血清miR-122表达水平与冠心病心绞痛患者PCI后非靶血管斑块进展的关系

目的探讨血清微小核糖核酸(miR)-122表达水平与冠心病心绞痛患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后非靶血管斑块进展的关系。方法选取拟行PCI术治疗的168例冠心病心绞痛患者为研究组,另选取同期经冠状动脉造影(CAG)检查显示冠脉血管正常者145例为对照组,均采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清miR-122表达水平并进行对比。根据研究组PCI后非靶血管斑块进展情况将其分为进展组与未进展组,对比进展组、未进展组血清miR-122表达水平,并采用多因素Logistic回归性分析法分析血清miR-122表达水平与冠心病心绞痛患者PCI后非靶血管斑块进展的关系,且采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-122表达水平对冠心病心绞痛患者PCI后非靶血管斑块进展的评估价值。结果研究组血清miR-122表达水平明显高于对照组(P<0.05);研究组PCI术后非靶血管斑块进展发生率为14.88%;进展组血清miR-122表达水平明显高于未进展组(P<0.05);性别、心脏外科与介入治疗狭窄冠状动脉研究(SYNTAX)评分、糖尿病、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、血清miR-122水平均为患者PCI术后非靶血管斑块进展的独立危险因素(P<0.05),非靶血管参考直径、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均为患者PCI后非靶血管斑块进展的独立保护因素(P<0.05);血清miR-122表达水平对冠心病心绞痛患者PCI后非靶血管斑块进展预测的最佳截断点为3.28,灵敏度、特异度、曲线下面积(AUC)、95%CI分别为92.00%(23/25)、81.12%(116/143)、0.905、0.850~0.944。结论冠心病心绞痛患者血清miR-122表达水平异常增高,可增加患者PCI术后非靶血管斑块进展风险,并对患者PCI术后非靶血管斑块进展具有一定的评估价值。

微小核糖核酸-146a通过靶向调控B-细胞淋巴瘤因子11A对子宫内膜样腺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的探讨微小核糖核酸-146a(miR-146a)对子宫内膜样腺癌(EA)细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响。方法选取2019年4月至2021年4月于河北北方学院附属第一医院接受手术治疗的45例子宫内膜癌(EC)患者的癌组织及邻近正常组织作为研究对象,根据免疫组化染色结果分为EA组(n=31)和非EA组(n=14);体外培养人子宫内膜上皮HEECs细胞和EA细胞株Ishikawa、HEC-1A,并分别转染mimics NC、miR-146a mimics进行分组;另购得20只雄性BALB/c裸鼠进行动物实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定各组织和细胞中miR-146a的表达水平;分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验、集落形成实验、Transwell实验测定mimics NC组与miR-146a mimics组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力;采用Western blot分析mimics NC组和miR-146a mimics组细胞中EMT相关蛋白、B-细胞淋巴瘤因子11A(BCL11A)的表达情况;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素和碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法测定细胞的凋亡情况;采用荧光素酶报告基因检测验证miR-146a对BCL11A的靶向调控作用;采用裸鼠异种移植验证miR-146a对体内EA发生的影响。结果EC组织和细胞中的miR-146a水平明显降低(P<0.05)。与mimics NC组相比,miR-146a mimics组Ishikawa、HEC-1A细胞的miR-146a、E-cadherin、α-catenin水平及凋亡率明显升高,N-cadherin、Vimentin、BCL11A水平及细胞活力、克隆数、迁移数目、侵袭数目、荧光素酶活性明显下降(P<0.05)。动物实验结果显示,miR-146a mimics组的肿瘤体积明显小于mimics NC组(P<0.05)。结论过表达miR-146a可抑制EA细胞的增殖、迁移和EMT,促进细胞凋亡,其机制可能是通过靶向下调BCL11A实现的。

乳腺癌组织微小核糖核酸-485-3p、Xklp2靶蛋白表达水平及临床意义

目的探讨乳腺癌组织微小核糖核酸-485-3p(miR-485-3p)、Xklp2靶蛋白(TPX2)表达水平与患者预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测TPX2蛋白表达,采用实时荧光定聚合酶链反应检测miR-485-3p、TPX2 mRNA表达。采用Pearson检验分析乳腺癌组织中miR-485-3p表达与TPX2 mRNA表达的关系;随访5年,采用Kaplan-Meier法分析乳腺癌组织中miR-485-3p、TPX2蛋白表达与患者总生存率的关系,并用COX回归分析影响乳腺癌患者总生存的危险因素。结果乳腺癌组织中TPX2蛋白阳性率、TPX2 mRNA表达水平均高于癌旁正常组织,miR-485-3p表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中miR-485-3p、TPX2蛋白表达与患者TNM分期、淋巴结转移、Ki-67表达有关(P<0.05)。乳腺癌组织中miR-485-3p表达与TPX2 mRNA表达呈负相关(P<0.05)。miR-485-3p高表达者5年总生存率为77.78%,高于低表达者的52.94%,差异有统计学意义(P<0.05);TPX2蛋白阴性者5年总生存率为84.00%,高于阳性者的60.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移、miR-485-3p低表达、TPX2蛋白阳性是影响乳腺癌患者总生存的独立危险因素(P<0.05)。结论在乳腺癌组织中,miR-485-3p低表达、TPX2高表达及二者呈负相关,均可作为判断乳腺癌患者的预后指标。

微小RNA-325-3p和叉头框蛋白M1在胃腺癌中的表达及靶向关系研究

目的:探究微小RNA-325-3p(miR-325-3p)与叉头框蛋白M1(FOXM1)在胃腺癌中的表达,分析miR-325-3p与FOXM1的靶向关系。方法:选择人胃腺癌MGC-803、SGC-7901细胞系,分别构建miR-325-3p mimic组、miR-325-3p inhibitor组,并设立空白对照组,应用Western blot法检测FOXM1蛋白的表达,应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-325-3p与FOXM1的靶向关系。收集确诊为胃腺癌并行根治术的42例患者的肿瘤组织和距肿物边缘>2 cm的癌旁正常胃黏膜组织,应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-325-3p的表达,应用免疫组化染色(EnVision法)检测组织中FOXM1的表达。结果:胃癌MGC-803和SGC-7901细胞系miR-325-3p mimic组FOXM1蛋白表达明显低于空白对照组,miR-325-3p inhibitor组FOXM1蛋白表达明显高于空白对照组(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-325-3p与FOXM1具有靶向关系。胃腺癌组织中miR-325-3p相对表达量明显低于癌旁正常胃黏膜组织,FOXM1阳性率明显高于癌旁正常胃黏膜组织(均P<0.05)。miR-325-3p和FOXM1在胃腺癌不同肿瘤最大径、浸润深度方面比较差异有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-325-3p与FOXM1呈负相关(r=-0.630,P=0.027)。结论:胃腺癌中miR-325-3p与FOXM1异常表达,参与肿瘤的形成和进展。miR-325-3p与FOXM1具有靶向调控关系。

乳腺癌组织miR-1247-5p表达及其靶基因生物信息学预测研究

目的:探讨微小核糖核酸-1247-5p(miR-1247-5p)在乳腺癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析。方法:收集2019年6月至2020年12月本院手术治疗的104例乳腺癌患者癌组织及其癌旁组织。RT-PCR检测标本中miR-1247-5p的相对表达量;比较不同临床病理特征患者癌组织miR-1247-5p表达;预测miR-1247-5p的靶基因;采用DAVID数据库对miR-1247-5p靶基因进行功能和通路富集分析;String数据库对miR-1247-5p靶基因进行互作分析。结果:miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织下调(P<0.05)。miR-1247-5p潜在靶基因38个,其靶基因功能主要富集于RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控、基因表达/转录调控、质膜部分、突触小体、蛋白质结合、poly(A)RNA结合等;参与的通路主要富集于癌症通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等。磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)、上皮生长因子受体(EGFR)、假尿苷酸合酶1(PUS1)的编码蛋白质在miR-1247-5p基因靶基因蛋白质互作网络(PPI)中关键节点位置。结论:miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达下调,其靶基因富集于多个生物学过程及与肿瘤相关的信号转导通路上,miR-1247-5p可能通过调控其靶基因的表达参与乳腺癌的发生发展过程。

胃癌组织miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的探讨胃癌组织微小核糖核酸(miR)-23a-3p、miR-361-5p表达与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和预后的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测120例胃癌患者胃癌组织与癌旁组织中miR-23a-3p、miR-361-5p、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达。Pearson相关分析胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达的相关性,以及分析miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析胃癌组织中不同miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者生存预后的关系。单因素及多因素COX回归分析影响胃癌患者生存预后因素。结果相比于癌旁组织,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达明显较低,而PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达明显较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达呈负相关(均P<0.05)。不同肿瘤TNM分期、肿瘤分化程度、术后辅助化疗及淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。miR-23a-3p低表达胃癌患者3年总体生存率为46.77%(29/62),低于miR-23a-3p高表达胃癌患者3年总体生存率[81.03%(47/58)],差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=30.243,P<0.001)。miR-361-5p低表达胃癌患者3年总体生存率为50.79%(32/63),低于miR-361-5p高表达胃癌患者3年总体生存率[77.19%(44/57)],差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=24.932,P<0.001)。单因素及多因素Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、无术后辅助化疗、miR-23a-3p低表达、miR-361-5p低表达是影响胃癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达降低,二者表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关,是潜在的胃癌预后相关的肿瘤标志物。

微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。

胃癌中微小RNA-424-5p与真核翻译起始因子5A的表达特征研究

目的:观察胃癌中微小RNA-424-5p(miR-424-5p)与真核翻译起始因子5A(eIF5A)的表达特征,分析二者的靶向关系。方法:收集确诊为胃癌并行根治术的患者共65例作为研究对象,留取肿瘤组织和正常胃黏膜组织,应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-424-5p的表达,应用免疫组化法检测eIF5A的表达。选择胃癌MGC-803细胞株,应用双荧光素酶报告基因实验观察miR-424-5p与eIF5A的结合情况。结果:胃癌中miR-424-5p的表达量明显低于正常胃黏膜组织(P<0.05),eIF5A的阳性率明显高于正常胃黏膜组织(P<0.05),miR-424-5p与eIF5A在不同肿瘤最大径、不同浸润深度、有无淋巴结转移分组的比较中有统计学差异(P<0.05)。miR-424-5p与eIF5A呈负相关性(Y=-2.572X+7.662,P<0.05)。miR-424-5p和eIF5A的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-424-5p与eIF5A具有靶向关系。结论:胃癌组织中miR-424-5p表达下调、eIF5A表达升高,且具有靶向负调控关系。miR-424-5p和eIF5A的表达可能与患者术后生存时间有关。

原发性高血压患者血浆ARR,CTRP9和miR-663表达水平与靶器官损害的相关性研究

目的探讨原发性高血压患者醛固酮肾素比值(aldosterone-renin ratio,ARR),C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(C1q/tumor necrosis factor-related protein 9,CTRP9)和miR-663表达水平与靶器官损害的相关性。方法选择2020年5月~2022年5月鄂东医疗集团黄石市中心医院收治的162例原发性高血压患者为研究对象,根据靶器官损害状况分为复合损害组、单一损害组和无损害组。比较三组一般资料、ARR,CTRP9和miR-663水平。应用Spearman相关性分析观察ARR,CTRP9和miR-663水平与原发性高血压患者靶器官损害的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析ARR,CTRP9和miR-663对原发性高血压患者出现单一、复合靶器官损害的预测效能。结果复合损害组ARR水平(18.26±2.29)高于单一损害组(15.06±2.47)、无损害组(13.59±2.60),差异有统计学意义(F=50.799,P=0.000);单一损害组ARR水平高于无损害组,差异有统计学意义(t=2.768,P=0.007)。复合损害组CTRP9(112.45±22.57 ng/ml)和miR-663(0.42±0.15)水平均低于单一损害组(125.37±24.45 ng/ml,0.56±0.18)、无损害组(145.84±27.38 ng/ml,0.71±0.20),差异有统计学意义(F=21.861,33.514,均P=0.000);单一损害组CTRP9,miR-663水平均低于无损害组,差异有统计学意义(t=3.796,3.971,均P=0.000)。Spearman相关性分析发现,ARR水平与原发性高血压患者靶器官损害呈正相关(r=0.706,P=0.000),CTRP9和miR-663水平与原发性高血压患者靶器官损害呈负相关(r=-0.593,-0.641,均P=0.000);绘制ROC曲线分析显示,ARR,CTRP9和miR-663联合预测原发性高血压患者出现单一、复合靶器官损害的曲线下面积(AUC)分别为0.815,0.970,均高于单一指标预测。结论原发性高血压患者ARR,CTRP9和miR-663表达水平与靶器官损害密切相关,联合检测可为患者靶器官损害预测提供一定参考依据。

循环miR-126-3p在非小细胞肺癌中表达及诊断价值

目的探讨循环微小核糖核酸(miR)-126-3p在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及诊断价值。方法收集多中心miR芯片及测序数据探讨NSCLC的循环miR-126-3p的表达差异。为了评估循环miR-126-3p综合表达水平,计算标准化均数差(SMD)和综合受试者工作特征(sROC)曲线,分析sROC曲线的曲线下面积(AUC),探讨灵敏度、特异度、阳性阴性似然比,并结合组织进一步综合分析循环miR-126-3p表达。通过miRDB、starBase v2.0和TargetScan 7.1,结合NSCLC中的上调差异基因,利用互补序列方法筛选了循环miR-126-3p潜在靶基因。结果基于6项循环miR数据集发现循环miR-126-3p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),受试者工作曲线显示循环miR-126-3p有较强的诊断效能(AUC>0.5),而在199例NSCLC组中综合表达低于对照组(SMD=-1.46)。sROC曲线显示循环miR-126-3p区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.91),Egger's检验不存在发表偏倚(P>0.05),灵敏度、特异度均≥0.80,阳性似然比、阴性似然比为5.37和0.18。此外,对26个数据集1320例NSCLC循环和组织综合分析显示,循环miR-126-3p在NSCLC组中表达低于对照组(SMD=-2.07)。sROC曲线显示低表达的循环miR-126-3p在区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.97)。此外,筛选得到循环miR-126-3p的潜在靶基因ADAM9和SLC7A5在NSCLC组中表达均高于对照组。结论低表达的循环miR-126-3p可能是NSCLC高准确性筛查的重要生物标志物。

MicroRNA-501-5p在瘢痕疙瘩中的表达及与eIF3L的靶向关系探讨

目的:检测瘢痕疙瘩中MicroRNA-501-5p(miR-501-5p)的表达,分析其与真核翻译起始因子3L(eIF3L)的靶向关系。方法:选择瘢痕疙瘩组织41例作为观察组,选择增生性瘢痕41例为对照组,选择正常皮肤组织41例作为正常对照组。应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测3组中miR-501-5p的表达,应用免疫组化法检测瘢痕疙瘩中eIF3L和Ki67的表达。选择永生化成纤维细胞系,应用双荧光素酶报告基因实验观察miR-501-5p与eIF3L的结合情况。结果:三组中miR-501-5p的表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组中miR-501-5p的表达在有无家族史及不同病程的分组中差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示miR-501-5p与eIF3L呈正相关性。双荧光素酶报告基因实验显示miR-501-5p与eIF3L具有靶向关系。结论:瘢痕疙瘩中miR-501-5p高表达,与家族史及病程相关。miR-501-5p与eIF3L具有靶向关系。

长链非编码RNA CYP1B1-AS1对急性髓系白血病细胞增殖和迁移的影响及机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)CYP1B1-AS1对急性髓系白血病细胞增殖和迁移的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CYP1B1-AS1在急性髓系白血病细胞系THP-1、NB4、HL-60、KG-1、SKM-1和骨髓基质细胞HS-5中的表达量。通过5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理急性髓系白血病细胞系,RT-qPCR检测5-Aza-CdR对CYP1B1-AS1表达的影响。根据转染物不同分别将HL-60细胞分为NC组和CYP1B1-AS1组。克隆形成实验和划痕实验依次检测HL-60细胞的增殖和迁移能力。双荧光素酶实验验证CYP1B1-AS1与微小RNA(miR)-1306-5p的靶向关系。RT-qPCR检测CYP1B1-AS1对HL-60细胞miR-1306-5p表达的影响。免疫印迹法检测CYP1B1-AS1对HL-60细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期素E(Cyclin E)和转录因子(Twist)、纤维连接蛋白(Fibronectin)表达的影响。结果:与HS-5细胞比较,CYP1B1-AS1在急性髓系白血病细胞系中表达量降低,且HL-60细胞系中CYP1B1-AS1表达量最低(均P<0.05)。5-Aza-CdR能够明显促进急性髓系白血病细胞系中CYP1B1-AS1的表达(均P<0.05)。与NC组比较,CYP1B1-AS1组HL-60细胞增殖能力和迁移率降低(均P<0.05)。过表达miR-1306-5p能够抑制野生型CYP1B1-AS1的荧光素酶活性(P<0.05)。与NC组比较,CYP1B1-AS1组HL-60细胞中miR-1306-5p表达减少,细胞增殖和迁移相关蛋白CDK2、Cyclin E、Twist、Fibronectin表达降低(均P<0.05)。结论:过表达CYP1B1-AS1可能通过靶向下调miR-1306-5p表达抑制急性髓系白血病细胞的增殖和迁移。

黄芩素通过miR-141-3p/sirt7介导的线粒体自噬发挥帕金森病神经保护作用的机制研究

目的探讨黄芩素(Baicalein)对帕金森病(PD)神经保护的可能机制。方法在本研究中,采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导小鼠的PD模型,研究黄岑素的保护作用机制。首先,对黄芩素干预后的PD模型小鼠进行神经学评分,高效液相色谱电化学法检测纹状体多巴胺含量,TUNEL和Fluoro-Jade B染色检测凋亡细胞及神经元。采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制PD模型小鼠线粒体自噬,通过Jc-1染色检测黄芩素干预后的PD模型小鼠的线粒体膜电位,通过Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62。在PD模型体内转染agomiR-141-3p,通过qRT-PCR检测转染效率,通过Jc-1和Wb检测线粒体膜电位和自噬相关蛋白的变化情况。通过Starbase网站(https://starbase.sysu.edu.cn/)、双荧光素酶切报告实验在293T细胞中分析miR-141-3p和SIRT7的靶向关系,qRT-PCR检测SIRT7在PD模型体内的表达水平。结果PD严重影响了小鼠的神经功能,下调了线粒体膜电位水平及线粒体自噬相关蛋白LC3的表达水平、上调了P62的表达水平。而黄芩素提高了PD模型小鼠的神经学评分,一定程度上还原了多巴胺与神经元的数目,恢复了线粒体膜电位水平及LC3和P62的表达水平;黄芩素抑制了PD小鼠miR-141-3p的表达,上调miR-141-3p可以逆转黄芩素促线粒体膜电位上升、LC3 z-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上升及P62表达下降;而miR-141-3p可以靶向负调控SIRT7,通过下调SIRT7同样可以逆转黄芩素促线粒体膜电位上升、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调及P62表达下调;黄芩素可以使SIRT7表达上调,而过表达miR-141-3p可以抑制SIRT7的表达。结论黄芩素通过下调miR-141-3p靶向负调控SIRT7介导线粒体自噬,从而对PD神经发生保护。

基于mTOR/P70S6K通路研究上调miR-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)通路研究上调微小核糖核酸(miR)-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响。方法肝癌HepG2细胞株经过细胞培养、转染后,分为上调miR-205-5p组、肝癌组和阴性对照组。实时荧光定量(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测miR-205-5p表达,观察肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力,Western印迹检测p-mTOR、p-P70S6K、mTOR、P70S6K蛋白表达。结果上调miR-205-5p组miR-205-5p表达显著高于肝癌组和阴性对照组,阴性对照组显著高于肝癌组(均P<0.05)。在24、48、72 h,上调miR-205-5p组细胞光密度值均显著低于阴性对照组和肝癌组,阴性对照组光密度值均显著低于肝癌组,在72 h差异表现最为明显(P<0.05),阴性对照组和肝癌组随着时间延长,光密度值逐渐显著升高,上调miR-205-5p组光密度值逐渐显著降低(均P<0.05)。上调miR-205-5p组72 h细胞增殖数、细胞侵袭数显著低于肝癌组和阴性对照组,细胞凋亡数显著高于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。上调miR-205-5p组mTOR、P70S6K、p-mTOR、p-P70S6K蛋白表达显著低于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。结论上调miR-205-5p可以影响mTOR/P70S6K信号通路的活性,参与肝癌细胞侵袭、增殖、凋亡的过程。

双荧光素酶报告基因技术验证miR-31对LATS2的靶向调控作用

目的通过双荧光素酶报告基因技术验证miR-31对大肿瘤抑制因子2(LATS2)的靶向调控作用,观察miR-31在心肌细胞肥大过程中的可能影响。方法运用Targetscan软件预测大鼠miR-31对LATS2的靶向调控作用;以双荧光素酶报告质粒为工具载体,分别插入人工合成的大鼠LATS2基因野生型3′UTR(LATS2-3′UTR-WT)及突变型3′UTR(LATS2-3′UTR-MU)片段,构建LATS2-3′UTR-WT及LATS2-3′UTR-MU双荧光素酶报告质粒;重组双荧光素酶报告质粒分别与miR-31过表达质粒共转染293T细胞,检测荧光素酶活性并分析miR-31对LATS2的靶向调控作用;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导体外心肌细胞肥大模型,RT-qPCR检测miR-31、LATS2及心肌细胞肥大基因心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,F肌动蛋白荧光探针观察心肌细胞形态变化。结果Targetscan软件预测结果显示,大鼠miR-31与LATS2基因3′UTR存在互补结合位点;经酶切及基因测序鉴定,成功构建LATS2-3′UTR-WT及LATS2-3′UTR-MU双荧光素酶报告质粒;与LATS2-3′UTR-MU+miR-31组相比,LATS2-3′UTR-NC+miRNA-31组荧光素酶活性无明显变化(0.98±0.03vs.1.00±0.03,P>0.05),而LATS2-3′UTR-MT+miR-31组与LATS2-3′UTR-NC+miR-31组相比,荧光素酶活性显著降低(0.74±0.02vs.1.00±0.03,P<0.01);AngⅡ诱导48h后可检测到心肌细胞肥大基因ANP(P<0.01)及β-MHC表达上调(P<0.05),心肌细胞肥大过程中miR-31表达显著上调(P<0.01),LATS2基因明显下调(P<0.05),96h后心肌细胞表面积明显增大。结论miR-31可通过与LATS2基因3′UTR互补结合实现其对LATS2靶向调控作用,miR-31靶向作用LATS2可能参与调控心肌细胞的肥大。

妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表达水平及其与母婴不良结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病患者血清微小核糖核酸-15a(miR-15a)表达水平变化情况及其与母婴不良结局的关系。方法选取妊娠期糖尿病患者143例为实验组,另选取同期孕检健康的124例正常孕妇为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清miR-15a表达水平。随访至分娩,观察两组母婴不良结局发生情况,并采用多因素Logistic回归性分析法分析血清miR-15a表达水平与妊娠期糖尿病患者母婴不良结局的关系。结果实验组血清miR-15a表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组流产、胎膜早破、羊水过多、产后出血、产后感染、早产儿、巨大儿、胎儿窘迫、新生儿窒息、新生儿呼吸窘迫综合征、新生儿低血糖发生率及母体、围生儿不良结局总发生率均高于对照组(P<0.05),实验组死胎发生率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);母体结局不良组与围生产儿结局不良组的年龄>35岁、孕前体质量指数≥24.0 kg/m^(2)、不良孕产史、血糖控制不良占比及血清miR-15a表达水平均高于母体结局良好组、围生产儿结局良好组(P<0.05),经多因素Logistic回归性分析显示,以上各指标均是妊娠期糖尿病患者母婴不良结局的危险因素(P<0.05)。结论妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表达水平异常升高,可增加母婴不良结局发生风险,与母婴不良结局的发生关系密切。患者年龄、孕前体质量指数、不良孕产史、血糖控制情况等亦对妊娠期糖尿病患者母婴不良结局的发生具有一定的影响。

子宫内膜癌组织中miR-3188和mTOR表达量与预后的相关性研究

目的探究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中微小核糖核酸-3188(miR-3188)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达量与预后的相关性。方法前瞻性选取2016年1月至2018年4月在开滦总医院林西医院接受手术治疗的121例EC患者作为研究对象,并根据3年内是否复发将其分为复发组(n=32)和未复发组(n=89)。用实时荧光定量PCR法检测EC组织和癌旁组织中miR-3188表达量,用蛋白质免疫印迹法检测EC组织和癌旁组织中mTOR表达量。结果EC组织中miR-3188相对表达量低于癌旁组织(0.60±0.14 vs 1.46±0.14),EC组织中mTOR相对表达量高于癌旁组织(0.92±0.11比0.63±0.11),差异均有统计学意义(t=48.995,19.348,均P=0.000)。不同浸润深度、是否淋巴结转移、是否子宫外转移、不同分化程度及不同FIGO分期的miR-3188和mTOR相对表达量比较,差异均有统计学意义(t=2.400~8.611,均P<0.05)。未复发组的miR-3188相对表达量高于复发组(0.66±0.11 vs 0.45±0.08),mTOR相对表达量低于复发组(0.88±0.10 vs 1.02±0.06),差异均有统计学意义(t=11.220,9.229,均P=0.000)。COX回归分析结果显示分化程度高(HR=0.696,P=0.015)、miR-3188表达量高(HR=0.058,P=0.008)是EC预后的独立保护因素,FIGO分期高(HR=2.967,P=0.000)、mTOR表达量高(HR=1.162,P=0.035)是EC预后的独立危险因素。Pearson相关分析结果显示EC组织中miR-3188相对表达量与mTOR相对表达量呈负相关关系(r=-0.409,P=0.000)。结论EC组织中miR-3188表达量低、mTOR表达量高与预后不良有关。

miR-519在肿瘤中的研究进展

肿瘤的发生发展为复杂的多基因事件,microRNAs(miRNAs)参与其中并发挥重要作用。miRNAs是由长度为18-25个核苷酸组成的的非编码单链小RNA分子,通过与特定的靶mRNA结合来抑制靶基因转录或蛋白翻译从而沉默靶基因的表达,作为抑癌或致癌因子与靶基因共同作用参与肿瘤发生、发展。本文从miR-519的生成与组织分布、靶基因及相关肿瘤作用机制等方面进行综述。

子痫前期患者胎盘组织ET-1、Notch1蛋白、miR-204表达水平与胎盘螺旋动脉重铸及不良妊娠结局的关系

目的探究子痫前期(PE)患者胎盘组织内皮素-1(ET-1)、Notch1蛋白、微小核糖核酸-204(miR-204)表达水平与胎盘螺旋动脉重铸及不良妊娠结局的关系。方法将2021年2月至2023年2月在空军军医大学唐都医院产科建卡并首次确诊为PE的98例患者纳入PE组,另将50例正常妊娠孕妇纳入对照组,比较两组基线资料以及胎盘组织ET-1、Notch1蛋白及miR-204表达水平,比较不同病情程度PE患者胎盘组织ET-1、Notch1蛋白及miR-204表达水平,比较两组胎盘螺旋动脉重铸相关指标(管壁厚度、管腔面积)、妊娠结局(胎盘重量、1 min Apgar评分、新生儿出生体重),分析PE患者胎盘组织ET-1、Notch1、miR-204与胎盘螺旋动脉管壁厚度、管腔面积及妊娠结局的相关性。结果与对照组比较,PE组胎盘组织Notch1蛋白表达水平显著降低,ET-1蛋白及miR-204表达水平显著升高(P<0.05);与PE轻度组比较,PE重度组胎盘组织Notch1蛋白表达水平显著降低,ET-1蛋白及miR-204表达水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,PE组管壁厚度显著升高,管腔面积、胎盘重量、1 min Apgar评分、新生儿出生体重显著降低,流产和胎儿生长受限发生率明显升高(P<0.05);Pearson检验显示,PE患者胎盘组织ET-1、miR-204表达水平与管壁厚度、流产和胎儿生长受限发生率呈正相关,与管腔面积、胎盘重量、1 min Apgar评分、新生儿出生体重呈负相关(P<0.05);PE患者胎盘组织Notch1表达水平与管壁厚度、流产和胎儿生长受限发生率呈负相关,与管腔面积、胎盘重量、1 min Apgar评分、新生儿出生体重呈正相关(P<0.05)。结论PE患者胎盘组织ET-1、miR-204呈高表达,Notch1呈低表达,三者表达水平与PE严重程度、胎盘螺旋动脉重铸及孕妇不良妊娠结局相关。

miR-34a基于AKT/mTOR通路对骨关节炎大鼠的影响及作用机制研究

目的探究微小核糖核酸-34a(microRNA-34A,miR-34a)基于蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对骨关节炎大鼠的影响及作用机制。方法研究时间为2020年2月至2021年5月,选取43只6~9周龄健康雄性SD大鼠作前瞻性研究,其中随机选取10只分为空白组,剩余33只建立骨关节炎模型。成功建模30只,随机分为模型组、上调miR-34a组、沉默miR-34a组,各10只。观察病理组织,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)法检测miR-34a表达,酶联免疫吸附实验法检测白细胞介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-4、IL-10,蛋白免疫印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,pAKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,pmTOR)表达。其中多组间比较行F检验,两组间比较行独立样本t检验。结果空白组、模型组、上调miR-34a组、沉默miR-34a组的miR-34a表达分别为(0.94±0.08)、(2.39±0.26)、(2.12±0.23)、(1.54±0.17),Makin评分分别为(0.35±0.05)、(4.13±0.19)、(3.02±0.16)、(1.15±0.09)分,IL-1β分别为(3.68±0.37)、(7.51±1.23)、(5.72±0.95)、(4.63±0.72)ng/L,TNF-α分别为(37.45±4.85)、(62.05±7.49)、(56.26±6.25)、(43.85±5.10)ng/L,IL-4分别为(115.75±16.81)、(50.43±9.42)、(75.82±11.94)、(93.85±13.86)pg/ml,IL-10分别为(106.49±17.51)、(60.85±10.23)、(76.81±13.07)、(91.05±15.02)pg/ml,pAKT分别为(1.00±0.01)、(1.95±0.29)、(1.71±0.26)、(1.71±0.26),pmTOR分别为(1.00±0.01)、(1.89±0.24)、(1.56±0.25)、(1.25±0.15)。与空白组相比,模型组、上调miR-34a组、沉默miR-34a组的miR-34a表达、Makin评分、IL-1β、TNF-α、pAKT、pmTOR较高,IL-4、IL-10较低,差异均有统计学意义(F/P值分别为25.290/0.001、91.260/0.001、14.144/0.001、13.077/0.001、15.525/0.001、17.580/0.001、16.080/0.001、10.676/0.001);与模型组相比,上调miR-34a组、沉默miR-34a组miR-34a表达、Makin评分、IL-1β、TNF-α、pAKT、pmTOR较低,IL-4、IL-10较高,差异均有统计学意义(均P<0.05);沉默miR-34a组与上调miR-34a组相比,沉默miR-34a组miR-34a表达、Makin评分、IL-1β、TNF-α、pAKT、pmTOR较低,IL-4、IL-10较高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论沉默miR-34a对骨关节炎大鼠有干预作用,减少大鼠出现炎性反应,降低Makin评分,其作用机制与AKT/mTOR信号通路有关。