姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖诱导的损伤研究

目的:探究姜黄素(curcumin,Cur)通过miR-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖(highglucose,HG)诱导的损伤。方法:将心肌细胞分为Con组(正常培养细胞)、HG组(30mmol/L葡萄糖培养细胞)、HG+Cur-L组(姜黄素25μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur-M组(姜黄素50μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞)、HG+Cur-H组(姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-NC组(转染miR-NC,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-34a(转染miR-34a,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞)、HG+Cur+miR-34a+3-MA组(转染miR-34a,使用姜黄素100μmol/L、葡萄糖30 mmol/L及自噬抑制剂3-MA 10μmol/L培养细胞)。采用qRT-PCR检测miR-34a表达水平;CCK8检测细胞活性;ELISA检测LDH含量、SOD、GSH-Px活性;Western blot检测Beclin-1、LC3II/I、p62蛋白表达。结果:与Con组相比,HG组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显降低,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显增加。与HG组比较,HG+Cur-L组、HG+Cur-M组、HG+Cur-H组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显增加,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显降低。与HG+Cur+miR-NC组相比,HG+Cur+miR-34a、HG+Cur+miR-34a+3-MA组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显降低,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显增加。与HG+Cur+miR-34a组相比,HG+Cur+miR-34a+3-MA组细胞活性、SOD、GSH-Px活性、p62蛋白明显增加,而LDH含量、miR-34a表达、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达明显降低。结论:姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导自噬途径减缓高糖诱导的心肌细胞损伤。

微小核糖核酸-34a对大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控

目的 :探讨微小核糖核酸-34a(miRNA-34a)对左心室肥厚大鼠心肌组织肌球蛋白重链α基因表达的调控及其意义。方法 :将40只雄性SD大鼠随机分为4组(n=10),分别为腹主动脉缩窄术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物组(ant-34a/AAC组),腹主动脉缩窄术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物阴性对照物组(con/AAC组),假手术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物组(ant-34a/SH组),假手术后皮下注射miRNA-34a表达阻遏物阴性对照物组(con/SH组)。模型建立第12周存活大鼠:ant-34a/AAC组6只,con/AAC组7只,ant-34a/SH组8只,con/SH组8只。测定各组大鼠左心室收缩压、左心室舒张末期压及压力最大变化速率,计算心肌肥厚指数,观察心肌组织病理学改变,应用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大鼠左心室心肌组织miRNA-34a、肌球蛋白重链α基因表达水平。结果:与con/AAC组相比,ant-34a/AAC组心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压以及miRNA-34a相对表达量降低,压力最大变化速率、肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均<0.05)。与con/AAC组相比,con/SH组心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压以及miRNA-34a相对表达量明显降低,压力最大变化速率、肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均<0.05)。与con/SH组相比,ant-34a/SH组miRNA-34a相对表达量明显降低,肌球蛋白重链α基因相对表达量明显升高(P均<0.05),心肌肥厚指数、左心室收缩压、左心室舒张末期压、压力最大变化速率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:压力负荷性左心室肥厚大鼠心肌组织中miRNA-34a表达上调,肌球蛋白重链α基因表达减少,利用特异性阻遏物阻断miRNA-34a表达可使大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链α基因表达水平增高,减轻或者延缓心肌肥厚、提高心肌顺应性、改善心功能。

慢性阻塞性肺疾病合并冠心病患者组胺、可溶性髓样细胞触发受体-1、微小核糖核酸-145、超敏C反应蛋白的表达特征及检测价值

目的 探讨组胺(HA)、可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、微小核糖核酸-145(miR-145)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并冠心病(CHD)患者中的表达特征及检测价值。方法 将107例COPD合并CHD患者设为研究组,同期健康体检者107例设为对照组。抽取受检者血液样本,检测miR-145、HA及sTREM-1、hs-CRP水平。比较2组HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平,并比较研究组不同病情严重程度和纽约心脏病协会(NYHA)分级患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平。观察各指标水平与病情严重程度、NYHA分级的关联性。结果 研究组HA、sTREM-1、hs-CRP水平高于对照组,miR-145水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同COPD病情严重程度患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着病情严重程度的加剧,HA、sTREM-1、hs-CRP水平持续增高,miR-145持续降低,差异有统计学意义(P<0.05)。不同NYHA分级患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着NYHA分级的增高,HA、sTREM-1、hs-CRP水平持续增高,miR-145持续降低,差异有统计学意义(P<0.05)。HA、sTREM-1、hs-CRP与COPD病情严重程度、NYHA分级呈正相关,miR-145与COPD病情严重程度、NYHA分级呈负相关(P<0.05)。结论 COPD合并CHD患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP表达异常,且与COPD病情严重程度、NYHA分级密切相关。

原发性先天性青光眼(PCG)患儿与正常婴幼儿血浆中微小核糖核酸(miRNA或miR)-29b、miR-24、miR-200c的表达差异及临床意义

目的探讨原发性先天性青光眼(primary congenital glaucoma,PCG)患儿与正常婴幼儿血浆中微小核糖核酸(miRNA或miR)-29b、miR-24、miR-200c的表达差异及临床意义。方法收集2015年至2017年散发的PCG患儿16例血浆标本作为PCG组,另选年龄相近的正常婴幼儿共49例血浆标本作为正常人组。应用实时荧光定量PCR检测两组受试者血浆中miR-29b、miR-24、miR-200c的表达量,分析各自表达差异与病变严重程度的关系,并运用ROC曲线评价其诊断价值。结果PCG组受试者血浆中miR-29b、miR-24、miR-200c相对表达量(0.31±0.19、0.17±0.16、0.55±0.18)明显低于正常人组(1.18±0.52、2.86±2.65、1.62±0.76),差异均有统计学意义(均为P<0.05);血浆中miR-24、miR-29b的表达与PCG病变严重程度有关,病变越严重,其表达量越低;ROC曲线表明miR-24和miR-29b对PCG疾病的诊断价值高于miR-200c。结论血浆中游离的miRNA可作为辅助诊断PCG一种新的血浆标志物。

微小核糖核酸-34a调节高迁移率族蛋白B1对卵巢癌细胞增殖的影响

目的 探讨微小核糖核酸-34a(miR-34a)通过调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对卵巢癌SKOV-3细胞增殖能力的影响,了解miR-34a参与卵巢癌发生、发展的分子机制。方法 设计miR-34a模拟物、miR-34a抑制剂,对SKOV-3细胞进行转染,采用CCK8检测转染24h、48h和72h后SKOV-3细胞存活情况,采用qRT-PCR法检测各组miR-34a和HMGB1mRNA的表达;利用Westernblot法检测各组HMGB1蛋白的表达。结果 转染miR-34a模拟物后,SKOV-3细胞的增殖率显著低于空白对照组和miR-34a模拟物对照组(P均<0.05),HMGB1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和miR-34a模拟物对照组降低(P均<0.05);转染miR-34a抑制剂后,SKOV-3细胞的增殖率显著高于空白对照组和miR-34a抑制剂对照组(P均<0.05),HMGB1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和miR-34a抑制剂对照组增加(P均<0.05)。结论 MiR-34a影响卵巢癌细胞的增殖功能,其可能是通过抑制HMGB1的表达参与卵巢癌的发生、发展。

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P<0.05),促进Caspase 2表达(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P<0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P<0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P<0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P<0.05),促进Survivin的蛋白表达(P<0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P<0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。

血清微小核糖核酸-210、微小核糖核酸-34a在重度子痫前期孕妇中的表达及其临床意义

目的分析血清微小核糖核酸-210(miR-210)、微小核糖核酸-34a(miR-34a)在重度子痫前期(SP)孕妇中的表达及其临床意义。方法将达州市中心医院2018年8月至2020年4月收治的83例轻度子痫前期(MP)患者纳入MP组,另将同期收治的83例SP患者纳入SP组。检测并比较两组入院时血清miR-210、miR-34a的水平;追踪并记录SP患者的妊娠结局,分析血清miR-210、miR-34a与SP患者发生不良妊娠结局的关系。结果SP组血清miR-210、miR-34a水平均高于MP组,差异具有统计学意义(P<0.05);83例SP患者中有19例发生不良妊娠结局,发生率为22.89%;发生不良妊娠结局的SP患者血清miR-210、miR-34a水平均高于未发生患者,差异具有统计学意义(P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线发现,血清miR-210、miR-34a单项及联合预测SP患者不良妊娠结局发生风险的曲线下面积(AUC)均>0.80,有中等预测价值。结论SP孕妇血清miR-210、miR-34a水平升高,且血清miR-210、miR-34a水平可作为SP孕妇不良妊娠结局发生风险的预测指标。

冠状动脉介入术后外周血微小核糖核酸-145表达与急性冠状动脉综合征患者氯吡格雷抵抗的相关性研究

目的:探究血小板微小核糖核酸-145(miR-145)、细胞色素P450 2C19(CYP2C19)基因型与急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入术(PCI)术后氯吡格雷抵抗(CR)及预后的相关性。方法:选取2018年1月至2019年12月,在本院行PCI术的ACS患者102例进行研究,患者术后均进行常规双联抗血小板治疗,根据患者是否存在CR分为CR组25例和氯吡格雷非抵抗(NCR)组77例。比较两组患者一般资料;分析比较两组患者miR-145表达水平,CYP2C19*2位点、*3位点基因多态性;记录1年内ACS患者PCI术后发生主要不良心血管事件(MACE)的情况;以Logistic回归分析ACS患者PCI术后发生不良预后的危险因素。结果:CR组ACS患者血小板miR-145相对表达量明显高于NCR组(P<0.05);CR组ACS患者CYP2C19*2位点中*1/*1基因型占比明显低于NCR组(P<0.05),*1/*2基因型占比明显高于CR组(P<0.05);CR组ACS患者CYP2C19*3位点中*1/*1基因型占比低于NCR组(P<0.05),*1/*3基因型、*3/*3基因型占比明显高于NCR组(P<0.05);CR组ACS患者PCI术后MACE总发生率明显高于NCR组(P<0.05);miR-145是ACS患者PCI术后的保护因素(P<0.05),CYP2C19*2位点是ACS患者PCI术后的危险因素(P<0.05)。结论:血小板miR-145表达水平、CYP2C19基因多态性有助于评估ACS患者PCI术后CR及预后情况,临床需要密切关注。

急诊有机磷中毒患者外周血微小核糖核酸-214、T淋巴细胞和炎症因子表达与早期肾损伤关系

目的:分析急诊有机磷中毒患者外周血微小核糖核酸(miRNA)-214、T淋巴细胞和炎症因子的表达与早期肾损伤的关系。方法:选取80例急诊有机磷中毒患者为研究对象,将其作为研究组,根据是否发生早期肾损伤将其分为肾损伤组(n=24)和非肾损伤组(n=56),另选取同期50例健康体检者作为对照组。比较不同组别之间的miR-214、CD3^(+)、CD8^(+)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-18(IL-18)水平差异,分析miR-214、CD3^(+)、CD8^(+)、CRP、IL-18与早期肾损伤的关系。结果:研究组miR-214、CRP、IL-18水平均高于对照组,CD3^(+)、CD8^(+)水平均低于对照组(均P<0.05)。单因素分析结果显示,肾损伤组miR-214、CRP、IL-18水平均高于非肾损伤组,CD3^(+)、CD8^(+)水平均低于非肾损伤组(均P<0.05),而两组间性别、年龄、体重指数、中毒时间、服毒量比较差异无统计学意义(均P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-214、CD3^(+)、CD8^(+)、CRP、IL-18水平均为影响急诊有机磷中毒患者发生早期肾损伤的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-214、CD3^(+)、CD8^(+)、CRP、IL-18在预测急诊有机磷中毒患者发生早期肾损伤中具有较高价值(均P<0.05)。结论:急诊有机磷中毒患者miR-214、CRP、IL-18表达量升高、CD3^(+)、CD8^(+)表达量降低有助于疾病的早期判断,在预测早期肾损伤的发生风险中具有较高的临床价值。

CCCK-18CTRP-3miR-340-5p预测重症高血压性脑出血患者预后的价值

目的探讨CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p在重症高血压性脑出血患者中的表达及相关性。方法选取哈尔滨医科大学附属第一医院2019-10—2021-10收治的80例重症高血压性脑出血患者为观察组,另选取同期健康体检者80例为对照组,比较对照组与观察组血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p水平,依据mRS评分将观察组患者分为预后良好组(55例)和预后不良组(25例),比较不同预后患者一般资料及血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p水平,Logistic回归分析重症高血压性脑出血患者预后的影响因素,Pearson相关性分析CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p之间的相关性,ROC曲线分析血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p单独及三者联合预测高血压性脑出血预后的价值。结果观察组血清CCCK-18高于对照组,CTRP-3、miR-340-5p低于对照组(P<0.05)。预后良好组血清CCCK-18低于预后不良组,CTRP-3、miR-340-5p高于预后不良组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p均是重症高血压性脑出血患者预后的影响因素(P<0.05)。血清CCCK-18与血清CTRP-3、miR-340-5p呈负相关(r=-0.385,r=-0.406,P<0.05),三者联合检测预测患者预后的AUC值较高(P<0.05)。结论重症高血压性脑出血患者CCCK-18呈高表达,CTRP-3、miR-340-5p呈低表达,其对高血压脑出血病情判断和预后具有重要意义。

HFpDF患者血清lncRNATUG1、miR-34a与心室重构、心肌纤维化及Wnt/β-catenin信号通路的相关性

目的观察射血分数保留性心力衰竭(HFpEF)患者血清长链非编码核糖核酸牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)、微小核糖核酸-34a(miR-34a)水平变化,并探讨lncRNA TUG1、miR-34a水平与心室重构、心肌纤维化及无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β连环蛋白(β-catenin)信号通路的相关性。方法收集HFpEF患者139例作为HFpEF组,另选择同期健康体检者100例作为对照组。采用RT-PCR法检测血清lncRNA TUG1、miR-34a及外周血Wnt、β-catenin,ELISA法检测心肌纤维化相关指标血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)、Ⅲ型前胶原羧基端肽(PⅢCP)、透明质酸(HA),超声心动图检测心室重构指标左心房内径(LAD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室心肌质量指数(LVMI)、二尖瓣口舒张早期最大血流速度E峰与舒张晚期最大血流速度A峰比值(E/A)、左心室射血分数(LVEF)。采用Pearson检验分析HFpEF患者血清lncRNA TUG1与miR-34a水平的相关性及血清lncRNA TUG1、miR-34a水平与心室重构、心肌纤维化及Wnt/β-catenin信号通路指标的相关性。结果HFpEF组血清lncRNA TUG1、miR-34a水平及外周血Wnt、β-catenin水平均高于对照组(P均<0.05)。HFpEF组LAD、LVEDD、LVMI、PⅠCP、PⅢCP、HA均高于对照组,E/A、LVEF均低于对照组(P均<0.05)。HFpEF患者血清lncRNA TUG1、miR-34a与LAD、LVEDD、LVMI、PⅠCP、PⅢCP、HA及外周血Wnt、β-catenin呈正相关,与E/A、LVEF呈负相关(P均<0.05)。结论HFpEF患者血清lncRNA TUG1、miR-34a水平升高,血清lncRNA TUG1、miR-34a水平与心室重构、心肌纤维化及Wnt/β-catenin信号通路的激活相关。

少精症、弱精症患者精浆miR-34c的表达及意义

目的探讨精浆微小核糖核酸-34c(miR-34c)的表达与少精症、弱精症患者精液质量的临床关系。方法选取2020年1月至2022年3月浙江省丽水市人民医院收治的135例少精症患者为少精症组,156例弱精症患者为弱精症组,同期选取150例育龄期健康男性作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测精浆miR-34c表达水平,比较三组的精浆miR-34c表达水平和精子质量参数(包括精液量、精子总数、精子浓度、精子活力a+b级百分比、精子前向运动率),采用Pearson相关性分析少精症、弱精症患者精浆miR-34c表达水平与精液质量的关系。结果三组的精浆miR-34c表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);少精症组、弱精症组的miR-34c表达水平均低于对照组(P<0.05);少精症组与弱精症组比较,差异无统计学意义(P>0.05);三组的精液量比较,差异无统计学意义(P>0.05);三组的精子总数、精子浓度、精子活力a+b级百分比、精子前向运动率比较,差异有统计学意义(P<0.05);少精症组、弱精症组以上指标均低于对照组(P<0.05);少精症组患者的精子总数、精子浓度低于弱精症组(P<0.05);少精症组患者的精子活力a+b级百分比、精子前向运动率高于弱精症组(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,少精症组、弱精症组患者的精浆miR-34c表达水平与精液量无相关性(P>0.05),与精子总数、精子浓度、精子活力a+b级百分比及精子前向运动率呈正相关(P<0.05)。结论少精症、弱精症患者的精浆miR-34c表达水平均低于健康育龄期男性,且与其精液质量均呈正相关,miR-34c表达水平越高,精子总数越多,精子浓度、精子活力a+b级百分比及精子前向运动率越高。

miR-34a与人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星耐药的关系

目的探讨miR-34a对人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星(Adr)耐药性的影响及其潜在分子机制。方法用低浓度逐步加量诱导法,建立MCF-7的Adr耐药细胞系(MCF-7/Adr),用miRNA芯片结合RT-qPCR筛选并验证miRNA在MCF-7/Adr及MCF-7细胞中的表达差异;用生物信息学软件对miR-34a进行基因靶向预测;通过miR-34a模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染实验结合MTT、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)观察miR-34a的表达变化对细胞耐药性的影响,western blot检测转染后Notch1蛋白表达水平。结果成功构建MCF-7/Adr耐药亚系;与MCF-7细胞相比,MCF-7/Adr中有156个差异表达miRNA;其中miR-34a的表达水平明显降低(t=11.597,P=0.000)。与阴性对照组相比,转染miR-34a mimic后MCF-7/Adr细胞miR-34a表达水平增高(t=8.013,P=0.001),且增加了对Adr的敏感性(t=18.160,P=0.000);转染miR-34a inhibitor后MCF-7细胞miR-34a的表达水平降低(t=9.979,P=0.000),且降低了对Adr的敏感性(t=4.130,P=0.009)。靶基因预测结果显示,Notch1为miR-34a的特异性靶基因。western blot结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比,MCF-7/Adr细胞转染miR-34a mimic后,Notch1蛋白的表达水平下降(F=64.949,P=0.000)。MCF-7细胞转染miR-34a inhibitor后,Notch1蛋白的表达水平升高(F=10.938,P=0.010)。结论 MCF-7/Adr及MCF-7细胞miRNA表达谱存在差异;miR-34a参与调节细胞对Adr的耐药过程,Notch1基因可能是调控靶基因之一。

上调microRNA-34a抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭

目的探讨micro RNA-34a(mi R-34a)在胶质瘤组织中的表达情况以及对人脑胶质瘤细胞系U251增殖及侵袭的影响。方法选取川北医学院附属医院2013年3月至2017年3月胶质瘤组织标本30例和重症脑外伤需行手术者正常脑组织标本10例作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测mi R-34a在胶质瘤组织表达情况。体外实验,将人工合成的mi R-34a模拟物mi R-34a mimic转染至U251细胞系,采用荧光定量PCR、MMT、Transwell法检测mi R-34a在U251细胞系中表达以及对U251细胞增殖和侵袭能力的影响。依据细胞转染情况,分为Control组(不转染任何基因)、Mock组(转染mi RNA-neg序列)和mi RNA-34a mimic组(转染mi RNA-34a mimic序列)。结果 mi RNA-34a在人脑胶质瘤组织中相对表达水平为(0.35±0.07),低于正常人脑组织的(1.00±0.13),差异有统计学意义(P<0.05);转染后,荧光定量PCR结果显示,Control组、Mock组、mi RNA-34a mimic组mi RNA-34a相对表达水平分别为(1.00±0.08)、(0.98±0.11)和(6.19±0.34),mi RNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05);MMT结果显示,在不同时间点,mi RNA-34a mimic组U251细胞增殖抑制率高于Control组、Mock组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell结果显示,Control组、Mock组、mi RNA-34a mimic组侵袭细胞数分别为(90.53±5.84)个、(88.21±5.04)个和(27.46±2.76)个,mi RNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论mi R-34a在胶质瘤组织中表达下调,上调mi R-34a表达可抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭。

组织中miR-24-3p、CD34蛋白表达与上皮性卵巢癌患者术后预后的相关性

目的探讨组织中微小核糖核酸(miR)-24-3p、CD34蛋白表达与上皮性卵巢癌(EOC)患者术后预后的关系。方法选取2019年5月至2020年5月新疆维吾尔自治区人民医院收治的100例初次采用肿瘤细胞减灭术治疗的EOC患者作为研究对象。术后均接受为期1年的随访,记录随访期间病情进展情况,以病情有无进展作为预后的评估标准,分为预后不良组和预后良好组。比较两组的基线资料、组织中miR-24-3p及CD34蛋白表达水平,分析二者与患者术后预后的关系。结果随访结束时,100例中有40例预后不良(预后不良组),60例预后良好(预后良好组)。预后不良组miR-24-3p、CD34蛋白表达、血清糖类抗原125(CA125)水平高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组其他基线资料、实验室指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);COX回归分析结果显示,EOC患者组织中miR-24-3p、CD34蛋白表达及血清CA125水平高是术后预后不良的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论组织中miR-24-3p、CD34蛋白表达与EOC患者术后预后存在相关性,早期动态监测EOC患者组织中miR-24-3p、CD34蛋白表达情况,并尽早实施合理干预,或可对促进患者良性预后有积极意义。

miR-200c联合MORC2检测在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值

目的研究微小核糖核酸-200c(miR-200c)联合MORC家族CW型锌指蛋白2(MORC2)检测在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值。方法选择2017年1月—2019年12月武汉大学人民医院妇产科诊治的卵巢癌患者103例(卵巢癌组)及卵巢良性疾病患者60例(对照组)为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测miR-200c及MORC2表达并分析其与临床病理因素的关系;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-200c联合MORC2预测卵巢癌2年预后不良的效能;多因素Logistic回归分析卵巢癌患者死亡的危险因素;Kaplan-Meier法分析miR-200c和MORC2表达与生存期的关系。结果卵巢癌组患者肿瘤组织miR-200c、MORC2表达高于癌旁组织和对照组(F=1926.617、1832.415,P均<0.001)。低分化、有恶性腹水、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移、有远处转移及Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌患者miR-200c、MORC2表达高于中-高分化、无恶性腹水、肿瘤最大径<5 cm、无淋巴结转移、无远处转移及Ⅰ~Ⅱ期患者(t=14.067、12.451、12.871、11.523、16.298、18.351,11.745、10.893、10.462、9.893、14.617、13.269,P均<0.001)。miR-200c、MORC2及二者联合预测卵巢癌患者2年预后不良的AUC分别为0.786、0.792、0.901,二者联合优于各自单独预测效能(Z=8.239、8.025,P均<0.001)。miR-200c≥0.78、MORC2≥0.65、低分化、有恶性腹水、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移、有远处转移、FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期为卵巢癌死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=5.323(1.812~8.834)、4.802(1.141~8.463)、2.065(1.068~3.062)、2.252(1.145~3.359)、2.140(1.216~3.064)、2.012(1.005~3.019)、2.522(1.625~3.419)、2.186(1.134~3.238)];卵巢癌组中miR-200c≥0.78且MORC2≥0.65卵巢癌患者中位生存期显著低于其他患者(miR-200c<0.78或MORC2<0.65)(Log-Rankχ^(2)=16.371,P<0.05)。结论卵巢癌患者miR-200c及MORC2表达显著升高,在卵巢癌病情及预后评估中具有重要临床价值,两者联合检测时可显著提高预测卵巢癌预后不良的敏感度及特异度。

血清miR-34a及Ang-1水平变化与新生儿呼吸窘迫综合征患儿预后关系研究

目的探讨血清微小核糖核酸-34a(miR-34a)及血管生成素-1(Ang-1)水平变化与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)患儿预后关系。方法选取2020年1月至2022年12月邯郸市中心医院收治的NRDS患儿178例作为研究对象,纳入NRDS组,另外选取健康新生儿178例作为对照组。比较两组血清miR-34a及Ang-1水平变化。以新生儿确诊NRDS为起点,根据预后情况将患儿分为生存组(n=140)和死亡组(n=38),采用Logistic回归模型分析影响NRDS患儿死亡的相关因素,并用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-34a、Ang-1对NRDS患儿死亡的预测价值。结果NRDS组血清miR-34a表达水平高于对照组,Ang-1水平则低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组剖宫产占比、凶险型前置胎盘占比、白细胞计数、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肌钙蛋白-Ⅰ、SNAPPEⅡ评分及血清miR-34a表达水平高于生存组,Ang-1水平则低于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析模型显示,血清miR-34a表达水平、SNAPPEⅡ评分、IL-6水平偏高,Ang-1水平偏低均是影响NRDS患儿死亡的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-34a及Ang-1单项预测NRDS患儿死亡的AUC(95%CI)分别为0.770(0.702~0.830)、0.808(0.742~0.863),采用LogP模式拟合联合诊断,结果显示联合诊断AUC(95%CI)为0.887(0.815~0.939),高于任一单项检测(P<0.05)。结论NRDS患儿血清miR-34a高表达,Ang-1则低表达,且两者均是NRDS患儿死亡的危险因素,对NRDS患儿不良预后具有较好的预测价值。

外周血miR-34a、miR-431、miR-183水平与突发性耳聋患者血流动力学及听力预后的相关性

目的探究外周血微小核糖核酸(miR)-34a、miR-431、miR-183水平与突发性耳聋(SD)患者血流动力学及听力预后的相关性。方法选择2021年1月至2023年12月于空军军医大学第一附属医院(下称该院)就诊的132例SD患者为疾病组,另选择同期来该院体检的132例健康者(无SD)为控制组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测外周血miR-34a、miR-431、miR-183水平,Pearson相关性分析外周血miR-34a、miR-431、miR-183水平与血流动力学指标的相关性,多元Logistic回归分析(逐步向前法)筛选影响SD患者听力预后的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,获得外周血miR-34a、miR-431、miR-183联合预测SD患者听力预后的曲线下面积(AUC),并采用Z检验进行预测效能比较。结果疾病组外周血miR-34a、miR-431水平显著高于控制组,miR-183水平显著低于控制组(P<0.05)。治疗后SD患者全血高切黏度(HSV)、全血低切黏度(LSV)、血浆黏度(PV)显著低于治疗前(P<0.05)。SD患者外周血miR-34a、miR-431水平与治疗前HSV、LSV、PV水平呈正相关(P<0.05),miR-183水平与治疗前HSV、LSV、PV水平呈负相关(P<0.05)。预后良好组外周血miR-34a、miR-431水平显著低于预后不良组,miR-183水平显著高于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。影响SD患者听力预后的危险因素有miR-34a和miR-431,而miR-183是影响SD患者听力预后的保护因素(P<0.05)。外周血miR-34a、miR-431、miR-183联合预测SD患者听力预后的AUC为0.969(95%CI:0.938~1.000),三者联合的预测价值较miR-34a(Z=2.336,P=0.019)、miR-431(Z=2.157,P=0.031)、miR-183(Z=2.351,P=0.019)单独更高。结论miR-34a、miR-431水平在SD患者外周血异常升高,与血流动力学指标呈正相关,miR-183水平异常降低,与血流动力学指标呈负相关,三者联合对SD患者听力预后具有一定预测价值。

脓毒症并发急性肾损伤患者血清miR-181c和miR-578水平表达及临床意义

目的 探讨微小核糖核酸(micro RNA,mi R)-181c,mi R-578在脓毒症并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)患者血清中的表达水平及临床意义。方法 收集2022年1~12月在国药葛洲坝中心医院住院治疗的80例脓毒症并发AKI患者(AKI组)和80例单纯脓毒症患者(非AKI组)作为研究对象。检测两组血清mi R-181c和mi R-578水平,并进行组间比较;Logistic回归分析脓毒症患者并发AKI的影响因素;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清mi R-181c和mi R-578水平对脓毒症患者并发AKI的预测价值。结果 AKI组患者肺部感染所占比例、动脉血乳酸、血肌酐、尿素氮水平以及APACHEⅡ评分均高于非AKI组,氧合指数低于非AKI组,差异有统计学意义(χ^(2)=7.364,t=14.298,26.691,17.925,7.104,12.676,均P<0.05)。AKI组患者血清mi R-181c水平(1.47±0.36)高于非AKI组(1.03±0.28),而血清mi R-578水平(0.76±0.19)显著低于非AKI组(1.05±0.31),差异具有统计学意义(t=8.629,7.134,均P=0.000)。Logistic回归分析结果显示,mi R-181c[OR(95%CI):2.984(1.628~5.468)]、肺部感染[OR(95%CI):1.946(1.250~3.031)]、动脉血乳酸[OR(95%CI):1.457(1.073~1.978)]、APACHEⅡ评分[OR(95%CI):2.283(1.393~3.741)]是脓毒症患者并发AKI的危险因素(均P<0.05);mi R-578[OR(95%CI):0.742(0.631~0.873)]、氧合指数[OR(95%CI):0.342(0.130~0.904)]是脓毒症患者并发AKI的保护因素(P<0.05)。血清mi R-181c和mi R-578二者联合预测脓毒症患者并发AKI的AUC为0.915(95%CI:0.961~0.953),敏感度和特异度分别为83.65%,88.75%,优于各自单独预测(Z=3.118,3.460,P=0.002,0.001)。结论 脓毒症并发AKI患者血清mi R-181c表达显著上调,mi R-578表达显著下调,二者联合对预测脓毒症并发AKI有较好参考价值。

甲状腺乳头状癌组织中miR-338-3p、PLCD3表达及其与病理参数、上皮—间质转化、预后的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中微小核糖核酸-338-3p(miR-338-3p)、磷脂酶Cδ-3(PLCD3)表达及与病理参数、上皮—间质转化(EMT)、预后的关系。方法选取2016年1月—2020年12月商洛市中心医院乳甲外科收治接受手术切除的PTC患者152例,取其癌组织及对应癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达,免疫组织化学法检测EMT相关蛋白[N-钙黏蛋白(N-Cad)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、波形蛋白(VIM)];分析miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达与PTC病理参数的关系;通过Targetscan数据库预测miR-338-3p与PLCD3的结合位点,采用Pearson法和二列相关性分析miR-338-3p与PLCD3 mRNA及二者与EMT相关蛋白在PTC组织中表达的相关性;根据PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达均值分为高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达组,通过Kaplan-Meier法绘制高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达PTC患者无病生存率(DFS)生存曲线;通过Cox回归分析PTC患者DFS的影响因素。结果与癌旁组织比较,PTC组织miR-338-3p和E-Cad蛋白阳性表达率降低,PLCD3 mRNA和N-Cad、VIM蛋白阳性表达率升高(t/χ^(2)/P=32.875/<0.001、15.575/<0.001、37.351/<0.001、21.984/<0.001、16.604/<0.001);miR-338-3p与PLCD3 mRNA在PTC组织中表达呈负相关(r/P=-0.712/<0.001)。PTC组织中miR-338-3p与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈负相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈正相关(r/P=-0.642/<0.001、-0.617/<0.001、0.622/<0.001);PTC组织中PLCD3 mRNA与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈正相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈负相关(r/P=0.657/<0.001、0.624/<0.001、-0.632/<0.001)。不同TNM分期、淋巴结转移的PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达差异有统计学意义(F/t/P=30.778/<0.001、3.430/0.001)。miR-338-3p高表达组3年DFS高于低表达组,PLCD3 mRNA高表达组3年DFS低于低表达组(χ^(2)/P=15.615/<0.001、16.088/<0.001)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、PLCD3 mRNA≥1.83为PTC患者DFS的独立危险因素[HR(95%CI)=3.127(1.361~7.604)、2.546(1.115~5.817)、2.854(1.178~6.919)],miR-338-3p≥0.57为独立保护因素[HR(95%CI)=0.306(0.116~0.804)]。结论PTC组织中miR-338-3p低表达和PLCD3 mRNA高表达,与TNM分期、淋巴结转移、EMT和预后有关,可能成为PTC诊治新靶点。