miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

脓毒症患者外周血miR-125b、miR-150表达及其临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血微小核糖核酸-125b(miR-125b)、微小核糖核酸-150(miR-150)表达及其临床意义。方法 选取邢台市中心医院收治的103例脓毒症患者为研究组,另选取体检健康者82例为健康组,均测定外周血miR-125b、miR-150表达及血清白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平。对比研究组、健康组各指标水平,采用Pearson相关性分析法分析脓毒症患者miR-125b、miR-150表达与IL-6、CRP、PCT水平的关系;比较不同严重程度脓毒症患者及不同预后患者的miR-125b、miR-150表达;采用多因素Logistic回归分析法分析miR-125b、miR-150表达与预后的关系;通过受试者工作特征曲线分析miR-125b、miR-150表达对脓毒症预后的预测价值。结果 研究组外周血miR-125b表达与IL-6、CRP、PCT水平分别为(2.43±0.35)、(159.42±26.81)pg/mL、(115.47±20.38)mg/L、(10.57±2.03)ng/mL,均高于健康组(t=31.012、52.149、48.978、46.945,均P=0.000),miR-150表达(0.21±0.04)低于健康组(t=52.008,P=0.000);经Pearson相关性分析,脓毒症患者外周血miR-125b表达与IL-6(r=0.706,P=0.016)、CRP(r=0.711,P=0.013)、PCT(r=0.759,P=0.001)水平均呈正相关,miR-150与IL-6(r=-0.702,P=0.018)、CRP(r=-0.709,P=0.015)、PCT(r=-0.728,P=0.006)水平均呈负相关;脓毒症者外周血miR-125b表达(2.16±0.43)低于严重脓毒症者(2.82±0.27)(t=8.815,P=0.000),脓毒症者外周血miR-150表达(0.24±0.02)高于严重脓毒症者(0.16±0.03)(t=16.248,P=0.000);入院28 d生存者外周血miR-125b表达(2.25±0.41)低于死亡者(3.13±0.36)(t=8.982,P=0.000),生存者外周血miR-150表达(0.23±0.04)高于死亡者(0.13±0.02)(t=11.078,P=0.000);年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、疾病严重程度及外周血miR-125b表达均是脓毒症患者预后的危险因素(OR=2.438、2.689、2.866、2.824,P=0.036、0.012、0.000、0.005),miR-150表达是其保护因素(OR=0.390,P=0.003);外周血miR-125b、miR-150表达预测脓毒症预后的最佳截断点分别为2.854、0.179,灵敏度分别为76.19%、80.95%,特异度分别为79.27%、75.61%,曲线下面积分别为0.861、0.843。结论 与健康人群比较,脓毒症患者外周血miR-125b表达升高,而miR-150表达降低,且miR-125b、miR-150表达均与炎症因子水平、疾病严重程度及预后相关,并对预后具有一定的预测价值,可作为临床判断病情严重程度及预后的指标。

miR-10b通过下调KLF10促进高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT

目的:探讨微小RNA-10b(miR-10b)在高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用及相关机制。方法:通过RT-qPCR法分析2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达量;利用高糖刺激人肾小管上皮细胞HK-2建立EMT模型,RT-qPCR法检测miR-10b在EMT不同阶段的表达水平。在HK2细胞中分别转染miR-10b模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor) 24 h后,再给予高糖刺激,相差显微镜观察细胞形态学改变,Western blot法检测纤连蛋白(fibronectin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)等EMT标志蛋白的表达。通过在线数据库miRBase对miR-10b的作用靶点进行预测,并利用双萤光素酶报告基因实验进行验证。结果:与癌旁正常肾组织相比,2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达明显增加(P<0.01)。在高糖刺激诱导的HK-2细胞EMT中,miR-10b的表达呈现时间依赖性上调(P<0.01)。转染miR-10b inhibitor可抑制高糖诱导的HK-2细胞形态学改变以及EMT标志蛋白fibronectin、SLUG、N-cadherin和SNAI1表达的上调。在线数据库预测KLF10的3’-UTR可以与miR-10b结合,该结果被双萤光素酶报告基因实验证实。同时,KLF10过表达可以逆转高糖诱导的肾小管上皮细胞的形态学改变以及fibronectin和N-cadherin等EMT标志蛋白。进一步研究显示,miR-10b是通过抑制KLF10表达,从而激活TGF-β/Smad3通路发挥作用。结论:miR-10b可通过下调KLF10表达促进高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT。

miR-29b通过靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10参与多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭的机制研究

目的分析微小RNA(microRNA,miR)-29b通过靶向转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)调控免疫因子白介素(interleukin,IL)-6和IL-10参与多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞增殖和侵袭的机制。方法双荧光素酶报告实验验证miR-29b和STAT3的靶向关系。将人MM细胞系U266细胞分为对照(normal control,NC)组、miR-29b模拟物(mimic)组、STAT3过表达(over expression STAT3,OE-STAT3)组和miR-29b mimic+OE-STAT3组,根据组别转染miR-29b mimic或者STAT3过表达质粒。通过CCK-8法、细胞划痕和Transwell实验检测细胞增殖活力、迁移和侵袭能力。通过ELISA检测培养基中IL-6和IL-10水平。结果通过双荧光素酶报告在U266细胞中验证miR-29b靶向STAT3。与NC组比较,miR-29b mimic组细胞的STAT3 mRNA和蛋白的表达水平、OD值、划痕前缘迁移距离百分比(26.79%±1.56%)、侵袭细胞数目(34.59±2.93)、培养基中IL-6(9.37 pg/ml±1.12 pg/ml)和IL-10(3.86 pg/ml±0.48 pg/ml)水平显著降低,而OE-STAT3组的上述指标均升高(P<0.05)。miR-29b mimic+OE-STAT3组的STAT3 mRNA和蛋白的表达水平、划痕前缘迁移距离百分比(49.06%±3.27%)、侵袭细胞数目(90.31±4.07)、培养基中IL-6(16.23 pg/ml±1.75 pg/ml)和IL-10(7.55 pg/ml±0.82 pg/ml)水平显著低于OESTAT3组且显著高于miR-29b mimic组(P<0.05)。结论miR-29b可能通过靶向STAT3的表达来抑制MM细胞的增殖、迁移、侵袭,并抑制IL-6和IL-10的表达解除免疫抑制。

Has-miR-10b与肿瘤侵袭性关系的研究进展

恶性肿瘤的侵袭转移能力是肿瘤治疗的一大难点。近些年来,小分子RNA(miRNA)的出现为研究肿瘤的发生及侵袭转移机制提供了新的思路和途径,微小RNA(miRNA)是一类内源性、保守、稳定的非编码短单链RNA,在转录后水平调节靶基因表达。miRNA在机体发育,细胞增殖、凋亡及肿瘤发生发展等生理和病理过程中发挥重要作用。miR-10b作为微小RNA家族中的一员,在肝癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、垂体瘤、急性髓性白血病等肿瘤组织中都有异常表达,并且与肿瘤的侵袭性和远处转移有密切关系。

miR-10b对脑胶质瘤恶性生物学行为的调控及其机制

脑胶质瘤(胶质瘤)具有高发病率、高病死率、高复发率及低治愈率的特点,胶质瘤细胞的无限增殖能力和高侵袭迁移能力是胶质瘤治疗的难点,近年来微小核糖核酸(micro RNA,miRNA)的出现为研究胶质瘤的发生及侵袭迁移机制提供了新的思路。miRNA是一类内生的、长约20~24个核苷酸的非编码小RNA,可通过与其靶基因mRNA的3’UTR区域互补结合,从而在转录后水平调控基因的表达。多项研究证实,miR-10b在胶质瘤组织和胶质瘤患者血清中高表达,并影响患者预后情况。miR-10b可能通过影响其靶基因如PTEN、CDKN、P53、HOXD10等的表达,参与胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移等过程。深入研究miR-10b对胶质瘤的调控作用及其机制,对该病的诊断、治疗和预后评估等均具有重要意义。

宫颈癌患者血浆miRNA-10b的表达及其临床意义

目的探讨血浆微小核糖核酸-10b(miRNA-10b)在宫颈癌患者中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR检测168例宫颈癌患者,68例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)患者(CIN组)和45例健康女性(对照组)血浆miRNA-10b,鳞癌抗原(SCCA)及癌胚抗原(CEA)表达水平,分析miRNA-10b表达与宫颈癌临床病理特征的关系。应用ROC曲线评价miRNA-10b,SCCA及CEA对宫颈癌诊断的灵敏度和特异度,多元Logistic回归模型分析三项指标与宫颈癌的关系。Pearson相关分析宫颈癌患者血浆miRNA-10b与SCCA和CEA的相关性。结果宫颈癌组血浆miRNA-10b,SCCA及CEA表达水平均明显高于CIN组和对照组[miRNA-10b(2-ΔΔCt):5.83±1.84vs 2.64±0.92和2.38±0.75;SCCA(ng/ml):8.74±2.26vs 1.97±0.62和0.61±0.15;CEA(ng/ml):5.71±2.15vs 1.56±0.58和1.34±0.16,F=17.842,13.614,8.273,均P<0.01]。宫颈癌患者血浆miRNA-10b表达水平与临床分期、淋巴结转移、浸润深度及SCCA水平相关(t/F值=19.287,21.528,5.672,5.284,均P<0.05)。血浆miRNA-10b,SCCA,CEA及三项联合诊断宫颈癌的AUC(95%CI)分别为0.836(0.752~0.924),0.795(0.722~0.875),0.664(0.596~0.738)和0.882(0.794~0.958),其最佳截值分别为4.26,6.58ng/ml和4.05ng/ml。Logistic回归分析显示,血浆miRNA-10b和SCCA水平升高是宫颈癌发生的独立危险因素[OR(95%CI)=1.816(1.629~2.483),1.427(1.206~1.975)]。宫颈癌患者血浆miRNA-10b与SCCA呈正相关(r=0.637,P<0.01)。结论血浆miRNA-10b有望作为早期诊断宫颈癌的分子标志物,与SCCA和CEA联合应用可提高宫颈癌诊断的准确性。

lncRNA CDKN2B-AS1对黑色素瘤B16-F10细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA CDKN2B反义RNA1(long non-coding RNA CDKN2B-antisense RNA 1,lncRNA CDKN2B-AS1)通过靶向miR-7-5p影响黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为的影响。方法:选用黑色素瘤B16-F10细胞,构建shRNA CDKN2B-AS1载体并转染到B16-F10细胞,实验分为对照组、sh-CDKN2B-AS1组、miR-7-5p mimics组、miR-7-5p inhibitor组。用RT-PCR检测转染后B16-F10细胞中CDKN2B-AS1表达水平,用克隆形成实验和MTT法检测克隆形成数及细胞的增殖能力,用划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。用荧光素酶报告基因实验检证CDKN2B-AS1和miR-7-5p相互间靶向关系。用RT-PCR和Western blotting检测转染miR-7-5p mimics、inhibitor后B16-F10细胞中miR-7-5p和Ki67、cleaved caspase-3、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Twist1蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,sh-CDKN2B-AS1组B16-F10细胞中CDKN2B-AS1表达水平显著下调(P<0.01),细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降(均P<0.01)。荧光素酶报告基因实验证明CDKN2B-AS1与miR-7-5p存在靶向作用关系。sh-CDKN2B-AS1组与miR-7-5p mimics组细胞中miR-7-5p和cleaved caspase-3、E-cadherin水平均明显上调(均P<0.05),Ki67、N-cadherin、Twist1水平明显下调(均P<0.05)。结论:CDKN2BAS1通过靶向miR-7-5p促进黑色素瘤发展,干扰CDKN2B-AS1可抑制黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为。

HCV核心蛋白调控miR-486-5p/AKR1B10促进肝癌细胞生长的实验研究

目的:探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)对肝癌HepG2细胞增殖凋亡和miR-486-5p以及醛酮还原家族1B10(AKR1B10)蛋白表达的影响。方法:以重组腺病毒Ad-GFP-HCVc感染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western blot检测HepG2细胞HCVc表达,MTT法和流式细胞术分别检测HepG2细胞增殖和凋亡情况,qRT-PCR检测HepG2细胞中miR-486-5p表达,Western blot检测AKR1B10蛋白表达;以miR-486-5p抑制剂转染HepG2细胞,qRT-PCR和Western blot分别检测HepG2细胞中miR-486-5p和AKR1B10蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-486-5p和AKR1B10的靶向关系。结果:Ad-GFP-HCVc感染后,HepG2细胞中HCVc表达升高;与阴性对照组相比,HCVc组细胞增殖活力和AKR1B10蛋白表达明显升高,而细胞凋亡率和miR-486-5p表达明显降低(P<0.05);与anti-miR-NC组相比,转染miR-486-5p抑制剂的HepG2细胞miR-486-5p表达明显降低,而AKR1B10蛋白表达明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-486-5p可与AKR1B10靶向结合。结论:HCVc可能通过下调miR-486-5p表达引起其靶基因AKR1B10表达升高,促进HepG2细胞异常生长。

miR-153-3p靶向结合BCL2基因调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的实验研究

目的探讨miR-153-3p调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的作用。方法利用生物信息学软件对miR-153-3p的候选靶基因进行预测。实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测miR-153-3p对细胞内mRNA和蛋白表达的影响。用密理博MUSETM细胞检测仪对细胞周期和细胞凋亡情况进行检测。用CCK8法和克隆技术形成实验检测细胞增殖能力。结果生物信息学预测结果显示,miR-153-3p与BCL2分子之间存在一个高可信度的结合区。miR-153-3p mimic能上调miR-153-3p的表达,降低BCL2蛋白的表达。与对照组相比,过表达miR-153-3p的6-10B细胞的凋亡明显增加,增殖能力受到显著抑制。结论miR-153-3p通过下调BCL2的表达,能够促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制其增殖。

血清微小RNA-181b的表达与子痫前期患者白介素-6、白介素-10、白介素-17的相关性

目的观察子痫前期(PE)患者血清微小RNA(miR)-181b的表达,并分析其与白介素(IL)-6、IL-10、IL-17的关系。方法选取2018年10月至2020年12月海南医学院第二附属医院收治的96例PE患者作为研究对象,并根据病情程度分为非重度PE(N-PE)组和重度PE(S-PE)组,各48例。询问并记录患者的基线资料;检测患者入院时血清miR-181b及血清IL-6、IL-10、IL-17等炎性因子水平;分析血清miR-181b的表达与PE患者IL-6、IL-10、IL-17的关系,并进一步探究血清miR-181b与PE病情的关系及其对评估S-PE发生风险的价值。结果S-PE组患者入院时血清miR-181b、IL-6、IL-17水平均高于N-PE组,血清IL-10水平低于N-PE组,差异具有统计学意义(P<0.05);相关性检验发现,血清miR-181b的表达与PE患者IL-6、IL-17水平呈正相关(r>0,P<0.05),与血清IL-10水平呈负相关(r<0,P<0.05);回归分析发现,入院时血清miR-181b的过表达与PE患者病情存在一定关系,其可作为S-PE发生的风险因子(P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线,入院时血清miR-181b的表达评估S-PE发生风险的曲线下面积(AUC)为0.896,有一定的评估价值。结论血清miR-181b的表达与PE患者IL-6、IL-17水平呈正相关,与血清IL-10水平呈负相关,且其过表达与PE患者病情存在一定关系,可作为S-PE发生的风险因子。

miRNA-10b与乳腺癌相关肿瘤标志物在早期乳腺癌中诊断效能比较

目的探讨微小核糖核酸-10b(miRNA-10b)与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原153(CA153)、糖类抗原199(CA199)和糖类抗原125(CA125)在早期乳腺癌诊断中的价值。方法选取2015年7月至2017年12月该院诊治的乳腺疾病女性患者92例,其中乳腺恶性肿瘤患者50例(早期乳腺癌30例、晚期乳腺癌20例)、乳腺良性疾病患者42例,另选健康对照者50例。采用电化学发光法分别检测乳腺癌患者、乳腺良性疾病患者和健康对照者血清中CEA、CA153、CA199和CA125的水平。采用荧光定量PCR法检测外周血中miRNA-10b水平。结果CEA、CA199及CA125在乳腺癌良性疾病组患者血清中表达水平略升高,但与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。早期乳腺癌组患者血清中仅CA153、miRNA-10b表达水平明显升高(P<0.05)。晚期乳腺癌组患者血清CEA、CA153、CA199、CA125和miRNA-10b水平均升高(P<0.05)。miRNA-10b和CA153的受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积(AUC)、灵敏度和特异度均优于CEA、CA199和CA125。结论CA153和miRNA-10b可作为早期乳腺癌筛查的血清学指标,诊断准确率高。CEA、CA125和CA199不可用于早期乳腺癌肿瘤筛查。

microRNA-10b与肿瘤

microRNA-10b(miR-10b)是小分子RNA-microRNAs(miRNAs)的一种,是一类非编码的小分子RNA,在基因转录后的调控中发挥着重要作用。本文miR-10b与多种肿瘤之间不同程度的关系做一综述。

miR-29b 及相关炎症因子水平与冠脉CTA钙化积分的相关性

目的探讨微小RNA-29b(miR-29b)及炎症因子水平与冠状动脉成像(CTA)钙化积分(CACS)的关系。方法60例冠状动脉造影诊断为冠心病的患者为观察组,同期60例冠状动脉造影正常者为对照组,观察组患者根据CACS分为轻度钙化组(n=13)、中度钙化组(n=27)及重度钙化组(n=20);比较观察组与对照组、不同钙化组被检者性别、年龄、体质量指数(BMI)、高血压史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、miR-29b水平,分析miR-29b、CRP、IL-6、IL-10与CACS的相关性。结果观察组与对照组患者性别、年龄、BMI、高血压史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10水平显著高于对照组,HDL-C、miR-29b水平显著低于对照组(P<0.05);不同钙化组患者性别、年龄、BMI、高血压史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史及血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);随着患者狭窄冠状动脉的钙化程度加重,血清miR-29b水平逐渐降低,血清CRP、IL-6、IL-10水平逐渐升高,各钙化组间比较差异有统计学意义(P<0.05);回归分析显示,血清miR-29b(OR=1.392,95%CI为1.207~2.004)、CRP(OR=1.701,95%CI为1.039~2.897)、IL-6(OR=1.218,95%CI为1.114~1.385)及IL-10(OR=1.714,95%CI为1.197~2.215)是冠心病患者重度钙化的危险因素(P<0.05);相关性分析显示,血清miR-29b水平与CACS呈负相关(r=-0.583,P<0.001),血清CRP、IL-6、IL-10与CACS呈正相关(r=0.677、0.641、0.496,P<0.001)。结论miR-29b及炎症因子水平与CACS具有一定相关性,对冠心病的钙化程度及病情评估具有一定参考价值。

血清miR-483-5p miR-487b表达与脓毒症所致急性肺损伤患者炎性因子病情和预后的关系研究

目的:探讨miR-483-5p、miR-487b与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者炎性因子、病情和预后的关系。方法:选择2018年9月至2021年12月我院收治的133例脓毒症患者,51例合并ALI(ALI组),82例未合并ALI(NALI组),根据氧合指数[(氧分压/吸入气氧浓度]将ALI组分为轻度组(201~300mmHg)16例、中度组(101~200mmHg)20例和重度组(≤100mmHg)15例,根据ALI组28d生存状况分为生存组(28例)、死亡组(23例),另选择43例志愿者为对照组。比较不同分组血清miR-483-5p、miR-487b表达与炎性因子水平差异,Pearson分析脓毒症合并ALI患者miR-483-5p、miR-487b表达与炎性因子水平相关性,受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-483-5p、miR-487b预测脓毒症所致ALI患者预后的价值。结果:ALI组基线血清miR-483-5p表达,白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-33(IL-33)水平高于NALI组和对照组(P<0.05),miR-487b表达低于NALI组和对照组(P<0.05)。重度组基线、住院3d、住院7d血清miR-483-5p表达,IL-6、TNF-α、IL-33水平高于中度组和轻度组(P<0.05),miR-487b表达低于中度组和轻度组(P<0.05)。死亡组基线、住院3d、住院7d血清miR-483-5p表达,IL-6、TNF-α、IL-33水平高于生存组(P<0.05),miR-487b表达低于生存组(P<0.05)。脓毒症所致ALI患者基线、住院3d、住院7d血清miR-483-5p表达与基线、住院3d、住院7d IL-6、TNF-α、IL-33水平呈正相关(P<0.05),基线、住院3d、住院7d miR-487b表达与基线、住院3d、住院7d IL-6、TNF-α、IL-33水平呈负相关(P<0.05)。联合住院7d miR-483-5p和miR-487b预测脓毒症所致ALI的曲线下面积为0.964,高于单独miR-483-5p、miR-487b预测(z=2.612、3.141,P<0.05)。结论:脓毒症所致ALI患者血清miR-483-5p表达上调,miR-487b表达下调,且与过度炎症反应,病情加重和不良预后有关。

糖尿病肾病患者血清miR-135b水平检测与疾病预后的相关性研究

目的探讨血清miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者预后的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测158例DN患者(DN组)和60例健康体检者(对照组)血清miR-135b水平,分析miR-135b与DN患者不同临床指标的关系。采用肾小球分级、间质性纤维化和小管萎缩评分(IFTA)及间质炎症来评价肾脏损伤情况,并应用ROC曲线分析血清miR-135b水平预测DN患者发生终末期肾病(ESRD)的价值。结果 DN组血清miR-135b水平为3.94±0.75,明显高于对照组0.64±0.13,差异有统计学意义(t=9.317,P<0.01)。血清miR-135b水平与蛋白尿定量、Cr,BUN及eGFR水平相关(P<0.05)。DN患者血清miR-135b水平与肾小球分级、IFTA及间质炎症均有关,且随着肾脏病理损伤程度的增加,血清miR-135b水平明显升高(P<0.05)。终末期肾病(ESRD)患者血清miR-135b水平(5.39±1.26)明显高于非ESRD患者(3.46±0.68),差异有统计学意义(t=4.157,P=0.025)。ROC曲线显示,血清miR-135b水平预测DN患者发生ESRD的最佳截值取4.96时,其AUC[0.912(95%CI:0.850~0.973)]最大,敏感度(91.3%)和特异度(87.5%)较好。Spearman相关分析显示,DN患者血清miR-135b水平与蛋白尿定量、Cr,BUN,肾小球分级,IFTA及间质炎症呈正相关(r=0.504,0.396,0.438,0.475,0.351和0.559,均P<0.01),与eGFR呈负相关(r=-0.637,P<0.01)。结论血清miR-135b水平在DN患者中明显上调,且与DN患者肾脏损伤及预后不良有关。

miR-27a miR-27b及肺栓塞严重程度指数对急性肺栓塞患者预后的评估价值

目的探讨血清微小核糖核酸-27a(miR-27a)、微小核糖核酸-27b(miR-27b)水平及肺栓塞严重程度指数(PESI)对急性肺栓塞(APE)患者预后的评估价值。方法选取2016年1月至2018年6月海口市第三人民医院收治的APE患者160例,根据APE患者28d生存情况分为存活组(n=115)和死亡组(n=45)。采用PESI评分标准将APE患者分为低危组(n=34)、中危组(n=68)和高危组(n=58)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组血清miR-27a及miR-27b水平变化。应用ROC曲线分析血清miR-27a、miR-27b水平及PESI对APE患者的预后评估价值,采用Pearson相关分析APE患者血清miR-27a、miR-27b水平与PESI的相关性。结果死亡组血清miR-27a(4.26±0.93 vs.1.95±0.42)、miR-27b(3.72土0.75 vs.1.63±0.51)水平及PESI评分(164.70±28.60vs.93.50±14.30)均明显高于存活组(P<0.01)。高危组血清miR-27a(3.94±0.85 vs.2.87±0.62,1.52±0.34)、miR-27b(3.60±0.71vs.2.26±0.54,1.18±0.20)水平及PESI评分(158.50±26.40vs.102.40土18.50,75.20±10.70)均明显高于中危组和低危组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,血清miR-27a、miR-27b水平及PESI评分预测APE死亡的最佳截值分别为3.45、2.96、135.70分,三者联合预测APE患者死亡的AUC[0.862(0.803~0.926)]最大,其敏感度和特异度为87.2%和82.5%。相关分析显示,死亡组血清miR-27a、miR-27b水平与PESI均呈正相关(r=0.795、r=0.718,P<0.01),miR-27a水平与miR-27b水平呈正相关(r=0.746,P<0.01)。结论miR-27a及miR-27b表达上调与APE患者预后相关,miR-27a及miR-27b联合PESI.可有效评估APE患者的预后。

微小RNA-182-5p通过靶向MAPK1调控MAPK/NF-κB通路治疗急性肺损伤的研究

目的通过分子生物学手段探讨微小RNA-182-5p(miR-182-5p)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)的影响及其分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测LPS诱导的ALI模型miR-182-5p和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)表达。双荧光素酶报告基因检测用于检测miR-182-5p与MAPK1的关系。ALI模型分别给予Ad-MAPK1、Ad-miR-182-5p和Ad-MAPK1+Ad-miR-182-5p,而后采用苏木精-伊红染色法(HE染色)和Masson染色检测肺损伤指数和肺纤维化改变情况。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各处理组肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和髓过氧化物酶(MPO)水平。采用蛋白质印迹法(WB)检测核因子κB(NF-κB)和NF-κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达。结果本研究显示miR-182-5p表达水平在ALI后0~12 h逐渐升高,>12~24 h下降;MAPK1表达则在0~12 h逐渐下降,>12~24 h出现升高。进一步行基因干扰的ALI结果显示,miR-182-5p过表达能够显著下调肺损伤指数、肺纤维化评分和促炎细胞因子水平,而MAPK1的过表达上调了肺损伤指数、肺纤维化评分和促炎细胞因子水平。体外细胞实验结果显示,LPS刺激显著增加NF-κB的蛋白质表达,同时抑制IκBα的表达。miR-182-5p能够抑制NF-κB的表达而促进IκBα的表达;相反,MAPK1过表达则逆转了这一现象。结论miR-182-5p通过抑制MAPK/NF-κB信号通路在ALI中发挥治疗作用,本研究数据或可有助于深入了解ALI的潜在分子机制和ALI治疗新方法的开发。

miR-122-5p通过ADAM10基因抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移的研究

目的研究微小核糖核酸122-5p (miR-122-5p)对卵巢癌细胞的作用及机制。方法应用miR-122-5p转染卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,测定转染后细胞活性、集落形成和凋亡情况,以及侵袭迁移能力的变化。应用TargetScan工具预测miR-122-5p的可能靶基因,并应用荧光素酶检测方法判定miR-122-5p对其靶基因表达的调节作用。应用miR-122-5p转染卵巢癌顺铂耐药株A2780/DDP检测转染后顺铂的半数抑制量(IC50)的变化。结果 miR-122-5p抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移,诱导癌细胞的凋亡。这种作用在引入ADAM10基因后得以逆转,证明ADAM10是miR-122-5p的一个重要靶基因。miR-122-5p在人类卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP中表达下调,过表达miR-122-5p能明显降低该细胞株的IC50。结论 miR-122-5p抑制卵巢癌细胞增殖和迁移,并能逆转癌细胞对顺铂的耐药性。

微小RNA-214靶向调控PTEN对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA-214(miR-214)靶向调控第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为miR-124 mimic组(转染miR-124 mimic)、miR-124 NC组(转染miR-124 NC)、pcDNA3.1-PTEN组(转染pcDNA3.1-PTEN)、miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组(转染miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN)。采用在线生信预测miR-124和PTEN靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因进行验证。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-124和PTEN mRNA表达。采用CCK-8法检测细胞增殖。采用碱性磷酸酶活性测定检测细胞分化能力。采用茜素红染色和骨钙素水平测定检测细胞的矿化。采用Werstern blot检测PTEN、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)水平。结果:与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组野生型PTEN的荧光素酶活性降低(均P<0.05)。与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组miR-124及p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平降低,而pcDNA3.1-PTEN组则相反(均P<0.05)。与miR-124 mimic组比较,miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平升高(均P<0.05)。结论:miR-214通过靶向下调PTEN蛋白表达激活PI3K/AKT信号通路,从而调控成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化。