微小核糖核酸-451a在人参养荣汤治疗鼻咽癌放射性黏膜损伤中的机制研究

目的:通过检测微小核糖核酸-451a(miR-451a)和富含半胱氨酸的分泌性酸性蛋白(SPARC)mRNA的表达,推断人参养荣汤治疗鼻咽癌(NPC)放射性黏膜损伤的疗效及作用机制。方法:选择2022年3月—2023年5月收治的鼻咽癌放射性口腔黏膜损伤患者30例作为观察组,选择同期健康者30例作为对照组。采用辨证论治拟人参养荣汤加减治疗,比较观察组治疗前后患者中医症候积分量表和口干程度、口咽疼痛程度、黏膜损伤程度。检测治疗前后患者血清miR-451a和SPARC mRNA表达水平。结果:人参养荣汤可以有效降低患者主症和次症严重程度、Ⅲ级和Ⅳ级口腔黏膜损伤程度、口咽疼痛程度以及口干程度,使患者血清中miR-451a表达下降,促进SPARC mRNA蛋白翻译增强(P<0.05)。治疗前后,miR-451a与中医症候积分均呈正相关(P<0.05)。结论:人参养荣汤对鼻咽癌放射性黏膜损伤具有一定的临床疗效,可降低miR-451a表达水平,升高SPARC mRNA表达水平;miR-451a抑制了SPARC mRNA的翻译,可为将来的中西医结合治疗提供理论依据。

微小核糖核酸-155对肝癌细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的影响

目的探究微小核糖核酸(miR)-155靶向蛋白酪氨酸磷酸酶非受体21型(PTPN21)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养Huh7人肝癌细胞并通过miR-155沉默慢病毒(sh-miR-155)转染下调miR-155。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Huh7细胞miR-155沉默效果,获得稳转细胞株后将细胞株随机分为:Blank组(正常Huh7细胞)、shNC组(Huh7细胞+miR-155空载体)、sh-miR-155组(Huh7细胞+miR-155沉默)、sh-miR-155+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155沉默+PI3K-AKT激动剂)、shNC+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155空载体+PI3K-AKT激动剂)。双荧光素酶实验检测PTPN21是否为miR-155的下游;溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术测定各组细胞凋亡水平;Transwell实验分析各组细胞侵袭与迁移能力;蛋白质印迹检测各组PTPN21、通路相关蛋白PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3表达变化差异。结果sh-miR-155组中miR-155的表达水平低于Blank组及shNC组(P<0.0001),miR-155在Blank组及shNC组表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示,sh-miR-155组中Huh7细胞在2、3、4、5 d时A值均低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而Blank组与shNC组差异无统计学意义(P>0.05);sh-miR-155组在2、3、4、5 d时A值低于sh-miR-155+Recilisib组及shNC+Recilisib组(P=0.0052,P<0.0001),而sh-miR-155+Recilisib组在2、3、4、5 d时A值低于shNC+Recilisib组(P<0.0001)。Blank组与shNC组迁移及侵袭细胞数差异无统计学意义(P>0.05),激活PI3K-AKT信号通路后,与Blank组相比,shNC+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力显著增加(P<0.0001)。相反,沉默miR-155后Huh7细胞的迁移及侵袭细胞数明显低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而PI3K激动剂逆转了这一现象,与sh-miR-155组相比,sh-miR-155+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力增强(P=0.0002)。慢病毒转染Huh7人肝癌细胞以沉默miR-155,下调miR-155抑制PTPN21调控PI3K-AKT信号通路从而抑制肝癌细胞的侵袭、迁移、增殖能力,促进肝癌细胞凋亡。结论miR-155通过靶向PTPN21调控PI3K-AKT信号通路抑制肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖。miR-155可能是未来肝癌治疗潜在靶点。

β-烟酰胺单核苷酸及其在维持基因组稳态中的研究进展

β-烟酰胺单核苷酸(NMN)是辅酶Ⅰ烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))的前体,其主要通过NAD^(+)在细胞生命过程中发挥关键作用,包括DNA损伤修复信号通路、氧化还原反应和代谢反应等。补充NMN提高细胞内NAD^(+)水平以增强DNA损伤修复,已成为国内外研究的焦点。该文综述了NMN在延缓衰老、治疗疾病、维持基因组稳定性及细胞稳态方面的最新研究进展,分析了其提升宿主DNA损伤修复能力的作用机制,并对补充NMN的潜在风险进行探讨,为后续的NMN相关科学研究提供参考。

微小核糖核酸-21反义寡核苷酸对人舌鳞癌细胞生长抑制的体内研究

目的研究微小核糖核酸-21(miR-21)反义寡核苷酸(AS-miR-21)对人舌鳞癌生长的抑制作用。方法采用稳定转染pGL6荧光素酶报告基因质粒的舌鳞癌细胞Tca8113-luc接种裸鼠,建立移植瘤动物模型,瘤体内注射AS-miR-21,应用活体成像和TUNEL等实验技术进行AS-miR-21对人舌鳞癌细胞系生长抑制的体内研究。结果通过转染pGL6荧光素酶报告基因质粒构建了稳定表达荧光素酶活性的Tca8113-luc细胞株。裸鼠皮下荷瘤模型成瘤率高,肿瘤生长稳定。在瘤体内注射AS-miR-21后肿瘤生长减慢,活体成像中光子数偏低,肿瘤标本中坏死灶少见,细胞核变小,染色变浅,异型性减低,新生血管数减少。肿瘤组织中miR-21表达明显下降,凋亡指数升高。结论肿瘤内注射AS-miR-21可以降低舌鳞癌细胞中miR-21的表达,促进舌鳞癌肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的生长。

血清外泌体微小核糖核酸-218表达水平与肝癌预后研究

目的探讨血清外泌体微小核糖核酸(miRNA)-218表达水平与肝癌预后的关系。方法选取自2012年6月至2014年9月收治的120例肝癌患者为肝癌组,均于术前采集血清。另选取同期行健康体检的30例健康者为健康组,并采集血清。分离血清外泌体,并采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测外泌体miRNA-218表达水平。以miRNA-218表达的中位数为截断值,分为高表达与低表达。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,存活率比较采用log-rank检验;多因素分析采用Cox比例风险模型。结果肝癌组血清外泌体miRNA-218相对表达量为(0.32±0.05),明显低于健康组的(0.69±0.09),差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤直径≤5 cm的肝癌患者血清外泌体miRNA-218相对表达量为(0.38±0.05),明显高于直径>5 cm肝癌患者的(0.29±0.02);TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的肝癌患者血清外泌体miRNA-218相对表达量为(0.37±0.06),明显高于TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期肝癌患者的(0.29±0.04),差异均有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,血清外泌体miRNA-218低表达患者3年、5年存活率均低于miRNA-128高表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。COX多因素分析显示,miRNA-218低表达、TNM分期(Ⅲ~Ⅳ期)、肿瘤直径>5 cm是影响肝癌患者3年预后的独立因素;mir-128低表达、肿瘤直径>5 cm是影响肝癌患者5年预后的独立因素(P<0.05)。结论肝癌患者血清外泌体miRNA-218相对表达量明显低于健康者,血清外泌体miRNA-218表达下调与肝癌患者不良预后有关。

孕早期子痫前期孕妇血胎盘生长因子、微小核糖核苷酸水平及风险预测价值

目的:分析血浆胎盘生长因子(PIGF)与微小核糖核苷酸-240(miRNA-240)在孕早期子痫前期(PE)患者血中的表达,并建立疾病预测模型。方法:收集2020年1月-2021年6月本院产前检查并分娩的孕产妇临床资料,诊断PE 130例为病例组,其中早发型PE 70例、晚发型PE 60例,正常孕妇150例为对照组。均于孕11~13^(+6)周产前检查唐氏血清筛查时检测血浆PIGF及血清miRNA-204水平;绘制受试者工作特征曲线分析血浆PIGF及血清miRAN-204预测PE价值。结果:病例组孕早期血浆PIGF(136.98±16.78 pg/ml)低于对照组(179.58±20.13 pg/ml),外周血miRNA-240-5p(2.11±0.41)高于对照组(1.03±0.32)(P<0.001),但病例组中早发型PE与晚发型PE患者均未见差异(P>0.05)。病例组血浆PIGF与血清miRNA-204相对表达量呈负相关(P<0.001)。绘制ROC曲线,孕早期血浆PIGF、血清miRNA-204预测PE均有较好效能,曲线下面积(AUC)分别为0.798、0.809。经logistic回归分析,设X1=PIGF,X2=miRNA-204,得到PE预测值回归方程P=1+[e^(-(0.663X1+0.711X2-4.317))],二者联合预测PE的AUC(0.876)高于单独指标效能。结论:PE患者孕早期血浆PIGF水平异常下降,血清miR-204水平异常升高,预测PE均有良好效能,且联合应用临床价值更高。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定茶叶中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸及其4种前体化合物含量

烟酰胺核糖体(NR)、烟酰胺单核苷酸(NMN)、烟酸(NA)和烟酰胺(NAM)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))的4个前体化合物,口服后可在体内转化为NAD^(+)发挥抗衰老等功效。建立了采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定茶叶中NAD^(+)及其4种前体化合物含量的方法,茶叶经水提取,稀释后直接进行UPLC-MS/MS分析。经方法学验证,5种目标化合物在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.99),回收率为70.00%~120.00%,相对标准偏差为2.09%~14.50%,方法的定量限为0.10~0.50μg·L^(-1)。绿茶、红茶和黑茶中5种目标化合物的含量测定结果显示,绿茶和红茶是NR、NMN、NAD^(+)的良好天然食物来源;主成分分析结果显示,根据5种化合物含量能对红茶、绿茶、黑茶进行良好的类群区分;聚类分析结果显示,同一产地同一类型茶叶中5种化合物质量分布不均,离散度较高,无法进行区分。

微小RNA-98-5p靶向调控核糖核苷酸还原酶小亚基M2调控宫颈癌细胞顺铂的耐药性

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p对顺铂(DDP)耐药宫颈癌细胞顺铂敏感性的调控及其机制。方法用脂质体法将DDP+miR-NC组(转染miR-NC)、DDP+miR-98-5p组(转染miR-98-5p mimics)、DDP+si-NC组(转染si-NC)、DDP+si-核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)组(转染si-RRM2)、DDP+miR-98-5p+pc DNA组(共转染miR-98-5p mimics和pc DNA)、DDP+miR-98-5p+pc DNA-RRM2组(共转染miR-98-5p mimics和pc DNA-RRM2)转染至He La/DDP组细胞;Real-time PCR、Western blotting、CCK-8、迁移实验(Transwell)和双荧光素酶报告基因检测细胞中miR-98-5p、RRM2、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、基因金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达、细胞的抑制率、半数抑制浓度(IC50)、迁移和侵袭及荧光活性。结果与He La组细胞相比,He La/DDP组细胞中miR-98-5p表达显著降低,RRM2表达显著升高,IC50值显著升高(P<0.05);过表达miR-98-5p或抑制RRM2可明显抑制He La/DDP细胞的增殖、迁移和侵袭,下调cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白,上调P21蛋白;miR-98-5p明显抑制野生型RRM2细胞的荧光活性,并且过表达RRM2反转了miR-98-5p对He La/DDP细胞增殖、迁移侵袭的抑制作用。结论MiR-98-5p可抑制顺铂耐药宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,增强对顺铂的敏感性,其机制与靶向RRM2相关,将可为顺铂耐药宫颈癌细胞的治疗提供方向。

微小核糖核酸-21对人舌鳞状细胞癌细胞系生物学特性的影响

目的研究微小核糖核酸-21(miR-21)对人舌鳞状细胞癌细胞系生物学特性的影响。方法将2’O-Me修饰的正义和反义miR-21寡核苷酸序列通过脂质体转染技术转染到舌鳞状细胞癌细胞Tca8113及其高转移株内,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测转染后miR-21在细胞中的表达变化,通过甲基噻唑基四唑(MTT)法、流式细胞术、AnnexinⅤ细胞早期凋亡检测、划痕实验及Transwell实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期、细胞早期凋亡情况、细胞迁移及侵袭能力的变化。结果靶向miR-21的反义寡核苷酸可以有效地抑制Tca8113及其高转移株细胞的增殖,促进细胞凋亡,并抑制细胞的迁移和侵袭能力。结论细胞内转染反义miR-21寡核苷酸序列后,可以降低舌鳞状细胞癌细胞中miR-21的表达,并对舌鳞状细胞癌细胞的生物学行为产生影响。

微小核糖核酸-21对乳腺癌MCF-7细胞反转录富含半胱氨酸蛋白表达的调节研究

目的探讨乳腺癌MCF-7细胞中微小核糖核酸-21(microRNA-21,miR-21)对反转录富含半胱氨酸蛋白(reversion inducing cysteine rich protein with Kazal motifs,RECK)表达的调控作用。方法将miR-21模拟物、miR-21抑制物及模拟物阴性对照、抑制物阴性对照各组瞬时转染到MCF-7细胞中,48 h后通过荧光定量聚合酶链反应检测miR-21在细胞的表达情况,蛋白质印迹法检测转染后RECK表达水平变化。结果细胞转染48 h后,miR-21抑制物组和miR-21模拟物组miR-21的表达分别与转染空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.001),转染miR-21抑制物组miR-21的表达明显下降,转染miR-21模拟物组miR-21的表达明显上调;细胞转染miR-21各组后RECK表达差异有统计学意义(P<0.01),miR-21抑制物组相对其阴性对照组,RECK表达明显上升(P<0.001);miR-21模拟物组相对其阴性对照组,RECK表达明显下降(P<0.001)。结论miR-21可以抑制乳腺癌MCF-7细胞RECK表达,可能成为判断乳腺癌患者预后的评价指标及肿瘤治疗的新靶点。

微小核糖核苷酸对急性心肌梗死的早期诊断价值研究

目的:探讨微小核糖核苷酸(miRNA)在急性心肌梗死(AMI)早期诊断中的价值。方法:将发病时间<3h的胸痛患者60例根据其诊断结果分为AMI组(n=30)和非AMI组(n=30),另选择正常对照组(n=30),在入院即刻测定mi R-208a、肌钙蛋白、肌红蛋白、磷酸肌酸心肌同工酶(CK-MB),比较各组生化标记物的变化。在AMI组动态监测miR-208a和肌钙蛋白的波动情况;以实时荧光定量聚合酶链反应测定miR-208a。结果 :入院即刻AMI组miR-208a明显高于对照组(P<0.05),但肌钙蛋白和CK-MB与对照组无明显差异;发病1h时的miR-208a显著高于对照组(P<0.05),肌钙蛋白浓度尚处于正常范围内。miR-208a的峰值出现于发病12h,峰值明显早于肌钙蛋白。结论:miR-208a在早期AMI诊断中具备高特异性和高敏感性。

脊柱骨折并发脊髓损伤患者血清miRNA-133a和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3表达水平及其与预后的相关性研究

目的探究脊柱骨折并发脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)患者血清微小RNA(microRNA,miR)-133a和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors protein 3,NLRP3)表达水平及其与预后的关系。方法选取2019年1月~2022年3月在贵州省骨科医院治疗的90例脊柱骨折并发SCI患者作为并发SCI组,统计手术后3个月患者预后情况,并依据预后分为预后良好组和预后不良组;另以同期单纯脊柱骨折患者90例作为对照组,记录患者一般资料。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测脊柱骨折患者血清NLRP3水平,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测miR-133a水平;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-133a和NLRP3水平预测脊柱骨折并发SCI患者预后的价值;采用多因素Logistic回归分析脊柱骨折并发SCI患者预后不良的影响因素。结果与对照组比较,并发SCI组血清miR-133a水平(0.68±0.19 vs 1.01±0.24)降低,NLRP3水平(136.42±32.78 pg/ml vs 86.35±15.95 pg/ml)升高,差异具有统计学意义(t=10.227,13.030,均P<0.001)。与预后良好组比较,预后不良组椎管侵占率≥50%比例(64.71%vs 23.21%)、受伤至激素类药物使用时间≥8 h比例(70.59%vs 25.00%)、Frankel分级A级比例(41.18%vs 1.79%)和血清NLRP3水平(162.11±46.74 pg/ml vs 120.82±29.75 pg/ml)升高,miR-133a水平(0.58±0.14 vs 0.74±0.18)降低,差异均具有统计学意义(t=4.430~45.267,均P<0.001)。ROC分析显示,血清miR-133a,NLRP3及二者联合预测脊柱骨折并发SCI患者预后不良的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.779(95%CI:0.681~0.877),0.770(95%CI:0.673~0.868)和0.834(95%CI:0.750~0.918)。Logistic回归结果显示,miR-133a[OR(95%CI)=0.824(0.727~0.934)]、NLRP3[OR(95%CI)=2.673(1.359~5.256)]、椎管侵占率≥50%[OR(95%CI)=1.562(1.146~2.129)]和受伤至激素类药物使用时间≥8h[OR(95%CI)=1.305(1.009~1.687)]均是脊柱骨折并发SCI患者发生预后不良的独立影响因素(均P<0.05)。结论脊柱骨折并发SCI患者血清NLRP3水平较高,miR-133a水平较低,与预后密切相关,两者联合对脊柱骨折并发SCI患者预后有较高预测效能。

循环肿瘤细胞联合血清微小核糖核酸在结直肠癌早期诊断中的应用

目的探讨外周血循环肿瘤细胞(CTC)联合血清微小核糖核酸(miR)在结直肠癌(CRC)早期诊断中的应用价值。方法选取2020年1月至2021年12月郑州大学附属洛阳市中心医院收治的90例CRC患者作为CRC组,选取同期健康查体者60例作为对照组。分析两组临床资料,采用CanPatrolTM CTCs检测技术检测两组外周血中CTC分布情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组血清miR-218-5p、miR-335、miR-497表达水平。采用多因素logistic回归分析CTC、miR-218-5p、miR-335、miR-497与CRC的关系。结果CRC组年龄和吸烟、慢性腹泻、结核病史、肠息肉史、CTC阳性、低表达miR-218-5p、低表达miR-335、低表达miR-497占比高于对照组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄(OR=1.025,95%CI:1.005~1.045)、吸烟(OR=1.007,95%CI:1.004~1.010)、慢性腹泻(OR=2.542,95%CI:1.478~4.372)、结核病史(OR=4.189,95%CI:1.243~14.117)、肠息肉史(OR=2.191,95%CI:1.386~3.464)、CTC阳性(OR=4.586,95%CI:1.257~16.731)、低表达miR-218-5p(OR=2.986,95%CI:1.784~4.998)、低表达miR-335(OR=1.844,95%CI:1.113~3.055)、低表达miR-497(OR=2.728,95%CI:1.615~4.608)均是影响CRC发生的独立危险因素(P<0.05)。结论除年龄、吸烟、慢性腹泻、结核病史、肠息肉史外,CTC、miR-218-5p、miR-335、miR-497也是影响CRC发生的独立危险因素,均可作为早期CRC诊断的可靠标志物。

缺血修饰蛋白、微小核苷酸-126对后循环短暂性脑缺血发作诊断及继发脑梗死的预测价值

目的探讨缺血修饰蛋白(IMA)和微小核苷酸-126(miR-126)对后循环短暂性脑缺血发作(PTIA)的诊断及继发脑梗死的预测价值。方法回顾性分析112例PTIA患者的临床资料及3 h内、6 h及12 h血清IMA和miR-126水平,并结合ABCD2评分,研究其对PTIA诊断及继发脑梗死的相关性。结果同期受试的80名健康志愿者血清IMA水平为(54.19±10.10)U/L,112例PTIA发作后3 h内、6 h及12 h分别为(85.81±20.21)、(62.98±12.79)、(57.66±13.39)U/L。发病后3 h内IMA水平较健康志愿者显著升高(P=0.001),miR-126在PTIA发作后3 h内、6 h、12 h分别为(9.42±1.01)、(8.65±1.59)、(6.13±2.43)。与健康志愿者(9.35±1.76)比较,6 h及12 h显著下降(P=0.036,P=0.001)。3 h内IMA水平及12 h miR-126水平在PTIA患者中显著负相关(r=-0.313,P=0.000)。当IMA水平为67.52 U/L,miR-126为8.64时,在PTIA诊断中的敏感性和特异性分别为73.20%、96.20%和82.10%、81.20%。112例PTIA患者随访30 d,7 d内继发脑梗死11例(9.82%),8~30 d继发脑梗死17例(15.18%)。3 h内IMA及12 h miR-126在PTIA后继发脑梗死的相对风险率分别为Rr=8.45、9.84,CI为1.10~65.03,1.13~86.02,P=0.040、0.039。结论早期IMA及miR-126的检测对诊断PTIA及预测继发脑梗死具有较好的应用价值。

通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在肝癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药中的作用,并开发潜在的策略来提高肝癌细胞对5-FU的敏感性。方法:利用Western blot检测5-FU耐药肝癌细胞(BEL/5-FU)与非耐药肝癌细胞(BEL7402)中RRM2蛋白的表达差异;通过用RNA干扰技术下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达或RRM2抑制剂3-AP(Triapine)抑制RRM2活性;CCK-8和集落形成实验用于检测细胞的增殖能力;使用高内涵细胞成像系统仪检测与分析细胞凋亡。结果:BEL/5-FU细胞中RRM2的表达量是BEL7402细胞的2.5倍。RNA干扰技术能够下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达,并使5-FU对BEL/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC_(50))下降约50%,同时细胞集落形成能力也显著减弱。3-AP与5-FU联合处理BEL/5-FU细胞,使5-FU对BEL/5-FU细胞的IC_(50)下降约40%,细胞集落形成能力减弱,并促进5-FU导致的细胞凋亡。结论:RRM2与肝癌细胞对5-FU的耐药相关,本研究通过抑制RRM2的活性来逆转肝癌细胞对5-FU的耐药,为提高肝癌的5-FU化疗疗效提供新靶点和新思路。

水解核糖核酸生产5′-核苷酸的条件优化及初步鉴定

以啤酒废酵母中提取的核糖核酸为原料,利用单因素试验和响应面优化试验优化了核酸酶P1催化水解核糖核酸的条件,并利用离子交换层析法对水解液中5′-核苷酸进行了初步分离鉴定。结果表明:最佳水解条件为核糖核酸质量浓度7.5 g/L、水解液初始pH 5、水解温度54℃、水解时间2.0 h。通过分离初步确定核糖核酸水解液中含有尿嘧啶核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸和腺嘌呤核苷酸。

5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸联合干扰素对K562细胞的影响

目的:研究5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)联合干扰素(IFN-ɑ-2b)对慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;Wright-Giemsa方法染色,光学显微镜下观察细胞形态;FITC AnnexinV/PI双染法分析细胞凋亡率的变化;免疫细胞化学法检测野生型P53蛋白的阳性表达率。结果:不同浓度AICAR于不同作用时间24、48和72 h对K562细胞均有抑制作用,抑制程度呈时间、剂量依赖性(r=0.71,r=0.84)。AICAR与IFN-ɑ-2b联合应用后可以有效抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,联合作用72 h时细胞的抑制率可达(45.26±2.54)%,联合作用48 h早期凋亡率达(33.72±0.23)%,与对照组及单用AICAR和单用IFN-ɑ-2b相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。AICAR与IFN-ɑ-2b联合作用促进野生型P53蛋白的表达。结论:AICAR和(或)IFN-ɑ-2b能抑制细胞增殖,促进K562细胞凋亡,2药联合具有协同抗瘤效应,其作用机制可能与促进野生型P53蛋白高表达有关。

外周血微小核糖核酸-21、同型半胱氨酸水平变化与急性心肌梗死患者Gensini积分的关联性及临床意义

目的:探讨外周血微小核糖核酸-21(miR-21)、同型半胱氨酸(Hcy)水平变化与急性心肌梗死(AMI)患者Gensini积分的关联性及临床意义。方法:选取2019年6月—2020年6月我院AMI患者136例,均检测其外周血miR-21、Hcy水平,并评估Gensini积分。比较两组一般资料[年龄、性别、合并症、体质量指数(BMI)、Killip分级、心率(HR)、收缩压(SBP)、病变支数、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)],术前与术后3d外周血miR-21、Hcy水平及Gensini积分,分析术前外周血miR-21、Hcy水平与Gensini积分的关联性及预后不良的影响因素。结果:两组年龄、性别、合并症、BMI、HR、SBP比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同预后AMI患者Killip分级、病变支数、cTnI、CK-MB、miR-21相对表达量、Hcy、Gensini积分比较,差异有统计学意义(P<0.05);术前外周血miR-21、Hcy水平与Gensini积分呈正相关(P<0.05);Killip分级、病变支数、cTnI、CK-MB、miR-21相对表达量、Hcy均为AMI患者预后不良的重要影响因素(P<0.05)。结论:AMI患者外周血miR-21、Hcy水平异常升高,且与Gensini积分、预后效果密切相关,具有较高临床指导价值。

miR-93靶向TLR4/NF-κB信号通路对动脉粥样硬化大鼠血管内皮炎症反应的影响

目的 探究微小核RNA(miR)-93对Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB的调控作用及对动脉粥样硬化(AS)大鼠血管内皮炎症反应的影响。方法 大鼠经高脂饲料喂养+腹腔注射维生素D3复制AS模型,随机分为正常对照组、模型组、miR-93模拟物(miR-93 agomir)组、agomir-NC组、RS09(TLR4激活剂)组、miR-93 agomir+RS09组,每组15只,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血脂[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]和炎症因子[白细胞介素(IL)-6、C反应蛋白(CRP)]水平;流式细胞术检测循环内皮细胞比例以评价血管内皮损伤状况;Movat染色观察动脉血管泡沫细胞聚集状况;油红O染色检测斑块面积;免疫组化法检测M1型巨噬细胞标记抗体(CD11)阳性表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-93表达;Western印迹法检测TLR4/核因子(NF)-κB通路蛋白、脂质沉积相关蛋白如三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运体(ABC)A1、载脂蛋白(Apo)A1、巨噬细胞清道夫受体(ScR)-A、凝集素型氧化低密度脂蛋白受体(Lox)-1、M1型巨噬细胞极化相关蛋白[IL-1β、诱导型一氧化氮(iNOS)]、M2巨噬细胞极化相关蛋白[IL-10,几丁质酶-3样蛋白3(YM1)]表达。结果 与正常对照组相比,模型组动脉血管内膜增厚、泡沫细胞聚集及脂质沉积严重,斑块面积比例、IL-6、CRP、循环内皮细胞比例、TG、TC、LDL-C水平、TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化、炎症应答活性均明显升高,HDL-C、miR-93表达明显降低(P<0.05)。外源性上调miR-93,可明显促进脂质转运相关蛋白ABCA1及ApoA1表达,明显抑制TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化和炎症应答,缓解大鼠动脉血管内膜增厚、泡沫细胞聚集及脂质沉积,明显降低斑块面积及循环内皮细胞比例(P<0.05)。RS09可明显促进TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化和炎症应答,并可拮抗miR-93 agomir发挥的上述作用(P<0.05)。结论 外源性上调miR-93表达可能通过靶向抑制TLR4/NF-κB通路活化,发挥抗炎、抗M1型巨噬细胞极化、抗泡沫细胞聚集及抗脂质沉积作用,改善AS大鼠血管内皮损伤。

微小核糖核酸与心血管疾病关系的研究进展

微小核糖核酸（microRNA,miRNA）为非编码RNA（ncRNA）,它长度约22个核苷酸序列,与特定信使在相应的位点结合,通过改变信使RNA的稳定性来调节翻译过程,发挥调控作用,是一种重要的调控因子。多个研究发现miRNA作为ncRNA物种一个非常重要的部分[1],其存在鼠、线虫、果蝇等多个物种中,迄今为止估计人类miRNA序列编码约有1000个,