNA表达，主要在细胞核中表达，与对照组比较，染氟实验组阳性表达强度高于对照组，阳性细胞数多于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），其中10mg／L组阳性表达高于其他实验组（P〈0．05），呈现双向作用。real time RT-PCR检测显示，各组均可检测到MCM3mRNA．相对定量比由对照组到高剂量组约为102：259：145：135：100：染氟实验组中5、10、20mg／L组表达量高于对照组和40mg／L组，以5mg／L组表达量最高，随着染氟剂量增加，基因表达量降低。结论不同剂量氟对成骨细胞中MCM3表达的影响不同，低剂量氟可以促进MCM3的表达，随剂量增加氟的促进作用减弱。

微小染色体维系蛋白3基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达

目的：制备地高辛标记的微小染色体维系蛋白3（MCM3）基因的RNA探针，研究MCM3在斑马鱼早期发育中的时空表达。方法：收集并固定受精后24h时期的野生型斑马鱼胚胎，提取总RNA，制备DIG标记的MCM3RNA反义探针，整胚原位杂交，研究MCM3在斑马鱼胚胎早期发育过程的表达。结果：斑马鱼的MCM3氨基酸序列与小鼠、人具有高度同源性，通过不同时期胚胎的原位杂交，发现MCM3在早期发育过程中普遍性表达，胚胎受精后0-2hMCM3在增殖性区域泛表达，受精后14～22h在中枢神经系统、发育未成熟的眼部、体节及增殖性区域表达，受精后24h在血液、中枢神经、翼板中脑、视觉盖及增殖性区域表达，受精后48h在头部及肛门增殖性区域表达。结论：明确了MCM3在斑马鱼胚胎发育过程中的表达模式，证明其与早期斑马鱼发育细胞增殖密切相关，为研究该基因功能提供了一定的理论基础。

鱼藤素抑制MCF-7、H1299增殖及下调微小染色体维系蛋白3、CDC45表达

目的探究鱼藤素对MCF-7及H1299细胞的增殖作用,并从m RNA水平研究了鱼藤素对微小染色体维系蛋白3(MCM3)和CDC45在MCF-7及H1299细胞中的影响。方法利用MTT法研究不同浓度的鱼藤素分别处理MCF-7和H1299细胞48、72、96 h后的抑制增殖作用;利用显微镜观察MCF-7和H1299细胞的生长状态;荧光定量PCR探究鱼藤素对MCF-7和H1299细胞中MCM3-CDC45表达的变化。结果 0.25、0.5、1、5、10、30、50μmol/L的鱼藤素作用MCF-7细胞48、72、96 h后,能明显抑制其增殖,且呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用MCF-7 48、72、96 h的IC_(50)分别为9、3、2μmol/L;0.5、1、5、10、30、50、100μmol/L的鱼藤素作用H1299细胞48、72、96 h,抑制率呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用H1299细胞96 h的IC50为2μmol/L。光学显微镜下,观察到药物处理组中,细胞数目减少,形态皱缩明显。鱼藤素干预MCF-7及H1299细胞,MCM3-CDC45的表达量减少。结论鱼藤素可抑制MCF-7、H1299细胞增殖,并可下调细胞中MCM3和CDC45的表达。

微小染色体维系蛋白3在乳腺癌组织的表达及意义

目的探讨微小染色体维系蛋白3（MCM3）在乳腺癌组织与癌旁组织中的差异性表达及意义，分析MCM3在乳腺癌组织中的表达水平与临床病理特征的相关性。方法根据患者的临床病理资料随机收集乳腺癌患者组织标本，将其分为癌组织组和癌旁组织组，采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法测定MCM3蛋白在40例乳腺癌组织及癌旁组织中的表达。结果癌组织和癌旁组织中的MCM3蛋白的表达差异有统计学意义（P＝0.000）；癌组织中MCM3蛋白的表达更倾向于＋＋＋（45.0%），而癌旁组织中MCM3蛋白的表达更趋向于－（82.5%）；MCM3的表达水平与年龄（P＝0.003）、肿瘤大小（P＝0.029）、腋窝淋巴结转移（P＝0.021）显著相关，而与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、细胞核增殖抗原（Ki-67）、人表皮生长因子受体2（Her-2）的表达无明显相关。结论MCM3可能作为一种癌基因在乳腺癌的发生、发展过程中起重要作用。

微小染色体维持蛋白3在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的:分析微小染色体维持蛋白3(minichromosome maintenance protein 3,MCM3)在脑胶质瘤中的表达情况、临床意义和可能参与的生物学过程,并探究其与胶质瘤免疫的关系。方法:在线检索GEPIA和Oncomine数据库获得MCM3在胶质瘤组织中的表达情况,利用CGGA数据库在线分析MCM3表达和胶质瘤临床病理特征的关系。同时收集2019年1月到2020年3月在山西省人民医院神经外科接受手术治疗的24例胶质瘤患者的肿瘤标本和8例非肿瘤对照标本,采用免疫组化SP法检测MCM3的表达,对生物信息学分析结果进行验证。在TCGA和CGGA数据库中利用Kaplan-Meier生存曲线评价MCM3对胶质瘤预后的作用。通过Linkedomic数据库、STRING数据库和Cytoscape软件获得与MCM3表达显著相关的基因。使用DAVID数据库对MCM3及其显著相关基因进行GO和KEGG分析,探究基因功能。最后在TIMER数据库中探究MCM3表达和胶质瘤免疫浸润的关系。结果:综合生物信息学与临床数据分析显示,MCM3在胶质瘤组织中相对正常组织呈高表达(P=0.024),其表达量随着病理级别逐渐升高(P=0.001)。生存分析显示,MCM3高表达与胶质瘤不良预后有关(P<0.05)。GO和KEGG分析显示,MCM3及其显著相关基因主要富集于细胞周期、DNA复制和调节DNA损伤修复等方面。TIMER数据库分析结果显示,在胶质瘤队列中,MCM3与多种免疫浸润细胞具有相关性(P<0.05)。结论:MCM3在胶质瘤中高表达且与不良预后有关,其可能与胶质瘤细胞的细胞周期、DNA复制、调节DNA损伤修复和免疫微环境有关。MCM3能促进胶质瘤的进展,可作为胶质瘤患者预后判断指标和潜在的治疗靶点。

微小RNA-301b-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法本研究起止时间为2019年3—9月。人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心。U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系。结果与h FOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)%比(7.48±0.78)%]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高。PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因。与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低。结论抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。

微小RNA-214靶向调控PTEN对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA-214(miR-214)靶向调控第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为miR-124 mimic组(转染miR-124 mimic)、miR-124 NC组(转染miR-124 NC)、pcDNA3.1-PTEN组(转染pcDNA3.1-PTEN)、miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组(转染miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN)。采用在线生信预测miR-124和PTEN靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因进行验证。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-124和PTEN mRNA表达。采用CCK-8法检测细胞增殖。采用碱性磷酸酶活性测定检测细胞分化能力。采用茜素红染色和骨钙素水平测定检测细胞的矿化。采用Werstern blot检测PTEN、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)水平。结果:与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组野生型PTEN的荧光素酶活性降低(均P<0.05)。与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组miR-124及p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平降低,而pcDNA3.1-PTEN组则相反(均P<0.05)。与miR-124 mimic组比较,miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平升高(均P<0.05)。结论:miR-214通过靶向下调PTEN蛋白表达激活PI3K/AKT信号通路,从而调控成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化。

微小RNA-92a-3p靶向PTEN调控胰腺癌细胞增殖和转移

目的:探讨微小RNA-92a-3p(microRNA-92a-3p,miR-92a-3p)靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten,PTEN)调控胰腺癌细胞增殖和转移的作用机制。方法:采用Real-time PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞株(HPDE6-C7)与胰腺癌细胞株(Panc-1,BxPC-3,AsPC-1,MIA Paca-2,Capan-2)中的miR-92a-3p表达;同时,采用蛋白质印迹法检测上述细胞中PTEN的表达。选取胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1的细胞进行实验,分为转染对照模拟物组(NC mimics组)、miR-92a-3p模拟物组(miR-92a-3p mimics组)、对照拮抗剂组(NC inhibitor组)、miR-92a-3p拮抗剂(miR-92a-3p inhibitor组),采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白质印迹法检测PTEN蛋白表达水平。将野生型PTEN的3’-非编码区(untranslated regions,UTR)(wt-PTEN 3’UTR)或突变体PTEN的3’-UTR(mutPTEN 3’UTR)分别与NC mimics,miR-92a-3p mimics,NC inhibitor,miR-92a-3p inhibitor共转染293T细胞,采用双萤光素酶报告实验检测miR-92a-3p与PTEN的靶向结合关系。在BxPC-3细胞的回复实验中,实验又分NC inhibitor+siNC组、miR-92a-3p inhibitor+si-NC组、NC inhibitor+si-PTEN组和miR-92a-3p inhibitor+si-PTEN组;在Panc-1细胞的回复实验中,实验又分为NC mimics+NC组、miR-92a-3p mimics+NC组、NC mimics+PTEN组和miR-92a-3p mimics+PTEN组,再分别采用CCK-8检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白质印迹法检测PTEN蛋白的表达。结果:与HPDE6-C7细胞相比,miR-92a-3p在胰腺癌细胞株中均呈高表达(均P<0.01),PTEN在胰腺癌细胞株中均呈低表达(均P<0.05)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组BxPC-3和Panc-1细胞活力均升高(均P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组BxPC-3和Panc-1细胞活力均降低(均P<0.01)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组穿过微孔的BxPC-3和Panc-1细胞数均增多(均P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组穿过微孔的BxPC-3和Panc-1细胞数均减少(均P<0.01)。与NC mimics组相比,miR-92a-3p mimics组的wtPTEN 3’UTR荧光素酶活性被抑制(P<0.01);与NC inhibitor组相比,miR-92a-3p inhibitor组的wt-PTEN 3’UTR荧光素酶活性被增强(P<0.01)。与miR-92a-3p inhibitor+si-NC组相比,miR-92a-3p inhibitor+si-PTEN组恢复了miR-92a-3p inhibitor对BxPC-3细胞增殖和转移的影响;与miR-92a-3p mimics+NC组相比,miR-92a-3p mimics+PTEN组恢复了miR-92a-3p mimics对Panc-1细胞增殖和转移的影响。结论:MiR-92a-3p可靶向抑制PTEN的表达,促进胰腺癌细胞的增殖和转移。

微小RNA-486-5p通过调控缺氧诱导因子-1α/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶A信号通路影响结肠癌的发生发展

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)通过调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶A(Akt)信号通路影响结肠癌的发生发展。方法脂质体Lipofectamine™3000将miR-486-5p模拟物NC(对照),miR-486-5p模拟物转入SW480结肠癌细胞中,细胞购自上海细胞库。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-486-5p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、HIF-1α、PTEN、PI3K及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。组间比较采用t检验进行分析。结果miR-486-5p模拟物组细胞miR-486-5p表达量(1.87±0.09比1.00±0.10,t=5.589,P<0.05)、细胞早期凋亡率[(15.48±0.97)%比(1.47±0.09)%,t=4.327,P<0.05],细胞晚期凋亡率[(27.46±1.54)%比(3.24±0.13)%,t=5.652,P<0.05],细胞周期G1期[(60.32±4.43)%比(24.08±1.96)%,t=4.578,P<0.05]、bax(0.96±0.08比0.18±0.01,t=5.373,P<0.05)、p27(0.86±0.06比0.32±0.01,t=5.762,P<0.05)及PTEN(1.64±0.09比0.46±0.02,t=4.874,P<0.05)蛋白表达量高于对照组,miR-486-5p模拟物组细胞活力(0.33±0.01比0.54±0.03,t=4.582,P<0.05)、细胞侵袭数目[(37.59±2.64)个比(179.93±6.96)个,t=4.147,P<0.05],bcl-2(0.21±0.01比1.04±0.09,t=5.287,P<0.05)、Cyclin D1(0.14±0.00比0.85±0.07,t=4.642,P<0.05)、MMP-9(0.28±0.02比0.84±0.06,t=4.643,P<0.05)、HIF-1α(0.45±0.03比1.53±0.09,t=5.562,P<0.05)、PI3K(0.38±0.01比1.78±0.10,t=5.468,P<0.05)及p-Akt(0.38±0.02比1.10±0.08,t=4.129,P<0.05)蛋白表达量低于对照组。结论上调miR-486-5p表达量可诱导结肠癌细胞SW480凋亡、抑制细胞侵袭、使细胞周期发生阻滞,可能与抑制HIF-1α/PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

微小RNA-363-3p靶向调控PTEN及对黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响

目的探讨微小RNA-363-3p(miR-363-3p)对10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)的靶向调控作用及黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响。方法采用Tumor-miRNA-Pathway网站在线分析miR-363-3p在皮肤黑色素瘤组织中的水平及参与调控的信号通路情况;荧光定量PCR(qPCR)检测正常人皮肤黑色素细胞PIG1和人恶性黑色素瘤细胞A375的miR-363-3p水平。脂质体法向A375细胞转染miR-363-3p抑制剂(Inhibitor组)和阴性无关序列(NC组)并设未转染的细胞为对照组,qPCR检测转染48 h后的miR-363-3p水平以评估转染效率,划痕实验和Transwell小室实验检测划痕愈合率和穿膜细胞数,TargetScan7.1在线预测miR-363-3p与PTEN的靶向结合序列并通过荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系,qPCR和Western blotting检测PTEN、基质金属蛋白酶(MMP)-3、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(p-Akt1)水平。结果在线分析显示皮肤黑色素瘤组织的miR-363-3p水平高于正常皮肤组织,且可调控包括PI3K/Akt在内的37条信号通路。A375细胞的miR-363-3p水平高于PIG1细胞(P<0.05);Inhibitor组的miR-363-3p水平、划痕愈合率和穿膜细胞数分别为0.311±0.082、(13.241±2.603)%和(81.190±6.663)个,均低于对照组的1.002±0.745、(84.068±4.168)%和(242.501±26.536)个及NC组的0.937±0.524、(81.267±5.719)%和(265.592±36.027)个(P<0.05);与对照组和NC组相比,Inhibitor组的PTEN水平升高,而MMP-3、p-PI3K和p-Akt1水平降低(P<0.05);PTEN野生型质粒与miR-363-3p模拟物共转染后,荧光素酶活性降低(P<0.05),而其余共转染组合荧光素酶活性变化不显著(P>0.05)。结论黑色素瘤组织和细胞中,miR-363-3p均为过表达模式,且下调其水平可抑制迁移侵袭能力,可能通过靶向PTEN及激活PI3K/Akt信号通路来发挥促癌作用。MiR-363-3p/PTEN轴有望成为黑色素瘤诊治的潜在靶点。

微小RNA-1269a靶向调控PTEN对肝癌细胞迁移、侵袭和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨微小RNA-1269a(miR-1269a)对肝癌细胞侵袭、迁移和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响及可能机制。方法采用Ualcan数据库分析肝癌组织中miR-1269a的水平;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞(Huh-7、HCCLM6、Hep3B和SMMC-7721)的miR-1269a水平。将SMMC-7721细胞分为4组:空白对照组、阴性对照组、抑制物(Inhibitor)组(转染miR-1269a inhibitor)和Inhibitor+LY294002组(转染miR-1269a inhibitor+PI3K抑制剂LY294002),MTT法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,Western blotting检测PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt1和磷酸化Akt1(p-Akt1)水平,在线预测miR-1269a与靶基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白(PTEN)的潜在结合序列并经荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系。结果369例原发性肝癌组织的miR-1269a水平高于49例正常肝组织(P<0.05)。肝癌细胞的miR-1269a水平均高于HL-7702细胞(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,Inhibitor组的增殖活力减弱且p-PI3K和p-Akt1水平降低(P<0.05);空白对照组、阴性对照组、Inhibitor组和Inhibitor+LY294002组的划痕愈合率依次为(70.235±3.484)%、(75.269±6.245)%、(44.376±3.174)%和(21.812±0.968)%,穿膜细胞数依次为(192.453±10.324)、(201.288±5.873)、(129.197±8.485)和(47.839±9.037)个,Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数均少于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05),而Inhibitor+LY294002组的上述指标均低于Inhibitor组(P<0.05)。PTEN野生型载体和miR-1269a模拟物共转染细胞的荧光素酶活性较PTEN突变型载体和miR-1269a模拟物共转染细胞降低(P<0.05)。结论miR-1269a在肝癌组织和细胞中高表达,且可能通过靶向PTEN来激活PI3K/Akt信号通路来促进肝癌细胞的迁移和侵袭,miR-1269a可能通过调控PI3K/Akt/PTEN轴来发挥促癌作用。

miR-24-3p靶向CHD5影响甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性

目的探讨miR-24-3p调控染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)表达对甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性的影响。方法选取2018年9月—2020年9月杭州市萧山区第一人民医院首次确诊为甲状腺癌的患者125例,收集其癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>4 cm)和相关临床病理资料。选取人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1和人甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1。检测癌组织、癌旁组织和4种细胞中miR-24-3p、CHD5蛋白的表达。对SW579细胞分别转染miR-24-3p抑制物anti-miR-24-3p(anti-miR-24-3p组)和阴性对照物anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、miR-24-3p模拟物miR-24-3p mimics(miR-24-3p mimics组)和阴性对照物miR-NC(miR-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-NC(anti-miR-24-3p+si-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-CHD5(anti-miR-24-3p+si-CHD5组)。分析各组细胞的迁移能力、增殖能力和放射敏感性。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与CHD5的靶向关系。结果癌组织和甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1中miR-24-3p相对表达量均显著高于癌旁组织和正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1(P<0.05),CHD5蛋白相对表达量均显著低于癌旁组织和正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1(P<0.05)。SW579细胞miR-24-3p相对表达量最高,CHD5蛋白相对表达量最低。有无淋巴转移、不同临床分期的甲状腺癌患者之间miR-24-3p和CHD5蛋白表达差异有统计学意义(P<0.001)。抑制miR-24-3p表达可抑制SW579细胞的迁移能力和侵袭能力,并提高SW579细胞的放射敏感性(P<0.05);miR-24-3p靶向负调控CHD5的表达;沉默CHD5可逆转抑制miR-24-3p表达对SW579细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响(P<0.05)。结论抑制miR-24-3p表达可上调CHD5,进而抑制SW579细胞的迁移能力和侵袭能力,提高其放射敏感性。

微小RNA-29a通过10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路调控乳腺癌细胞增殖迁移的机制

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-29a通过第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路调控乳腺癌细胞增殖迁移的机制。方法 应用Lipofectamine^TM3000将miR-29a inhibitor、miR-29a NC转染到MCF-7乳腺癌细胞,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-29a表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、PTEN、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果 miR-29a inhibitor组(0.53±0.05)miR-29a表达量较miR-29a NC组(2.74±0.27)上调(P<0.05)。miR-29a inhibitor组(0.35±0.02)细胞活力较miR-29a NC组(0.58±0.05)降低(P<0.05)。miR-29a inhibitor组细胞早期凋亡率(15.38±1.54)%、晚期凋亡率(23.69±2.37)%较miR-29a NC组[(2.53±0.23)%、(3.17±0.31)%]提高(P<0.05)。miR-29a inhibitor组细胞周期G1期较miR-29a NC组延长(P<0.05)。miR-29a inhibitor组(42.87±4.88)细胞迁移数目较miR-29a NC组(136.49±10.37)降低(P<0.05)。miR-29a inhibitor组中bcl-2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、PI3K、p-Akt表达量较miR-29a NC组下调(P<0.05),PTEN表达量较miR-29a NC组上调(P<0.05)。结论 下调miR-29a表达能通过抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖与迁移。

微小染色体缺陷维持蛋白3对黑色素瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探究微小染色体缺陷维持蛋白3(MCm3)通过Wnt/β-catenin信号通路对黑色素瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法将人恶性黑色素瘤细胞A375分为对照组(空白对照),si-NC组(转染si-NC组)、si-MCm3组(转染si-MCm3组)。以噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,以划痕实验和Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测Wnt3a蛋白(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平。结果对照组、si-NC组和si-MCm3组72 h的细胞存活率分别为(249.31±18.66)%,(253.26±12.63)%,(168.71±16.01)%,侵袭细胞数分别为(375.55±11.83),(366.94±20.04),(148.53±11.75)个,划痕愈合率分别为(53.64±5.71)%,(51.37±4.33)%和(22.37±2.07)%,si-MCm3组与对照组和si-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组和si-NC相比,si-MCm3组细胞Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1均显著降低(均P<0.01)。结论敲低MCm3可抑制黑色素瘤细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关.

微小染色体维持蛋白3(MCM3)在胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究微小染色体维持蛋白3(MCM3)在人胃癌中表达水平及临床意义。方法使用TCGA,CCLE,HPA等公共数据库分析MCM3的mRNA及蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的表达水平。回顾性分析69例胃癌患者的临床病理特征,用免疫组织化学染色法检测肿瘤组织及癌旁正常组织中MCM3蛋白表达水平,分析其与临床病理特征间的关系。使用STRING数据库分析MCM3蛋白的相互作用网络。结果MCM3的mRNA及蛋白在胃癌组织中表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),且其高表达与胃癌肿瘤的大小相关(P<0.05)。在胃癌组织中,MCM3表达与增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平具有相关性(R=0.61,P<0.01),并且两者之间可能存在蛋白-蛋白相互作用。结论MCM3在胃癌中通过与PCNA相互作用而发挥重要作用,并有望成为一个新的诊断及治疗靶点。

miR-489-3p靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-489-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对膀胱癌(BC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法2021年1-7月于河北北方学院附属第一医院进行细胞实验,利用火山图从癌症基因组图谱(TCGA-BLCA)数据库筛选BC差异表达miRNA。以110例BC患者的癌组织及其癌旁组织和购买的人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1及人BC细胞系5637、J82、T24为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定miR-489-3p和PTEN mRNA的表达。根据miR-489-3p的相对表达量均值将BC患者分为低表达组(≤0.36)70例和高表达组(>0.36)40例,并分析miR-489-3p表达在BC患者不同临床病理特征中的变化。双荧光素酶实验验证miR-489-3p和PTEN的靶向关系。选择miR-489-3p表达最低的T24细胞进行转染实验,T24细胞随机分组为对照组、miR-NC(阴性对照)组、miR-489-3p mimics(模拟物)组、miR-489-3p mimics+pcDNA组、miR-489-3p mimics+pc-PTEN组。MTT和克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Western-blot检测PTEN、PI3K、Akt蛋白表达。结果通过火山图筛选出BC组织中显著下调的miR-489-3p。BC癌组织中miR-489-3p表达低于癌旁组织,PTEN mRNA表达高于癌旁组织(t=186.168,510.107,P均<0.001);BC细胞系miR-489-3p表达低于SV-HUC-1细胞,PTEN mRNA表达高于SV-HUC-1细胞(F=883.826,807.220,P均<0.001)。miR-489-3p低表达组患者TNM分期T_(3~4)、有淋巴结转移、肿瘤低分化比例高于高表达组(P<0.05)。双荧光素酶实验显示,miR-489-3p靶向负调控PTEN表达。miR-489-3p mimics组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平高于miR-NC组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数低于miR-NC组(P均<0.01);miR-489-3p mimics+pc-PTEN组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平低于miR-489-3p mimics组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数高于miR-489-3p mimics组(P<0.01)。结论miR-489-3p可能通过靶向下调PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而抑制BC细胞增殖、侵袭,促进凋亡。

LncRNA MCM3AP-AS1在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义

目的 分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者组织中长链非编码RNA微小染色体维系蛋白3结合蛋白反义1 (lncRNA MCM3AP-AS1)的表达情况及其临床意义。方法 收集2017年1月至2018年7月在咸阳市中心医院血液内科接受手术治疗的80例DLBCL患者术中切除的组织(癌组织及其对应的癌旁组织),使用q RT-PCR法检测组织中MCM3AP-AS1、微小RNA (miR)-195-5p表达水平;收集DLBCL患者临床病理资料,术后随访3年,分析MCM3AP-AS1、miR-195-5p不同表达水平与患者病理特征的关系;Pearson法分析MCM3AP-AS1与miR-195-5p的相关性;Logistics回归分析影响DLBCL患者预后不良的主要因素;构建Kaplan-Meier生存曲线,分析MCM3AP-AS1、miR-195-5p表达水平与DLBCL患者3年累积生存率的关系。结果 DLBCL组织中MCM3AP-AS1表达水平为1.64±0.48,明显高于癌旁组织的1.26±0.35;miR-195-5p表达水平为0.69±0.22,明显低于癌旁组织的1.08±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);DLBCL组织中MCM3AP-AS1与miR-195-5p呈负相关(r=-0.560,P=0.000);MCM3AP-AS1、miR-195-5p表达水平与患者临床分期、B症状、国际预后指数(IPI)评分、肿瘤直径有关(P<0.05);生存分析表明,MCM3AP-AS1低表达、miR-195-5p高表达患者的3年累积生存率较高;此外,MCM3AP-AS1、miR-195-5p水平、IPI评分、临床分期、B症状是影响患者预后的主要因素(P<0.05)。结论 DLBCL中MCM3AP-AS1高表达,miR-195-5p低表达,MCM3AP-AS1与miR-195-5p呈负相关,两者表达水平均与DLBCL病理特征有关,可影响预后。

脑胶质瘤中MAGE-D4和MCM3 mRNA的表达水平及其临床意义

目的探讨肿瘤相关抗原(MAGE)-D4和微小染色体维持蛋白3(MCM3)mRNA的表达水平,分析MAGE-D4与MCM3二者之间的相关性及临床意义。方法应用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库比较MAGE-D4和MCM3 mRNA在脑胶质瘤及正常脑组织中的表达情况;并通过癌症基因组图谱(TCGA)、中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库分析MAGE-D4和MCM3 mRNA表达对胶质瘤患者生存期的影响;通过逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法在临床样本(胶质瘤62例,正常脑组织11例)中进一步验证。分析MAGE-D4和MCM3 mRNA表达水平与胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默胶质瘤细胞株SF126和U251中MAGE-D4的表达,接着用RT-qPCR检测干扰后MAGE-D4及MCM3的表达水平。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,MAGED4和MCM3 mRNA的表达水平均高于正常脑组织(P<0.05);TCGA及CGGA数据库显示,MAGE-D4和MCM3 mRNA与多数胶质瘤患者的总体生存率明显相关(P<0.05)。对本实验室收集的脑胶质瘤组织及正常脑组织的RT-qPCR检测结果也显示,胶质瘤组织中MAGE-D4和MCM3 mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4和MCM3 mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(vimentin)的表达水平均无关联性(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床胶质瘤样本组织中MAGE-D4和MCM3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.1405,P=0.0057)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,SF126和U251细胞中MCM3 mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论人脑胶质瘤中MAGE-D4和MCM3高表达,且与总体生存率明显相关,二者表达水平呈正相关,提示其可能共同参与了胶质瘤的发生、发展,具有成为胶质瘤免疫治疗靶点的应用前景。

miR-383-3p靶向PTEN/PI3K/Akt/mTOR信号通路对冠心病大鼠内皮细胞凋亡的影响

目的:探究微小RNA-383-3p(miR-383-3p)靶向调节人第10号染色体缺失的磷酸酶/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PTEN/PI3K/AKT/mTOR)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞凋亡的影响。方法:将SD大鼠分为control组、CHD组、mimic NC组、miR-383-3p mimic组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1-PTEN组,每组15只;除control组外其余组大鼠通过高脂饲料喂养及垂体后叶素注射构建CHD模型,造模前24h,将慢病毒液或质粒载体注射到相应组大鼠中;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测冠状动脉miR-383-3p表达;全自动生化分析仪测定大鼠血脂水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)水平;HE染色及TUNEL法观察冠状动脉组织病理变化及内皮细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-383-3p与PTEN靶向关系;Western blot检测冠状动脉组织Bcl-2、Bax及PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达。结果:与control组相比,CHD组大鼠miR-383-3p、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著减少,三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞凋亡指数(AI)、Bax、PTEN表达显著升高(P<0.05);与CHD组相比,miR-383-3p mimic组miR-383-3p、HDL-C、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著增加,TG、LDL-C、TC、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞AI、Bax、PTEN表达显著减少(P<0.05);过表达PTEN可逆转miR-383-3p高表达对CHD大鼠内皮细胞凋亡及功能损伤的改善作用;PTEN是miR-383-3p的靶向基因。结论:miR-383-3p可通过靶向抑制PTEN表达来激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,与抑制CHD大鼠内皮细胞凋亡密切相关。

MCM2和E2F3在脑膜瘤中的表达及临床意义

目的探讨脑膜瘤中MCM2、E2F3的表达与临床及病理特征的关系。方法收集2013~2015年西南医科大学附属医院神经外科手术切除并经病理确诊的脑膜瘤标本69例以及2015年脑外伤患者行内外减压术采集的正常脑膜19例,运用免疫组化检测MCM2、E2F3在脑膜瘤以及正常脑膜中的表达,分析瘤组织中MCM2、E2F3的表达与脑膜瘤临床及病理特征的关系。结果脑膜瘤中MCM2、E2F3的表达强度明显高于正常脑膜(P<0.05)。MCM2、E2F3在不同病理级别脑膜瘤间的表达差异有统计学意义(P<0.05),并且与脑膜瘤的病理级别呈正相关(P<0.05)。MCM2、E2F3在不同性别、年龄、部位、大小脑膜瘤间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。脑膜瘤中的MCM2与E2F3表达呈正相关(P<0.05)。结论脑膜瘤中MCM2、E2F3的表达水平显著增高,并且与病理分级程度密切相关,在调控脑膜瘤细胞的异常增殖方面起协同作用,值得临床引起重视。