微小核糖核酸-451a在人参养荣汤治疗鼻咽癌放射性黏膜损伤中的机制研究

目的:通过检测微小核糖核酸-451a(miR-451a)和富含半胱氨酸的分泌性酸性蛋白(SPARC)mRNA的表达,推断人参养荣汤治疗鼻咽癌(NPC)放射性黏膜损伤的疗效及作用机制。方法:选择2022年3月—2023年5月收治的鼻咽癌放射性口腔黏膜损伤患者30例作为观察组,选择同期健康者30例作为对照组。采用辨证论治拟人参养荣汤加减治疗,比较观察组治疗前后患者中医症候积分量表和口干程度、口咽疼痛程度、黏膜损伤程度。检测治疗前后患者血清miR-451a和SPARC mRNA表达水平。结果:人参养荣汤可以有效降低患者主症和次症严重程度、Ⅲ级和Ⅳ级口腔黏膜损伤程度、口咽疼痛程度以及口干程度,使患者血清中miR-451a表达下降,促进SPARC mRNA蛋白翻译增强(P<0.05)。治疗前后,miR-451a与中医症候积分均呈正相关(P<0.05)。结论:人参养荣汤对鼻咽癌放射性黏膜损伤具有一定的临床疗效,可降低miR-451a表达水平,升高SPARC mRNA表达水平;miR-451a抑制了SPARC mRNA的翻译,可为将来的中西医结合治疗提供理论依据。

重复经颅磁刺激对阿尔茨海默病患者临床症状及血浆微小核糖核酸-125b、血浆磷酸化Tau-181蛋白的影响

目的:观察重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者认知功能、神经精神行为症状及血浆微小核糖核酸-125b(microRNA-125b,miR-125b)、血浆磷酸化Tau-181蛋白(phosphorylated Tau181 protein,P-tau181)表达的影响。方法:筛选轻中度AD患者34例,随机分为对照组(n=16)和试验组(n=18)。对照组采取认知训练及重复经颅磁伪刺激,试验组采取认知训练结合重复经颅磁真刺激。磁刺激强度为100%的静息运动阈值,频率为10Hz,每日治疗1次,每周治疗5天,持续4周,刺激脑区为左侧前额叶背外侧区和左侧颞叶区。在治疗前、后进行Addenbrooke-Ⅲ认知检查(the AddenbrookeⅢcognitive examination,ACE-Ⅲ)、简易精神状态量表(mini-mental state scale,MMSE)及神经精神症状问卷(neuropsychiatric inventory,NPI)评估,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测微小miR-125b表达量,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测P-tau181的浓度。结果:治疗结束后,试验组ACE-Ⅲ、MMSE和NPI评分以及miR-125b、P-tau181均较组内治疗前显著改善,差异具有显著性意义(P<0.05),且上述指标与对照组治疗后相比,差异具有显著性意义(P<0.05);而对照组各项指标改善不具有显著性意义(P>0.05)。结论:rTMS能改善轻中度AD患者的认知功能及神经精神行为症状,这可能与rTMS促进血浆miR-125b的表达和抑制P-tau181蛋白产生相关。

慢性心力衰竭患者血清微小核糖核酸-29b表达水平及其临床意义

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血清中微小核糖核酸-29b(miR-29b)的表达水平及其临床意义。方法选取2017年6月至2020年8月长沙市第四医院收治的167例CHF患者作为观察组,并根据纽约心脏协会心功能分级标准进行分级;另选同时间段内145名健康体检者为对照组。采用qRT-PCR检测受试者血清miR-29b表达水平,超声心动图检测左心房内径(LAD)、左心室重构指数(LVRI)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室后壁厚度(LVPWD)、左心室质量指数(LVMI)、左心室射血分数(LVEF)、心排血量(CO),并检测血清N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平及评估堪萨斯城心肌病调查问卷(KCCQ)评分、6 min步行试验(6MWT)。比较对照组和观察组各级心功能患者上述各项指标,采用Pearson相关性分析法分析观察组患者血清miR-29b表达水平与心功能、心室重构指标及生存质量的关系;随访1年,采用多因素Logistic回归分析法分析CHF患者血清miR-29b表达水平与预后的关系。结果观察组心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患者中血清miR-29b相对表达量、LVRI、CO、LVEF及KCCQ评分、6MWT均依次降低(P<0.05),且均低于对照组(F=831.833、386.491、110.251、71.503、101.552、867.632,P<0.05);观察组心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级中LAD、LVEDD、LVMI、LVPWD及血清NT-proBNP、cTnI、cTnT水平均依次升高(P<0.05),且均高于对照组(F=238.758、528.524、241.700、58.167、3712.854、1836.663、2230.468,P<0.05);Pearson相关性分析显示CHF患者miR-29b表达与LVEDD、LVPWD、LVMI、LAD及血清NT-proBNP、cTnI、cTnT水平均呈负相关(r=-0.822、-0.884、-0.891、-0.713、-0.854、-0.813、-0.832,P<0.05),而与LVEF、CO、LVRI及KCCQ评分、6MWT均呈正相关(r=0.734、0.864、0.791、0.721、0.783,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清miR-29b表达是CHF患者预后不良的保护因素(OR=0.517,P<0.05),心功能分级Ⅲ/Ⅳ级和对医嘱依从性差是其预后不良的危险因素(OR=5.496、6.074,P<0.05)。结论miR-29b表达是CHF患者预后不良的影响因素,对CHF的临床诊治具有重要指导作用。

微小核糖核酸对包虫病患者免疫细胞功能的调控作用研究进展

包虫病是一种对宿主造成严重损害的潜在致命性人畜共患疾病。微小核糖核酸(miRNAs)是一类小型非编码RNA分子,可在转录后以序列特异性方式通过抑制或促进mRNA降解以调节基因表达,从而发挥调控生物学过程的作用。宿主感染棘球蚴绦虫后可以引起多种miRNAs表达改变,并参与宿主的免疫调节过程。在包虫病患者的感染过程中,miR-71、miR-4989-3p、miR-222-3p、miR-155-5p、miR-146a-5p可影响单核巨噬细胞功能,miR-277a-3p能够影响树突状细胞功能,miR-374b-5p、miR-126a-5p可影响T淋巴细胞功能,miR-181a-5p能够影响自然杀伤细胞功能,上述miRNAs通过影响患者的免疫细胞及其功能而参与免疫调节。但目前还有很多miRNAs的功能和机制尚未得到证实,需要我们使用更先进的方法来确定有效的miRNAs及其功能,以便为包虫病的早期诊断和治疗提供新靶点及理论依据。

微小核糖核酸-155对肝癌细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的影响

目的探究微小核糖核酸(miR)-155靶向蛋白酪氨酸磷酸酶非受体21型(PTPN21)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养Huh7人肝癌细胞并通过miR-155沉默慢病毒(sh-miR-155)转染下调miR-155。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Huh7细胞miR-155沉默效果,获得稳转细胞株后将细胞株随机分为:Blank组(正常Huh7细胞)、shNC组(Huh7细胞+miR-155空载体)、sh-miR-155组(Huh7细胞+miR-155沉默)、sh-miR-155+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155沉默+PI3K-AKT激动剂)、shNC+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155空载体+PI3K-AKT激动剂)。双荧光素酶实验检测PTPN21是否为miR-155的下游;溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术测定各组细胞凋亡水平;Transwell实验分析各组细胞侵袭与迁移能力;蛋白质印迹检测各组PTPN21、通路相关蛋白PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3表达变化差异。结果sh-miR-155组中miR-155的表达水平低于Blank组及shNC组(P<0.0001),miR-155在Blank组及shNC组表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示,sh-miR-155组中Huh7细胞在2、3、4、5 d时A值均低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而Blank组与shNC组差异无统计学意义(P>0.05);sh-miR-155组在2、3、4、5 d时A值低于sh-miR-155+Recilisib组及shNC+Recilisib组(P=0.0052,P<0.0001),而sh-miR-155+Recilisib组在2、3、4、5 d时A值低于shNC+Recilisib组(P<0.0001)。Blank组与shNC组迁移及侵袭细胞数差异无统计学意义(P>0.05),激活PI3K-AKT信号通路后,与Blank组相比,shNC+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力显著增加(P<0.0001)。相反,沉默miR-155后Huh7细胞的迁移及侵袭细胞数明显低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而PI3K激动剂逆转了这一现象,与sh-miR-155组相比,sh-miR-155+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力增强(P=0.0002)。慢病毒转染Huh7人肝癌细胞以沉默miR-155,下调miR-155抑制PTPN21调控PI3K-AKT信号通路从而抑制肝癌细胞的侵袭、迁移、增殖能力,促进肝癌细胞凋亡。结论miR-155通过靶向PTPN21调控PI3K-AKT信号通路抑制肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖。miR-155可能是未来肝癌治疗潜在靶点。

姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖诱导的损伤研究

目的:探究姜黄素(curcumin,Cur)通过miR-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖(highglucose,HG)诱导的损伤。方法:将心肌细胞分为Con组(正常培养细胞)、HG组(30mmol/L葡萄糖培养细胞)、HG+Cur-L组(姜黄素25μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur-M组(姜黄素50μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞)、HG+Cur-H组(姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-NC组(转染miR-NC,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-34a(转染miR-34a,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-34a+3-MA组(转染miR-34a,使用姜黄素100μmol/L、葡萄糖30 mmol/L及自噬抑制剂3-MA 10μmol/L培养细胞)。采用qRT-PCR检测miR-34a表达水平;CCK8检测细胞活性;ELISA检测LDH含量、SOD、GSH-Px活性;Western blot检测Beclin-1、LC3II/I、p62蛋白表达。结果:与Con组相比,HG组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显降低,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显增加。与HG组比较,HG+Cur-L组、HG+Cur-M组、HG+Cur-H组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显增加,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显降低。与HG+Cur+miR-NC组相比,HG+Cur+miR-34a、HG+Cur+miR-34a+3-MA组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显降低,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显增加。与HG+Cur+miR-34a组相比,HG+Cur+miR-34a+3-MA组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显增加,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显降低。结论:姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导自噬途径减缓高糖诱导的心肌细胞损伤。

老年急性心肌梗死伴心力衰竭患者血清中Kruppel样因子15、微小核糖核酸128-3p表达与心功能的关系

目的探讨老年急性心肌梗死(AMI)伴心力衰竭患者血清中Kruppel样因子15(KLF15)、微小核糖核酸128-3p(miR-128-3p)表达与心功能的关系。方法纳入2020年8月至2021年8月期间襄阳市襄州区人民医院收治的老年AMI伴心力衰竭患者112例作为AMI伴心力衰竭组,同期选取一般资料相匹配且单纯AMI患者120例作为AMI组,所有患者采用超声心动图进行心功能检测,记录左心室收缩末期内径(LVESd)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室射血分数(LVEF);测定患者血清中脑钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、KLF15、miR-128-3p水平;Pearson法分析老年AMI伴心力衰竭患者血清KLF15、miR-128-3p表达水平与BNP、CK-MB、cTnI、LVESd、LVEDd、LVEF相关性,并分析血清KLF15与miR-128-3p的相关性。结果与AMI组相比,AMI伴心力衰竭组患者miR-128-3p表达水平、BNP、CK-MB、cTnI、LVESd、LVEDd水平升高(t/Z=38.306、5.865、7.997、20.575、16.037、17.368,P<0.05),LVEF、KLF15水平降低(t=24.072、47.301,P<0.05)。AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p水平随心功能分级升高而升高(F=322.866,P<0.05),KLF15水平随心功能分级升高而降低(F=221.228,P<0.05);老年AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p表达水平与BNP、CK-MB、cTnI呈正相关(r=0.667、0.525、0.617,P<0.05),与LVEF呈负相关(r=-0.537,P<0.05);血清KLF15表达水平与BNP、CK-MB、cTnI、LVEDd呈负相关(r=-0.531、-0.574、-0.562、-0.416,P<0.05),与LVEF呈正相关(r=0.624,P<0.05)。TargetScan网站预测miR-128-3p与KLF15具有靶向结合位点,Pearson分析显示,老年AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p与KLF15呈负相关(r=-0.853,P<0.05)。结论老年AMI伴心力衰竭患者血清KLF15降低,miR-128-3p水平升高,均与患者心功能指标具有相关性,可作为判断AMI伴心力衰竭患者心功能的标志物。

血清微小核糖核酸-183、基质金属蛋白酶9水平与B型主动脉夹层患者预后的关系

目的 探讨血清微小核糖核酸(miRNA)-183、基质金属蛋白酶9(MMP9)水平与B型主动脉夹层(TBAD)患者胸段血管内主动脉修复术(TEVAR)后预后的关系。方法 收集2019年1月至2022年1月柳州市工人医院接受TEVAR治疗的150例TBAD患者的临床资料,根据术后随访情况将患者分为预后不良组(n=27)和预后良好组(n=121)。统计随访期间不良事件的发生情况,采用多因素Logistic回归模型分析TBAD患者TEVAR术后预后不良的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)分析miRNA-183、MMP9对TBAD患者TEVAR术后预后不良的预测价值。结果 随访时间为8~44个月,中位随访23个月。预后不良组患者的年龄大于预后良好组患者,高血压比例、2型糖尿病比例、收缩压、白细胞计数、空腹血糖、糖化血红蛋白水平及血清MMP9水平均高于预后良好组患者,血清mi RNA-183的表达水平低于预后良好组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,高血压、MMP9表达水平高均是TBAD患者TEVAR术后预后不良的危险因素(P<0.05),miRNA-183水平高是TBAD患者TEVAR术后预后不良的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-183和MMP9联合预测TBAD患者TEVAR术后预后不良的曲线下面积(AUC)为0.919,高于miRNA-183、MMP9单独预测的0.824、0.843,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 血清miRNA-183表达下调、MMP9水平升高均与TBAD患者TEVAR术后预后不良有关,可作为其预后分析的标志物。

微小核糖核酸在脓毒症中的作用机制研究进展

脓毒症是由感染引起的全身性炎性反应综合征,是创伤、烧伤、术后感染和危重病的常见并发症,可导致脓毒性休克和多器官功能障碍综合征,具有发病急、病死率高的特点。微小核糖核酸(miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码RNA,参与调节免疫、代谢、分化、增殖和癌变等多种生物学过程,在脓毒症的发生发展中发挥重要作用。该文介绍了miRNA的生物学特性,以及与脓毒症相关的miRNA在脓毒症的发生、发展过程中的调控机制,以期为脓毒症的预防和治疗提供参考。

安罗替尼对年龄大于75岁晚期非小细胞肺癌患者微小核糖核酸表达水平的影响

目的分析安罗替尼对年龄大于75岁晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者微小核糖核酸(Micro-ribonucleic acid,miR)-185-5p、miR-204-5p、miR-96-5p表达水平及预后情况。方法2018年3月至2021年3月河北省张家口市第一医院收治的年龄大于75岁晚期NSCLC患者114例,按照随机数字表法分为对照组和联合组,每组各57例。对照组接受紫杉醇联合顺铂治疗,联合组在紫杉醇联合顺铂基础上应用安罗替尼,21d为1个周期,两组均治疗3个周期,并随访1年。分析治疗3个周期后疗效,治疗前、治疗3个周期后全血T淋巴细胞亚群、血清miR-185-5p、miR-204-5p、miR-96-5p表达水平,治疗期间不良反应发生情况,随访1年期生存率。结果联合组治疗3个周期后肿瘤控制率及1年期生存率高于对照组(P<0.05)。治疗3个周期后,联合组血清miR-96-5p表达水平更低,血清miR-185-5p、miR-204-5p表达水平,外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平更高(P<0.05)。两组治疗期间不良反应发生率接近(P>0.05)。结论安罗替尼治疗年龄大于75岁晚期NSCLC患者疗效较好,可提高1年期生存率,改善机体细胞免疫,还可能与调节miR-185-5p、miR-204-5p、miR-96-5p表达有关,且安全性良好。

循环肿瘤细胞联合血清微小核糖核酸在结直肠癌早期诊断中的应用

目的探讨外周血循环肿瘤细胞(CTC)联合血清微小核糖核酸(miR)在结直肠癌(CRC)早期诊断中的应用价值。方法选取2020年1月至2021年12月郑州大学附属洛阳市中心医院收治的90例CRC患者作为CRC组,选取同期健康查体者60例作为对照组。分析两组临床资料,采用CanPatrolTM CTCs检测技术检测两组外周血中CTC分布情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组血清miR-218-5p、miR-335、miR-497表达水平。采用多因素logistic回归分析CTC、miR-218-5p、miR-335、miR-497与CRC的关系。结果CRC组年龄和吸烟、慢性腹泻、结核病史、肠息肉史、CTC阳性、低表达miR-218-5p、低表达miR-335、低表达miR-497占比高于对照组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄(OR=1.025,95%CI:1.005~1.045)、吸烟(OR=1.007,95%CI:1.004~1.010)、慢性腹泻(OR=2.542,95%CI:1.478~4.372)、结核病史(OR=4.189,95%CI:1.243~14.117)、肠息肉史(OR=2.191,95%CI:1.386~3.464)、CTC阳性(OR=4.586,95%CI:1.257~16.731)、低表达miR-218-5p(OR=2.986,95%CI:1.784~4.998)、低表达miR-335(OR=1.844,95%CI:1.113~3.055)、低表达miR-497(OR=2.728,95%CI:1.615~4.608)均是影响CRC发生的独立危险因素(P<0.05)。结论除年龄、吸烟、慢性腹泻、结核病史、肠息肉史外,CTC、miR-218-5p、miR-335、miR-497也是影响CRC发生的独立危险因素,均可作为早期CRC诊断的可靠标志物。

慢性阻塞性肺疾病合并冠心病患者组胺、可溶性髓样细胞触发受体-1、微小核糖核酸-145、超敏C反应蛋白的表达特征及检测价值

目的 探讨组胺(HA)、可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、微小核糖核酸-145(miR-145)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并冠心病(CHD)患者中的表达特征及检测价值。方法 将107例COPD合并CHD患者设为研究组,同期健康体检者107例设为对照组。抽取受检者血液样本,检测miR-145、HA及sTREM-1、hs-CRP水平。比较2组HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平,并比较研究组不同病情严重程度和纽约心脏病协会(NYHA)分级患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平。观察各指标水平与病情严重程度、NYHA分级的关联性。结果 研究组HA、sTREM-1、hs-CRP水平高于对照组,miR-145水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同COPD病情严重程度患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着病情严重程度的加剧,HA、sTREM-1、hs-CRP水平持续增高,miR-145持续降低,差异有统计学意义(P<0.05)。不同NYHA分级患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着NYHA分级的增高,HA、sTREM-1、hs-CRP水平持续增高,miR-145持续降低,差异有统计学意义(P<0.05)。HA、sTREM-1、hs-CRP与COPD病情严重程度、NYHA分级呈正相关,miR-145与COPD病情严重程度、NYHA分级呈负相关(P<0.05)。结论 COPD合并CHD患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP表达异常,且与COPD病情严重程度、NYHA分级密切相关。

微小核糖核酸34a与沉默信息调节因子1在宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的:探讨微小核糖核酸34a(miR-34a)及沉默信息调节因子1 (SIRT1)在宫颈癌组织中的表达及其相关性。方法:收集住院患者标本,采用RT-qPCR法检测miR-34a在正常宫颈、宫颈癌组织中的表达;免疫组化法检测SIRT1在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达,分析miR-34a及SIRT1表达与宫颈癌患者临床病理参数的关系,并作Spearman相关分析。结果:miR-34a在宫颈癌组织中的表达明显低于正常宫颈组织(P<0.05),且miR-34a在宫颈癌组织的表达与肿瘤分化程度显著相关(均P<0.05);免疫组化显示SIRT1在宫颈癌组织中的表达高于正常宫颈组织,其阳性表达率分别为84%与20%,差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman分析显示,SIRT1与miR-34a在宫颈癌组织中的表达呈负相关(r=-0.327,P<0.05)。结论:miR-34a在宫颈癌的发生中起重要作用,这为宫颈癌临床治疗提供了一个潜在靶点。

利用CRISPR-Cas9技术构建微小核糖核酸-551b基因敲除小鼠模型

目的:利用成簇规律性间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白9(CRISP associated protein 9,Cas9)技术构建微小核糖核酸-551b(miR-551b)基因敲除小鼠模型。方法:选择健康C57BL/6J小鼠,针对miR-551b外显子1区域,设计导向RNA(guide RNA,gRNA),构建Cas9载体质粒,将体外转录的Cas9 RNA及gRNA显微注射入小鼠的受精卵并体外培养。将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠,使用基因测序确定基因敲除情况,与野生型小鼠繁育后,得到F1代杂合小鼠,F1代小鼠经自交繁育获得F2代小鼠,F3代小鼠由F2代纯合小鼠自交获得,采用电泳鉴定小鼠基因型,RT-PCR检测F3代小鼠组织miR-551b的表达。结果:利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠,通过测序筛选出缺失目标序列的F0代杂合子小鼠。与WT小鼠繁育后,琼脂糖凝胶电泳及测序筛选出F1代杂合小鼠,同样的方法鉴定并获得F2、F3代基因敲除小鼠,获取F3代纯合小鼠的心脏及下腔静脉样本,RT-PCR结果证实F3代纯合小鼠miR551b表达明显低于WT小鼠(P<0.05),成功敲除miR-551b基因。结论:通过CRISPR-Cas9技术成功构建miR⁃155基因敲除小鼠模型并稳定遗传,为进一步研究提供了有利条件。

子宫内膜癌患者血清微小核糖核酸-146a、微小核糖核酸-155表达水平及其临床意义

目的分析子宫内膜癌(EC)患者血清微小核糖核酸-146a(miR-146a)、微小核糖核酸-155(miR-155)表达水平及其临床意义。方法前瞻性纳入达州市中心医院2019年7月至2021年4月收治的81例EC患者作为EC组,另纳入同期收治的81例子宫内膜增生患者作为内膜增生组。检测并比较两组入院时血清miR-146a、miR-155水平;询问并记录EC患者临床病理特征,比较不同病理特征EC患者血清miR-146a、miR-155水平,分析血清miR-146a、miR-155水平与EC患者临床病理特征的关系。结果EC组血清miR-146a水平低于内膜增生组,miR-155水平高于内膜增生组(P<0.05)。有淋巴结转移EC患者血清miR-146a水平低于无淋巴结转移患者,miR-155水平高于无淋巴结转移患者(P<0.05);经Logistic回归分析结果显示,血清miR-146a水平升高可能是EC患者淋巴结转移的保护因子(OR<1,P<0.05),miR-155水平升高可能是EC患者淋巴结转移的风险因子(OR>1,P<0.05)。结论EC患者血清miR-146a降低水平、miR-155水平升高,且血清miR-146a水平降低、miR-155水平升高可能与EC患者淋巴结转移有关。

微小核糖核酸在针灸干预疾病机制研究中的应用进展

微小核糖核酸(miRNA)通过调控mRNA来调节基因的表达,是多种生理过程不可或缺的参与者。大量研究显示,miRNA对基因的表达与调控在疾病发生发展和治疗中扮演了重要的角色,且若干miRNA被验证与针灸效应机制密切相关。针灸可能通过调控miRNA影响多条传导通路,干预炎性反应、细胞增殖、分化与凋亡以及5-羟色胺系统,从而达到治疗疾病的目的。本研究着重分析了近10年文献,并整理出通过miRNA探究针灸作用机制的研究,整合miRNA在针灸机理探究中的应用策略,为日后相关研究提供思路。

宫颈癌患者血清微小核糖核酸-381、微小核糖核酸-145水平变化及与临床病理参数相关性分析

目的:探讨宫颈癌(CC)患者血清微小核糖核酸-381(miRNA-381)、微小核糖核酸-145(miRNA-145)水平的变化及与临床病理参数的关系。方法:选取CC患者80例作为观察组,并于同期健康女性体检者选取68例作为对照组。采用定量聚合酶链反应法(QRT-PCR)检测两组血清miRNA-381、miRNA-145表达水平,同时收集其临床病理资料,探究血清表达水平与临床病理参数的关系。结果:观察组血清miRNA-381、miRNA-145水平低于对照组(均P<0.05);CC患者血清miRNA-381、miRNA-145表达水平与患者年龄、乳头瘤病毒感染、肿瘤直径、病理分期等因素无关(均P>0.05);与病理类型、组织分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移有关(均P<0.05)。结论:CC患者中血清miRNA-381、miRNA-145呈低表达,其表达水平与病理类型、组织分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移有关。

两种微小核糖核酸与急性心肌梗死介入术后心血管事件的关系

目的:探讨术前微小核糖核酸-5196-5p(micro ribonucleic acid 5196-5p,miR-5196-5p)和miR-652-5p水平与急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)后发生主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular and cerebrovascular events,MACE)的关系。方法:选取2019年1月至2020年12月间,于益阳市中心医院心内科行PCI治疗的AMI患者591例作为研究对象,采用荧光定量PCR测量miR-5196-5p和miR-652-5p相对表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-5196-5p和miR-652-5p对AMI患者发生MACE的预测价值。采用多因素入Cox回归模型分析影响AMI患者PCI术后发生MACE的影响因素。结果:591例AMI患者中,共有63(10.7%)例患者至少发生过1次MACE。与未发生MACE组患者相比,发生MACE组患者年龄更大,BMI、LDL-C、血肌酐及miR-5196-5p更高,HDL-C及miR-652-5p水平更低(均P<0.05)。miR-5196-5p和miR-652-5p预测AMI患者PCI术后发生MACE的曲线下面积(AUC)分别为0.895和0.842,而二者联合AUC可达0.953(P<0.01)。多因素Cox回归分析表明,miR-5196-5p上调及miR-652-5p下调是AMI患者PCI术后发生MACEs的危险因素。结论:miR-5196-5p表达上调和miR-652-5p表达下调是AMI患者PCI术后发生MACE的危险因素,二者联合检测对MACE具有一定的预测价值。

尿沉渣微小核糖核酸检测联合超声对膀胱癌的诊断价值研究

目的:探讨尿沉渣微小核糖核酸(miRNA)检测联合超声对膀胱癌的诊断价值。方法:选取在医院就诊的127例膀胱癌患者,将其纳入观察组,另将同期127例在医院就诊的泌尿系统良性疾病(泌尿系结石、尿道感染、慢性前列腺炎等)患者纳入对照组。所有患者均接受超声和尿沉渣miRNA-192(miR-192)检查,观察超声联合miR-192对膀胱癌的诊断价值。结果:观察组患者miR-192相对表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(t=31.097,P<0.001)。对观察组膀胱癌患者分析显示,不同性别、年龄及体质量指数的膀胱癌患者miR-192表达相比较差异无统计学意义(t=0.622,t=0.482,t=0.698;P>0.05),不同肿瘤T分期、肿瘤大小和尿细胞学分级患者miR-192表达相比较差异有统计学意义(F=21.053,t=2.175,t=3.359;P<0.05)。miR-192和超声预测膀胱癌的灵敏度分别为85.04%和82.68%,特异度分别为81.10%和85.53%;miR-192联合超声预测膀胱癌的特异度为94.78%,显著高于miR-192和超声单独诊断;miR-192联合超声预测膀胱癌的灵敏度为96.85%,显著高于miR-192和超声单独诊断。结论:膀胱癌患者尿沉渣中miR-192表达下调,与肿瘤进展有关,而miR-192在尿沉渣中的检测联合超声检查,对膀胱癌的诊断具有较高的敏感性。

原发性先天性青光眼(PCG)患儿与正常婴幼儿血浆中微小核糖核酸(miRNA或miR)-29b、miR-24、miR-200c的表达差异及临床意义

目的探讨原发性先天性青光眼(primary congenital glaucoma,PCG)患儿与正常婴幼儿血浆中微小核糖核酸(miRNA或miR)-29b、miR-24、miR-200c的表达差异及临床意义。方法收集2015年至2017年散发的PCG患儿16例血浆标本作为PCG组,另选年龄相近的正常婴幼儿共49例血浆标本作为正常人组。应用实时荧光定量PCR检测两组受试者血浆中miR-29b、miR-24、miR-200c的表达量,分析各自表达差异与病变严重程度的关系,并运用ROC曲线评价其诊断价值。结果PCG组受试者血浆中miR-29b、miR-24、miR-200c相对表达量(0.31±0.19、0.17±0.16、0.55±0.18)明显低于正常人组(1.18±0.52、2.86±2.65、1.62±0.76),差异均有统计学意义(均为P<0.05);血浆中miR-24、miR-29b的表达与PCG病变严重程度有关,病变越严重,其表达量越低;ROC曲线表明miR-24和miR-29b对PCG疾病的诊断价值高于miR-200c。结论血浆中游离的miRNA可作为辅助诊断PCG一种新的血浆标志物。