血清微小RNA-499a-5p、成纤维细胞生长因子9、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤患者病情严重程度和预后的关系

目的探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系。方法选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例)。根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例)。以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例)。另外,选取同期体检健康者151例为健康组。分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能。结果轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症并发ALI患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P<0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P<0.05)。miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关。miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估。

激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

高、低表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的调控作用

目的探讨高、低表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体对食管鳞癌细胞(ESCC)迁移和侵袭的调控作用及其机制。方法提取转染miR-296-5p过表达和miR-296-5p干扰及其阴性对照物(NC)后的ESCC细胞外泌体,并采用透射电镜与Western blotting法进行鉴定;将ESCC细胞分为三组,干扰组、过表达组分别加入miR-296-5p干扰或过表达细胞的外泌体培养,NC组加入NC转染细胞的外泌体培养48 h;取各组细胞,MTT法检测细胞活力、Transwell法检测细胞侵袭迁移能力,RT-PCR、Western blotting法检测细胞黏附分子3(CADM3)、CADM1、CADM4、钙黏蛋白E(E-cadherin)及血管内皮细胞生成浸润相关蛋白CD31、CD44。结果细胞活力、迁移和侵袭细胞数过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05)。细胞中CADM1、CADM4、E-cadherin基因及蛋白表达水平干扰组>NC组>过表达组,CADM3、CD31、CD44基因及蛋白表达水平过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05)。结论高表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体可能通过调控CADM、E-cadherin、CD31、CD44等基因表达提高ESCC细胞的侵袭、迁移能力。

胶质瘤组织lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达与临床特征及预后的关系研究

目的探讨胶质瘤组织长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)25、微小RNA(miR)-497-5p表达与临床特征及预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月该院收治的157例胶质瘤患者为胶质瘤组,同期该院100例因颅脑损伤接受手术治疗的患者为对照组。分别取术中切除的胶质瘤组织和正常脑组织检测lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平,术后随访3年。分析lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p的相关性,lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平与患者临床特征和预后的关系。结果与对照组比较,胶质瘤组lncRNA SNHG25表达水平升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。与肿瘤最大径<4 cm、世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分级Ⅰ~Ⅱ级比较,肿瘤最大径≥4 cm、WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级的胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。胶质瘤患者的lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p呈负相关(r=-0.370,P<0.05)。lncRNA SNHG25高表达组累积生存率低于lncRNA SNHG25低表达组(P<0.05),miR-497-5p低表达组累积生存率低于miR-497-5p高表达组(P<0.05)。WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、lncRNA SNHG25高表达是胶质瘤患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-497-5p高表达则是保护因素(P<0.05)。结论胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低,且与肿瘤最大径增大、WHO中枢神经系统肿瘤分级高有关,可导致胶质瘤患者不良预后。

LINC00852调节miR-671-5p/MYH9信号轴对非小细胞肺癌细胞增殖侵袭及迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA00852(LINC00852)调节微小RNA-671-5p(miR-671-5p)/肌球蛋白重链9(MYH9)信号轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:采用qRT-PCR法检测45例2022年9月至2023年12月期间在我院进行手术的NSCLC患者术中切除的NSCLC组织及癌旁组织中LINC00852、miR-671-5p、MYH9 mRNA的表达。以A549细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LINC00852组、sh-LINC00852+anti-NC组、sh-LINC00852+anti-miR-671-5p组。检测各组中LINC00852、miR-671-5p、MYH9 mRNA的表达;平板克隆实验、Transwell实验、划痕实验分别检测敲低LINC00852对A549细胞的增殖、侵袭、迁移的影响;Western blot检测各组A549细胞中PCNA、MYH9、MMP-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测LINC00852与miR-671-5p、miR-671-5p与MYH9之间的互作。结果:NSCLC组织LINC00852(1.65±0.34)、MYH9 mRNA表达(1.73±0.35)高于癌旁组织[(0.98±0.29)、(1.01±0.33)](t=10.058、10.041,P<0.05),miR-671-5p表达(0.52±0.15)低于癌旁组织(1.00±0.18)(t=13.742,P<0.05)。sh-LINC00852组A549细胞的克隆数、侵袭数、划痕愈合率、LINC00852、MYH9 mRNA和蛋白、PCNA蛋白、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-671-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LINC00852组、sh-LINC00852+anti-NC组相比,sh-LINC00852+anti-miR-671-5p组克隆数、侵袭数、划痕愈合率、MYH9 mRNA和蛋白、PCNA蛋白、MMP-9蛋白表达升高,miR-671-5p表达降低(P<0.05)。LINC00852可以靶向负调控miR-671-5p,miR-671-5p可以靶向负调控MYH9。结论:敲低LINC00852可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭、迁移,其机制可能是通过调控miR-671-5p/MYH9信号通路实现的。

LncRNA CASC9靶向调节miR-195-5p/VEGFA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因(LncRNA CASC)9对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人OSCC组织与细胞中LncRNA CASC9表达,筛选最佳细胞系。体外培养OSCC细胞SCC15,将细胞分为空白对照(Control)组、si-CASC9组、si-NC组、miR-195-5p mimic组、miR-NC组、si-CASC9+NC inhibitor组、si-CASC9+miR-195-5p inhibitor组、miR-195-5p mimics+pcDNA组、miR-195-5p mimics+VEGFA组,qRT-PCR检测LncRNA CASC9、miR-195-5p表达,CCK-8法检测SCC15细胞增殖,流式细胞仪检测SCC15细胞凋亡,Transwell实验检测SCC15细胞迁移;Western印迹法检测SCC15细胞中血管内皮生长因子(VEGF)A、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-195-5p与LncRNA CASC9、VEGFA的靶向关系。结果LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中表达较癌旁组织显著上调(P<0.05);抑制LncRNA CASC9表达或过表达miR-195-5p可显著抑制SCC15细胞增殖及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,LncRNA CASC9、VEGFA与miR-195-5p存在靶向关系(P<0.05);抑制miR-195-5p表达可显著逆转抑制LncRNA CASC9表达对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05);上调VEGFA表达可显著逆转过表达miR-195-5p对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05)。结论LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中上调表达,抑制LncRNA CASC9表达可通过调节miR-195-5p/VEGFA轴抑制OSCC细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

安罗替尼对年龄大于75岁晚期非小细胞肺癌患者微小核糖核酸表达水平的影响

目的分析安罗替尼对年龄大于75岁晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者微小核糖核酸(Micro-ribonucleic acid,miR)-185-5p、miR-204-5p、miR-96-5p表达水平及预后情况。方法2018年3月至2021年3月河北省张家口市第一医院收治的年龄大于75岁晚期NSCLC患者114例,按照随机数字表法分为对照组和联合组,每组各57例。对照组接受紫杉醇联合顺铂治疗,联合组在紫杉醇联合顺铂基础上应用安罗替尼,21d为1个周期,两组均治疗3个周期,并随访1年。分析治疗3个周期后疗效,治疗前、治疗3个周期后全血T淋巴细胞亚群、血清miR-185-5p、miR-204-5p、miR-96-5p表达水平,治疗期间不良反应发生情况,随访1年期生存率。结果联合组治疗3个周期后肿瘤控制率及1年期生存率高于对照组(P<0.05)。治疗3个周期后,联合组血清miR-96-5p表达水平更低,血清miR-185-5p、miR-204-5p表达水平,外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平更高(P<0.05)。两组治疗期间不良反应发生率接近(P>0.05)。结论安罗替尼治疗年龄大于75岁晚期NSCLC患者疗效较好,可提高1年期生存率,改善机体细胞免疫,还可能与调节miR-185-5p、miR-204-5p、miR-96-5p表达有关,且安全性良好。

miR-9-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力的调控作用及其机制

目的观察微小RNA(miR)-9-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力的调控作用,并基于痉挛性截瘫20(SPG20)基因及Notch信号通路探讨相关机制。方法培养肺腺癌细胞株A549并分为抑制物组、阴性对照组和未转染组,抑制物组和阴性对照组分别转染miR-9-5p抑制物和阴性对照,未转染组不进行转染;采用MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Western blotting法检测Notch信号通路相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Notch1、Snail和基质金属蛋白酶2(MMP-2)]。采用TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_80/)预测miR-9-5p与SPG20基因结合位点,并用双荧光素酶报告基因分析进行验证;检测肺腺癌组织和细胞中的miR-9-5p、SPG20 mRNA和蛋白;将A549细胞分为抑制物组、阴性对照组和未转染组,采用RT-PCR法检测各组细胞中的SPG20 mRNA。结果培养12、24、36、48 h时miR-9-5p抑制物组细胞增殖能力低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。抑制物组穿模细胞数和细胞迁移距离低于阴性对照组和为转染组(P均<0.05)。抑制物组Notch1、Snail、MMP-2蛋白表达低于阴性对照组和未转染组,E-cadherin蛋白表达高于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。SPG20基因存在连续的可以与miR-9-5p互补的核苷酸序列;共转染SPG20-WT和miR-9-5p质粒的A549细胞相对荧光素酶活性低于其他细胞(P均<0.05)。肺腺癌组织和细胞中miR-9-5p高表达、SPG20mRNA和蛋白低表达(P均<0.05),肺腺癌组织中miR-9-5p与SPG20 mRNA表达呈负相关(r=-0.914,P<0.05)。抑制物组SPG20 mRNA表达高于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。结论miR-9-5p能够抑制肺腺癌细胞的增殖能力及侵袭、迁移能力,作用机制可能与负性调节SPG20基因表达及调控Notch信号通路有关。

血清微小RNA-7a-5p及前蛋白转化酶枯草溶菌素9水平与急性胰腺炎患者病情严重程度及预后的关系

目的分析血清微小RNA-7a-5p(miR-7a-5p)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)水平与急性胰腺炎(AP)患者病情严重程度及预后的关系。方法选取2020年1月至2022年1月重庆医科大学附属巴南医院收治的185例AP患者为AP组,另选取同期本院体检健康者53例为对照组。AP患者根据病情严重程度分为轻症组(81例)、中度重症组(53例)、重症组(51例)。收集AP患者的临床资料,检测所有受试者血清miR-7a-5p、PCSK9水平。分析AP患者预后不良的危险因素以及血清miR-7a-5p、PCSK9水平单独与联合预测AP患者预后不良的价值。结果AP组血清miR-7a-5p、PCSK9水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。轻症组、中度重症组、重症组血清miR-7a-5p、PCSK9水平逐渐升高[miR-7a-5p:(2.12±0.43)、(2.51±0.33)、(3.00±0.43);PCSK9:(36.1±2.6)、(38.6±2.2)、(41.3±2.2)μg/L],差异均有统计学意义(均P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,重症AP、重症监护病房停留时间延长和红细胞体积分布宽度、血肌酐、C反应蛋白、miR-7a-5p、PCSK9水平升高为AP患者预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。受试者工作特征曲线分析显示,血清miR-7a-5p、PCSK9水平单独与联合预测AP患者预后不良的曲线下面积分别为0.780、0.773、0.877,二者联合预测AP患者预后不良的曲线下面积大于单独预测(均P<0.05)。结论AP患者血清miR-7a-5p、PCSK9水平升高与病情严重程度和预后不良有关,二者联合对AP患者预后不良的辅助预测价值较高。

circPVT1靶向调控miR-195-5p/SOX9轴影响结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化

目的:探究环状RNA浆细胞瘤变体易位1(circPVT1)靶向调控微小RNA-195-5p(miR-195-5p)/性别决定区Y框蛋白9(SOX9)轴对结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养人正常结肠上皮细胞NCM-460、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)至对数期,将SW480细胞分为对照组(正常培养SW480细胞不进行转染)、空载质粒组(转染空载质粒)、circPVT1沉默组[转染circPVT1小干扰RNA(siRNA)质粒]、miR-195-5p过表达组[转染miR-195-5p模拟物(mimics)质粒]、SOX9沉默组(转染SOX9 siRNA质粒)、circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组(转染circPVT1 siRNA和miR-195-5p siRNA质粒)。各组转染相应质粒后培养48 h。荧光定量PCR法检测NCM-460细胞、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)和各组SW480细胞circPVT1、miR-195-5p、SOX9 mRNA的表达;噻唑蓝和流式细胞仪分别检测各组SW480细胞增殖和凋亡;蛋白印迹法检测各组SW480细胞SOX9、凋亡和EMT相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9的靶向关系。结果:与NCM-460细胞比较,SW480细胞、HCT116细胞、HCT29细胞、LOVO细胞、SW620细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达显著升高,miR-195-5p表达显著降低(P<0.05);其中,SW480细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达最高,miR-195-5p表达最低;故选择SW480细胞进行后续实验。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组circPVT1、SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低,miR-195-5p表达显著升高(P<0.05);miR-195-5p过表达组miR-195-5p表达显著升高,SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);SOX9沉默组SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组、miR-195-5p过表达组、SOX9沉默组细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。与circPVT1沉默组比较,circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组miR-195-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著降低,SOX9 mRNA及蛋白、细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9存在靶向调控关系。结论:沉默circPVT1可以靶向上调miR-195-5p表达,抑制SOX9表达,进而抑制SW480细胞增殖和EMT进程,促进其凋亡。

miR-143-3p和miR-509-5p在儿童肺炎支原体肺炎疾病程度及预后评估中的应用价值

目的分析微小核糖核酸-143-3p(miR-143-3p)与微小核糖核酸-509-5p(miR-509-5p)在肺炎支原体肺炎患儿血清中的表达水平,及其与疾病严重程度和预后的关系。方法选取2020年5月至2022年4月邯郸市妇幼保健院收治的肺炎支原体肺炎患儿135例(肺炎支原体肺炎组),根据疾病严重程度分为轻症组84例和重症组51例,另选取同期体检健康儿童130例作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-143-3p与miR-509-5p水平;对肺炎支原体肺炎患儿进行肺功能检测,测定呼吸频率(RR)、潮气量(VT)、呼气时间(Te)、达峰时间(TPTEF)、达峰容积(VPTEF),计算TPTEF/Te、VPTEF/VT;采用Pearson法分析肺炎支原体肺炎患儿RR、VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT与血清miR-143-3p、miR-509-5p的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-143-3p和miR-509-5p对重症肺炎支原体肺炎以及预后不良的预测价值。结果肺炎支原体肺炎组miR-143-3p水平为(0.25±0.04),miR-509-5p为(0.37±0.04),均低于对照组(P<0.05);与轻症组相比,重症组肺炎支原体肺炎患儿RR升高,VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT、血清miR-143-3p及miR-509-5p水平均降低(P<0.05);肺炎支原体肺炎患儿血清miR-143-3p、miR-509-5p与VT、TPTEF/Te、VPTEF/VT均呈正相关(P<0.05);血清miR-143-3p、miR-509-5p预测重症肺炎支原体肺炎的曲线下面积为0.820(灵敏度为82.4%,特异度为83.3%)、0.849(灵敏度为72.5%,特异度为92.9%);血清miR-143-3p、miR-509-5p预测预后不良的曲线下面积为0.735(灵敏度为79.6%,特异度为63.0%)、0.859(灵敏度为81.5%,特异度为87.3%)。结论肺炎支原体肺炎患儿血清miR-143-3p、miR-509-5p水平降低,二者均对疾病严重程度和预后具有判别价值,有望作为临床病情评估以及预后判断的指标。

长链非编码RNA AFAP1-AS1靶向miR-195-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)AFAP1-AS1及微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法常规培养人HCC细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Bel7402、SK-hep1细胞)和正常人肝细胞(HL-7702细胞),用实时荧光定量PCR法检测AFAP1-AS1、miR-195-5p并筛选实验细胞。将对数生长期实验细胞随机分为si-AFAP1-AS1组、si-NC组,miR-195-5pmimics组、mimics-NC组,miR-195-5pinhibitor+si-NC组、miR-195-5p inhibitor+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-NC组,用Lipofectamine 2000试剂将相应质粒按照分组转染入细胞。用CCK-8实验、菌落形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,用双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果HCC细胞中AFAP1-AS1表达高于正常人肝细胞(P均<0.05),HCC细胞中miR-195-5p表达低于正常人肝细胞(P均<0.05)。由于SK-hep1细胞中AFAP1-AS1表达最高、miR-195-5p表达最低,因此,后续研究均采用SK-hep1细胞进行实验。与si-NC组比较,si-AFAP1-AS1组中AFAP1-AS1表达低、细胞增殖能力低、迁移和侵袭细胞少、G0/G1期细胞比例高、细胞凋亡率高(P均<0.05)。通过Starbase v3.0在线数据库预测发现,AFAP1-AS1与miR-195-5p有互补的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC组、miR-195-5p组共转染WT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),共转染MUT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与inhibitor-NC+si-NC组比较,si-NC+miR-195-5p inhibitor组细胞增殖能力高、迁移和侵袭细胞多、G_(0)/G_(1)期细胞比例低、细胞凋亡率低(P均<0.05),而si-AFAP1-AS1+miR-195-5p inhibitor组上述细胞生物学行为则相反。结论lncRNA AFAP1-AS1可能通过竞争性结合miR-195-5p参与调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为。

妊娠期糖尿病患者血清miR-195-5p、VEGF-A水平与胎儿生长发育与妊娠结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)水平与妊娠不良事件和胎儿生长发育的关系。方法选择203例GDM患者,根据胎儿生长发育将GDM患者分为发育正常组(157例)、发育异常组(46例),根据不良妊娠事件将其分为结局不良组(77例)和结局良好组(126例)。收集妊娠结局相关资料;于GDM患者入组后次日晨采集其静脉血,用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-195-5p,用酶联免疫吸附试验测定血清VEGF-A。Pearson相关法分析miR-195-5p与VEGF-A的相关性,多因素Logistic回归分析血清miR-195-5p、VEGF-A对GDM患者妊娠结局的影响,绘制受试者工作特征曲线分析血清miR-195-5p、VEGF-A对GDM患者妊娠结局的预测价值。结果发育异常组血清miR-195-5p表达高于发育正常组(P<0.05),血清VEGF-A水平低于发育正常组(P<0.05)。GDM患者血清miR-195-5p表达与VEGF-A水平呈负相关(r=-0.472,P<0.05)。结局不良组年龄大于结局良好组,空腹血糖、稳态模型胰岛素抵抗指数、糖化血红蛋白(HbA1c)水平高于结局良好组,分娩孕周早于结局良好组,血清miR-195-5p表达高于结局良好组,血清VEGF-A水平低于结局良好组,比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。年龄大、高水平HbA1c、高表达miR-195-5p是GDM患者妊娠结局的危险因素(P均<0.05),高水平VEGF-A是保护因素(P<0.05)。血清miR-195-5p、VEGF-A联合预测GDM妊娠结局的曲线下面积为0.910,高于二者单独预测(P均<0.05)。结论GDM患者血清miR-195-5p、VEGF-A水平变化与胎儿发育不良、不良妊娠结局有关,二者联合检测可预测GDM妊娠结局。

缺氧缺血性脑病新生儿血清miR-139-5p,HDAC4和GFAP表达水平及其临床价值研究

目的分析血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-139-5p,组蛋白去乙酰化酶4(histone deacetylase 4,HDAC4)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)与新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)脑损伤严重程度的关系。方法选取2017年1月~2022年3月广元市中心医院分娩的HIE新生儿72例为研究对象(研究组);同期健康的足月新生儿75例为对照组。实时荧光定量PCR检测血清中miR-139-5p,HDAC4表达水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清GFAP水平。Logistic回归分析影响HIE患儿重度脑损伤发生的因素。结果与对照组相比,研究组血清GFAP(1.30±0.37ng/L vs 0.50±0.15ng/L),HDAC4相对表达水平(2.05±0.39 vs 1.02±0.21)升高,miR-139-5p相对表达水平(0.63±0.14 vs 1.01±0.22)和NBNA评分(33.20±1.43分vs 39.85±2.23分)降低,差异具有统计学意义(t=17.304,20.046,12.436,21.424,均P<0.05);与轻中度组相比,重度组血清GFAP(1.61±0.47ng/L vs 1.16±0.33ng/L),HDAC4(2.43±0.37 vs 1.87±0.40)相对表达水平升高,miR-139-5p相对表达水平(0.38±0.10 vs 0.74±0.16)和NBNA评分(30.52±1.54分vs 34.46±1.38分)降低,差异具有统计学意义(t=4.690,5.669,9.900,10.884,均P<0.05)。Logistic回归分析显示,miR-139-5p低表达,HDAC4高表达,低NBNA评分,低出生后1 min内Apgar评分是影响HIE患儿重度脑损伤发生的危险因素(Waldχ^(2)=5.772~6.969,OR=1.519~1.709,均P<0.05)。Pearson分析显示,血清miR-139-5p表达水平与GFAP,HDAC4呈负相关(r=-0.416,-0.579,均P<0.05),血清HDAC4表达水平与GFAP呈正相关(r=0.437,P<0.05)。Spearman分析显示,血清mi R-139-5p表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈正相关(r=0.398,0.367,0.348,均P<0.05);血清HDAC4表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈负相关(r=-0.364,-0.345,-0.332,均P<0.05)。结论HIE患儿血清中miR-139-5p表达降低,HDAC4表达升高,mi R-139-5p,HDAC4与HIE患儿脑损伤严重程度有关。

血清lncRNA CASC2、miR-590-5p与支气管哮喘患者气道炎症、气流受限的关系及其预测效能分析

目的探讨血清长链非编码核糖核酸(lncRNA)-癌易感性候选基因2(CASC2)、微小核糖核酸-590-5p(miR-590-5p)与支气管哮喘(BA)患者气道炎症、气流受限的关系及其预测效能分析。方法选择2021年12月至2022年12月我院收治的BA患者145例,将其分为急性发作期组(50例)、慢性持续期组(50例)和临床控制期组(45例),另选取50例同期健康体检者为对照组。检测各组的血清lncRNA CASC2、miR-590-5p表达及气道炎症、气道重塑和肺功能指标水平,并分析其相关性。分析血清lncRNA CASC2与miR-590-5p对BA患者气流受限的预测价值。结果对照组、临床控制期组、慢性持续期组、急性发作期组的lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平和肺功能指标水平依次降低,气道炎症、气道重塑指标水平依次升高(P<0.05)。Pearson分析显示,BA患者的lncRNA CASC2、miR-590-5p表达水平与气道炎症、气道重塑指标呈负相关,与肺功能指标呈正相关(P<0.05)。轻、中、重度气流受限患者的血清lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平依次降低(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平联合预测气流受限的曲线下面积(AUC)高于两指标单独预测。结论血清lncRNA CASC2、miR-590-5p在BA患者中低表达可导致气道炎症、气道重塑及气流受限,联合检测血清lncRNA CASC2、miR-590-5p对气流受限程度有较高的预测价值。

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P<0.05),促进Caspase 2表达(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P<0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P<0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P<0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P<0.05),促进Survivin的蛋白表达(P<0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P<0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。

miR-92b-5p、HMGB1与2型糖尿病肾病患者肾功能的相关性

目的探讨微小核糖核酸-92b-5p(miR-92b-5p)、血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与2型糖尿病肾病患者肾功能的相关性。方法选取2021年1月至2023年12月期间河南省驻马店市中心医院内分泌科收治的212例2型糖尿病肾病患者作为肾病组,另选取同期来本院就诊的单纯2型糖尿病患者95例作为2型糖尿病组。比较二组患者的肾功能相关指标以及miR-92b-5p、HMGB1水平;以Pearson相关性分析评估2型糖尿病肾病患者血清miR-92b-5、HMGB1水平与肾功能的相关性;以单、多因素Logistic回归分析2型糖尿病患者并发肾病的危险因素,并绘制受试者工作特性曲线(ROC)进一步评估miR-92b-5p、HMGB1二者联合检测对2型糖尿病患者并发肾病的预测价值。结果两组糖尿病病程、BUN、Scr、eGFR、miR-92b-5p以及HMGB1水平的比较差异有统计学意义(P<0.05);Pearson分析显示,HMGB1与BUN、Scr呈正相关,与eGFR呈负相关(r=0.570,0.646,-0.485,P<0.05);miR-92b-5与BUN、Scr呈负相关,与e GFR呈正相关(r=-0.526,-0.562,0.442,P<0.05)。多因素回归分析显示,糖尿病病程增加、BUN、Scr、HMGB1水平升高、eGFR、miR-92b-5p水平降低均是2型糖尿病患者并发肾病的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR-92b-5p、HMGB1以及二者联合检测曲线下面积为0.898、0.932、以及0.961(P<0.05)。结论2型糖尿病肾病患者肾功能异常可能与血清中miR-92b-5p表达量下降、HMGB1表达量上升有关,二指标可作为2型糖尿病肾病的有效预测指标。

LncRNA KCNQ1OT1靶向miR-9-5p对口腔癌细胞黏附性及活性的影响

目的探究长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)靶向miR-9-5p对口腔鳞状细胞癌细胞黏附性及活性的影响。方法体外培养口腔癌SCC25细胞,分别转染LncRNA KCNQ1OT1阴性对照、LncRNA KCNQ1OT1 siRNA、miR-9-5p阴性对照、miR-9-5p siRNA、LncRNA KCNQ1OT1 siRNA和miR-9-5p siRNA,分别记为KCNQ1OT1-NC组、KCNQ1OT1组、miR-9-5p-NC组、miR-9-5p组,KCNQ1OT1+miR-9-5p组及口腔癌组;采用RT-PCR检测各组细胞的LncRNA KCNQ1OT1及miR-9-5p水平,MTT法检测细胞吸光度(OD)值,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中CD44S及CD44V5蛋白表达;通过双荧光素酶报告证实LncRNA KCNQ1OT1与miR-9-5p靶向关系。结果KCNQ1OT1组LncRNA KCNQ1OT1水平低于口腔癌组(P<0.05),miR-9-5p组miR-9-5p水平低于口腔癌组(P<0.05);与口腔癌组相比,KCNQ1OT1组、miR-9-5p组、KCNQ1OT1+miR-9-5p组细胞OD值、CD44S及CD44V5蛋白降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),且以KCNQ1OT1+miR-9-5p组效果最为显著(P<0.05);双荧光素酶报告结果显示,miR-9-5p是LncRNA KCNQ1OT1的靶基因。结论LncRNA KCNQ1OT1可通过调控miR-9-5p表达从而降低口腔鳞状细胞癌细胞黏附性,抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖,诱导其凋亡。

肝血流超声参数、血清IGFBP-3、miR-9a-5p水平联合检测在肝硬化胃底静脉曲张破裂出血患者再出血诊断中的效能

目的:分析肝血流超声参数、血清胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、微小RNA-9a-5p(miR-9a-5p)水平联合检测在肝硬化食管胃底静脉曲张破裂出血(EGVB)患者再出血诊断中的效能。方法:选取2018年10月至2022年3月该院收治的124例肝硬化EGVB患者进行横断面研究,依据治疗后6个月是否发生再出血将其分为出血组70例与未出血组54例。比较两组肝血流超声参数[门静脉内径(PVD)、肝静脉减振指数(HV-DI)、门静脉血流速度(PVV)]、血清IGFBP-3和miR-9a-5p水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析肝血流超声参数、血清IGFBP-3、miR-9a-5p水平联合检测在肝硬化EGVB患者再出血诊断中的效能。结果:治疗后1个月,两组PVD、HV-DI、血清IGFBP-3、miR-9a-5p水平低于治疗前,但出血组高于未出血组;两组PVV均高于治疗前,但出血组低于未出血组,差异有统计学意义(P<0.05);经ROC曲线分析结果显示,治疗后1个月PVD、HV-DI、PVV、IGFBP-3、miR-9a-5p水平单项及联合检测诊断肝硬化EGVB患者再出血的曲线下面积分别为0.760、0.761、0.764、0.753、0.780、0.930,且联合检测诊断肝硬化EGVB治疗后再出血的效能高于五者单项检测。结论:肝血流超声参数、血清IGFBP-3、miR-9a-5p水平联合检测诊断肝硬化EGVB患者再出血的效能高于五者单项检测。

重型颅脑损伤患者血清miR-129-5p、miR-140-5p水平及其与TLR4/NF-κB信号通路和预后的关系

目的观察重型颅脑损伤(TBI)患者血清微小核糖核酸-129-5p(miR-129-5p)、miR-140-5p水平变化,探讨两者与Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路及预后的关系。方法选取重型TBI患者118例作为sTBI组、轻中型TBI患者100例作为轻中型TBI组、健康体检者100例作为对照组,RT-qPCR法检测血清miR-129-5p、miR-140-5p及外周血单个核细胞TLR4、NF-κB。采用Pearson相关性分析重型TBI患者血清miR-129-5p、miR-140-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB的相关性;统计重型TBI患者术后28 d内的全因死亡例数,根据重型TBI患者术后28 d内生存情况将患者分为生存者及死亡者,比较不同预后结局重型TBI患者的临床资料;采用多因素Logistic回归分析重型TBI患者预后影响因素。结果血清miR-129-5p、miR-140-5p水平对照组>轻中型TBI组>重型TBI组(P均<0.05);Pearson相关性分析显示,重型TBI患者血清miR-129-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB呈负相关(r分别为-0.320、-0.312,P均<0.01),miR-140-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB呈负相关(r分别为-0.358、-0.361,P均<0.01)。118例重型TBI患者28 d内死亡42例、生存76例,28 d生存率为64.40%。死亡重型TBI患者入院时外科损伤严重度(ISS)评分、术中失血量、受伤后至手术时间、外周血单个核细胞TLR4、外周血单个核细胞NF-κB高于生存重型TBI患者,入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、血清miR-129-5p、血清miR-140-5p低于生存重型TBI患者(P均<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,入院时ISS评分高、受伤后至手术时间长、外周血单个核细胞TLR4表达高、外周血单个核细胞NF-κB表达高为重型TBI患者死亡的独立危险因素(P均<0.05),入院时GCS评分高、血清miR-129-5p水平高、血清miR-140-5p水平高为重型TBI患者死亡的独立保护因素(P均<0.05)。结论重型TBI患者血清miR-129-5p、miR-140-5p水平降低,血清miR-129-5p、miR-140-5p水平与TLR4/NF-κB信号通路相关分子存在相关性,且为重型TBI患者死亡的独立影响因素。