激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

长链非编码RNA DLEU2通过miR-30a-5p/CD61对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸淋巴细胞白血病缺失基因2(LncRNA DLEU2)通过靶向微小核糖核酸(miR)-30a-5p/整合素β3(CD61)对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响。方法取人结肠癌细胞株SW1116培养并随机分为si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-30a-5p mimics组、miR-30a-5p抑制剂阴性对照(NC inhibitor)+si-LncRNA DLEU2组及miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组,同时设置未转染细胞为空白组;转染48 h后,采用荧光显微镜检测细胞转染效率,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞LncRNA DLEU2和miR-30a-5p表达、CD61、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-Myc mRNA和蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR检测LncRNA DLEU2与miR-30a-5p的靶向关系、miR-30a-5p与CD61的靶向关系;制作雄性胸腺BALB/c裸鼠异种移植瘤模型评估LncRNA DLEU2对肿瘤生长的影响。结果si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、miR-NC组、miR-30a-5p mimics组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组、miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组转染效率均>85%;与空白组及si-NC组比较,si-LncRNA DLEU2组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组增殖抑制率上升(P<0.05),DLEU2表达下降(P<0.05),miR-30a-5p表达增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达减少(P<0.05);与NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组比较,miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组细胞增殖抑制率下降(P<0.05),miR-30a-5p表达下降,CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达上升(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-30a-5p mimics组miR-30a-5p表达、增殖抑制率增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达下降(P<0.05);LncRNA DLEU2可直接靶向调控miR-30a-5p、miR-30a-5p可直接靶向调控CD61,抑制LncRNA DLEU2表达可降低BALB/c裸鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论沉默LncRNA DLEU2可抑制人结肠癌细胞株SW1116生长和增殖,其机制可能与靶向miR-30a-5p抑制CD61表达,抑制CyclinD1、c-Myc表达相关。

外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与妊娠期糖尿病患者妊娠结局的关系

目的探究外周血微小核糖核酸-27a(miR-27a)、微小核糖核酸-146a-5p(miR-146a-5p)水平与妊娠期糖尿病(GDM)患者妊娠结局的相关性。方法回顾性选取2020年1月至2022年12月郑州大学第二附属医院妇产科接收的60例GDM患者当作研究对象,依照妊娠结局划分成不良组(n=29)、良好组(n=31),对两组临床资料行单因素分析与logistics多因素回归分析,采用Spearman相关性分析法分析外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与妊娠结局的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-27a、miR-146a-5p对GDM患者妊娠结局的预测价值。结果两组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、miR-27a、miR-146a-5p比较差异有统计学意义(P<0.05);logistics多因素回归分析结果显示,miR-27a、miR-146a-5p为GDM患者发生不良妊娠结局的危险因素(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血miR-27a水平与不良妊娠结局发生呈正相关,外周血miR-146a-5p水平与不良妊娠结局发生呈负相关(P<0.05);ROC曲线显示,miR-27a、miR-146a-5p预测GDM患者妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.915、0.902,联合预测的AUC最大,为0.979。结论外周血miR-27a、miR-146a-5p水平与不良妊娠结局发生有关,且联合检测对妊娠结局具有较高预测价值,有助于GDM患者妊娠结局的早期判断。

乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(HCC)患者血清微小核糖核酸(miR)-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义。方法选取2018年1月至2020年10月该院收治的90例HBV相关性HCC患者作为HBV相关性HCC组。另选取同期该院的90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达。分析miR-125a-5p、miR-127-3p表达与HBV相关性HCC患者病理特征的关系。根据HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达的平均值分为高、低表达组,通过Kaplan-Meier法绘制各组不同的生存曲线。通过Cox回归分析影响HBV相关性HCC患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达对HBV相关性HCC患者死亡的预测价值。结果HBV相关性HCC组血清miR-125a-5p、miR-127-3p相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期、淋巴结转移的HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-125a-5p高表达组3年总生存率(64.58%)高于miR-125a-5p低表达组(38.10%),miR-127-3p高表达组3年总生存率(66.00%)高于miR-127-3p低表达组(35.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.770、9.507,P=0.005、0.002)。HBV相关性HCC患者死亡的独立危险因素为肿瘤最大径≥5 cm、低分化、有脉管侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移,其独立保护因素为miR-125a-5p、miR-127-3p升高。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合预测的曲线下面积(AUC)为0.907,高于血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达单独预测的AUC(0.790、0.787),差异有统计学意义(Z=2.691、3.152,P=0.007、0.002)。结论HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p低表达,与肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期和预后有关,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合对HBV相关性HCC患者预后有较高的预测价值。

胃癌组织miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的探讨胃癌组织微小核糖核酸(miR)-23a-3p、miR-361-5p表达与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和预后的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测120例胃癌患者胃癌组织与癌旁组织中miR-23a-3p、miR-361-5p、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达。Pearson相关分析胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达的相关性,以及分析miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析胃癌组织中不同miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者生存预后的关系。单因素及多因素COX回归分析影响胃癌患者生存预后因素。结果相比于癌旁组织,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达明显较低,而PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达明显较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达呈负相关(均P<0.05)。不同肿瘤TNM分期、肿瘤分化程度、术后辅助化疗及淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。miR-23a-3p低表达胃癌患者3年总体生存率为46.77%(29/62),低于miR-23a-3p高表达胃癌患者3年总体生存率[81.03%(47/58)],差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=30.243,P<0.001)。miR-361-5p低表达胃癌患者3年总体生存率为50.79%(32/63),低于miR-361-5p高表达胃癌患者3年总体生存率[77.19%(44/57)],差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=24.932,P<0.001)。单因素及多因素Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、无术后辅助化疗、miR-23a-3p低表达、miR-361-5p低表达是影响胃癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达降低,二者表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关,是潜在的胃癌预后相关的肿瘤标志物。

miR-92b-5p、HMGB1与2型糖尿病肾病患者肾功能的相关性

目的探讨微小核糖核酸-92b-5p(miR-92b-5p)、血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与2型糖尿病肾病患者肾功能的相关性。方法选取2021年1月至2023年12月期间河南省驻马店市中心医院内分泌科收治的212例2型糖尿病肾病患者作为肾病组,另选取同期来本院就诊的单纯2型糖尿病患者95例作为2型糖尿病组。比较二组患者的肾功能相关指标以及miR-92b-5p、HMGB1水平;以Pearson相关性分析评估2型糖尿病肾病患者血清miR-92b-5、HMGB1水平与肾功能的相关性;以单、多因素Logistic回归分析2型糖尿病患者并发肾病的危险因素,并绘制受试者工作特性曲线(ROC)进一步评估miR-92b-5p、HMGB1二者联合检测对2型糖尿病患者并发肾病的预测价值。结果两组糖尿病病程、BUN、Scr、eGFR、miR-92b-5p以及HMGB1水平的比较差异有统计学意义(P<0.05);Pearson分析显示,HMGB1与BUN、Scr呈正相关,与eGFR呈负相关(r=0.570,0.646,-0.485,P<0.05);miR-92b-5与BUN、Scr呈负相关,与e GFR呈正相关(r=-0.526,-0.562,0.442,P<0.05)。多因素回归分析显示,糖尿病病程增加、BUN、Scr、HMGB1水平升高、eGFR、miR-92b-5p水平降低均是2型糖尿病患者并发肾病的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR-92b-5p、HMGB1以及二者联合检测曲线下面积为0.898、0.932、以及0.961(P<0.05)。结论2型糖尿病肾病患者肾功能异常可能与血清中miR-92b-5p表达量下降、HMGB1表达量上升有关,二指标可作为2型糖尿病肾病的有效预测指标。

血清miR-33a-5p、SMAD7水平与视网膜静脉阻塞患者视力预后的关系

目的观察视网膜静脉阻塞患者血清微小核糖核酸-33a-5p(miR-33a-5p)、SMAD同源物7(SMAD7)水平变化,并探讨二者与视力预后的关系。方法选择视网膜静脉阻塞患者108例(观察组),同期体检健康的志愿者108例(对照组),采集所有研究对象清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-33a-5p,采用ELISA法检测血清SMAD7。比较两组血清miR-33a-5p、SMAD7水平,分析视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p、SMAD7水平的关系。所有视网膜静脉阻塞患者予雷珠单抗玻璃体腔内注射治疗。治疗3个月,评估视力,其中预后不良57例、预后良好51例。采用多因素Logistic回归模型分析视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的预测价值。结果观察组血清miR-33a-5p水平低于对照组,血清SMAD7水平高于对照组(t分别为13.362、38.657,P均<0.01)。Pearson相关分析显示,视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平与血清SMAD7水平呈负相关(r=-0.649,P<0.05)。单因素分析显示,视网膜静脉阻塞患者视力预后不良者合并高血压、高血脂比例和有并发症比例以及血清SMAD7水平均高于其预后良好者(χ^(2)/t分别为13.412、7.342、10.095、6.394,P均<0.05),血清miR-33a-5p水平低于其预后良好者(t=7.373,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高和合并高血压、高血脂以及有并发症是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素(OR分别为0.683、3.843、2.146、1.463、2.773,P均<0.05)。血清miR-33a-5p、SMAD7水平预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.870、0.869,二者联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC为0.938。血清miR-33a-5p、SMAD7水平联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC高于二者单独(Z分别为2.419、2.422,P均<0.05)。结论视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高;血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素;血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2和miR-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系研究

目的探讨鼻咽癌癌组织中长链非编码RNA羧基末端结合蛋白1反义RNA2(long non-coding RNA C-terminal binding protein 1 antisense RNA2,LncRNA CTBP1-AS2)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系。方法选取2018年3月~2020年3月于南通市肿瘤医院确诊的222例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,记录患者临床资料,评估放疗疗效及预后,并分为生存组(n=194)和死亡组(n=28);另选取同期219例鼻咽炎患者为对照组。采用Pearson相关分析检验鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2,miR-140-5p表达水平与患者预后的关系;采用COX比例风险回归模型对鼻咽癌患者预后进行多因素分析。结果鼻咽癌组患者组织中LncRNA CTBP1-AS2表达水平(2.25±0.46)高于对照组(1.02±0.22),miR-140-5p表达水平(0.67±0.19)低于对照组(1.01±0.23),差异具有统计学意义(t=35.742,16.934,均P<0.001)。鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平呈负相关(r=-0.624,P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2高表达的鼻咽癌患者放疗后总有效率(74.11%)和三年生存率(77.68%)低于低表达患者(93.64%,97.27%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.578,19.331,均P<0.001);miR-140-5p高表达患者放疗后总有效率(93.58%)和三年生存率(96.33%)显著高于低表达患者(74.34%,78.76%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.119,15.538,均P<0.001)。死亡组磁共振酰胺质子转移(amide proton transfer,APT)值(2.10±0.26)、放疗无效(85.71%)、LncRNA CTBP1-AS2高表达(89.29%)及miR-140-5p低表达(85.71%)患者比例高于生存组(1.82±0.31,6.19%,44.85%,45.88%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=4.551,108.127,19.331,15.538,均P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的危险因素(HR=2.762,95%CI:1.510~5.051,P=0.001),miR-140-5p表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的保护因素(HR=0.817,95%CI:0.718~0.930,P=0.002)。结论鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2高表达,miR-140-5p低表达,二者与放疗疗效及预后关系密切。

血清lncRNA CASC2、miR-590-5p与支气管哮喘患者气道炎症、气流受限的关系及其预测效能分析

目的探讨血清长链非编码核糖核酸(lncRNA)-癌易感性候选基因2(CASC2)、微小核糖核酸-590-5p(miR-590-5p)与支气管哮喘(BA)患者气道炎症、气流受限的关系及其预测效能分析。方法选择2021年12月至2022年12月我院收治的BA患者145例,将其分为急性发作期组(50例)、慢性持续期组(50例)和临床控制期组(45例),另选取50例同期健康体检者为对照组。检测各组的血清lncRNA CASC2、miR-590-5p表达及气道炎症、气道重塑和肺功能指标水平,并分析其相关性。分析血清lncRNA CASC2与miR-590-5p对BA患者气流受限的预测价值。结果对照组、临床控制期组、慢性持续期组、急性发作期组的lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平和肺功能指标水平依次降低,气道炎症、气道重塑指标水平依次升高(P<0.05)。Pearson分析显示,BA患者的lncRNA CASC2、miR-590-5p表达水平与气道炎症、气道重塑指标呈负相关,与肺功能指标呈正相关(P<0.05)。轻、中、重度气流受限患者的血清lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平依次降低(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平联合预测气流受限的曲线下面积(AUC)高于两指标单独预测。结论血清lncRNA CASC2、miR-590-5p在BA患者中低表达可导致气道炎症、气道重塑及气流受限,联合检测血清lncRNA CASC2、miR-590-5p对气流受限程度有较高的预测价值。

急性脑梗死患者血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平及其临床意义

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清微小核糖核酸-106a-5p(miR-106a-5p)、神经损伤诱导蛋白1(NINJ1)、冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的水平及其临床意义。方法选择2022年1月至2023年6月该院神经内科收治的151例ACI患者作为ACI组,另选择同期65例体检健康者作为对照组,根据静脉溶栓后90 d预后情况将ACI患者分为预后不良组和预后良好组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-106a-5p水平,通过酶联免疫吸附试验检测NINJ1、CIRP水平。采用多因素Logistic回归分析影响ACI患者预后的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平对ACI患者预后的预测价值。结果与对照组比较,ACI组血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访90 d,151例ACI患者预后不良发生率为35.10%。与预后良好组比较,预后不良组年龄明显增大,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。年龄增加、NIHSS评分升高和血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平升高均为ACI患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平联合检测预测ACI患者预后不良的曲线下面积为0.937,大于血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平单独检测预测的0.777、0.773、0.778(P<0.05)。结论ACI患者血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平升高是预后不良的独立危险因素,血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平联合检测对ACI患者预后不良有较高的预测价值。

miRNA-589-5p调控氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞损伤的机制

目的 微小核糖核酸-589-5p(miRNA-589-5p)、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)3对氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响,并探索其潜在的作用机制。方法 HBMEC细胞分为对照组、氧糖剥夺组;运用脂质体法将氧糖剥夺+miRNA-con组(转染miRNA-con)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p组(转染miRNA-589-5p的模拟物序列)、氧糖剥夺+miRNA-si-con组(转染miRNA-si-con)、氧糖剥夺+si-HDAC3组(转染si-HDAC3)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA组(共转染miRNA-589-5p的模拟物序列和pcDNA)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA-HDAC3组(共转染miRNA-589-5p mimics和pcDNA-HDAC3)转染至HBMEC,并行氧糖剥夺处理;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western印迹检测细胞中miRNA-589-5p、HDAC3 mRNA表达和HDAC3、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、核因子2相关因子(NRF)2、血红素氧合酶(HO)-1蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH);膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)试剂盒检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测细胞荧光活性。结果 与对照组相比,氧糖剥夺组细胞miRNA-589-5p表达水平明显降低,HDAC3表达、LDH、细胞凋亡率、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达、NRF2/HO-1信号通路关键基因NRF2核蛋白/PCNA、HO-1蛋白表达均显著降低(P<0.05);过表达miRNA-589-5p或沉默HDAC3均可明显抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞上述指标的调控。双荧光素酶报告实验显示,miRNA-589-5p明显抑制野生型HDAC3细胞的荧光活性,并负向调控HDAC3的蛋白表达。过表达HDAC3部分逆转过表达miRNA-589-5p对氧糖剥夺诱导HBMEC细胞的LDH、凋亡的抑制和NRF2/HO-1信号通路的激活作用。结论 miRNA-589-5p抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞的损伤,其作用机制与靶向HDAC3,激活NRF2/HO-1信号通路有关。

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P<0.05),促进Caspase 2表达(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P<0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P<0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P<0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P<0.05),促进Survivin的蛋白表达(P<0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P<0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。

微小RNA-27a-5p对抑郁症大鼠桡骨骨折愈合的影响

目的 探讨微小RNA (miR)-27a-5p对抑郁症大鼠桡骨骨折愈合的影响。方法 将SD大鼠随机分为骨折对照组、骨折+抑郁组、miR-27a-5p agomir(激活剂)阴性对照组、miR-27a-5p agomir组、miR-27a-5p antagomir(抑制剂)阴性对照组、miR-27a-5p antagomir组,除骨折对照组外,其余各组大鼠均通过慢性温和不可预知应激刺激建立抑郁模型。所有大鼠均折断前右肢桡骨中段制备骨折模型,并以miR-27a-5p激活剂及抑制剂进行干预分组后,以强迫游泳实验与蔗糖水消耗实验检测各组大鼠抑郁症状。检测各组大鼠骨折段骨痂量和骨微结构;检测各组大鼠血清炎性因子白细胞介素(IL)-2、IL-6及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测各组大鼠骨痂组织miR-27a-5p、IL-2 mRNA表达。体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),随机分为对照组、miR-27a-5p mimics(模拟物)组、miR-27a-5p mimics阴性对照组、miR-27a-5p inhibitor(抑制剂)组、miR-27a-5p inhibitor阴性对照组。诱导各组细胞成骨分化并以miR-27a-5p模拟物及抑制剂分组干预后,以碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞成骨分化;以qRT-PCR实验检测各组细胞miR-27a-5p、IL-2 mRNA表达。以双荧光素酶报告基因实验检测大鼠BMSC中miR-27a-5p对IL-2的靶向调节作用。结果 与骨折对照组相比,骨折+抑郁组大鼠强迫游泳不动时间延长,血清IL-2、IL-6及RANKL水平、骨痂组织IL-2 mRNA表达升高,蔗糖水消耗量、骨痂量、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量减少,血清OPG水平、骨痂组织miR-27a-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与骨折+抑郁组相比,miR-27a-5p agomir组大鼠强迫游泳不动时间缩短,血清IL-2、IL-6及RANKL水平、骨痂组织IL-2 mRNA表达降低,蔗糖水消耗量、骨痂量、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数量增加,血清OPG水平、骨痂组织miR-27a-5p表达升高,差异有统计学意义(P<0.05), miR-27a-5p antagomir组大鼠各指标变化趋势与miR-27a-5p agomir组相反,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,miR-27a-5p mimics组细胞ALP阳性细胞相对比例、miR-27a-5p表达升高,IL-2 mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05), miR-27a-5p inhibitor组细胞各指标变化趋势与miR-27a-5p mimics组相反,差异有统计学意义(P<0.05)。大鼠BMSC中miR-27a-5p可靶向下调IL-2表达。结论 miR-27a-5p可通过减轻炎症缓解抑郁症大鼠抑郁症状,并促进其桡骨骨折愈合,其分子机制是miR-27a-5p可靶向下调大鼠BMSC中IL-2表达。

sPE患者血清miR-199a-5p、miR-142-3p表达变化及与产妇血管内皮损伤、围产儿结局的关系

目的观察重度子痫前期(sPE)患者血清微小核糖核酸-199a-5p(miR-199a-5p)、微小核糖核酸-142-3p(miR-142-3p)表达变化,并分析其与产妇血管内皮损伤、围产儿结局的关系,为围产儿结局的改善提供参考。方法选取sPE患者200例(观察组)和产检健康孕妇200例(对照组),采用RT-PCR法测算两组血清miR-199a-5p、miR-142-3p,酶联免疫吸附试验检测两组血清可溶性细胞内皮因子(sEng)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF),Pearson相关分析法分析观察组血清miR-199a-5p、miR-142-3p与血管内皮功能相关指标的相关性。根据围产儿结局将观察组分为结局不良组(29例)和结局良好组(171例),采用单因素分析法及多因素Logistic回归分析法分析患者血清miR-199a-5p、miR-142-3p表达与围产儿结局的关系。结果与对照组比较,观察组血清miR-199a-5p表达及VEGF水平降低,血清miR-142-3p表达及sEng、sFlt-1、ET-1水平升高(P均<0.05)。观察组血清miR-199a-5p表达与sEng、sFlt-1、ET-1水平呈负相关,与VEGF水平呈正相关(P均<0.05);血清miR-142-3p表达与sEng、sFlt-1、ET-1水平呈正相关,与VEGF水平呈负相关(P均<0.05)。结局不良组和结局良好组年龄、早发型sPE比例、并发水肿比例、并发子痫比例、并发胎盘早剥比例、并发产后出血比例、血清miR-142-3p表达变化、血清miR-199a-5p表达变化比较,P均<0.05;多因素Logistic回归分析显示,早发型sPE、胎盘早剥、miR-142-3p高表达是sPE围产儿结局不良的危险因素(P均<0.05),miR-199a-5p高表达是sPE围产儿结局不良的保护因素(P<0.05)。结论sPE患者血清miR-199a-5p表达降低、miR-142-3p表达升高,与血管内皮损伤有关,miR-142-3p高表达是sPE围产儿结局不良的危险因素,miR-199a-5p高表达是sPE围产儿结局不良的保护因素。

微小RNA-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期

目的探讨卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)相关疱疹病毒(KSHV)编码的微小RNAs(miR),如miR-K1-5p,对KS细胞周期的调控作用及其机制。方法该研究进行于2020年1—12月,人脐静脉内皮细胞购自美国ScienCell。生物信息学软件预测miR-K1-5p的靶基因。双萤光素酶试验验证miR-K1-5p的靶基因[细胞周期素依赖性激酶抑制剂4(CDKN4)]。将miR-K1-5p模拟物转染后,行蛋白质印迹法(Western blotting)和q-PCR检测,分析G1/S期相关基因CDKN4、细胞周期蛋白A/细胞周期素依赖性激酶2(Cyclin A/CDK2)、细胞周期蛋白D2/细胞周期素依赖性激酶4(Cyclin D2/CDK4)的表达。碘化丙啶(PI)染色检测miR-K1-5p对内皮细胞(HUVECs)周期的影响。结果miR-K1-5p靶向CDKN4(miR-K1-5p mimics+CDKN4-WT组、mimics NC+CDKN4-WT组、miR-K1-5p mimics+CDKN4-MUT组、mimics NC+CDKN4-MUT组萤光素酶活性分别为0.42±0.05、0.81±0.04、0.82±0.03、0.80±0.05),负性调控CDKN4的表达(P<0.001),正性调控Cyclin A/CDK2和CyclinD2/CDK4的表达(P<0.05)。此外,miR-K1-5p可以加速细胞周期进程,促进G1/S期转换[S+G2期/G1+S+G2期:mimics组(23.37±0.29)%比mimics NC组(15.00±0.75)%,G1期:mimics组(76.63±0.28)%比mimics NC组(85.00±0.76)%,S期:mimics组(15.34±0.36)%比mimics NC(8.45±0.20)%,G2期:mimics组(8.02±0.17)%比mimics NC组(6.55±0.80)%]。结论miR-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期。

基于NIHSS评分分析ACI患者YKL-40、Lp-PLA2和miR-151a-3p表达意义及与预后关系

目的 探讨基于NIHSS评分分析急性脑梗死(ACI)患者几丁质酶样蛋白-40(YKL-40)、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)和微小核糖核酸-151a-3p(miR-151a-3p)表达意义及与预后关系。方法 选取2020年12月至2021年12月我院收治的102例ACI患者为研究组,另选同期50例健康体检者为对照组,分别对2组进行YKL-40、Lp-PLA2和miR-151a-3p检测。分析2组YKL-40、Lp-PLA2和miR-151a-3p表达水平;研究组患者根据NIHSS评分分为轻度、中度、重度3组并对比3组YKL-40、Lp-PLA2和miR-151a-3p表达水平;分析ACI患者YKL-40、Lp-PLA2和miR-151a-3p与NIHSS评分相关性及影响预后因素。结果 与对照组比较,研究组患者YKL-40、Lp-PLA2和miR-151a-3p表达水平较高(P<0.001);随着NIHSS评分增高,ACI患者YKL-40、Lp-PLA2和miR-151a-3p表达水平逐渐升高(P<0.001);经过6个月随访,失访8例,剩余94例,预后良好74例(78.72%),预后不良20例(21.28%),与预后良好组比较,预后不良组患者的YKL-40、Lp-PLA2、miR-151a-3p表达水平较高(P<0.001);YKL-40、Lp-PLA2、miR-151a-3p是ACI患者预后不良的独立危险因素(P<0.001)。结论 YKL-40、Lp-PLA2和miR-151a-3p在ACI预后不良患者中呈高表达水平,并随NIHSS评分增高而升高,均与NIHSS评分呈正相关。

血清miR-92a-1-5p及miR-92a-2-5p表达水平与老年卒中后抑郁的关系

目的分析血清微小核糖核酸-92a-1-5p(miR-92a-1-5p)、miR-92a-2-5p表达水平与老年卒中后抑郁的关系。方法选取2018年2月至2020年10月胶州中心医院收治的129例老年卒中患者为研究组,另选取110名同期健康体检者为对照组,均检测血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达。采用汉密尔顿抑郁量表评估研究组入院后1个月内合并抑郁情况。采用SPSS 23.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用单因素方差分析或χ^(2)检验进行组间比较。采用logistic回归分析法分析老年卒中患者合并抑郁的影响因素。结果研究组患者血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平均高于对照组(P<0.05)。研究组患者入院1个月后合并抑郁患者(抑郁组)占比为37.98%(49/129),其血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表达水平均高于未合并抑郁患者(非抑郁组)(P<0.05)。女性、美国国立卫生研究院卒中量表评分、基底节病变、左额病变、文化程度为高中以上、家庭支持度降低、血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达升高均为老年卒中后抑郁的危险因素(P<0.05)。结论老年卒中患者血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表达高,且可增加老年卒中后抑郁风险。

急性心肌梗死患者血清miR-423-5P,Bcl-2和LC3-II水平表达与预后相关性研究

目的探讨血清miR-423-5P,Bcl-2和LC3-II对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者预后的影响。方法筛选2017年3月~2018年10月收治于邯郸市第一医院心内科的122例AMI患者为研究对象,根据随访期间(一年)是否发生主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)分为MACE组(n=43)和非MACE组(n=79),同期体检健康志愿者(n=50)作为对照组,分别采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测患者血清miR-423-5P,Bcl-2和LC3-II表达水平。比较两组患者血清miR-423-5P,Bcl-2和LC3-II的表达差异,并用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线图分析对急性心肌梗死患者预后的价值。结果对照组miR-423-5P(0.91±0.12),Bcl-2(1.13±0.21ng/ml)和LC3-II(0.73±0.16 ng/ml)均低于MACE组(1.42±0.22,4.25±0.34 ng/ml,1.25±0.31g/ml)和非MACE组(1.13±0.11,2.01±0.28ng/ml,1.21±0.06 ng/ml),差异均具有统计学意义(F=151.155,1880.468,115.625,均P<0.05);MACE组血清m IR-423-5P和Bcl-2表达均高于非MACE组,差异具有统计学意义(t=9.716,39.093,均P<0.05),两组间血清LC3-II的表达差异无统计学意义(t=1.113,P>0.05)。ROC曲线显示,miR-423-5P,Bcl-2预测急性心肌梗死患者预后的曲线下面积分别为0.813和0.776,截断值分别为1.213和4.012 ng/ml,灵敏度分别为0.721和0.702,特异度分别为0.734和0.737;二者联合检测时,曲线下面积、灵敏度和特异度分别为0.852,0.832,0.827。结论血清mIR-423-5P,Bcl-2水平与急性心肌梗死患者预后密切相关,有可能成为判断预后的标志物,且两者联合应用的效果优于单独应用。

腰痛患者血清miR-133a-5p,SIRT1水平表达与功能障碍指数及疼痛评分的相关性研究

目的 探究血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-133a-5p和沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)水平变化与腰痛(low back pain,LBP)患者疼痛和功能障碍的相关性。方法 选取2019年5月~2022年4月在上海市长宁区天山中医医院骨伤科就诊治疗的89例LBP患者为研究组,另选取同期90例体检健康志愿者为对照组。采用Oswestry腰痛功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI)评估LBP患者腰痛功能障碍;采用视觉模拟疼痛评分(visual anallogue scale,VAS)评估LBP患者疼痛程度;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清miR-133a-5p和SIRT1表达水平;Pearson相关性检验分析血清miR-133a-5p和SIRT1表达水平与ODI指数和VAS评分的相关性;多因素Logistic回归分析LBP发生的影响因素。结果 研究组、对照组在饮酒史、体力活动强度、抑郁和焦虑方面比较差异具有统计学意义(χ^(2)=5.372,9.391,10.087,12.576,均P <0.05);与对照组比较,研究组血清miR-133a-5p(0.66±0.12 vs 1.01±0.15)和SIRT1(0.84±0.14 vs 1.12±0.18)表达水平明显降低,差异具有统计学意义(t=17.226,11.214,均P=0.000);与对照组比较,研究组ODI指数(28.86%±4.39%vs 9.86%±1.91%)和VAS评分(5.26±1.47分vs 1.34±0.21分)明显升高,差异具有统计学意义(t=37.617,25.042,均P=0.000);LBP患者血清miR-133a-5p表达水平与ODI指数和VAS评分呈显著负相关(r=-0.520,-0.416,均P <0.05);血清SIRT1表达水平与ODI指数和VAS评分呈显著负相关(r=-0.661,-0.588,均P <0.05)。Logistic回归分析结果显示,miR-133a-5p(OR=0.602,95%CI:0.464~0.788)和SIRT1(OR=0.569,95%CI:0.481~0.816)是LBP发生的保护因素(均P <0.05),饮酒(OR=1.104,95%CI:1.102~1.719)、抑郁(OR=1.328,95%CI:1.116~1.894)和高强度体力活动(OR=1.224,95%CI:1.097~1.862)是LBP发生的独立危险因素(均P <0.05)。结论 miR-133a-5p和SIRT1在LBP患者血清中表达降低,且与LBP患者疼痛程度和功能障碍具有相关性。

IRS-1/PI3K/Akt2信号通路调控miR-139-5p对2型糖尿病大鼠的干预效果

目的分析基于胰岛素受体底物1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt2)信号通路调控微小核糖核酸139-5p(miR-139-5p)对2型糖尿病大鼠的干预效果。方法选取52只雄性SPF级Wistar大鼠,12只大鼠作为对照组,另外40只建立2型糖尿病模型,将建模成功36只大鼠采用随机数字表法分为模型组、沉默组、过表达组,每组各12只。对照组、模型组大鼠注射同剂量0.9%氯化钠溶液,沉默组大鼠尾静脉注射10μL miR-139-5p沉默慢病毒悬液,过表达组大鼠尾静脉注射10μL miR-139-5p过表达慢病毒悬液,于miR-139-5p转染后,对各组大鼠毛发光泽度、活动、形态等一般情况进行观察。对各组大鼠miR-139-5p、IRS-1、PI3K、Akt2表达量、血糖相关指标[胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹胰岛素、空腹血糖、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)]、炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平、血脂变化水平、IRS-1/PI3K/Akt2信号通路蛋白表达量进行检测。结果与对照组相比,模型组、沉默组、过表达组miR-139-5p表达量、HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、磷酸化IRS-1(p-IRS-1)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt2、磷酸化Akt2(p-Akt2)表达量均降低,HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,沉默组、过表达组miR-139-5p表达量、HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯均降低,HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、Akt2、p-Akt2表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与沉默组相比,过表达组miR-139-5p相对表达量、HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯降低,HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、Akt2、p-Akt2表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-139-5p表达,可调节2型糖尿病大鼠体内血糖、血脂水平,其机制可能与IRS-1/PI3K/Akt2信号通路有关。