微小核糖核酸-200b-3p、血管内皮生长因子A在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其与复发转移相关性

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中微小核糖核酸-200b-3p(miR-200b-3p)、血管内皮生长因子A(VEGFA)表达及其与复发转移的关系。方法回顾性收集2013年12月至2015年12月于河北省退役军人总医院经手术切除且经组织病理证实的95例食管鳞状细胞癌病人的食管鳞状细胞癌组织及相应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR法检测组织中miR-200b3p、VEGFA mRNA表达,采用免疫组化法检测组织中VEGFA表达。采用Pearson检验分析食管鳞状细胞癌病人miR-200b-3p与VEGFA mRNA表达的相关关系;随访5年,采用Kaplan-Meier法分析食管鳞状细胞癌组织中miR-200b-3p、VEGFA表达与病人复发转移的关系,采用Cox比例风险模型分析影响食管鳞状细胞癌病人复发转移的危险因素。结果与癌旁正常组织比较,食管鳞状细胞癌组织中miR-200b-3p表达水平明显降低[(1.00±0.24)比(0.67±0.18),P<0.05],VEGFA mRNA和VEGFA阳性率明显升高[(1.01±0.26)比(1.92±0.50)、(17.89%)比(78.95%),P<0.05]。食管鳞状细胞癌病人miR-200b-3p与VEGFA mRNA表达呈负相关(r=−0.39,P<0.05)。与非复发转移组比较,复发转移组病人食管鳞状细胞癌组织中miR-200b-3p表达水平明显降低[(0.78±0.20)比(0.53±0.14),P<0.05],VEGFA阳性率明显升高[(67.92%)比(92.86%),P<0.05]。食管鳞状细胞癌组织中miR-200b-3p、VEGFA表达与病人组织分化程度、TNM分期有关(P<0.05)。miR-200b-3p低表达者5年复发转移率(55.56%)明显高于高表达者(34.00%)(P<0.05),VEGFA高表达者5年复发转移率(55.17%)明显高于低表达者(27.03%)(P<0.05)。组织分化程度、miR-200b-3p低表达、VEGFA高表达是影响食管鳞状细胞癌病人复发转移的独立危险因素(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌组织中miR-200b-3p表达下调,VEGFA表达上调,二者均可作为评定病人复发转移的临床参考指标。

重复经颅磁刺激对阿尔茨海默病患者临床症状及血浆微小核糖核酸-125b、血浆磷酸化Tau-181蛋白的影响

目的:观察重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者认知功能、神经精神行为症状及血浆微小核糖核酸-125b(microRNA-125b,miR-125b)、血浆磷酸化Tau-181蛋白(phosphorylated Tau181 protein,P-tau181)表达的影响。方法:筛选轻中度AD患者34例,随机分为对照组(n=16)和试验组(n=18)。对照组采取认知训练及重复经颅磁伪刺激,试验组采取认知训练结合重复经颅磁真刺激。磁刺激强度为100%的静息运动阈值,频率为10Hz,每日治疗1次,每周治疗5天,持续4周,刺激脑区为左侧前额叶背外侧区和左侧颞叶区。在治疗前、后进行Addenbrooke-Ⅲ认知检查(the AddenbrookeⅢcognitive examination,ACE-Ⅲ)、简易精神状态量表(mini-mental state scale,MMSE)及神经精神症状问卷(neuropsychiatric inventory,NPI)评估,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测微小miR-125b表达量,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测P-tau181的浓度。结果:治疗结束后,试验组ACE-Ⅲ、MMSE和NPI评分以及miR-125b、P-tau181均较组内治疗前显著改善,差异具有显著性意义(P<0.05),且上述指标与对照组治疗后相比,差异具有显著性意义(P<0.05);而对照组各项指标改善不具有显著性意义(P>0.05)。结论:rTMS能改善轻中度AD患者的认知功能及神经精神行为症状,这可能与rTMS促进血浆miR-125b的表达和抑制P-tau181蛋白产生相关。

慢性心力衰竭患者血清微小核糖核酸-29b表达水平及其临床意义

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血清中微小核糖核酸-29b(miR-29b)的表达水平及其临床意义。方法选取2017年6月至2020年8月长沙市第四医院收治的167例CHF患者作为观察组,并根据纽约心脏协会心功能分级标准进行分级;另选同时间段内145名健康体检者为对照组。采用qRT-PCR检测受试者血清miR-29b表达水平,超声心动图检测左心房内径(LAD)、左心室重构指数(LVRI)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室后壁厚度(LVPWD)、左心室质量指数(LVMI)、左心室射血分数(LVEF)、心排血量(CO),并检测血清N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平及评估堪萨斯城心肌病调查问卷(KCCQ)评分、6 min步行试验(6MWT)。比较对照组和观察组各级心功能患者上述各项指标,采用Pearson相关性分析法分析观察组患者血清miR-29b表达水平与心功能、心室重构指标及生存质量的关系;随访1年,采用多因素Logistic回归分析法分析CHF患者血清miR-29b表达水平与预后的关系。结果观察组心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患者中血清miR-29b相对表达量、LVRI、CO、LVEF及KCCQ评分、6MWT均依次降低(P<0.05),且均低于对照组(F=831.833、386.491、110.251、71.503、101.552、867.632,P<0.05);观察组心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级中LAD、LVEDD、LVMI、LVPWD及血清NT-proBNP、cTnI、cTnT水平均依次升高(P<0.05),且均高于对照组(F=238.758、528.524、241.700、58.167、3712.854、1836.663、2230.468,P<0.05);Pearson相关性分析显示CHF患者miR-29b表达与LVEDD、LVPWD、LVMI、LAD及血清NT-proBNP、cTnI、cTnT水平均呈负相关(r=-0.822、-0.884、-0.891、-0.713、-0.854、-0.813、-0.832,P<0.05),而与LVEF、CO、LVRI及KCCQ评分、6MWT均呈正相关(r=0.734、0.864、0.791、0.721、0.783,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清miR-29b表达是CHF患者预后不良的保护因素(OR=0.517,P<0.05),心功能分级Ⅲ/Ⅳ级和对医嘱依从性差是其预后不良的危险因素(OR=5.496、6.074,P<0.05)。结论miR-29b表达是CHF患者预后不良的影响因素,对CHF的临床诊治具有重要指导作用。

血清微小核糖核酸-183、基质金属蛋白酶9水平与B型主动脉夹层患者预后的关系

目的 探讨血清微小核糖核酸(miRNA)-183、基质金属蛋白酶9(MMP9)水平与B型主动脉夹层(TBAD)患者胸段血管内主动脉修复术(TEVAR)后预后的关系。方法 收集2019年1月至2022年1月柳州市工人医院接受TEVAR治疗的150例TBAD患者的临床资料,根据术后随访情况将患者分为预后不良组(n=27)和预后良好组(n=121)。统计随访期间不良事件的发生情况,采用多因素Logistic回归模型分析TBAD患者TEVAR术后预后不良的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)分析miRNA-183、MMP9对TBAD患者TEVAR术后预后不良的预测价值。结果 随访时间为8~44个月,中位随访23个月。预后不良组患者的年龄大于预后良好组患者,高血压比例、2型糖尿病比例、收缩压、白细胞计数、空腹血糖、糖化血红蛋白水平及血清MMP9水平均高于预后良好组患者,血清mi RNA-183的表达水平低于预后良好组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,高血压、MMP9表达水平高均是TBAD患者TEVAR术后预后不良的危险因素(P<0.05),miRNA-183水平高是TBAD患者TEVAR术后预后不良的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-183和MMP9联合预测TBAD患者TEVAR术后预后不良的曲线下面积(AUC)为0.919,高于miRNA-183、MMP9单独预测的0.824、0.843,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 血清miRNA-183表达下调、MMP9水平升高均与TBAD患者TEVAR术后预后不良有关,可作为其预后分析的标志物。

激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

利用CRISPR-Cas9技术构建微小核糖核酸-551b基因敲除小鼠模型

目的:利用成簇规律性间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白9(CRISP associated protein 9,Cas9)技术构建微小核糖核酸-551b(miR-551b)基因敲除小鼠模型。方法:选择健康C57BL/6J小鼠,针对miR-551b外显子1区域,设计导向RNA(guide RNA,gRNA),构建Cas9载体质粒,将体外转录的Cas9 RNA及gRNA显微注射入小鼠的受精卵并体外培养。将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠,使用基因测序确定基因敲除情况,与野生型小鼠繁育后,得到F1代杂合小鼠,F1代小鼠经自交繁育获得F2代小鼠,F3代小鼠由F2代纯合小鼠自交获得,采用电泳鉴定小鼠基因型,RT-PCR检测F3代小鼠组织miR-551b的表达。结果:利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠,通过测序筛选出缺失目标序列的F0代杂合子小鼠。与WT小鼠繁育后,琼脂糖凝胶电泳及测序筛选出F1代杂合小鼠,同样的方法鉴定并获得F2、F3代基因敲除小鼠,获取F3代纯合小鼠的心脏及下腔静脉样本,RT-PCR结果证实F3代纯合小鼠miR551b表达明显低于WT小鼠(P<0.05),成功敲除miR-551b基因。结论:通过CRISPR-Cas9技术成功构建miR⁃155基因敲除小鼠模型并稳定遗传,为进一步研究提供了有利条件。

微小核糖核酸-155对肝癌细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的影响

目的探究微小核糖核酸(miR)-155靶向蛋白酪氨酸磷酸酶非受体21型(PTPN21)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养Huh7人肝癌细胞并通过miR-155沉默慢病毒(sh-miR-155)转染下调miR-155。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Huh7细胞miR-155沉默效果,获得稳转细胞株后将细胞株随机分为:Blank组(正常Huh7细胞)、shNC组(Huh7细胞+miR-155空载体)、sh-miR-155组(Huh7细胞+miR-155沉默)、sh-miR-155+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155沉默+PI3K-AKT激动剂)、shNC+Recilisib组(Huh7细胞+miR-155空载体+PI3K-AKT激动剂)。双荧光素酶实验检测PTPN21是否为miR-155的下游;溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术测定各组细胞凋亡水平;Transwell实验分析各组细胞侵袭与迁移能力;蛋白质印迹检测各组PTPN21、通路相关蛋白PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3表达变化差异。结果sh-miR-155组中miR-155的表达水平低于Blank组及shNC组(P<0.0001),miR-155在Blank组及shNC组表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示,sh-miR-155组中Huh7细胞在2、3、4、5 d时A值均低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而Blank组与shNC组差异无统计学意义(P>0.05);sh-miR-155组在2、3、4、5 d时A值低于sh-miR-155+Recilisib组及shNC+Recilisib组(P=0.0052,P<0.0001),而sh-miR-155+Recilisib组在2、3、4、5 d时A值低于shNC+Recilisib组(P<0.0001)。Blank组与shNC组迁移及侵袭细胞数差异无统计学意义(P>0.05),激活PI3K-AKT信号通路后,与Blank组相比,shNC+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力显著增加(P<0.0001)。相反,沉默miR-155后Huh7细胞的迁移及侵袭细胞数明显低于Blank组及shNC组(P<0.0001),而PI3K激动剂逆转了这一现象,与sh-miR-155组相比,sh-miR-155+Recilisib组肝癌细胞的迁移、侵袭能力增强(P=0.0002)。慢病毒转染Huh7人肝癌细胞以沉默miR-155,下调miR-155抑制PTPN21调控PI3K-AKT信号通路从而抑制肝癌细胞的侵袭、迁移、增殖能力,促进肝癌细胞凋亡。结论miR-155通过靶向PTPN21调控PI3K-AKT信号通路抑制肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖。miR-155可能是未来肝癌治疗潜在靶点。

原发性先天性青光眼(PCG)患儿与正常婴幼儿血浆中微小核糖核酸(miRNA或miR)-29b、miR-24、miR-200c的表达差异及临床意义

目的探讨原发性先天性青光眼(primary congenital glaucoma,PCG)患儿与正常婴幼儿血浆中微小核糖核酸(miRNA或miR)-29b、miR-24、miR-200c的表达差异及临床意义。方法收集2015年至2017年散发的PCG患儿16例血浆标本作为PCG组,另选年龄相近的正常婴幼儿共49例血浆标本作为正常人组。应用实时荧光定量PCR检测两组受试者血浆中miR-29b、miR-24、miR-200c的表达量,分析各自表达差异与病变严重程度的关系,并运用ROC曲线评价其诊断价值。结果PCG组受试者血浆中miR-29b、miR-24、miR-200c相对表达量(0.31±0.19、0.17±0.16、0.55±0.18)明显低于正常人组(1.18±0.52、2.86±2.65、1.62±0.76),差异均有统计学意义(均为P<0.05);血浆中miR-24、miR-29b的表达与PCG病变严重程度有关,病变越严重,其表达量越低;ROC曲线表明miR-24和miR-29b对PCG疾病的诊断价值高于miR-200c。结论血浆中游离的miRNA可作为辅助诊断PCG一种新的血浆标志物。

血清长链非编码核糖核酸NORAD、微小核糖核酸-26b表达与急性冠状动脉综合征的相关性研究

目的分析长链非编码核糖核酸(lncRNA)NORAD、微小核糖核酸(miR)-26b在急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清中的表达相关性及二者对ACS的诊断价值。方法选取永州市中心医院2020年1月至2021年12月期间诊治的68例ACS患者纳入ACS组,按照Gensini评分将其分为高水平组、中等水平组、低水平组;同期选基线资料无显著性差异的健康体检者72例为对照组。收集所有研究对象一般资料及相关生化指标水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA NORAD、miR-26b水平;采用Pearson相关分析评估ACS患者血清lncRNA NORAD、miR-26b水平与一般资料及相关生化指标的相关性;血清lncRNA NORAD、miR-26b检测水平对ACS的诊断效能采用受试者工作特征(ROC)曲线评价;ACS发生的影响因素采用Logistic回归分析。结果ACS组血清lncRNA NORAD水平显著高于对照组,miR-26b水平显著低于对照组(t=10.177、11.175,P<0.05)。高水平组lncRNA NORAD、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、脑利钠肽(BNP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平显著高于中等水平组和低水平组,miR-26b水平显著低于中等水平组和低水平组(F=10.227、37.655、23.000、76.319、95.680、107.706、9.763,P<0.05)。ACS患者血清lncRNA NORAD与miR-26b水平呈负相关(r=-0.558,P<0.05);cTnI、BNP、hs-CRP、TNF-α、IL-6与lncRNA NORAD呈正相关,与miR-26b呈负相关(r=0.502、0.510、0.494、0.479、0.486、-0.487、-0.504、-0.493、-0.472、-0.482,P<0.05)。血清lncRNA NORAD、miR-26b及其联合诊断ACS的曲线下面积分别为0.764、0.907、0.914,特异度分别为81.5%、72.2%、93.5%,敏感度分别为72.4%、87.9%、67.8%。miR-26b是ACS发生的保护因素(P<0.05),lncRNA NORAD是ACS发生的独立危险因素(P<0.05)。结论ACS患者血清中lncRNA NORAD、miR-26b表达呈负相关,且二者在ACS的临床诊断中均具有一定价值。

血清miR-200b、miR-135b表达对急性缺血性脑卒中患者脑侧支循环状态及认知功能障碍评估的价值

目的探讨血清微小核糖核酸-200b(miR-200b)、miR-135b表达对急性缺血性脑卒中(AIS)患者脑侧支循环状态及认知功能障碍评估的价值。方法选取海军军医大学第一附属医院2022年3月至2023年3月收治的153例AIS患者作为研究对象,依据数字减影血管造影(DSA)侧支循环状态评分将其分为侧支循环良好组(n=81)和侧支循环不良组(n=72),观察血清miR-200b、miR-135b表达水平。并参照蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估所有患者认知功能状态,依据是否存在认知功能障碍将患者分为非障碍组(n=74)及障碍组(n=79),观察不同认知功能状态患者血清miR-200b、miR-135b水平变化,通过Pearson相关性分析血清miR-200b、miR-135b表达水平与AIS患者脑侧支循环状态及认知功能障碍的相关性。结果侧支循环良好组患者血清miR-200b、miR-135b表达水平及MoCA评分均高于侧支循环不良组患者(P<0.05)。非障碍组患者血清miR-200b、miR-135b表达水平均高于障碍组患者(P<0.05)。Pearson相关性分析显示:血清miR-200b、miR-135b表达水平与AIS患者脑侧支循环状态呈正相关(r=0.746、0.724,P<0.05);与AIS患者认知功能状态呈正相关(r=0.721、0.703,P<0.05)。ROC曲线分析显示:miR-200b预测不良脑侧支循环发生的约登指数(0.685)最大时对应截断值为0.64,曲线下面积为0.853,预测敏感度为83.33%,特异度为85.19%;miR-135b预测不良脑侧支循环发生的约登指数(0.650)最大时对应截断值为1.16,曲线下面积为0.833,预测敏感度为84.72%,特异度为80.25%。miR-200b预测认知功能障碍发生的约登指数(0.595)最大时对应截断值为0.71,曲线下面积为0.827,预测敏感度为79.75%,特异度为79.73%;miR-135b预测认知功能障碍发生的约登指数(0.488)最大时对应截断值为1.18,曲线下面积为0.800,预测敏感度为77.22%,特异度为71.62%结论血清miR-200b、miR-135b在不良脑侧支循环状态及认知功能障碍的AIS患者中表达水平较低,两者与AIS患者脑侧支循环状态及认知功能状态呈正相关,对不良脑侧支循环及认知功能障碍发生的预测价值较高。

血清微小核糖核酸-133b水平与老年糖尿病肾病患者肾脏损伤及预后的相关性

目的探讨血清微小核糖核酸-133b(miR-133b)水平与老年糖尿病肾病(DN)患者肾脏损伤及预后的关系。方法入选2016年1月至2017年12月海南省人民医院肾病风湿科收治的182例老年DN患者(DN组)及同期来本院进行体检的80名健康人群(对照组),比较2组miR-133b水平及其水平与老年DN患者不同临床指标的关系。采用肾病分级、间质性纤维化和小管萎缩(IFTA)评分、间质炎症来评价肾脏损伤情况,分析不同肾脏损伤程度和miR-133b水平的相关性。根据DN组miR-133b水平平均值将182例患者分为低表达组与高表达组,分析2组miR-133b水平与患者预后的关系。利用2-△△Ct法计算miR-133b的相对表达水平。采用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析,根据数据类型,组间比较采用单因素方差分析、成组t检验或χ~2检验。相关性分析采用Pearson法。结果 DN组血清miR-133b水平显著高于对照组,差异有统计学意义[(5.38±1.28)vs(1.06±0.25),P<0.01]。不同的糖尿病病程、24 h尿蛋白定量、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)及估算肾小球滤过率(e GFR)间血清miR-133b水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肾病分级、IFTA评分及间质炎症分级间血清miR-133b水平比较,差异亦有统计学意义(P<0.05),且随着肾脏病理损伤程度的增加,血清miR-133b水平显著升高(P<0.05)。Pearson相关分析显示,患者血清miR-133b水平与24 h尿蛋白定量、SCr、BUN、肾病分级、IFTA及间质炎症呈正相关(r分别为0.492、0.382、0.415、0.463、0.338、0.547,P<0.01),与e GFR水平呈负相关(r=-0.625,P<0.01)。182例老年DN患者最终有76例发展为终末期肾病(ESRD),其中miR-133b高表达组(65.9%,58/88)相对于低表达组(19.1%,18/94)发展为ESRD的比例显著增加(χ2=6.175,P=0.006)。结论血清miR-133b水平在老年DN患者中明显增高,且与老年DN患者肾脏损伤及预后不良有关,miR-133b水平较高的患者肾脏损伤程度较严重且预后较差。

微小核糖核酸-34a调节高迁移率族蛋白B1对卵巢癌细胞增殖的影响

目的 探讨微小核糖核酸-34a(miR-34a)通过调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对卵巢癌SKOV-3细胞增殖能力的影响,了解miR-34a参与卵巢癌发生、发展的分子机制。方法 设计miR-34a模拟物、miR-34a抑制剂,对SKOV-3细胞进行转染,采用CCK8检测转染24h、48h和72h后SKOV-3细胞存活情况,采用qRT-PCR法检测各组miR-34a和HMGB1mRNA的表达;利用Westernblot法检测各组HMGB1蛋白的表达。结果 转染miR-34a模拟物后,SKOV-3细胞的增殖率显著低于空白对照组和miR-34a模拟物对照组(P均<0.05),HMGB1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和miR-34a模拟物对照组降低(P均<0.05);转染miR-34a抑制剂后,SKOV-3细胞的增殖率显著高于空白对照组和miR-34a抑制剂对照组(P均<0.05),HMGB1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和miR-34a抑制剂对照组增加(P均<0.05)。结论 MiR-34a影响卵巢癌细胞的增殖功能,其可能是通过抑制HMGB1的表达参与卵巢癌的发生、发展。

老年急性心肌梗死患者血清微小核糖核酸-302b表达及其临床意义

目的探讨血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-302b在老年急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者中的表达及其临床意义。方法选取海南三林旅业开发有限公司澄迈富力红树湾医院内科和海南省人民医院收治的136例老年AMI患者和50例正常对照组,比较两组血清miR-302b、心肌肌钙蛋白I(myocardial troponin I,cTnI)及肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)浓度变化。应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析血清miR-302b、cTnI及CK-MB浓度对老年AMI患者诊断的价值。结果AMI组血清miR-302b(4.19±1.27 vs.0.48±0.14,P<0.01)、cTnI[(3.14±1.32)ng/mL vs.(0.03±0.01)ng/mL,P<0.01]及CK-MB[(73.42±19.20)U/L vs.(11.64±2.18)U/L,P<0.01]均明显高于对照组,差异有统计学意义。ROC分析结果显示,miR-302b、cTnI及CK-MB诊断AMI的临界值分别为2.64、1.48 ng/mL、60.75 U/L,3项联合诊断老年AMI的曲线下面积=0.933(95%CI:0.870~0.982)最大,其敏感度和特异度为94.6%和89.0%。结论血清miR-302b在老年AMI患者中呈高表达,与cTnI、CK-MB联合检测有助于提高老年AMI诊断的准确性。

妊娠期高血压miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a表达水平及临床意义

目的 探讨妊娠期高血压miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a表达水平及临床意义。方法 回顾性选取83例2022年1月至2023年1月承德市妇幼保健院收治的妊娠期高血压患者的临床资料作为病例组,其中28例妊娠期高血压作为妊娠期高血压组、28例轻度子痫前期作为轻度子痫前期组、27例重度子痫前期作为重度子痫前期组;另随机选择同期于本院产科门诊规律围产期保健并入院待产的94名正常足月单胎妊娠孕妇为对照组。结果 收缩压、舒张压:重度子痫前期组>轻度子痫前期组>妊娠期高血压组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a表达水平:重度子痫前期组>轻度子痫前期组>妊娠期高血压组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a水平联合检测诊断妊娠期高血压的AUC值为0.940,高于各指标单独检测(0.768、0.809、0.744、0.795,P<0.05)。病例组不良妊娠结局总发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 妊娠期高血压患者不良妊娠结局的几率更大,血清miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a在妊娠期高血压患者中呈高表达,其表达水平与患者病情严重程度具有一定关系,且四者联合检测对妊娠期高血压的诊断价值更高。

乌司他丁对老年脓毒症患者血清微小核糖核酸-23b和炎症因子的影响及其临床疗效

目的探讨乌司他丁对老年脓毒症患者血清微小核糖核酸-23b(miR-23b)、炎症因子的影响及其临床疗效。方法采用随机、单盲、对照试验设计,选取2017年3月至2018年1月张家口市中医院急诊科救治的脓毒症患者64例,随机数字表法分为对照组32例和观察组32例。对照组给予常规治疗,观察组在常规治疗的基础上给予注射用乌司他丁30万U,静脉滴注,1次/8h。2组患者均连续治疗7 d。检测2组患者治疗前后血清炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)]以及miR-23b水平变化,应用急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭估计(SOFA)评分、多器官功能障碍(MODS)评分评估患者健康状况,并比较2组患者临床疗效。采用SPSS 17.0软件进行数据分析,组间比较采用t检验、χ~2检验或秩和检验。结果治疗前对照组与观察组患者miR-23b表达量分别为(0.87±0.10)和(0.86±0.09)ng/μl,治疗7 d后依次为(1.73±0.21)和(1.91±0.26)ng/μl;与治疗前比较,治疗后2组患者miR-23b表达量均显著升高(P<0.05);与对照组比较,观察组治疗后miR-23b表达量显著升高,差异均有统计学意义(t=2.112,P=0.037)。与治疗前相比,治疗7 d后2组患者TNF-α、IL-6、hs-CRP水平及APACHEⅡ、SOFA、MODS评分均显著降低(P<0.05);治疗7 d后,与对照组比较,观察组患者上述指标亦均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗7 d后对照组和观察组治疗总有效率分别为75.0%(24/32)和90.6%(29/32),差异有统计学意义(Z=-2.375,P=0.018)。结论乌司他丁可能通过调控miR-23b表达来减轻机体炎症反应并改善脓毒症患者预后,值得临床推广应用。

外周血微小核糖核酸-26b评价原发性高血压早期肾损害的临床价值

目的 分析外周血微小核糖核酸-26b(miR-26b)对原发性高血压早期肾损害的评价价值。方法 选取2017年6月至2019年10月徐州市中心医院收治的112例原发性高血压患者进行外周血miR-26b检测。经尿微量白蛋白(mALB)检测证实是否发生早期肾损害,分为发生组55例和未发生组57例。对比两组一般资料、外周血miR-26b水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血miR-26b水平评价原发性高血压早期肾损害的效能。结果 早期肾损害占比49.11%;两组一般资料对比差异均无统计学意义(P> 0.05);发生组外周血miR-26b水平高于未发生组(t=15.653,P <0.05);外周血miR-26b水平评价原发性高血压肾损害的Cut-off值为1.57,敏感度、特异度、曲线下面积(95%CI)分别为89.09%、94.74%、0.979(0.933~0.997)。结论 外周血miR-26b水平对原发性高血压早期肾损害有一定评估价值。

栝楼瞿麦汤对糖尿病肾病患者血清PDGF-BB、微小核糖核酸-133b水平的影响观察

目的:探究栝楼瞿麦汤对糖尿病肾病患者血清血小板衍化生长因子-BB(PDGF-BB)、微小核糖核酸-133b(miR-133b)水平的影响。方法:选取本院2018年1月~2021年1月收治的糖尿病肾病患者100例,随机数表法分为观察组50例和对照组50例,对照组给予常规西医治疗,观察组在对照组基础上给予栝楼瞿麦汤治疗,并观察两组患者临床疗效、中医证候积分、血糖和肾功能指标、血清指标。结果:观察组治疗总有效率为98.00%,高于对照组的78.00%(P<0.05)。治疗后,观察组的中医证候积分分值低于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后的血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、尿素氮(BUN)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)、PDGF-BB和miR-133b水平均降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。结论:栝楼瞿麦汤对糖尿病肾病患者具有良好的治疗效果,能够改善其血清PDGF-BB和miR-133b水平。

心肌细胞中微小核糖核酸let-7c对肌营养素基因表达的调控作用

目的:探讨心肌细胞中微小核糖核酸(mi R)let-7c(mi R-let-7c)对肌营养素基因表达是否具有调控作用以及可能的作用机制。方法:首先构建携带肌营养素基因3'非编码区(3'-UTR)片段的荧光素酶报告基因载体,与mi R-let-7c前体共转染Hela细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性以验证mi R-let-7c与肌营养素基因的靶向调控关系。进而培养大鼠心肌细胞H9c2,Taqman实时定量聚合酶链式反应(PCR)法检测mi R转染效果,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测mi R-let-7c及mi R-let-7c抑制物转染心肌细胞后肌营养素蛋白表达,以及心肌肥厚相关信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)的活性变化。结果:荧光素酶活性实验结果表明,与重组荧光素酶报告基因表达载体(p MIR-MTPN)+mi R前体阴性对照组相比,p MIR-MTPN+mi R-let-7c前体组荧光素酶活性显著降低[(59.30±9.90)%vs(98.10±15.10)%]。Western blot结果表明,mi R-let-7c前体组与mi R阴性对照组相比,肌营养素蛋白表达水平显著降低([0.28±0.05)vs(0.90±0.09)],此外,NF-κB蛋白水平显著降低([0.25±0.06)vs(0.75±0.07)];相反,mi R-let-7c抑制物组与抑制物阴性对照组相比,肌营养素蛋白表达水平显著升高[(1.14±0.09)vs(0.44±0.09)],同时,NF-κB蛋白水平也显著升高[(1.09±0.05)vs(0.71±0.06)],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-let-7c能够通过作用于3'UTR区域,抑制肌营养素基因表达,并影响心肌肥厚关键信号通路分子NF-κB的活性。

胃癌根治性切除患者术前血清外泌体miR-193a和miR-208b水平表达及其对预后预测价值研究

目的探究胃癌(gastric cancer,GC)患者在根治性手术前血清外泌体微小核糖核酸(micro RNA,miR)-193a和微小核糖核酸(microRNA,miR)-208b水平表达及其预后预测价值。方法以新疆医科大学第一附属医院2018年3月~2020年3月收治的132例GC根治性切除术前患者为GC组,同期132例体检健康者为对照组。收集对比患者临床病理资料。血清外泌体miR-193a和miR-208b相对表达水平的检测采用实时荧光定量PCR(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)法,Pearson法分析miR-193a和miR-208b的相关性。GC患者术前血清外泌体miR-193a,miR-208b表达与术后患者预后相关性采用Kaplan-Meier法分析;单因素及多因素COX回归分析患者预后的影响因素。结果GC组外泌体miR-208b表达水平较对照组明显升高(1.77±0.14 vs 1.02±0.01),miR-193a表达水平明显降低(0.52±0.06 vs 1.01±0.01),差异具有统计学意义(t=92.551,61.392,均P<0.05)。GC患者术前miR-193a与miR-208b的表达水平呈负相关(r=-0.409,P<0.05)。患者中TNM分期为I+II期、无淋巴结转移、无远处转移的miR-193a低表达比例和miR-208b高表达比例明显低于TNM分期为III+IV、有淋巴结转移、有远处转移患者,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.008,4.397;7.142,4.688;4.407,5.189,均P<0.05)。miR-193a低表达患者三年累积生存率(30.43%)显著低于高表达(60.32%)患者(χ^(2)=17.861,P<0.001),miR-208b高表达患者三年累积生存率(27.14%)低于低表达(64.52%)患者(χ^(2)=16.340,P<0.001)。血清外泌体miR-193a(HR=0.493,95%CI:0.323~0.753)和miR-208b水平(HR=2.697,95%CI:1.382~5.262)是患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论术前血清外泌体miR-193a水平降低,miR-208b水平升高,两者表达水平与GC根治性切除术患者的预后有关。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。