微小核糖核酸-27a、微小核糖核酸-1299预测食管癌病人术后预后的临床价值

目的探讨微小核糖核酸(miR)-27a、miR-1299预测食管癌病人术后远期预后的临床价值。方法2020年6月~2022年6月我院收治的食管癌病人89例,均行微创胸、腹腔镜联合食管癌切除术治疗。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测病人术前miR-27a、miR-1299表达量,采用酶联法检测血清铁蛋白(SF)水平,分析miR-27a、miR-1299相对表达量及血清SF与食管癌病人临床病理的关系。术后跟踪随访并记录病人的生存情况,随访截止时间为2023年2月。分析miR-27a、miR-1299表达量及血清SF与病人预后的关系,采用多因素Cox回归模型分析影响食管癌病人预后的危险因素。Pearson分析miR-27a、miR-1299与血清SF的关系。结果miR-27a、miR-1299相对表达量及血清SF在肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析结果显示,miR-27a高表达组及SF高表达组总生存率低于miR-27a低表达组及SF低表达组,miR-1299高表达组总生存率高于miR-1299低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,miR-27a≥2.54、miR-1299<4.18和血清SF≥223.78μg/L均为影响食管癌病人术后远期预后的独立危险因素(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清SF水平与miR-27a相对表达量呈正相关(P<0.05,r=0.612),与miR-1299相对表达量呈负相关(P<0.05,r=-0.517)。结论食管癌病人miR-27a、miR-1299表达及血清SF与病人肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度有关,且可以评估病人术后预后。

miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达在急性脑梗死患者诊疗中的价值研究

目的 探讨miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达在急性脑梗死(ACI)患者诊疗中的应用价值。方法 选取2020年1月至2022年12月南通市第三人民医院全科医学科收治的ACI患者100例作为研究对象,定义为ACI组,根据ACI患者3个月改良Rankin评分量表(mRS评分)将其分为预后良好组(mRS评分≤2分)68例与预后不良组(mRS>2分)32例,另选同期于南通市第三人民医院全科医学科体检的健康者100例作为对照组。记录各组miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平并进行比较,采用Pearson相关分析探讨两变量的相关性,通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测在ACI诊断中的效能,采用多因素Logistic回归分析探讨ACI预后的危险因素。结果 ACI组平均年龄、吸烟史比例、合并高血压比例、miR-140-3p与miR-128-3p及miR-27-3p表达水平均明显高于对照组(均P<0.05)。miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测用于诊断ACI的曲线下面积(AUC值)为0.965,敏感度为99.00%,特异度为98.00%,表明miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测用于诊断ACI的效能更高。预后不良组平均年龄、入院时NIHSS评分、梗死体积、吸烟史比例、合并高血压比例、miR-27-3p、miR-128-3p、miR-140-3p表达水平及3个月mRS评分均明显高于预后良好组(均P<0.05)。经Pearson相关分析表明ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p、miR-140-3p表达水平均分别与入院时NIHSS评分、梗死体积、3个月mRS评分呈正相关(均P<0.05)。经多因素Logistic回归分析表明年龄(OR:1.546;95%CI:1.124~1.969)、入院时NIHSS评分(OR:1.721;95%CI:1.229~2.308)、梗死体积(OR:1.853;95%CI:1.436~2.786)、吸烟史(OR:1.517;95%CI:1.168~1.825)、miR-27-3p (OR:2.481;95%CI:1.452~3.201)、miR-128-3p (OR:1.692;95%CI:1.288-2.431)及miR-140-3p (OR:2.032;95%CI:1.141~1.976)均为ACI患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论 ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平均明显升高,通过三指标联合检测可提高对ACI的诊断效能,而预后不良ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平则升高更为明显,并分别与入院时NIHSS评分、梗死体积、3个月mRS评分呈正相关,且miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p均为ACI患者预后的独立危险因素,应予以重点关注。

老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a、FOXO3与疾病严重程度及预后的关系

目的分析老年重症肺炎并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清微小核糖核酸(miRNA)-27a、叉头框蛋白O3(FOXO3)与疾病严重程度及预后的关系。方法选取2022年10月—2023年9月上海市静安区中心医院重症医学科收治老年重症肺炎并发ARDS患者108例(ARDS组)和老年重症肺炎未并发ARDS患者72例(非ARDS组),ARDS组患者再根据氧合指数分为轻度亚组26例、中度亚组34例、重度亚组48例,并根据28 d预后情况分为死亡亚组33例、存活亚组75例;另选取同期体检健康志愿者60例为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-27a、FOXO3水平,TargetScan数据库预测miR-27a与FOXO3的结合位点。通过Pearson/Spearman相关性分析血清miR-27a与FOXO3 mRNA水平的相关性,多因素Logistic回归分析老年重症肺炎并发ARDS患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-27a、FOXO3 mRNA水平对老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的预测价值。结果健康对照组、非ARDS组、ARDS组血清miR-27a水平依次降低,FOXO3 mRNA水平依次升高(F/P=77.352/<0.001、62.956/<0.001);轻度亚组、中度亚组、重度亚组血清miR-27a水平依次降低,FOXO3 mRNA水平依次升高(F/P=83.597/<0.001、111.833/<0.001);miR-27a与FOXO3的3’-非翻译区3257~3264处存在结合位点。老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a与FOXO3 mRNA水平呈负相关(r/P=-0.736/<0.001),氧合指数与血清miR-27a水平呈正相关,与FOXO3 mRNA水平呈负相关(r/P=0.751/<0.001、-0.785/<0.001)。老年重症肺炎并发ARDS患者28 d死亡率为30.56%(33/108)。年龄增加、机械通气时间延长、FOXO3 mRNA升高为影响老年重症肺炎并发ARDS患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.199(1.033~1.393)、1.547(1.009~2.373)、1.108(1.040~1.180)],氧合指数升高、miR-27a升高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.973(0.958~0.989)、0.903(0.844~0.965)];血清miR-27a、FOXO3 mRNA水平及二者联合预测老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的曲线下面积分别为0.784、0.786、0.879,二者联合的AUC大于血清miR-27a、FOXO3 mRNA水平单独预测(Z/P=2.550/0.011、2.963/0.003)。结论老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a水平降低,FOXO3 mRNA水平升高,与疾病加重和预后不良密切相关,二者联合预测老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的价值较高。

外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与妊娠期糖尿病患者妊娠结局的关系

目的探究外周血微小核糖核酸-27a(miR-27a)、微小核糖核酸-146a-5p(miR-146a-5p)水平与妊娠期糖尿病(GDM)患者妊娠结局的相关性。方法回顾性选取2020年1月至2022年12月郑州大学第二附属医院妇产科接收的60例GDM患者当作研究对象,依照妊娠结局划分成不良组(n=29)、良好组(n=31),对两组临床资料行单因素分析与logistics多因素回归分析,采用Spearman相关性分析法分析外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与妊娠结局的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-27a、miR-146a-5p对GDM患者妊娠结局的预测价值。结果两组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、miR-27a、miR-146a-5p比较差异有统计学意义(P<0.05);logistics多因素回归分析结果显示,miR-27a、miR-146a-5p为GDM患者发生不良妊娠结局的危险因素(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血miR-27a水平与不良妊娠结局发生呈正相关,外周血miR-146a-5p水平与不良妊娠结局发生呈负相关(P<0.05);ROC曲线显示,miR-27a、miR-146a-5p预测GDM患者妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.915、0.902,联合预测的AUC最大,为0.979。结论外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与不良妊娠结局发生有关,且联合检测对妊娠结局具有较高预测价值,有助于GDM患者妊娠结局的早期判断。

慢性间歇低氧和复氧对大鼠胰岛素抵抗及骨骼肌miR-27a-3p/PPARγ/IRS1/PI3K/AKT表达的影响

目的探讨慢性间歇低氧(CIH)和复氧对大鼠胰岛素抵抗(IR)及骨骼肌miR-27a-3p/PPARγ/IRS1/PI3K/AKT表达的影响。方法从基因表达数据库(GEO)中下载CIH条件下miRNA数据集,运用DESeq2筛选差异表达最显著的miRNA作为研究对象,使用miRNA walk网站对差异miRNA的靶基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并Cytoscape软件构建miRNA-mRNA-pathway调控网络。将48只雄性SD大鼠随机分为对照(CON)组和CIH组,24只/组,CON组常氧环境饲养12周,CIH组先予CIH环境饲养8周,再恢复常氧饲养4周。两组均在基线、8周、12周时留取血样和骨骼肌组织,检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,HE染色观察骨骼肌病理改变并计算肌纤维横截面积,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blotting法检测骨骼肌miR-27a-3p、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体1(IRS1)、p-IRS1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸激酶B(AKT)、p-AKT表达,比较组间差异。结果生信分析发现,GEO数据库未筛选出CIH状态下肌肉组织相关的miRNA数据集,仅得到肾脏组织差异表达miRNA的GSE202480数据集,从CON组和CIH组样本中筛选出165个差异表达的miRNA,选最显著miR-27a-3p作为研究对象。GO和KEGG分析显示,差异miRNA的靶基因主要参与肌肉调节和胰岛素信号传导。miRNA-mRNA-pathway调控网络显示miR-27a-3p是PPAR信号通路和PI3K/AKT信号通路的关键调控因子。动物实验发现,基线时,两组各项观察指标均无统计学意义(P>0.05);8周时,与CON组相比,CIH组FBG、FINS、HOMA-IR、PPARγ显著升高(P<0.05或P<0.01),肌纤维排列疏松,肌纤维横截面积、miR-27a-3p、p-IRS1/IRS1、PI3K、p-AKT/AKT显著降低(P<0.05或P<0.01),GLUT4表达呈升高趋势但无统计学意义(P>0.05);12周时,两组各项观察指标均无统计学意义(P>0.05)。结论CIH可导致大鼠IR增加和骨骼肌病理改变,而复氧可以逆转;CIH可致骨骼肌miR-27a-3p表达下调,PPARγ表达上调,IRS1/PI3K/AKT胰岛素信号转导受到抑制,而复氧干预可以逆转;miR-27a-3p可能通过调控PPARγ/IRS1/PI3K/AKT信号通路参与了CIH所致的IR。

高血压并发冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清miR-27a-3p和HOXC6水平表达与冠状动脉病变的相关性研究

目的探讨高血压并发冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血清微小核糖核酸-27a-3p(miR-27a-3p)和同源异型盒C6(homeobox C6,HOXC6)水平表达与冠状动脉病变的相关性,为高血压并发冠心病的防治提供一定参考。方法选取北大荒集团总医院2021年6月~2023年6月接诊的246例高血压患者为研究对象,其中129例高血压并发冠心病患者作为并发组,117例单纯高血压患者作为未并发组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real timePCR,qRT-PCR)检测血清miR-27a-3p和HOXC6表达水平;运用Spearman法分析高血压并发冠心病患者血清miR-27a-3p和HOXC6水平与冠状动脉病变的相关性;多因素Logistic回归分析高血压并发冠心病的影响因素;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-27a-3p,HOXC6水平对高血压并发冠心病的预测价值。结果并发组高血压病程(6.69±1.35年)、总胆固醇(total cholesterol,TC)(5.96±0.86mmol/L)、低密度脂蛋白-胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)(3.36±0.51mmol/L)均显著高于未并发组(5.87±1.32年,5.42±0.67mmol/L,2.98±0.48mmol/L),并发组血清miR-27a-3p(1.35±0.34),HOXC6(1.29±0.33)水平均显著高于未并发组(1.06±0.23,1.03±0.25),差异具有统计学意义(t=4.808,5.454,6.001,7.755,6.911,均P<0.05);轻度组、中度组、重度组患者血清miR-27a-3p(0.54±0.13,1.19±0.31,2.18±0.55)和HOXC6(0.47±0.12,1.12±0.31,2.13±0.52)表达水平逐渐升高,差异具有统计学意义(F=191.026,191.026,均P<0.05)。高血压并发冠心病患者血清miR-27a-3p,HOXC6与SYNTAX评分具呈正相关性(r=0.563,0.517,均P<0.05);血清miR-27a-3p[OR(95%CI:1.627(1.177~2.248)]、HOXC6[OR(95%CI):1.715(1.069~2.750)]是影响高血压并发冠心病的独立危险因素(P<0.05);血清miR-27a-3p和HOXC6联合预测高血压并发冠心病的AUC为0.896(95%CI:0.851~0.931),优于各自单独诊断(Z=2.133,2.815,均P<0.05)。结论高血压并发冠心病患者血清miR-27a-3p,HOXC6水平均显著升高,且与冠状动脉病变密切相关,二者联合对高血压并发冠心病具有较高的预测价值。

微小RNA-27a通过Nrf2对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的探讨微小RNA(miRNA)-27a通过核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法40只清洁级健康SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、AAV9-miR-27a过表达+心肌缺血再灌注组(AAV组)、miR-27a antagomir+心肌缺血再灌注组(AG组)。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型,Sham组穿线后不结扎冠状动脉。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清心肌肌钙蛋白T(cTn-T)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平。取心肌缺血再灌注区域心肌组织行3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色并计算心肌梗死面积,生化法测定心肌组织谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醇(MDA)水平,采用实时定量聚合酶链反应测定心肌组织miR-27a表达,Western blot法测定缺血心肌组织Nrf2的蛋白表达水平。结果与Sham组比较,I/R组血清cTnT、CK-MB和LDH水平及心肌梗死面积升高,心肌组织GSH、SOD水平降低,MDA水平升高,miR-27a表达水平升高,Nrf2的蛋白表达水平表达下降(P均<0.05);与I/R组比较,AAV组血清cTnT、CK-MB和LDH水平及心肌梗死面积升高,心肌组织GSH、SOD水平降低,MDA水平升高,miR-27a表达水平升高,Nrf2的蛋白表达水平表达下降(P均<0.05);与AAV组比较,AG组血清cTnT、CK-MB和LDH水平及心肌梗死面积降低,心肌组织GSH、SOD的水平升高,MDA水平降低,miR-27a表达水平降低,Nrf2的蛋白表达水平升高(P均<0.05)。结论miR-27a可能通过抑制Nrf2加重大鼠心肌缺血再灌注损伤。

miR-186-5p靶向CXCL13基因通过Wnt/β-catenin信号调节胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭

目的探讨miR-186-5p对胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法在胃癌HGC-27细胞中通过脂质体转染miR-186-5p模拟物(mimics),采用实时荧光定量PCR检测转染效果,MTT实验分析HGC-27细胞增殖水平,流式细胞术分析细胞周期变化和细胞凋亡情况,Transwell实验分析HGC-27细胞迁移和侵袭能力,生物信息学、双荧光素酶报告基因实验以及Western blotting分析miR-186-5p和CXCL13的靶向关系,Western blotting分析Wnt/β-catenin信号通路活化情况。结果体外转染miR-186-5p mimics可上调HGC-27细胞中miR-186-5p的表达。上调miR-186-5p表达能够抑制HGC-27细胞体外增殖、细胞周期进程、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,上调miR-186-5p表达能够抑制β-catenin和c-Myc的表达。结论miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,阻断Wnt/β-catenin信号通路,并抑制胃癌HGC-27细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

血清miR-27a-3p与miR-141-3p在老年高血压性脑出血患者中的表达及其与预后的关系

目的探究血清miR-27a-3p与miR-141-3p在老年高血压性脑出血患者中的表达及其与预后的关系。方法选取山东省立第三医院2020年4月~2021年9月收治的124例老年高血压性脑出血患者作为观察组,按照格拉斯哥昏迷(GCS)评分将患者分为轻度组(GCS 13~14分,55例)、中度组(GCS 9~12分,46例)及重度组(GCS 3~8分,23例),根据出院后3个月的格拉斯哥预后(GOS)评分将观察组分为预后良好组(GOS>4分,65例)和预后不良组(GOS≤4分,59例)。另选取同期在本院接受体检的55例健康志愿者作为对照组。对比观察组与对照组的miR-27a-3p、miR-141-3p、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)水平。采用Pearson相关系数分析miR-27a-3p、miR-141-3p与TNF-α、VEGF、IL-1β之间的相关性;采用logistic多因素回归分析影响老年高血压性脑出血患者预后的不良因素。结果观察组miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于对照组,TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重度组miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于轻度组和中度组(P<0.05),TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于轻度组和中度组(P<0.05);中度组miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于轻度组,TNF-α、VEGF及IL-1β高于轻度组(P<0.05);观察组miR-27a-3p与miR-141-3p呈正相关(P<0.05),miR-27a-3p与TNF-α、VEGF及IL-1β呈负相关(P<0.05),miR-141-3p与TNF-α、VEGF及IL-1β呈负相关(P<0.05);logistic回归分析显示,小脑及脑干出血是影响老年高血压性脑出血患者预后的独立危险因素(P<0.05),miR-27a-3p>0.165、miR-141-3p>1.035是老年高血压性脑出血患者预后的保护性因素(P<0.05)。结论血清miR-27a-3p与miR-141-3p在老年高血压性脑出血患者中的水平较低,对患者病情判断以及预后评估具有重要的临床意义。

血清miR-222、miR-874-3p和miR-27a联合诊断多囊卵巢综合征的应用价值

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清miR-222、miR-874-3p和miR-27a水平,并评估其在PCOS中的潜在诊断价值。方法 选取PCOS患者98例为PCOS组,因单纯输卵管不孕或男性因素不孕的妇女98例为对照组。根据体质指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和游离雄性激素指数(FAI),将PCOS组分为正常体质量组、超重组和肥胖组;非胰岛素抵抗组和胰岛素抵抗组;高雄激素组和低雄激素组。qRT-PCR检测各组miR-222、miR-874-3p和miR-27a水平,ROC曲线分析miR-222、miR-874-3p和miR-27a在PCOS中的诊断价值。结果 PCOS组BMI、HOMA-IR和FAI及血清miR-222、miR-874-3p、miR-27a均高于对照组(P<0.05)。超重组和肥胖组miR-27a高于正常体质量组,胰岛素抵抗组miR-222和miR-27a高于非胰岛素抵抗组,高雄激素组miR-874-3p高于低雄激素组(P<0.05)。miR-222、miR-874-3p和miR-27a联合诊断PCOS诊断效能最高。结论 PCOS患者血清miR-27a、miR-222和miR-874-3p表达上调,可能与胰岛素抵抗、脂代谢和高雄激素血症有关,三者联合检测有助于PCOS的诊断。

miR-27a,miR-138-5p对食管癌的早期诊断价值及与其病理分化程度的关系研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-27a、miR-138-5p与食管癌病理分化程度的关系,评价其在食管癌早期诊断中的意义。方法选取73例食管癌患者作为研究组,另选59例健康体检者作为对照组,应用实时荧光定量PCR技术检测两组血清miR-27a、miR-138-5p表达水平,比较两组血清miR-27a、miR-138-5p表达水平,分析两者与食管癌临床特征的关系,建立受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),分析miR-27a,miR-138-5p单独及联合检测对食管癌早期诊断价值。结果研究组血清miR-27a表达水平高于对照组,miR-138-5p表达水平低于对照组(P<0.05);随着病理分化程度升高,血清miR-27a表达水平降低、miR-138-5p表达水平升高(P<0.05);淋巴结发生转移患者血清miR-27a水平高于未转移患者、miR-138-5p表达水平低于未转移患者(P<0.05);Ⅳ期患者miR-27a表达水平高于Ⅲ期和Ⅰ~Ⅱ期患者,miR-138-5p表达水平低于Ⅲ期和Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);血清miR-27a,miR-138-5p单独诊断早期食管癌的最佳截断点分别为7.32、2.51,单独及联合诊断的AUC分别为0.786、0.725、0.813。结论血清miR-27a,miR-138-5p与食管癌发生发展相关,对食管癌的早期诊断价值较高。

miR-222-3p对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-222-3p(miR-222-3p)对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞和正常口腔角质细胞株(hNOK)中miR-222-3p的表达,培养CAL-27细胞并分为对照组(NC组)、inhibitor NC组(转染阴性对照质粒)和miR-222-3p inhibitor组(转染miR-222-3p inhibitor)。分别采用MTT法、流式细胞术及Trasnwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化,蛋白质印迹法检测BAX、Bcl-2、MMP-2、N-cadherin及E-cadherin的表达。结果CAL-27细胞中miR-222-3p的表达水平显著高于hNOK细胞(P<0.05)。与inhibitor NC组和NC组相比,miR-222-3p inhibitor组CAL-27细胞的凋亡率显著升高,增殖、侵袭能力显著降低(P<0.05),且Bcl-2、MMP-2和N-cadherin蛋白表达水平显著降低,BAX和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论miR-222-3p在CAL-27细胞中高表达,下调miR-222-3p可抑制CAL-27细胞的增殖和侵袭能力,并促进细胞凋亡。

miR-27b-3p通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-Catenin信号通路抑制肝星状细胞活化

目的探讨miR-27b-3p对肝星状细胞(HSC)活化的影响及其作用机制。方法取生长良好的LX-2细胞,利用10 ng/ml TGF-β1处理24 h以诱导其活化,并命名为LX-2-A细胞,免疫荧光法观察细胞中α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-27b-3p表达;利用LipofectamineTM2000转染试剂盒对LX-2-A细胞进行转染,并分为7组:空白组(正常培养的LX-2-A细胞)、mimics NC组(转染mimics NC)、miR-27b-3p mimics组(转染miR-27b-3p mim-ics)、si-NC组(转染si-NC)、si-Wnt3a组(si-Wnt3a)、miR-27b-3p mimics+pcDNA3.1组(共转染miR-27b-3p mimics和pcDNA3.1)、miR-27b-3p mimics+Wnt3a组(共转染miR-27b-3p mimics和pcDNA3.1-Wnt3a),qRT-PCR检测细胞中miR-27b-3p表达;细胞对数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;免疫荧光染色法观察各组细胞中α-SMA表达;Western印迹检测各组细胞中Wnt3a、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、Collagen Ⅲ、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-连环蛋白(catenin)、c-myc、细胞周期素(Cyclin)D1表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-27b-3p与Wnt3a靶向关系。结果与LX-2细胞比较,LX-2-A细胞绿色荧光强度显著升高,表示α-SMA蛋白表达水平升高,提示TGF-β1诱导LX-2细胞活化成功;与LX-2细胞比较,LX-2-A细胞中miR-27b-3p表达水平显著降低(P<0.05);与空白组、mimics NC组比较,miR-27b-3p mimics组LX-2-A细胞中miR-27b-3p表达水平显著升高,吸光度OD值(24、48 h)、绿色荧光强度、Wnt3a、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与空白组、si-NC组比较,si-Wnt3a组LX-2-A细胞中miR-27b-3p表达水平无显著变化(P>0.05),OD值(24、48 h)、绿色荧光强度、Wnt3a、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与miR-27b-3p mimics组、miR-27b-3p mimics+pcDNA3.1组比较,miR-27b-3p mimics+Wnt3a组LX-2-A细胞中miR-27b-3p表达水平无显著变化(P>0.05),OD值(24、48 h)、绿色荧光强度、Wnt3a、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白表达水平显著升高(P<0.05);miR-27b-3p靶向调控Wnt3a的表达。结论过表达miR-27b-3p通过靶向下调Wnt3a表达,抑制Wnt/β-catenin通路激活,进而抑制LX-2-A细胞活化。

微小RNA-27a-5p对抑郁症大鼠桡骨骨折愈合的影响

目的 探讨微小RNA (miR)-27a-5p对抑郁症大鼠桡骨骨折愈合的影响。方法 将SD大鼠随机分为骨折对照组、骨折+抑郁组、miR-27a-5p agomir(激活剂)阴性对照组、miR-27a-5p agomir组、miR-27a-5p antagomir(抑制剂)阴性对照组、miR-27a-5p antagomir组,除骨折对照组外,其余各组大鼠均通过慢性温和不可预知应激刺激建立抑郁模型。所有大鼠均折断前右肢桡骨中段制备骨折模型,并以miR-27a-5p激活剂及抑制剂进行干预分组后,以强迫游泳实验与蔗糖水消耗实验检测各组大鼠抑郁症状。检测各组大鼠骨折段骨痂量和骨微结构;检测各组大鼠血清炎性因子白细胞介素(IL)-2、IL-6及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测各组大鼠骨痂组织miR-27a-5p、IL-2 mRNA表达。体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),随机分为对照组、miR-27a-5p mimics(模拟物)组、miR-27a-5p mimics阴性对照组、miR-27a-5p inhibitor(抑制剂)组、miR-27a-5p inhibitor阴性对照组。诱导各组细胞成骨分化并以miR-27a-5p模拟物及抑制剂分组干预后,以碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞成骨分化;以qRT-PCR实验检测各组细胞miR-27a-5p、IL-2 mRNA表达。以双荧光素酶报告基因实验检测大鼠BMSC中miR-27a-5p对IL-2的靶向调节作用。结果 与骨折对照组相比,骨折+抑郁组大鼠强迫游泳不动时间延长,血清IL-2、IL-6及RANKL水平、骨痂组织IL-2 mRNA表达升高,蔗糖水消耗量、骨痂量、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量减少,血清OPG水平、骨痂组织miR-27a-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与骨折+抑郁组相比,miR-27a-5p agomir组大鼠强迫游泳不动时间缩短,血清IL-2、IL-6及RANKL水平、骨痂组织IL-2 mRNA表达降低,蔗糖水消耗量、骨痂量、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量增加,血清OPG水平、骨痂组织miR-27a-5p表达升高,差异有统计学意义(P<0.05), miR-27a-5p antagomir组大鼠各指标变化趋势与miR-27a-5p agomir组相反,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,miR-27a-5p mimics组细胞ALP阳性细胞相对比例、miR-27a-5p表达升高,IL-2 mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05), miR-27a-5p inhibitor组细胞各指标变化趋势与miR-27a-5p mimics组相反,差异有统计学意义(P<0.05)。大鼠BMSC中miR-27a-5p可靶向下调IL-2表达。结论 miR-27a-5p可通过减轻炎症缓解抑郁症大鼠抑郁症状,并促进其桡骨骨折愈合,其分子机制是miR-27a-5p可靶向下调大鼠BMSC中IL-2表达。

ST段抬高型心肌梗死患者血清微小核糖核酸-27b表达与经皮冠状动脉介入治疗术后主要心血管不良事件的关系

目的探讨ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血清微小核糖核酸-27b(miR-27b)表达与经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后主要心血管不良事件(MACE)的关系。方法回顾性选取2019年2月至2021年4月在洪湖市人民医院拟行PCI术的168例STEMI患者为观察组,另选取同期154例健康体检者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测两组血清miR-27b表达水平。观察组PCI术后随访6个月,统计MACE发生情况,采用Logistic回归分析STEMI患者PCI术后MACE发生的危险因素。结果观察组血清miR-27b表达水平高于对照组(2.26±0.31比1.32±0.26),差异有统计学意义(P<0.05)。168例行PCI术的患者随访6个月期间均无失访,MACE发生率为28.57%(48/168)。发生组血清miR-276表达水平高于未发生组(2.61±0.49比2.13±0.24),差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果表明,糖尿病病史、高超敏C反应蛋白、低左心室射血分数、高冠状动脉Gensini评分、高血清miR-27b表达、多支血管病变、病变狭窄程度Ⅲ~Ⅳ级、发病至手术时间长是影响STEMI患者发生MACE的独立危险因素(OR=1.697、2.680、3.673、2.121、2.863、1.846、2.751、3.007,P<0.05)。结论STEMI患者血清miR-27b水平升高,并且高miR-27b水平是STEMI患者PCI术后发生MACE的危险因素。

血清微小核糖核酸-4286与幽门螺旋杆菌感染的子痫前期患者妊娠结局的关系

目的分析血清微小核糖核酸-4286(miR-4286)与幽门螺旋杆菌(Hp)感染的子痫前期(PE)患者妊娠结局的关系。方法选择Hp感染的孕妇89例[Hp组;年龄24~40岁,平均年龄31.67岁;孕前体质量指数(BMI)21.30~31.55 kg/m^(2),平均孕前BMI 25.47 kg/m^(2)]和204例Hp感染的PE患者(Hp+PE组;年龄24~40岁,平均年龄31.87岁;孕前BMI 21.01~31.55 kg/m^(2),平均孕前BMI 25.69 kg/m^(2))作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测miR-4286表达水平。随访获取Hp感染的PE患者妊娠结局,并分析miR-4286与其妊娠结局的关系。结果Hp组妊娠28周第1天(T2)和妊娠30周第1天(T3)的miR-4286水平均高于Hp+PE组(1.95±0.39 vs 1.82±0.26、2.28±0.31 vs 1.92±0.33。P=0.003、0.000),Hp组和Hp+PE组T3时点的miR-4286水平均高于T2时点(2.28±0.31 vs1.95±0.39、1.92±0.33 vs 1.82±0.26。P=0.000、0.001),Hp组miR-4286水平升高程度[0.38(0.56)]高于Hp+PE组[0.06(0.57)](P=0.000)。Hp+PE组中有121例妊娠结局不良(结局不良组),83例妊娠结局良好(结局良好组)。结局不良组PE确诊时收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、24 h尿蛋白和剖宫产占比均高于结局良好组,分娩孕周低于结局良好组[(155.64±11.89)mmHg vs(151.75±11.34)mmHg、(101.25±6.16)mmHg vs(97.93±8.79)mmHg、(2.69±0.52)g vs(2.06±0.29)g、85.95%vs 65.06%、(34.79±2.06)周vs(37.94±0.97)周。P=0.020、0.002、0.000、0.000、0.000]。结局不良组PE确诊时(T1)、T2和T3时点的miR-4286水平均低于结局良好组(1.37±0.15 vs 1.66±0.23、1.75±0.26 vs 1.92±0.24、1.84±0.34 vs 2.02±0.28。P=0.000、0.000、0.000),两组miR-4286水平随时间进展呈升高趋势,结局不良组miR-4286水平升高程度[0.45(0.52)]高于结局良好组[0.32(0.45)](P=0.028)。T1时点miR-4286判断妊娠结局不良的受试者工作特性(ROC)曲线下面积高于T2和T3时点的miR-4286(0.864 vs 0.688、0.864 vs 0.674。P=0.000、0.000)。SBP>154 mmHg[优势比(OR)=2.784,P=0.035]、24 h尿蛋白>2.37 g(OR=7.628,P=0.000)和剖宫产(OR=6.087,P=0.001)是Hp+PE患者妊娠结局不良的独立危险因素,分娩孕周>37周(OR=0.047,P=0.000)和T1时点的miR-4286>1.47(OR=0.091,P=0.000)是Hp+PE患者妊娠结局不良的独立保护因素。结论PE确诊时miR-4286水平>1.47与Hp+PE患者妊娠结局良好有关。

血清miR-130a表达水平与COPD急性加重期患者近期预后不良的临床关系

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血清微小核糖核酸-130a(miR-130a)表达水平及其与近期预后不良的关系。方法 选取2019年6月—2021年6月武汉市第三医院收治的85例AECOPD患者和门诊随诊的66例慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者,分别设为AECOPD组和COPD组,另同期选取70例健康者设为对照组,三组均检测血清miR-130a表达水平。根据AECOPD患者入院28 d预后情况将其分为预后良好组及预后不良组,分析血清miR-130a表达水平与AECOPD患者预后的关系及其预测价值。结果 AECOPD组和COPD组血清miR-130a表达水平均高于对照组(P<0.05),且AECOPD组血清miR-130a表达水平高于COPD组(P<0.05);85例AECOPD患者入院28 d预后不良发生率为41.18%;年龄大、吸烟史、合并冠心病、动脉氧分压低、血清miR-130a表达水平高及机械通气均是AECOPD患者近期预后不良的危险因素(P<0.05);血清miR-130a表达水平预测AECOPD近期预后不良的灵敏度、特异度、曲线下面积分别为85.71%、74.00%、0.813。结论 AECOPD患者血清miR-130a水平呈高表达,与近期预后密切相关,是近期预后不良的危险因素,并对近期预后不良具有一定的预测价值。

原发性痛风性关节炎患者miR-23a miR-24-2和miR-27a的表达水平及调节机制

目的:分析原发性痛风性关节炎(PGA)患者microRNA-23a(miR-23a)、microRNA-24-2(miR-24-2)和microRNA-27a(miR-27a)的表达水平及调节机制。方法:将本院50例PGA患者为病例组,30例健康体检人员为对照组。比较两组实验室常规指标,通过实时荧光定量PCR法对miR-23a、miR-24-2和miR-27a的表达水平进行检测,并采用Pearson相关性分析miR-23a、miR-24-2、miR-27a表达间的关系,将所获数据纳入统计学分析。结果:病例组血浆空腹血糖、尿酸、白细胞计数、中性粒细胞、甘油三酯、载脂蛋白B100较对照组均明显升高(均P<0.05),载脂蛋白A1较对照组均明显下降(P<0.01);而两组总胆固醇的比较,并无明显差异(P>0.05)。相比对照组,病例组miR-23a、miR-24-2和miR-27a的表达水平明显下调(P<0.01)。经Pearson相关性分析结果显示,病例组患者外周血单个核细胞中miR-23a、miR-24-2、miR-27a三者之间的表达水平存在正相关关系(P<0.01)。采用尿酸盐(100μg/mL)对健康体检人员中的外周血单个核细胞进行刺激,结果发现在炎性微环境下,刺激组外周血单个核细胞中的miR-23a、miR-24-2和miR-27a的表达水平显著低于无刺激组(P<0.01)。结论:miR-23a、miR-24-2和miR-27a可能作为炎症负性调控因子而在PGA的炎症免疫反应过程中起到重要作用,并且miR-24-2可能具有调节PGA的脂蛋白的作用。

微小RNA-4286调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型对胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭的影响

目的探讨微小RNA-4286(miRNA-4286)调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型(INPP4A)对胃癌细胞系NGC-27生长、迁移及侵袭的影响。方法将胃癌HGC-27细胞分为空白对照组和阴性对照组、干预组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染p EGFP-N1质粒,干预组转染pEGFP-N1-miRNA-4286质粒,采用Real-time PCR检测3组胃癌HGC-27细胞miRNA-4286表达量,采用Western blotting检测3组胃癌HGC-27细胞中INPP4A蛋白表达量,采用八肽胆囊收缩素(CCK8)法检测3组胃癌HGC-27细胞增殖率,采用Transwell小室侵袭实验检测3组胃癌HGC-27细胞侵袭能力,采用划痕实验检测3组胃癌HGC-27细胞迁移能力。结果干预组miRNA-4286表达量、增殖率、穿过小室膜的HGC-27细胞数明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);干预组INPP4A蛋白表达量、划痕伤口愈合间距明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);阴性对照组miRNA-4286表达量、INPP4A蛋白表达量、增殖率、穿过小室膜的HGC-27细胞数、划痕伤口愈合间距较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论MiRNA-4286可能通过下调INPP4A表达而促进胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭。

miR-27a-3p抑制β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅲ表达对胃癌SGC-7901细胞的影响

目的目前关于胃癌中miRNAs靶向调控β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅲ(B4GALT3)表达的具体机制尚不明确。文中旨在分析miR-27a-3p对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移及侵袭的影响,探讨其分子机制。方法生物信息学预测B4GALT3基因的靶miRNAs,针对B4GALT3′UTR与靶miRNA结合位点构建荧光素酶报告基因载体,检测其相对荧光素酶的活性;将miR-27a-3p mimic、mimic NC、control(空白对照)、miR-27a-3p inhibitor、inhibitor NC分别瞬转入SGC-7901细胞后,Western blot检测各转染细胞B4GALT3的表达情况;采用MTT、迁移、侵袭实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力。结果与正常胃黏膜GES-1细胞比较,B4GALT3在胃癌各个细胞系中表达显著上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-27b-3p能使野生型B4GALT3的荧光素酶的活性显著性降低(P<0.001),说明miR-27a-3p与B4GALT3存在靶向关系。Western blot检测结果显示,瞬转miR-27a-3p mimic后,B4GALT3蛋白水平下降(P<0.05);瞬转miR-27a-3p inhibitor后,B4GALT3表达升高(P<0.01),说明miR-27a-3p对B4GALT3有负性调控作用。24、48、72、96、120 h,与mimic NC、空白对照比较,miR-27a-3p mimic的细胞增殖显著升高(P<0.05);与inhibitor NC、空白对照比较,miR-27a-3p inhibitor的细胞增殖显著降低(P<0.05)。miR-27a-3p mimic的迁移细胞数量[(319.3±13.9)个]较mimic NC[(218.0±10.7)个]明显增加(P<0.000);侵袭细胞数量[(402.0±15.0)个]较mimic NC[(241.0±17.3)个]明显增加(P<0.000)。miR-27a-3p inhibitor迁移细胞数量[(115.6±13.8)个]较inhibitor NC[(214.6±6.8)个]明显减少,迁移能力明显降低(P<0.000)。结论miR-27a-3p通过抑制B4GALT3表达,促进胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭能力,为寻找胃癌治疗靶点提供了实验依据。