姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖诱导的损伤研究

目的:探究姜黄素(curcumin,Cur)通过miR-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖(highglucose,HG)诱导的损伤。方法:将心肌细胞分为Con组(正常培养细胞)、HG组(30mmol/L葡萄糖培养细胞)、HG+Cur-L组(姜黄素25μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur-M组(姜黄素50μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞)、HG+Cur-H组(姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-NC组(转染miR-NC,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-34a(转染miR-34a,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-34a+3-MA组(转染miR-34a,使用姜黄素100μmol/L、葡萄糖30 mmol/L及自噬抑制剂3-MA 10μmol/L培养细胞)。采用qRT-PCR检测miR-34a表达水平;CCK8检测细胞活性;ELISA检测LDH含量、SOD、GSH-Px活性;Western blot检测Beclin-1、LC3II/I、p62蛋白表达。结果:与Con组相比,HG组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显降低,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显增加。与HG组比较,HG+Cur-L组、HG+Cur-M组、HG+Cur-H组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显增加,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显降低。与HG+Cur+miR-NC组相比,HG+Cur+miR-34a、HG+Cur+miR-34a+3-MA组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显降低,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显增加。与HG+Cur+miR-34a组相比,HG+Cur+miR-34a+3-MA组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显增加,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显降低。结论:姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导自噬途径减缓高糖诱导的心肌细胞损伤。

利用CRISPR-Cas9技术构建微小核糖核酸-551b基因敲除小鼠模型

目的:利用成簇规律性间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)相关蛋白9(CRISP associated protein 9,Cas9)技术构建微小核糖核酸-551b(miR-551b)基因敲除小鼠模型。方法:选择健康C57BL/6J小鼠,针对miR-551b外显子1区域,设计导向RNA(guide RNA,gRNA),构建Cas9载体质粒,将体外转录的Cas9 RNA及gRNA显微注射入小鼠的受精卵并体外培养。将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠,使用基因测序确定基因敲除情况,与野生型小鼠繁育后,得到F1代杂合小鼠,F1代小鼠经自交繁育获得F2代小鼠,F3代小鼠由F2代纯合小鼠自交获得,采用电泳鉴定小鼠基因型,RT-PCR检测F3代小鼠组织miR-551b的表达。结果:利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠,通过测序筛选出缺失目标序列的F0代杂合子小鼠。与WT小鼠繁育后,琼脂糖凝胶电泳及测序筛选出F1代杂合小鼠,同样的方法鉴定并获得F2、F3代基因敲除小鼠,获取F3代纯合小鼠的心脏及下腔静脉样本,RT-PCR结果证实F3代纯合小鼠miR551b表达明显低于WT小鼠(P<0.05),成功敲除miR-551b基因。结论:通过CRISPR-Cas9技术成功构建miR⁃155基因敲除小鼠模型并稳定遗传,为进一步研究提供了有利条件。

微小核糖核酸-34a对大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控

目的 :探讨微小核糖核酸-34a(miRNA-34a)对左心室肥厚大鼠心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控及其意义。方法 :将40只雄性SD大鼠随机分为4组(n=10),分别为腹主动脉缩窄术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物组(ant-34a/AAC组),腹主动脉缩窄术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物阴性对照物组(con/AAC组),假手术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物组(ant-34a/SH组),假手术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物阴性对照物组(con/SH组)。模型建立第12周存活大鼠:ant-34a/AAC组6只,con/AAC组7只,ant-34a/SH组8只,con/SH组8只。测定各组大鼠左心室收缩压、左心室舒张末期压及压力最大变化速率,计算心肌肥厚指数,观察心肌组织病理学改变,应用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大鼠左心室心肌组织miRNA-34a、肌球蛋白重链α基因表达水平。结果:与con/AAC组相比,ant-34a/AAC组心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压以及miRNA-34a相对表达量降低,压力最大变化速率、肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均<0.05)。与con/AAC组相比,con/SH组心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压以及miRNA-34a相对表达量明显降低,压力最大变化速率、肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均<0.05)。与con/SH组相比,ant-34a/SH组miRNA-34a相对表达量明显降低,肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均<0.05),心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压、压力最大变化速率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:压力负荷性左心室肥厚大鼠心肌组织中miRNA-34a表达上调,肌球蛋白重链α基因表达减少,利用特异性阻遏物阻断miRNA-34a表达可使大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链α基因表达水平增高,减轻或者延缓心肌肥厚、提高心肌顺应性、改善心功能。

微小核糖核酸-34a调节高迁移率族蛋白B1对卵巢癌细胞增殖的影响

目的 探讨微小核糖核酸-34a(miR-34a)通过调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对卵巢癌SKOV-3细胞增殖能力的影响,了解miR-34a参与卵巢癌发生、发展的分子机制。方法 设计miR-34a模拟物、miR-34a抑制剂,对SKOV-3细胞进行转染,采用CCK8检测转染24h、48h和72h后SKOV-3细胞存活情况,采用qRT-PCR法检测各组miR-34a和HMGB1mRNA的表达;利用Westernblot法检测各组HMGB1蛋白的表达。结果 转染miR-34a模拟物后,SKOV-3细胞的增殖率显著低于空白对照组和miR-34a模拟物对照组(P均<0.05),HMGB1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和miR-34a模拟物对照组降低(P均<0.05);转染miR-34a抑制剂后,SKOV-3细胞的增殖率显著高于空白对照组和miR-34a抑制剂对照组(P均<0.05),HMGB1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和miR-34a抑制剂对照组增加(P均<0.05)。结论 MiR-34a影响卵巢癌细胞的增殖功能,其可能是通过抑制HMGB1的表达参与卵巢癌的发生、发展。

血清微小核糖核酸-210、微小核糖核酸-34a在重度子痫前期孕妇中的表达及其临床意义

目的分析血清微小核糖核酸-210(miR-210)、微小核糖核酸-34a(miR-34a)在重度子痫前期(SP)孕妇中的表达及其临床意义。方法将达州市中心医院2018年8月至2020年4月收治的83例轻度子痫前期(MP)患者纳入MP组,另将同期收治的83例SP患者纳入SP组。检测并比较两组入院时血清miR-210、miR-34a的水平;追踪并记录SP患者的妊娠结局,分析血清miR-210、miR-34a与SP患者发生不良妊娠结局的关系。结果SP组血清miR-210、miR-34a水平均高于MP组,差异具有统计学意义(P<0.05);83例SP患者中有19例发生不良妊娠结局,发生率为22.89%;发生不良妊娠结局的SP患者血清miR-210、miR-34a水平均高于未发生患者,差异具有统计学意义(P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线发现,血清miR-210、miR-34a单项及联合预测SP患者不良妊娠结局发生风险的曲线下面积(AUC)均>0.80,有中等预测价值。结论SP孕妇血清miR-210、miR-34a水平升高,且血清miR-210、miR-34a水平可作为SP孕妇不良妊娠结局发生风险的预测指标。

微小核糖核酸-21反义寡核苷酸对人舌鳞癌细胞生长抑制的体内研究

目的研究微小核糖核酸-21(miR-21)反义寡核苷酸(AS-miR-21)对人舌鳞癌生长的抑制作用。方法采用稳定转染pGL6荧光素酶报告基因质粒的舌鳞癌细胞Tca8113-luc接种裸鼠,建立移植瘤动物模型,瘤体内注射AS-miR-21,应用活体成像和TUNEL等实验技术进行AS-miR-21对人舌鳞癌细胞系生长抑制的体内研究。结果通过转染pGL6荧光素酶报告基因质粒构建了稳定表达荧光素酶活性的Tca8113-luc细胞株。裸鼠皮下荷瘤模型成瘤率高,肿瘤生长稳定。在瘤体内注射AS-miR-21后肿瘤生长减慢,活体成像中光子数偏低,肿瘤标本中坏死灶少见,细胞核变小,染色变浅,异型性减低,新生血管数减少。肿瘤组织中miR-21表达明显下降,凋亡指数升高。结论肿瘤内注射AS-miR-21可以降低舌鳞癌细胞中miR-21的表达,促进舌鳞癌肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的生长。

乳腺癌组织miR-1247-5p表达及其靶基因生物信息学预测研究

目的:探讨微小核糖核酸-1247-5p(miR-1247-5p)在乳腺癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析。方法:收集2019年6月至2020年12月本院手术治疗的104例乳腺癌患者癌组织及其癌旁组织。RT-PCR检测标本中miR-1247-5p的相对表达量;比较不同临床病理特征患者癌组织miR-1247-5p表达;预测miR-1247-5p的靶基因;采用DAVID数据库对miR-1247-5p靶基因进行功能和通路富集分析;String数据库对miR-1247-5p靶基因进行互作分析。结果:miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织下调(P<0.05)。miR-1247-5p潜在靶基因38个,其靶基因功能主要富集于RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控、基因表达/转录调控、质膜部分、突触小体、蛋白质结合、poly(A)RNA结合等;参与的通路主要富集于癌症通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等。磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)、上皮生长因子受体(EGFR)、假尿苷酸合酶1(PUS1)的编码蛋白质在miR-1247-5p基因靶基因蛋白质互作网络(PPI)中关键节点位置。结论:miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达下调,其靶基因富集于多个生物学过程及与肿瘤相关的信号转导通路上,miR-1247-5p可能通过调控其靶基因的表达参与乳腺癌的发生发展过程。

血清miR-34a及Ang-1水平变化与新生儿呼吸窘迫综合征患儿预后关系研究

目的探讨血清微小核糖核酸-34a(miR-34a)及血管生成素-1(Ang-1)水平变化与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)患儿预后关系。方法选取2020年1月至2022年12月邯郸市中心医院收治的NRDS患儿178例作为研究对象,纳入NRDS组,另外选取健康新生儿178例作为对照组。比较两组血清miR-34a及Ang-1水平变化。以新生儿确诊NRDS为起点,根据预后情况将患儿分为生存组(n=140)和死亡组(n=38),采用Logistic回归模型分析影响NRDS患儿死亡的相关因素,并用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-34a、Ang-1对NRDS患儿死亡的预测价值。结果NRDS组血清miR-34a表达水平高于对照组,Ang-1水平则低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组剖宫产占比、凶险型前置胎盘占比、白细胞计数、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肌钙蛋白-Ⅰ、SNAPPEⅡ评分及血清miR-34a表达水平高于生存组,Ang-1水平则低于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析模型显示,血清miR-34a表达水平、SNAPPEⅡ评分、IL-6水平偏高,Ang-1水平偏低均是影响NRDS患儿死亡的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-34a及Ang-1单项预测NRDS患儿死亡的AUC(95%CI)分别为0.770(0.702~0.830)、0.808(0.742~0.863),采用LogP模式拟合联合诊断,结果显示联合诊断AUC(95%CI)为0.887(0.815~0.939),高于任一单项检测(P<0.05)。结论NRDS患儿血清miR-34a高表达,Ang-1则低表达,且两者均是NRDS患儿死亡的危险因素,对NRDS患儿不良预后具有较好的预测价值。

外周血miR-34a、miR-431、miR-183水平与突发性耳聋患者血流动力学及听力预后的相关性

目的探究外周血微小核糖核酸(miR)-34a、miR-431、miR-183水平与突发性耳聋(SD)患者血流动力学及听力预后的相关性。方法选择2021年1月至2023年12月于空军军医大学第一附属医院(下称该院)就诊的132例SD患者为疾病组,另选择同期来该院体检的132例健康者(无SD)为控制组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测外周血miR-34a、miR-431、miR-183水平,Pearson相关性分析外周血miR-34a、miR-431、miR-183水平与血流动力学指标的相关性,多元Logistic回归分析(逐步向前法)筛选影响SD患者听力预后的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,获得外周血miR-34a、miR-431、miR-183联合预测SD患者听力预后的曲线下面积(AUC),并采用Z检验进行预测效能比较。结果疾病组外周血miR-34a、miR-431水平显著高于控制组,miR-183水平显著低于控制组(P<0.05)。治疗后SD患者全血高切黏度(HSV)、全血低切黏度(LSV)、血浆黏度(PV)显著低于治疗前(P<0.05)。SD患者外周血miR-34a、miR-431水平与治疗前HSV、LSV、PV水平呈正相关(P<0.05),miR-183水平与治疗前HSV、LSV、PV水平呈负相关(P<0.05)。预后良好组外周血miR-34a、miR-431水平显著低于预后不良组,miR-183水平显著高于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。影响SD患者听力预后的危险因素有miR-34a和miR-431,而miR-183是影响SD患者听力预后的保护因素(P<0.05)。外周血miR-34a、miR-431、miR-183联合预测SD患者听力预后的AUC为0.969(95%CI:0.938~1.000),三者联合的预测价值较miR-34a(Z=2.336,P=0.019)、miR-431(Z=2.157,P=0.031)、miR-183(Z=2.351,P=0.019)单独更高。结论miR-34a、miR-431水平在SD患者外周血异常升高,与血流动力学指标呈正相关,miR-183水平异常降低,与血流动力学指标呈负相关,三者联合对SD患者听力预后具有一定预测价值。

胃癌组织中LncRNA LINC00342、miR-596表达变化与临床病理参数和预后的关系

目的探讨胃癌组织中长链非编码核糖核酸(LncRNA)长链基因间非编码核糖核酸00342(LINC00342)、微小核糖核酸-596(miR-596)表达变化与临床病理参数和预后的关系。方法选取胃癌患者93例,术中收集胃癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR法检测组织中LncRNA LINC00342、miR-596。通过starBase数据库(https://rnasysu.com/encori/index.php)预测LncRNA LINC00342与miR-596的结合位点,Pearson相关法分析胃癌组织中LncRNA LINC00342、miR-596表达的相关性,分析胃癌组织中LncRNA LINC00342、miR-596表达与临床病理参数的关系。术后对胃癌患者进行随访,根据胃癌组织LncRNA LINC00342、miR-596相对表达量均值将患者分为高/低表达组,比较各组3年生存率,用Cox回归模型分析LncRNA LINC00342、miR-596表达对胃癌患者预后的影响。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中LncRNA LINC00342表达高,miR-596表达低(P均<0.05)。经starBase数据库预测,LncRNA LINC00342与miR-596的3'非翻译端存在互补序列。胃癌组织中LncRNA LINC00342与miR-596表达呈负相关(r=-0.777,P<0.05)。不同分化程度、TNM分期及是否淋巴结转移的胃癌组织中LncRNA LINC00342、miR-596表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。随访3年,93例胃癌患者死亡36例,3年总生存率为61.29%(57/93)。与LncRNA LINC00342高表达患者比较,LncRNA LINC00342低表达患者3年总生存率高(P<0.05);与miR-596低表达患者比较,miR-596高表达患者3年总生存率高(P<0.05)。胃癌患者预后的独立危险因素为低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和LncRNA LINC00342≥1.52(P均<0.05),独立保护因素为miR-596≥0.82(P<0.05)。结论胃癌组织中LncRNA LINC00342高表达、miR-596低表达,二者表达变化与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

HFpDF患者血清lncRNATUG1、miR-34a与心室重构、心肌纤维化及Wnt/β-catenin信号通路的相关性

目的观察射血分数保留性心力衰竭(HFpEF)患者血清长链非编码核糖核酸牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)、微小核糖核酸-34a(miR-34a)水平变化,并探讨lncRNA TUG1、miR-34a水平与心室重构、心肌纤维化及无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β连环蛋白(β-catenin)信号通路的相关性。方法收集HFpEF患者139例作为HFpEF组,另选择同期健康体检者100例作为对照组。采用RT-PCR法检测血清lncRNA TUG1、miR-34a及外周血Wnt、β-catenin,ELISA法检测心肌纤维化相关指标血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)、Ⅲ型前胶原羧基端肽(PⅢCP)、透明质酸(HA),超声心动图检测心室重构指标左心房内径(LAD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室心肌质量指数(LVMI)、二尖瓣口舒张早期最大血流速度E峰与舒张晚期最大血流速度A峰比值(E/A)、左心室射血分数(LVEF)。采用Pearson检验分析HFpEF患者血清lncRNA TUG1与miR-34a水平的相关性及血清lncRNA TUG1、miR-34a水平与心室重构、心肌纤维化及Wnt/β-catenin信号通路指标的相关性。结果HFpEF组血清lncRNA TUG1、miR-34a水平及外周血Wnt、β-catenin水平均高于对照组(P均<0.05)。HFpEF组LAD、LVEDD、LVMI、PⅠCP、PⅢCP、HA均高于对照组,E/A、LVEF均低于对照组(P均<0.05)。HFpEF患者血清lncRNA TUG1、miR-34a与LAD、LVEDD、LVMI、PⅠCP、PⅢCP、HA及外周血Wnt、β-catenin呈正相关,与E/A、LVEF呈负相关(P均<0.05)。结论HFpEF患者血清lncRNA TUG1、miR-34a水平升高,血清lncRNA TUG1、miR-34a水平与心室重构、心肌纤维化及Wnt/β-catenin信号通路的激活相关。

急性缺血性卒中患者静脉溶栓后血清微小RNA-874-3p、微小RNA-181a-5p及Wnt/β-catenin信号通路与神经功能预后的关系

目的探讨急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者静脉溶栓后血清微小RNA(microRNA,miRNA)-874-3p(miR-874-3p)、miRNA-181a-5p(miR-181a-5p)与Wnt/β-catenin信号通路和神经功能预后的关系。方法前瞻性连续纳入2021年3月—2022年12月深圳市龙华区中心医院接受静脉溶栓治疗的AIS患者进入AIS组,选取同期体检健康者进入对照组。检测并比较两组血清miR-874-3p、miR-181a-5p及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Wnt/β-catenin相对表达水平,采用Pearson相关性分析AIS患者血清miR-874-3p、miR-181a-5p表达与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。所有AIS患者出院后均随访3个月,根据mRS评分将完成随访的患者分为神经功能预后良好组和神经功能预后不良组,比较两组患者血清miR-874-3p、miR-181a-5p相对表达水平。采用多因素logistic回归方程分析AIS患者神经功能预后的影响因素。结果本研究中,AI S组纳入185例患者,平均(62.8±7.3)岁;对照组纳入65例体检健康者,平均(63.4±6.9)岁。与对照组相比,AIS组血清miR-874-3p(1.02±0.21 vs.1.46±0.23,P<0.001)相对表达水平及PBMC中Wnt mRNA(2.41±0.64 vs.4.59±1.13,P<0.001)、β-catenin mRNA(1.19±0.18 vs.2.34±0.73,P<0.001)相对表达水平均低于对照组,血清miR-181a-5p(1.95±0.32 vs.1.27±0.27,P<0.001)相对表达水平高于对照组;Pearson相关性分析显示,AIS患者血清miR-874-3p表达与PBMC中Wnt mRNA(r=0.562,P<0.001)、β-catenin mRNA(r=0.611,P<0.001)表达呈正相关,miR-181a-5p表达与PBMC中Wnt mRNA(r=-0.586,P<0.001)、β-catenin mRNA(r=-0.595,P<0.001)表达呈负相关。AIS组中,神经功能预后良好104例,预后不良81例,预后不良率为43.78%;神经功能预后不良组血清miR-874-3p相对表达水平显著低于神经功能预后良好组(0.79±0.20 vs.1.20±0.22,P<0.001),miR-181a-5p相对表达水平显著高于神经功能预后良好组(2.26±0.31 vs.1.71±0.24,P<0.001);神经功能预后不良组年龄([65.48±7.45)岁vs.(62.29±7.21)岁,P=0.004]、发病至入院时间([4.36±1.03)h vs.(3.79±1.15)h,P=0.001]、入院时NIHSS评分([6.81±2.45)分vs.(4.67±1.76)分,P<0.001]及Hcy水平([13.34±4.12)μmol/L vs.(11.75±3.46)μmol/L,P=0.005]均高于神经功能预后良好组;多因素logistic回归结果显示,年龄偏高(OR 1.056,95%CI 1.005~1.108,P=0.029)、发病至入院时间延长(OR 1.125,95%CI 1.008~1.256,P=0.035)、入院时NIHSS评分高(OR 1.220,95%CI 1.093~1.362,P<0.001)、miR-874-3p低表达(OR 0.632,95%CI 0.498~0.803,P<0.001)及miR-181a-5p高表达(OR 1.506,95%CI 1.209~1.875,P<0.001)是导致AIS神经功能预后不良的危险因素。结论AIS组患者血清miR-874-3p表达下降,miR-181a-5p表达升高,均与Wnt/β-catenin信号通路相关,血清miR-874-3p、miR-181a-5p水平是患者神经功能预后的影响因素。

血清微RNA-34a在多发性骨髓瘤中的表达及其临床意义

目的 检测初诊多发性骨髓瘤(MM)病人血清微RNA-34a(miR-34a)表达水平,并探讨其临床意义。方法 选取2017年3月至2021年5月石家庄市人民医院收治的102例初诊MM病人作为疾病组,并同期选取100例性别、年龄匹配的健康体检者作为对照组,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应法(qRT-PCR)检测两组血清miR-34a表达水平,对比疾病组MM不同临床病理特征病人血清miR-34a表达水平。另疾病组均行以硼替佐米为基础的方案化疗,评估不同化疗方案的效果,并采用logistic回归分析法分析血清miR-34a表达水平对MM病人化疗效果的影响。结果 疾病组血清miR-34a表达水平低于对照组(0.63±0.10比1.45±0.23,P<0.05);疾病组国际分期系统(ISS)分期Ⅲ期、修订版国际分期系统(R-ISS)分期Ⅲ期、免疫球蛋白G(IgG)型、FISH筛查高危病人血清miR-34a表达水平均低于ISS分期Ⅱ期、免疫球蛋白A(IgA)、轻链型和其他类型、荧光原位杂交(FISH)筛查非高危病人(P<0.05);疾病组化疗4个周期后总有效率为75.49%,其中PTD、PAD、RVD化疗方案总有效率分别为69.39%、75.00%、88.88%;疾病组化疗无效组和化疗有效组性别、年龄、免疫分型、LDH水平和治疗方案比较差异无统计学意义(P>0.05);化疗无效病人血红蛋白水平、血清miR-34a水平低于化疗有效病人(P<0.05),血钙水平和ISS分期Ⅲ期、R-ISS分期Ⅲ期、FISH筛查高危占比均高于化疗有效病人(P<0.05);logistic回归分析结果显示,在全因素校正模型中血清miR-34a表达水平降低是MM化疗无效的危险因素[OR=1.93,95%CI:(1.11,3.21),P<0.05]。结论 血清miR-34a在MM病人中表达水平降低,与临床分期、免疫分型等均有关,且血清miR-34a水平降低是MM病人化疗无效的危险因素。

基于微小核糖核酸-信使核糖核酸网络探讨重复经颅磁刺激治疗缺血性脑卒中的分子机制

目的基于微小核糖核酸(miRNA)-信使核糖核酸(mRNA)调控网络探讨重复经颅磁刺激(rTMS)促进缺血性脑卒中(IS)神经修复的潜在分子机制。方法从基因表达综合数据库(GEO)下载rTMS干预7 d后的IS大鼠皮质miRNA表达谱。使用R软件分析差异miRNAs,通过在线数据库预测其对应的下游mRNAs,构建miRNA-mRNA调控网络,筛选关键miRNAs。对靶基因进行功能富集分析,构建靶基因所编码的蛋白质相互作用网络,识别网络中的核心mRNAs。选取无特定病原体动物(SPF)级雄性Sprague-Dawley大鼠24只,按随机数字表法随机分为假手术组、模型组和磁刺激组,每组8只大鼠。模型组和磁刺激组制备IS大鼠模型,仅磁刺激组接受连续7 d的rTMS干预,其余2组不进行干预。采用改良神经功能评分(mNSS)于造模前和造模成功1 d、3 d、7 d后评价3组大鼠的神经功能缺损程度;于造模成功8 d后深度麻醉大鼠,取脑组织行苏木精-伊红和尼氏染色观察组织缺失情况和神经元形态,利用实时荧光定量聚合酶链反应验证差异基因在3组大鼠缺血侧皮质中的表达趋势。结果共筛选出167个差异miRNAs和预测到25个mRNAs。富集分析表明,这些基因与细胞迁移的正向调节、神经营养因子受体信号通路的正向调节等生物学过程有关,涉及腺苷酸激活蛋白激酶、神经营养因子通路、大鼠肉瘤等信号通路。通过构建miRNA-mRNA调控网络,识别出miR-206-3p、miR-378a-3p、miR-107-3p、miR-92a-3p和miR-29b-3p共5个关键miRNAs;通过蛋白互作网络分析筛选出4个核心mRNAs,分别为整合素亚基β1、水通道蛋白4、脑源性神经生长因子(BDNF)、溶质载体家族2成员4。造模成功7 d后,磁刺激组的mNSS评分显著低于模型组同时间点(P<0.05)。与模型组相比,磁刺激大鼠右侧皮质的miR-206-3p表达明显降低(P<0.05),BDNF表达则显著增高(P<0.05)。结论miR-206-3p-BDNF调控网络和相关作用途径在rTMS促进IS大鼠神经修复过程中发挥重要的作用。

miR-141基因干扰靶向PTEN影响小鼠BMSCs成骨分化的实验研究

目的 探讨微小核糖核酸-141(micro-RNA-141,miR-141)基因干扰靶向蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)对小鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化的影响。方法 取小鼠BMSCs并鉴定;构建miR-141 mimics、miR-141 inhibitor、miR-141 mimics-NC、miR-141 inhibitor-NC质粒,分别转染小鼠BMSCs,并记为过表达组、沉默组、过表达对照组、沉默对照组,另取小鼠BMSCs常规培养记为空白对照组。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色、茜素红染色检测各组成骨分化能力;检测各组miR-141、PTEN通路相关基因及蛋白表达;验证miR-141是否可靶向调控PTEN。结果 与空白对照组、过表达对照组相比,过表达组ALP定量,AKT、GSK3β mRNA及蛋白表达,Runx2、Osterix蛋白表达,p-AKT、p-GSK3β均下降(P<0.05),钙化结节大小、数量、密度均显著减少,miR-141 mRNA表达及PTEN mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与空白对照组、沉默对照组相比,沉默组ALP定量,AKT、GSK3β mRNA及蛋白表达,Runx2、Osterix蛋白表达,p-AKT、p-GSK3β均升高(P<0.05),钙化结节也显著增多,miR-141 mRNA表达及PTEN mRNA和蛋白表达低于其余4组(P<0.05);荧光素酶活性实验验证miR-141可靶向调控PTEN。结论 miR-141过表达可激活PTEN信号通路抑制小鼠BMSCs成骨分化,而miR-141基因沉默可下调PTEN,上调AKT、GSK3β表达,增加p-AKT、p-GSK3β水平,并促进成骨标志蛋白表达,促进小鼠BMSCs成骨分化。

miR-34与survivin基因在人结肠癌组织中的表达及意义

目的探讨微小核糖核酸-34(miR-34)与其靶基因生存素(survivin)在人结肠癌中的表达及意义。方法收集32例手术患者切除的新鲜组织,其中32份结肠癌组织标本(均为腺癌)作为癌症组,32份癌旁组织标本(据切缘>2 cm)作为癌旁组。采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测miR-34和survivin基因在癌症组和癌旁组中的转录表达水平,并进行比较。结果miR-34a和miR-34b/c基因表达在癌症组组织中均低于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05);在癌症组组织中miR-34b/c表达较miR-34a水平降低更显著,survivin表达增加较癌旁组增高,差异有统计学意义(P<0.05);miR-34a和miR-34b/c与survivin在结肠癌癌组织中表达水平呈显著负相关(r=-0.43、-0.51,P<0.05)。结论miR-34家族在结肠腺癌中作为抑癌基因发挥作用,可以负性调节survivin的表达,为结肠癌的临床诊治提供新的靶点和思路。

缺血性心力衰竭患者血清miR-34表达水平与心室重构和预后的相关性分析

目的检测缺血性心力衰竭(ischemic heart failure,IHF)患者血清微小核糖核酸(miR)-34水平,分析其与IHF患者心室重构(VR)及预后的相关性。方法选择2019年8月~2021年8月武汉亚洲心脏病医院收治的80例IHF患者,入院时采用实时定量PCR法测定血清miR-34表达,对比不同临床特征的IHF患者血清miR-34表达状况。并分析血清miR-34与IHF患者VR及预后的相关性。结果80例IHF患者血清miR-34水平为3.64±1.13;发生VR,预后不良的IHF患者血清miR-34水平高于未发生VR,预后良好的患者,差异均有统计学意义(t=7.630,4.492,均P<0.05);经点二列相关性分析结果显示,IHF患者血清miR-34与发生VR,预后不良呈正相关(r=33.967,16.193,均P<0.05);经Logisitic回归分析,结果显示,高血清miR-34水平是IHF患者发生VR,预后不良的危险因素(OR=4.437,3.526,均P<0.05)。结论血清miR-34水平与IHF患者发生VR密切相关,miR-34高表达可增加患者不良预后风险。

胶质瘤组织lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达与临床特征及预后的关系研究

目的探讨胶质瘤组织长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)25、微小RNA(miR)-497-5p表达与临床特征及预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月该院收治的157例胶质瘤患者为胶质瘤组,同期该院100例因颅脑损伤接受手术治疗的患者为对照组。分别取术中切除的胶质瘤组织和正常脑组织检测lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平,术后随访3年。分析lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p的相关性,lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平与患者临床特征和预后的关系。结果与对照组比较,胶质瘤组lncRNA SNHG25表达水平升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。与肿瘤最大径<4 cm、世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分级Ⅰ~Ⅱ级比较,肿瘤最大径≥4 cm、WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级的胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。胶质瘤患者的lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p呈负相关(r=-0.370,P<0.05)。lncRNA SNHG25高表达组累积生存率低于lncRNA SNHG25低表达组(P<0.05),miR-497-5p低表达组累积生存率低于miR-497-5p高表达组(P<0.05)。WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、lncRNA SNHG25高表达是胶质瘤患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-497-5p高表达则是保护因素(P<0.05)。结论胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低,且与肿瘤最大径增大、WHO中枢神经系统肿瘤分级高有关,可导致胶质瘤患者不良预后。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184表达与患者临床病理特征和预后的关系

目的探讨卵巢癌组织中长链非编码核糖核酸(LncRNA)小核仁核糖核酸宿主基因11(SNHG11)、微小核糖核酸184(miR-184)的表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法收集手术切除的104例卵巢癌组织及其癌旁组织(距离癌组织边缘≥2 cm且经病理检查为正常组织),实时荧光定量PCR法检测LncRNA SNHG11、miR-184表达,并分析二者的相关性。根据卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184表达均值将患者分为高/低表达组,比较两组的生存率;用多因素Cox回归分析卵巢癌患者预后的影响因素。结果卵巢癌组织中LncRNA SNHG11表达高于癌旁组织,miR-184表达低于癌旁组织(P均<0.05)。用StarBase软件预测发现,LncRNA SNHG11与miR-184存在结合位点。Pearson相关分析显示,卵巢癌组织中LncRNA SNHG11与miR-184表达呈负相关(r=-0.711,P<0.05)。不同分化程度、FIGO分期、淋巴结转移的卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。LncRNA SNHG11高表达组总生存率低于LncRNA SNHG11低表达组(P<0.05),miR-184高表达组总生存率高于miR-184低表达组(P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移、LncRNA SNHG11≥2.27为卵巢癌患者死亡的独立危险因素,miR-184≥1.02为独立保护因素(P均<0.05)。结论卵巢癌组织中LncRNA SNHG11高表达、miR-184低表达,二者表达变化与肿瘤分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和预后有关。