激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

环状核糖核酸转化/转录域关联蛋白和微小核糖核酸-761在冠心病中的表达及临床意义

目的:探究环状核糖核酸转化/转录域关联蛋白(circular RNA transformation/transcription domain associated protein,circTRRAP)和微小RNA-761(microRNA-761,miR-761)在冠心病患者血清中的表达及与心肌损伤的相关性。方法:从2019年12月到2022年12月,在湖南中医药大学第一附属医院接受治疗的80例冠状动脉疾病患者被纳入研究组,同时,80名健康人为对照组。实时荧光定量PCR法用来检测血清中circTRRAP、miR-761表达水平;检测两组心肌损伤相关指标cTnI、cTnT、CK-MB和BNP的水平;采用Person相关性系数分析circTRRAP、miR-761表达与心肌损伤指标的相关性;以ROC曲线探究血清circTRRAP和miR-761水平对冠心病的诊断价值。结果:观察组的circTRRAP水平显著高于对照组,而miR-761水平则远低于对照组(P<0.05)。在心肌损伤指标cTnI、cTnT、CK-MB以及BNP方面,观察组的表达较对照组明显升高(P<0.05)。Pearson法结果显示,冠心病患者血清circTRRAP水平与miR-761呈负相关(r=-0.422,P<0.05)。此外,冠心病患者血清circTRRAP表达水平与cTnI、cTnT、CK-MB和BNP呈显著性的正相关(P<0.05);miR-761表达水平与cTnI、cTnT、CK-MB和BNP呈显著性的负相关(P<0.05)。circTRRAP水平诊断冠心病的曲线下面积(AUC)为0.917,敏感度为78.3%,特异性为95.0%;miR-761水平诊断冠心病的AUC为0.907,敏感度为97.8%,特异性为72.5%;circTRRAP和miR-761联合诊断的AUC为0.991,敏感度为93.5%,特异性为97.5%。结论:冠心病患者血清中circTRRAP的表达水平较高,miR-761的表达水平较低,且血清circTRRAP和miR-761表达水平对冠心病患者早期诊断均有重要作用。

微小核糖核酸-451a在人参养荣汤治疗鼻咽癌放射性黏膜损伤中的机制研究

目的:通过检测微小核糖核酸-451a(miR-451a)和富含半胱氨酸的分泌性酸性蛋白(SPARC)mRNA的表达,推断人参养荣汤治疗鼻咽癌(NPC)放射性黏膜损伤的疗效及作用机制。方法:选择2022年3月—2023年5月收治的鼻咽癌放射性口腔黏膜损伤患者30例作为观察组,选择同期健康者30例作为对照组。采用辨证论治拟人参养荣汤加减治疗,比较观察组治疗前后患者中医症候积分量表和口干程度、口咽疼痛程度、黏膜损伤程度。检测治疗前后患者血清miR-451a和SPARC mRNA表达水平。结果:人参养荣汤可以有效降低患者主症和次症严重程度、Ⅲ级和Ⅳ级口腔黏膜损伤程度、口咽疼痛程度以及口干程度,使患者血清中miR-451a表达下降,促进SPARC mRNA蛋白翻译增强(P<0.05)。治疗前后,miR-451a与中医症候积分均呈正相关(P<0.05)。结论:人参养荣汤对鼻咽癌放射性黏膜损伤具有一定的临床疗效,可降低miR-451a表达水平,升高SPARC mRNA表达水平;miR-451a抑制了SPARC mRNA的翻译,可为将来的中西医结合治疗提供理论依据。

重复经颅磁刺激对阿尔茨海默病患者临床症状及血浆微小核糖核酸-125b、血浆磷酸化Tau-181蛋白的影响

目的:观察重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者认知功能、神经精神行为症状及血浆微小核糖核酸-125b(microRNA-125b,miR-125b)、血浆磷酸化Tau-181蛋白(phosphorylated Tau181 protein,P-tau181)表达的影响。方法:筛选轻中度AD患者34例,随机分为对照组(n=16)和试验组(n=18)。对照组采取认知训练及重复经颅磁伪刺激,试验组采取认知训练结合重复经颅磁真刺激。磁刺激强度为100%的静息运动阈值,频率为10Hz,每日治疗1次,每周治疗5天,持续4周,刺激脑区为左侧前额叶背外侧区和左侧颞叶区。在治疗前、后进行Addenbrooke-Ⅲ认知检查(the AddenbrookeⅢcognitive examination,ACE-Ⅲ)、简易精神状态量表(mini-mental state scale,MMSE)及神经精神症状问卷(neuropsychiatric inventory,NPI)评估,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测微小miR-125b表达量,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测P-tau181的浓度。结果:治疗结束后,试验组ACE-Ⅲ、MMSE和NPI评分以及miR-125b、P-tau181均较组内治疗前显著改善,差异具有显著性意义(P<0.05),且上述指标与对照组治疗后相比,差异具有显著性意义(P<0.05);而对照组各项指标改善不具有显著性意义(P>0.05)。结论:rTMS能改善轻中度AD患者的认知功能及神经精神行为症状,这可能与rTMS促进血浆miR-125b的表达和抑制P-tau181蛋白产生相关。

慢性心力衰竭患者血清微小核糖核酸-29b表达水平及其临床意义

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血清中微小核糖核酸-29b(miR-29b)的表达水平及其临床意义。方法选取2017年6月至2020年8月长沙市第四医院收治的167例CHF患者作为观察组,并根据纽约心脏协会心功能分级标准进行分级;另选同时间段内145名健康体检者为对照组。采用qRT-PCR检测受试者血清miR-29b表达水平,超声心动图检测左心房内径(LAD)、左心室重构指数(LVRI)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室后壁厚度(LVPWD)、左心室质量指数(LVMI)、左心室射血分数(LVEF)、心排血量(CO),并检测血清N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平及评估堪萨斯城心肌病调查问卷(KCCQ)评分、6 min步行试验(6MWT)。比较对照组和观察组各级心功能患者上述各项指标,采用Pearson相关性分析法分析观察组患者血清miR-29b表达水平与心功能、心室重构指标及生存质量的关系;随访1年,采用多因素Logistic回归分析法分析CHF患者血清miR-29b表达水平与预后的关系。结果观察组心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患者中血清miR-29b相对表达量、LVRI、CO、LVEF及KCCQ评分、6MWT均依次降低(P<0.05),且均低于对照组(F=831.833、386.491、110.251、71.503、101.552、867.632,P<0.05);观察组心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级中LAD、LVEDD、LVMI、LVPWD及血清NT-proBNP、cTnI、cTnT水平均依次升高(P<0.05),且均高于对照组(F=238.758、528.524、241.700、58.167、3712.854、1836.663、2230.468,P<0.05);Pearson相关性分析显示CHF患者miR-29b表达与LVEDD、LVPWD、LVMI、LAD及血清NT-proBNP、cTnI、cTnT水平均呈负相关(r=-0.822、-0.884、-0.891、-0.713、-0.854、-0.813、-0.832,P<0.05),而与LVEF、CO、LVRI及KCCQ评分、6MWT均呈正相关(r=0.734、0.864、0.791、0.721、0.783,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清miR-29b表达是CHF患者预后不良的保护因素(OR=0.517,P<0.05),心功能分级Ⅲ/Ⅳ级和对医嘱依从性差是其预后不良的危险因素(OR=5.496、6.074,P<0.05)。结论miR-29b表达是CHF患者预后不良的影响因素,对CHF的临床诊治具有重要指导作用。

血清微小核糖核酸-133a、微小核糖核酸-126、髓系细胞表达触发受体-1、肺表面活性蛋白A表达水平与脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征风险及预后关系

目的:研究血清微小核糖核酸-133a(miR-133a)、微小核糖核酸-126(miR-126)、髓系细胞表达触发受体-1(TREM-1)、肺表面活性蛋白A(SP-A)表达水平与脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)风险及预后的关系。方法:将248例脓毒症患者根据其是否发生ARDS分为无ARDS组(97例)和ARDS组(151例),统计两组血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A表达水平;分别根据脓毒症并发ARDS患者病情严重程度及入院后28 d预后情况将其分为轻度组(51例)、中度组(73例)、重度组(27例)及存活组(122例)、死亡组(29例),比较不同病情严重程度及预后脓毒症并发ARDS患者血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A对脓毒症并发ARDS患者预后的预测价值。结果:ARDS组血清miR-133a、miR-126、TREM-1表达水平高于无ARDS组,血清SP-A表达水平低于无ARDS组(均P<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清miR-133a、miR-126、TREM-1表达水平呈升高趋势,血清SP-A表达水平呈降低趋势,组间比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。死亡组血清miR-133a、miR-126、TREM-1表达水平高于存活组,血清SP-A表达水平低于存活组(均P<0.05)。血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A联合预测脓毒症并发ARDS患者预后的曲线下面积(AUC)值高于四者单独检测(均P<0.05);敏感度比较,血清SP-A、TREM-1高于血清miR-133a、miR-126及联合检测,血清SP-A高于血清TREM-1,联合检测高于血清miR-133a、miR-126(均P<0.05);特异度比较,血清miR-133a高于血清TREM-1、SP-A及联合检测,血清miR-126、联合检测高于血清TREM-1、SP-A(均P<0.05)。结论:血清miR-133a、miR-126、TREM-1、SP-A表达水平与脓毒症并发ARDS患者病情的发生和发展均关系密切,四者联合对脓毒症并发ARDS患者预后具有较好的预测效果。

微小核糖核酸-27a、微小核糖核酸-1299预测食管癌病人术后预后的临床价值

目的探讨微小核糖核酸(miR)-27a、miR-1299预测食管癌病人术后远期预后的临床价值。方法2020年6月~2022年6月我院收治的食管癌病人89例,均行微创胸、腹腔镜联合食管癌切除术治疗。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测病人术前miR-27a、miR-1299表达量,采用酶联法检测血清铁蛋白(SF)水平,分析miR-27a、miR-1299相对表达量及血清SF与食管癌病人临床病理的关系。术后跟踪随访并记录病人的生存情况,随访截止时间为2023年2月。分析miR-27a、miR-1299表达量及血清SF与病人预后的关系,采用多因素Cox回归模型分析影响食管癌病人预后的危险因素。Pearson分析miR-27a、miR-1299与血清SF的关系。结果miR-27a、miR-1299相对表达量及血清SF在肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析结果显示,miR-27a高表达组及SF高表达组总生存率低于miR-27a低表达组及SF低表达组,miR-1299高表达组总生存率高于miR-1299低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,miR-27a≥2.54、miR-1299<4.18和血清SF≥223.78μg/L均为影响食管癌病人术后远期预后的独立危险因素(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清SF水平与miR-27a相对表达量呈正相关(P<0.05,r=0.612),与miR-1299相对表达量呈负相关(P<0.05,r=-0.517)。结论食管癌病人miR-27a、miR-1299表达及血清SF与病人肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度有关,且可以评估病人术后预后。

微小核糖核酸-155对肝癌细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的影响

目的探究微小核糖核酸(miR)-155靶向蛋白酪氨酸磷酸酶非受体21型(PTPN21)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养Huh7人肝癌细胞并通过miR-155沉默慢病毒(sh-miR-155)转染下调miR-155。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Huh7细胞miR-155沉默效果,获得稳转细胞株后将细胞株随机分为:Blank组(正常Huh7细胞)、shNC组(Huh7细胞+miR-155空载体)、sh-miR-155组(Huh7细胞+miR-155沉默)、sh-miR-155+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155沉默+PI3K-AKT激动剂)、shNC+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155空载体+PI3K-AKT激动剂)。双荧光素酶实验检测PTPN21是否为miR-155的下游;溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术测定各组细胞凋亡水平;Transwell实验分析各组细胞侵袭与迁移能力;蛋白质印迹检测各组PTPN21、通路相关蛋白PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3表达变化差异。结果sh-miR-155组中miR-155的表达水平低于Blank组及shNC组(P<0.0001),miR-155在Blank组及shNC组表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示,sh-miR-155组中Huh7细胞在2、3、4、5 d时A值均低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而Blank组与shNC组差异无统计学意义(P>0.05);sh-miR-155组在2、3、4、5 d时A值低于sh-miR-155+Recilisib组及shNC+Recilisib组(P=0.0052,P<0.0001),而sh-miR-155+Recilisib组在2、3、4、5 d时A值低于shNC+Recilisib组(P<0.0001)。Blank组与shNC组迁移及侵袭细胞数差异无统计学意义(P>0.05),激活PI3K-AKT信号通路后,与Blank组相比,shNC+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力显著增加(P<0.0001)。相反,沉默miR-155后Huh7细胞的迁移及侵袭细胞数明显低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而PI3K激动剂逆转了这一现象,与sh-miR-155组相比,sh-miR-155+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力增强(P=0.0002)。慢病毒转染Huh7人肝癌细胞以沉默miR-155,下调miR-155抑制PTPN21调控PI3K-AKT信号通路从而抑制肝癌细胞的侵袭、迁移、增殖能力,促进肝癌细胞凋亡。结论miR-155通过靶向PTPN21调控PI3K-AKT信号通路抑制肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖。miR-155可能是未来肝癌治疗潜在靶点。

姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖诱导的损伤研究

目的:探究姜黄素(curcumin,Cur)通过miR-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖(highglucose,HG)诱导的损伤。方法:将心肌细胞分为Con组(正常培养细胞)、HG组(30mmol/L葡萄糖培养细胞)、HG+Cur-L组(姜黄素25μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur-M组(姜黄素50μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞)、HG+Cur-H组(姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-NC组(转染miR-NC,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-34a(转染miR-34a,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-34a+3-MA组(转染miR-34a,使用姜黄素100μmol/L、葡萄糖30 mmol/L及自噬抑制剂3-MA 10μmol/L培养细胞)。采用qRT-PCR检测miR-34a表达水平;CCK8检测细胞活性;ELISA检测LDH含量、SOD、GSH-Px活性;Western blot检测Beclin-1、LC3II/I、p62蛋白表达。结果:与Con组相比,HG组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显降低,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显增加。与HG组比较,HG+Cur-L组、HG+Cur-M组、HG+Cur-H组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显增加,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显降低。与HG+Cur+miR-NC组相比,HG+Cur+miR-34a、HG+Cur+miR-34a+3-MA组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显降低,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显增加。与HG+Cur+miR-34a组相比,HG+Cur+miR-34a+3-MA组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显增加,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显降低。结论:姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导自噬途径减缓高糖诱导的心肌细胞损伤。

老年急性心肌梗死伴心力衰竭患者血清中Kruppel样因子15、微小核糖核酸128-3p表达与心功能的关系

目的探讨老年急性心肌梗死(AMI)伴心力衰竭患者血清中Kruppel样因子15(KLF15)、微小核糖核酸128-3p(miR-128-3p)表达与心功能的关系。方法纳入2020年8月至2021年8月期间襄阳市襄州区人民医院收治的老年AMI伴心力衰竭患者112例作为AMI伴心力衰竭组,同期选取一般资料相匹配且单纯AMI患者120例作为AMI组,所有患者采用超声心动图进行心功能检测,记录左心室收缩末期内径(LVESd)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室射血分数(LVEF);测定患者血清中脑钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、KLF15、miR-128-3p水平;Pearson法分析老年AMI伴心力衰竭患者血清KLF15、miR-128-3p表达水平与BNP、CK-MB、cTnI、LVESd、LVEDd、LVEF相关性,并分析血清KLF15与miR-128-3p的相关性。结果与AMI组相比,AMI伴心力衰竭组患者miR-128-3p表达水平、BNP、CK-MB、cTnI、LVESd、LVEDd水平升高(t/Z=38.306、5.865、7.997、20.575、16.037、17.368,P<0.05),LVEF、KLF15水平降低(t=24.072、47.301,P<0.05)。AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p水平随心功能分级升高而升高(F=322.866,P<0.05),KLF15水平随心功能分级升高而降低(F=221.228,P<0.05);老年AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p表达水平与BNP、CK-MB、cTnI呈正相关(r=0.667、0.525、0.617,P<0.05),与LVEF呈负相关(r=-0.537,P<0.05);血清KLF15表达水平与BNP、CK-MB、cTnI、LVEDd呈负相关(r=-0.531、-0.574、-0.562、-0.416,P<0.05),与LVEF呈正相关(r=0.624,P<0.05)。TargetScan网站预测miR-128-3p与KLF15具有靶向结合位点,Pearson分析显示,老年AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p与KLF15呈负相关(r=-0.853,P<0.05)。结论老年AMI伴心力衰竭患者血清KLF15降低,miR-128-3p水平升高,均与患者心功能指标具有相关性,可作为判断AMI伴心力衰竭患者心功能的标志物。

血清微小核糖核酸-183、基质金属蛋白酶9水平与B型主动脉夹层患者预后的关系

目的 探讨血清微小核糖核酸(miRNA)-183、基质金属蛋白酶9(MMP9)水平与B型主动脉夹层(TBAD)患者胸段血管内主动脉修复术(TEVAR)后预后的关系。方法 收集2019年1月至2022年1月柳州市工人医院接受TEVAR治疗的150例TBAD患者的临床资料,根据术后随访情况将患者分为预后不良组(n=27)和预后良好组(n=121)。统计随访期间不良事件的发生情况,采用多因素Logistic回归模型分析TBAD患者TEVAR术后预后不良的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)分析miRNA-183、MMP9对TBAD患者TEVAR术后预后不良的预测价值。结果 随访时间为8~44个月,中位随访23个月。预后不良组患者的年龄大于预后良好组患者,高血压比例、2型糖尿病比例、收缩压、白细胞计数、空腹血糖、糖化血红蛋白水平及血清MMP9水平均高于预后良好组患者,血清mi RNA-183的表达水平低于预后良好组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,高血压、MMP9表达水平高均是TBAD患者TEVAR术后预后不良的危险因素(P<0.05),miRNA-183水平高是TBAD患者TEVAR术后预后不良的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-183和MMP9联合预测TBAD患者TEVAR术后预后不良的曲线下面积(AUC)为0.919,高于miRNA-183、MMP9单独预测的0.824、0.843,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 血清miRNA-183表达下调、MMP9水平升高均与TBAD患者TEVAR术后预后不良有关,可作为其预后分析的标志物。

慢性阻塞性肺疾病合并冠心病患者组胺、可溶性髓样细胞触发受体-1、微小核糖核酸-145、超敏C反应蛋白的表达特征及检测价值

目的 探讨组胺(HA)、可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、微小核糖核酸-145(miR-145)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并冠心病(CHD)患者中的表达特征及检测价值。方法 将107例COPD合并CHD患者设为研究组,同期健康体检者107例设为对照组。抽取受检者血液样本,检测miR-145、HA及sTREM-1、hs-CRP水平。比较2组HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平,并比较研究组不同病情严重程度和纽约心脏病协会(NYHA)分级患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平。观察各指标水平与病情严重程度、NYHA分级的关联性。结果 研究组HA、sTREM-1、hs-CRP水平高于对照组,miR-145水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同COPD病情严重程度患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着病情严重程度的加剧,HA、sTREM-1、hs-CRP水平持续增高,miR-145持续降低,差异有统计学意义(P<0.05)。不同NYHA分级患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着NYHA分级的增高,HA、sTREM-1、hs-CRP水平持续增高,miR-145持续降低,差异有统计学意义(P<0.05)。HA、sTREM-1、hs-CRP与COPD病情严重程度、NYHA分级呈正相关,miR-145与COPD病情严重程度、NYHA分级呈负相关(P<0.05)。结论 COPD合并CHD患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP表达异常,且与COPD病情严重程度、NYHA分级密切相关。

利用CRISPR-Cas9技术构建微小核糖核酸-551b基因敲除小鼠模型

目的:利用成簇规律性间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白9(CRISP associated protein 9,Cas9)技术构建微小核糖核酸-551b(miR-551b)基因敲除小鼠模型。方法:选择健康C57BL/6J小鼠,针对miR-551b外显子1区域,设计导向RNA(guide RNA,gRNA),构建Cas9载体质粒,将体外转录的Cas9 RNA及gRNA显微注射入小鼠的受精卵并体外培养。将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠,使用基因测序确定基因敲除情况,与野生型小鼠繁育后,得到F1代杂合小鼠,F1代小鼠经自交繁育获得F2代小鼠,F3代小鼠由F2代纯合小鼠自交获得,采用电泳鉴定小鼠基因型,RT-PCR检测F3代小鼠组织miR-551b的表达。结果:利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠,通过测序筛选出缺失目标序列的F0代杂合子小鼠。与WT小鼠繁育后,琼脂糖凝胶电泳及测序筛选出F1代杂合小鼠,同样的方法鉴定并获得F2、F3代基因敲除小鼠,获取F3代纯合小鼠的心脏及下腔静脉样本,RT-PCR结果证实F3代纯合小鼠miR551b表达明显低于WT小鼠(P<0.05),成功敲除miR-551b基因。结论:通过CRISPR-Cas9技术成功构建miR⁃155基因敲除小鼠模型并稳定遗传,为进一步研究提供了有利条件。

微小RNA-199a-5p保护大鼠脑缺血后血-脑屏障完整性

目的探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制。方法通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组12只。应用Ludmila Belayev 12分评分法评估大鼠的神经行为学表现;采用Evans蓝染色检测脑缺血后BBB的完整性;免疫荧光染色检测脑缺血后细胞凋亡;Western blotting技术检测claudin-5、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、p-Akt、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)-A的蛋白表达;利用Real-time PCR检测脑缺血半暗带、梗死区miR-199a-5p、claudin-5及VEGF-A表达水平。结果MiR-199a-5p mimic干预增强MCAO大鼠本体感觉和运动能力。MiR-199a-5p降低脑缺血后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,并增加缺血半暗带中claudin-5和VEGF-A的表达。此外,miR-199a-5p减轻了脑缺血后的炎症。MiR-199a-5p降低脑缺血后BBB渗透性,减少神经细胞凋亡。结论MiR-199a-5p可降低缺血性脑卒中后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,降低炎性细胞因子的表达,减轻缺血性脑卒中对BBB的破坏。

血清微小核糖核酸-130a对老年高血压脑出血的影响

目的分析老年高血压脑出血患者血清微小核糖核酸(miR)-130a表达及其对脑血肿扩大的预测价值。方法选取210例老年高血压脑出血患者(疾病组)和180例老年健康志愿者(健康组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组血清miR-130a表达;Logistic回归分析明确疾病组脑血肿扩大的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,将曲线下面积(AUC)用以评价血清miR-130a表达对脑血肿扩大的预测价值。结果疾病组血清miR-130a相对表达量显著高于健康组(P<0.05);疾病组不同性别、年龄、出血位置患者血清miR-130a相对表达量差异无统计学意义(P>0.05),入院时舒张压、收缩压升高患者血清miR-130a相对表达量显著高于未升高患者(P<0.001);疾病组脑血肿扩大发生率为16.83%,且疾病组脑血肿扩大发生患者血清miR-130a表达显著高于未发生脑血肿扩大患者(P<0.05);丘脑出血、入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、血清miR-130a表达均是疾病组发生脑血肿扩大的影响因素(P<0.05);血清miR-130a表达对脑血肿扩大的预测灵敏度、AUC均显著高于GCS评分(P<0.05)。结论老年高血压脑出血患者血清miR-130a表达高,可能与血压升高有关,且发生脑血肿扩大者更高,血清miR-130a表达升高与丘脑出血等均可增加脑血肿扩大的发生风险,且血清miR-130a表达可预测脑血肿扩大。

宫颈癌患者血清微小核糖核酸-381、微小核糖核酸-145水平变化及与临床病理参数相关性分析

目的:探讨宫颈癌(CC)患者血清微小核糖核酸-381(miRNA-381)、微小核糖核酸-145(miRNA-145)水平的变化及与临床病理参数的关系。方法:选取CC患者80例作为观察组,并于同期健康女性体检者选取68例作为对照组。采用定量聚合酶链反应法(QRT-PCR)检测两组血清miRNA-381、miRNA-145表达水平,同时收集其临床病理资料,探究血清表达水平与临床病理参数的关系。结果:观察组血清miRNA-381、miRNA-145水平低于对照组(均P<0.05);CC患者血清miRNA-381、miRNA-145表达水平与患者年龄、乳头瘤病毒感染、肿瘤直径、病理分期等因素无关(均P>0.05);与病理类型、组织分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移有关(均P<0.05)。结论:CC患者中血清miRNA-381、miRNA-145呈低表达,其表达水平与病理类型、组织分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移有关。

子宫内膜癌患者血清微小核糖核酸-146a、微小核糖核酸-155表达水平及其临床意义

目的分析子宫内膜癌(EC)患者血清微小核糖核酸-146a(miR-146a)、微小核糖核酸-155(miR-155)表达水平及其临床意义。方法前瞻性纳入达州市中心医院2019年7月至2021年4月收治的81例EC患者作为EC组,另纳入同期收治的81例子宫内膜增生患者作为内膜增生组。检测并比较两组入院时血清miR-146a、miR-155水平;询问并记录EC患者临床病理特征,比较不同病理特征EC患者血清miR-146a、miR-155水平,分析血清miR-146a、miR-155水平与EC患者临床病理特征的关系。结果EC组血清miR-146a水平低于内膜增生组,miR-155水平高于内膜增生组(P<0.05)。有淋巴结转移EC患者血清miR-146a水平低于无淋巴结转移患者,miR-155水平高于无淋巴结转移患者(P<0.05);经Logistic回归分析结果显示,血清miR-146a水平升高可能是EC患者淋巴结转移的保护因子(OR<1,P<0.05),miR-155水平升高可能是EC患者淋巴结转移的风险因子(OR>1,P<0.05)。结论EC患者血清miR-146a降低水平、miR-155水平升高,且血清miR-146a水平降低、miR-155水平升高可能与EC患者淋巴结转移有关。

急诊有机磷中毒患者外周血微小核糖核酸-214、T淋巴细胞和炎症因子表达与早期肾损伤关系

目的:分析急诊有机磷中毒患者外周血微小核糖核酸(miRNA)-214、T淋巴细胞和炎症因子的表达与早期肾损伤的关系。方法:选取80例急诊有机磷中毒患者为研究对象,将其作为研究组,根据是否发生早期肾损伤将其分为肾损伤组(n=24)和非肾损伤组(n=56),另选取同期50例健康体检者作为对照组。比较不同组别之间的miR-214、CD3^(+)、CD8^(+)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-18(IL-18)水平差异,分析miR-214、CD3^(+)、CD8^(+)、CRP、IL-18与早期肾损伤的关系。结果:研究组miR-214、CRP、IL-18水平均高于对照组,CD3^(+)、CD8^(+)水平均低于对照组(均P<0.05)。单因素分析结果显示,肾损伤组miR-214、CRP、IL-18水平均高于非肾损伤组,CD3^(+)、CD8^(+)水平均低于非肾损伤组(均P<0.05),而两组间性别、年龄、体重指数、中毒时间、服毒量比较差异无统计学意义(均P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-214、CD3^(+)、CD8^(+)、CRP、IL-18水平均为影响急诊有机磷中毒患者发生早期肾损伤的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-214、CD3^(+)、CD8^(+)、CRP、IL-18在预测急诊有机磷中毒患者发生早期肾损伤中具有较高价值(均P<0.05)。结论:急诊有机磷中毒患者miR-214、CRP、IL-18表达量升高、CD3^(+)、CD8^(+)表达量降低有助于疾病的早期判断,在预测早期肾损伤的发生风险中具有较高的临床价值。

非小细胞肺癌并发肺栓塞患者微小核糖核酸-1233、血清碱性成纤维细胞生长因子、血细胞参数变化及与患者预后关系

目的:探讨并发急性肺栓塞(APE)的非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、微小核糖核酸-1233(miR-1233)、血细胞参数的变化与危险分层及短期预后的关系。方法:采取病例对照研究方法,选取110例肺癌合并肺栓塞患者作为栓塞组、另外选取同期收治的肺癌但未合并肺栓塞的患者110例作为对照组,对比两组患者的血清bFGF、miR-1233、红细胞分布宽度(RDW)、血小板分布宽度(PDW)、血小板平均体积(MPV)、血小板淋巴细胞比率(PLR)、中性粒细胞淋巴细胞比率(NLR)水平,并按照不同危险分层将栓塞组进行分层对比,采用Logistic回归模型分析各项指标与急性肺栓塞的NSCLC患者的相关性。结果:栓塞组患者的bFGF、miR-1233、RDW、MPV、PLR、NLR水平均显著高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);高风险组患者的bFGF、miR-1233、RDW、MPV、PLR、NLR水平均显著高于中低风险组患者,差异具有统计学意义(均P<0.05);死亡组患者的bFGF、miR-1233、RDW、MPV、PLR、NLR水平均显著高于生存组患者,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归模型结果显示:ALB降低、NT-proBNP升高、合并房颤、合并肺部感染、bFGF升高、miR-1233升高、PLR升高、NLR升高是NSCLC合并肺栓塞患者不良预后结局的独立危险因素(均P<0.05)。结论:bFGF、miR-1233及血细胞参数与NSCLC发生肺栓塞有关,并且与患者治疗的不良预后结局关系密切。

血清长链非编码核糖核酸NORAD、微小核糖核酸-26b表达与急性冠状动脉综合征的相关性研究

目的分析长链非编码核糖核酸(lncRNA)NORAD、微小核糖核酸(miR)-26b在急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清中的表达相关性及二者对ACS的诊断价值。方法选取永州市中心医院2020年1月至2021年12月期间诊治的68例ACS患者纳入ACS组,按照Gensini评分将其分为高水平组、中等水平组、低水平组;同期选基线资料无显著性差异的健康体检者72例为对照组。收集所有研究对象一般资料及相关生化指标水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA NORAD、miR-26b水平;采用Pearson相关分析评估ACS患者血清lncRNA NORAD、miR-26b水平与一般资料及相关生化指标的相关性;血清lncRNA NORAD、miR-26b检测水平对ACS的诊断效能采用受试者工作特征(ROC)曲线评价;ACS发生的影响因素采用Logistic回归分析。结果ACS组血清lncRNA NORAD水平显著高于对照组,miR-26b水平显著低于对照组(t=10.177、11.175,P<0.05)。高水平组lncRNA NORAD、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、脑利钠肽(BNP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平显著高于中等水平组和低水平组,miR-26b水平显著低于中等水平组和低水平组(F=10.227、37.655、23.000、76.319、95.680、107.706、9.763,P<0.05)。ACS患者血清lncRNA NORAD与miR-26b水平呈负相关(r=-0.558,P<0.05);cTnI、BNP、hs-CRP、TNF-α、IL-6与lncRNA NORAD呈正相关,与miR-26b呈负相关(r=0.502、0.510、0.494、0.479、0.486、-0.487、-0.504、-0.493、-0.472、-0.482,P<0.05)。血清lncRNA NORAD、miR-26b及其联合诊断ACS的曲线下面积分别为0.764、0.907、0.914,特异度分别为81.5%、72.2%、93.5%,敏感度分别为72.4%、87.9%、67.8%。miR-26b是ACS发生的保护因素(P<0.05),lncRNA NORAD是ACS发生的独立危险因素(P<0.05)。结论ACS患者血清中lncRNA NORAD、miR-26b表达呈负相关,且二者在ACS的临床诊断中均具有一定价值。