miR-122-5p、miR-143-3p及炎症因子IL-6、IL-10在双酚A和高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病中的表达及意义

目的探究双酚A(BPA)暴露对C57BL/6J小鼠肝脏脂质代谢的影响及作用机制。方法8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为单纯普通饲料组(ND组)、普通饲料低剂量BPA组(BPA-50 ND组)、普通饲料高剂量BPA组(BPA-500 ND组)、单纯高脂饲料组(HFD组)、高脂饲料低剂量BPA组(BPA-50 HFD组)、高脂饲料高剂量BPA组(BPA-500 HFD组),低剂量和高剂量BPA组干预剂量分别为50、500μg/(kg·d),连续灌胃12周。通过HE染色分析小鼠肝脏组织变化情况;采用qRT-PCR法和ELISA法检测肝脏中miR-122-5p、miR-143-3p及外周血清白细胞介素(IL)-6和IL-10的表达水平。结果HE染色:ND组小鼠肝小叶结构完整,其余各组小鼠呈现不同程度的脂滴浸润及肝小叶破坏。随着BPA的添加和浓度升高及高脂饮食摄入,外周血IL-6浓度逐渐上升,IL-10浓度逐渐下降。普通饲料组随着BPA的添加及浓度加大,miR-122-5p和miR-143-3p表达水平逐渐降低,但高脂饮食组中随着BPA的添加及浓度加大,二者表达水平呈逐渐上升趋势。Pearson相关分析显示:普通饲料组中miR-122-5p和miR-143-3p表达水平与IL-10浓度呈正相关(P<0.01);高脂饮食组中miR-122-5p表达水平与IL-6浓度呈正相关(P<0.05),miR-143-3p表达水平与IL-10浓度呈负相关(P<0.05)。结论双酚A可通过调控miR-122-5p、miR-143-3p的表达和调节炎症因子IL-6、IL-10的水平诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生及进展。

胰腺癌外周血miR-122-5p、NOC2L表达与临床病理特征及预后的相关性

目的研究胰腺癌(PAC)外周血miR-122-5p、NOC2类核仁相关转录阻遏物(NOC2L)表达与临床病理特征及预后的相关性。方法选择2020年1月—2023年1月荆州市第一人民医院肝胆胰外科诊治的胰腺癌患者(PAC组,97例)及胰腺良性疾病患者(对照组,53例)为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血miR-122-5p、NOC2L表达;比较不同临床病理特征中miR-122-5p、NOC2L表达差异;Spearman秩相关分析miR-122-5p、NOC2L与临床病理特征的相关性;采用ROC曲线及DeLong法比较miR-122-5p、NOC2L在胰腺癌预后不良预测中的敏感度及特异度;多因素Cox回归分析胰腺癌预后不良的危险因素。Kaplan-Meier生存模型分析并Log Rank比较不同外周血miR-122-5p和NOC2L表达中生存期的差异。结果PAC组患者外周血miR-122-5p表达低于对照组,NOC2L表达高于对照组(t/P=28.061/<0.001、29.701/<0.001)。组织学分级3级、原发肿瘤直径≥4 cm、淋巴结转移N2、远处转移M1及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者外周血miR-122-5p表达低于组织学分级1~2级、原发肿瘤直径<4 cm、淋巴结转移N0~1、远处转移M0及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者(t/P=5.935/<0.001、2.801/0.006、3.284/0.001、3.583/<0.001、6.567/<0.001),NOC2L表达高于组织学分级1~2级、原发肿瘤直径<4 cm、淋巴结转移N0~1、远处转移M0及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者(t/P=2.039/0.044、3.318/0.001、2.287/0.024、2.417/0.018、3.943/<0.001);胰腺癌患者外周血miR-122-5p表达与组织学分级、原发肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及TNM分期呈负相关(r_(s)/P=-0.713/0.016、-0.678/0.021、-0.764/0.009、-0.695/0.011、-0.732/0.004),NOC2L表达与组织学分级、原发肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及TNM分期呈正相关(r_(s)/P=0.657/0.039、0.701/0.014、0.726/0.019、0.672/0.028、0.717/0.015);miR-122-5p、NOC2L及二者联合预测胰腺癌预后不良的AUC分别为0.735、0.719、0.863,二者联合优于各自单独预测效能(Z/P=9.412/<0.05、10.013/<0.05);miR-122-5p≤0.69、NOC2L≥1.21、组织学分级3级、原发肿瘤直径≤4 cm、淋巴结转移N2、远处转移M1、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期为胰腺癌预后不良的独立危险因素[HR(95%CI)=4.051(1.217~6.885)、4.063(1.159~6.968)、1.723(1.013~2.433)、1.831(1.022~2.641)、2.036(1.141~2.932)、2.300(1.097~3.503)、2.474(1.115~3.834)]。miR-122-5p≤0.69且NOC2L≥1.21胰腺癌患者中位生存期显著短于其他患者(miR-122-5p>0.69或NOC2L<1.21)(Log Rank=12.573,P<0.001)。结论胰腺癌外周血miR-122-5p及NOC2L表达与临床病理特征及预后密切相关,在预后及病情预测中具有一定临床价值,两者联合检测时可提高在胰腺癌预后不良预测中的敏感度及特异度。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

miR-122-5p靶向调控人骨髓间充质干细胞诱导成骨分化的分子机制研究

目的:研究miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导的作用分子机制。方法:运用茜素红S、碱性磷酸酶活性ALP染色试剂盒检测hBMSCs成骨分化的钙结节与成骨活性;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-122-5p与BRCC3之间的靶向关系;运用qRT-PCR分别检测Runx2、Osterix、wnt3a、β-catenin、GSK3-β、miR-122-5以及BRCC3基因的表达情况;Western印迹检测β-catenin蛋白的表达量。结果:过表达miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导21天后的钙结节与干细胞成骨活性均有明显促进作用,对成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Os‐terix及wnt3a、β-catenin、GSK3-β主要基因均激活作用,过表达BRCC3对干细胞成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Osterix及wnt3a、β-catenin、GSK3-β主要基因有抑制作用;并且通过双荧光素酶报告基因与回复性实验确定miR122-5p与BRCC3之间的靶向关系,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-122-5p靶向抑制BRCC3的表达诱导hBMSCs细胞通过wnt/β-catenin通路进行成骨分化诱导。

彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值

目的 探讨彩色多普勒超声检查联合血清微小RNA(miRNA)-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的早期诊断价值以及与卵巢癌周围血管侵袭的相关性。方法 回顾性选取2019年5月至2021年12月沧州市中心医院收治的102例卵巢肿瘤患者为研究对象,所有患者均行彩色多普勒超声检查,采用实时定量聚合酶链反应测定血清中miR-122-5p和miR-106b的表达水平。以病理诊断结果作为金标准,将研究对象分为卵巢癌组(n=51)和良性卵巢肿瘤组(n=51);卵巢癌组又分为侵袭组(n=32)和非侵袭组(n=19)。比较卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组的临床资料(年龄、体重指数、生育和绝经)、彩色多普勒超声图像特征(实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4、肿瘤最大直径>10 cm)、彩色多普勒超声血流参数[搏动指数(PI)和血流阻力指数(RI)]、血清miR-122-5p、miR-106b水平。应用多因素Logistic回归模型探究相关变量对卵巢癌的独立预测作用。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值。并比较侵袭组与非侵袭组彩色多普勒超声血流参数及血清miR-122-5p、miR-106b水平,采用Pearson相关性分析对彩色多普勒超声血流参数、miR-122-5p、miR-106b与卵巢癌周围血管侵袭的相关性进行分析。结果 卵巢癌组实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4以及肿瘤最大直径>10 cm所占比例分别为80.39%、76.47%、74.51%、78.43%,均高于良性卵巢肿瘤组(9.80%、11.76%、29.41%、45.10%),PI、RI、血清miR-122-5p表达水平分别为0.94±0.27、0.48±0.11、1.01±0.27,均低于良性卵巢肿瘤组(1.47±0.32、0.71±0.19、1.42±0.30),miR-106b表达水平为4.57±1.13,高于良性卵巢肿瘤组(2.86±0.65),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,PI、RI、miR-122-5p、miR-106b是卵巢癌的独立预测因子,OR值分别为1.080、1.116、1.689、1.301(P<0.05)。ROC曲线分析显示,PI、RI、miR-122-5p和miR-106b以及联合诊断卵巢癌的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.874、0.859、0.898、0.969,其联合诊断的价值高于单独应用。侵袭组PI、RI和血清miR-122-5p表达水平均低于非侵袭组,血清miR-106b表达水平高于非侵袭组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,彩色多普勒超声血流参数PI、RI及血清miR-122-5p水平与卵巢癌周围血管侵袭呈负相关(r=-0.743、-0.696、-0.822,P<0.05),血清miR-106b水平与卵巢癌周围血管侵袭呈正相关(r=0.863,P<0.05)。结论 彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平可以提高卵巢癌的早期诊断价值,并且可根据这些指标评估卵巢癌周围血管侵袭程度,值得应用推广。

冠心病患者血清miR-122-5p变化及与斑块稳定程度、预后的关系

目的分析冠心病(CHD)患者血清微小RNA-122-5p(miR-122-5p)变化及与斑块稳定程度、预后的关系。方法选取2019年8月至2021年8月张家口市第五医院186例CHD患者作为研究组,根据斑块稳定程度分为不稳定斑块组(n=58)及稳定斑块组(n=128),另取同期健康体检者90名作为对照组,检测比较所有受试者血清miR-122-5p水平,采用ROC曲线分析血清miR-122-5p水平对CHD患者斑块稳定程度的诊断价值。记录CHD患者治疗后随访1年内心血管不良事件发生情况,并将心血管不良事件发生情况作为评估预后的标准,将研究组分为预后不良组(n=50)及预后良好组(n=136),采用单因素及多因素Logistic分析影响CHD患者预后的因素。结果研究组血清miR-122-5p水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不稳定斑块组血清miR-122-5p水平均高于稳定斑块组,差异有统计学意义(P<0.05);由ROC曲线可知,血清miR-122-5p诊断CHD患者斑块稳定程度的AUC为0.845(P<0.05);预后不良组血清miR-122-5p水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic分析显示,血清miR-122-5p水平过高是CHD患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论miR-122-5p在CHD患者血清中呈高表达,对斑块稳定程度具有一定的诊断价值,其水平过高是CHD患者预后不良的独立危险因素。

lncRNA SNHG7通过miR-122-5p/CCND1轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(lncRNA SNHG)7通过miR-122-5p/细胞周期蛋白(CCN)D1轴对胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测体外培养的人胃癌细胞株NCI-N87、SNU-1、MKN-45和人胃癌组织源细胞、人胃黏膜上皮细胞中lncRNA SNHG7、miR-122-5p与CCND1表达。体外培养的人胃癌细胞MKN-45,随机分为对照组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)组、lncRNA SNHG7 siRNA阴性对照(si-NC)组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)+miR-122-5p inhibitor组,分组转染后,检测各组MKN-45细胞增殖、凋亡、活化CD8+T细胞杀伤率、miR-122-5p及CCND1、细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡蛋白〔B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3〕表达,并检测lncRNA SNHG7对MKN-45细胞miR-122-5p的靶向调节作用。结果与胃黏膜上皮细胞相比,胃癌组织源和MKN-45、SNU-1、NCI-N87细胞lncRNA SNHG7、CCND1 mRNA表达明显升高,miR-122-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,si-lncRNA SNHG7组细胞活力、EdU阳性率、细胞CCND1、PCNA蛋白表达明显降低,凋亡率、活化CD8+T细胞对各组MKN-45细胞的杀伤率、miR-122-5p及Bax、caspase-3蛋白表达明显升高(均P<0.05);si-NC组细胞各指标均无显著差异(P>0.05);lncRNA SNHG7 siRNA和miR-122-5p inhibitor联合可逆转lncRNA SNHG7 siRNA对细胞各指标的作用。lncRNA SNHG7可靶向下调MKN-45细胞miR-122-5p表达。结论下调lncRNA SNHG7可通过上调miR-122-5p而降低CCND1表达,进而抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡,并减轻其免疫逃逸。

miR-122-5p和miR-183-5p在脑出血患者中的表达水平及其与神经损伤的相关性

目的 分析脑出血患者神经损伤的影响因素和微小RNA-122-5p(miR-122-5p)、微小RNA-183-5p(miR-183-5p)血清水平对患者神经损伤的诊断价值,探讨二者水平与患者神经损伤的关系。方法 选取2021年6月至2023年7月于绵阳市中心医院住院治疗的146例脑出血患者作为研究对象,依据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)将患者分为轻度损伤组(85例)和中重度损伤组(61例)。实时荧光定量PCR检测两组患者血清miR-122-5p、miR-183-5p水平;比较两组患者的一般临床资料和血清水平;分析患者血清miR-122-5p、miR-183-5p水平与神经损伤之间的相关性;多因素Logistic回归分析脑出血患者神经损伤程度的影响因素,并分析血清miR-122-5p、miR-183-5p水平对患者神经损伤程度的诊断价值。结果 中重度损伤组患者NIHSS评分和血清miR-122-5p水平均高于轻度损伤组,血清miR-183-5p水平则低于轻度损伤组。miR-122-5p与miR-183-5p水平之间、miR-183-5p水平与NIHSS评分之间均呈负相关;miR-122-5p水平与NIHSS评分呈正相关。多因素Logistic回归分析表明,血肿体积、NIHSS评分、血清miR-122-5p水平为脑出血患者中重度神经损伤的危险因素,miR-183-5p血清水平为其保护因素。ROC曲线分析表明,miR-122-5p和miR-183-5p血清水平可作为脑出血患者中重度神经损伤程度的诊断指标,联合诊断的ROC曲线下面积(AUC)和Youden指数更高。结论 脑出血患者的血清miR-122-5p、miR-183-5p水平与神经损伤密切相关,二者联合检测对脑出血患者神经损伤具有较高的临床诊断价值。

UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究

目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1(CPEB1)轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究。方法通过实时荧光反转录定量PCR(RT-qPCR)检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株。通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合。药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度(IC50);通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系。结果miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高。CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1 mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌(AUC=0.849),进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联。结论UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性。UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点。

血清miR-122-5p、miR-618、miR-202联合检测对原发性肝癌的诊断价值分析

目的分析血清微小核糖核苷酸-122-5p(miR-122-5p)、微小核糖核苷酸-618(miR-618)、微小核糖核苷酸-202(miR-202)联合检测对原发性肝癌的诊断价值。方法选取应急总医院2022年1月~2023年1月收治的原发性肝癌患者118例纳入原发性肝癌组,另择同期120例良性肝脏疾病患者纳入良性组,120例健康体检者为健康对照组,回顾性收集临床资料。比较3组研究对象血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平,通过Pearson相关性分析分析血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平之间的相关性;以原发性肝癌组作为阳性组,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的诊断价值。结果原发性肝癌组血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平低于良性组和健康对照组,良性组低于健康对照组,差异有统计学意义(F=193.644、88.486、105.045,P<0.05)。年龄≥60岁、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、乙型肝炎病毒(HBV)感染、肿瘤数目多发的原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平更低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202间表达水平均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的预测价值分析曲线下面积(AUC)分别为0.839、0.814、0.807、0.932,灵敏度分别为85.59%、84.75%、79.66%、88.98%,特异度分别为75.00%、68.75%、70.00%、85.42%,联合检测均为最高。结论随着原发性肝癌发生及病情进展患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202表达水平降低,联合检测对原发性肝癌的诊断价值较高。

胎盘源性外泌体miR-122-5p改善妊娠糖尿病脐静脉内皮细胞功能损伤的机制研究

目的探讨胎盘源性外泌体(Exo)miR-122-5p改善妊娠糖尿病(GDM)小鼠脐静脉内皮细胞(MUVECs)功能损伤的机制。方法取妊娠小鼠腹腔注射0.25%链脲佐菌素溶液以诱导GDM模型(GDM组),对照组小鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液,检测两组FPG和胰岛素水平验证模型。采用HE染色观察小鼠胎盘组织形态,qRT-PCR法检测miR-122-5p表达情况,Western blot法检测核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体相关蛋白[包括NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白、半胱氨酸蛋白酶-1]表达。采用差速离心法获得胎盘源性Exo,并采用透射电子显微镜和纳米颗粒追踪分子对Exo表征进行鉴定;与MUVECs共培养后,采用免疫荧光法观察MUVECs对Exo的摄取。采用噻唑蓝法、流式细胞术、Transwell实验和血管形成实验检测MUVECs细胞活性、凋亡能力、迁移能力和成管能力。结果GDM组小鼠FPG水平明显高于对照组(P<0.001),胰岛素水平低于对照组(P<0.001),提示模型构建成功。与对照组相比,GDM组小鼠胎盘组织出现明显损伤,miR-122-5p表达水平降低,NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MUVECs能对胎盘源性Exo进行摄取,且GDM小鼠胎盘Exo上调了MUVECs中miR-122-5p表达水平(P<0.001)。GDM小鼠胎盘Exo共培养的MUVECs较对照小鼠胎盘Exo共培养的MUVECs细胞活性增强,凋亡能力减弱,迁移能力和成管能力均增强,且NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。过表达miR-122-5p的MUVECs细胞活性增强,凋亡能力减弱,迁移能力和成管能力均增强,NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);抑制miR-122-5p表达后,MUVECs细胞活性减弱,凋亡能力增强,迁移能力和成管能力均减弱,NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胎盘源性Exo的miR-122-5p对GDM MUVECs起到保护作用,且可能通过调控NLRP3炎症小体的活化来改善MUVECs的损伤。

miR-122-5p通过靶向Circ_MTM1在HBV相关肝纤维化中的分子机制研究

目的:研究微小核糖核酸microRNA-122-5p (miR-122-5p)对HBV感染相关肝纤维化的作用及分子机制。方法:分别用采用HBsAg、HBeAg酶联免疫吸附剂测定(ELISA)试剂盒和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HBV表面抗原(HBsAg)、抗原(HBeAg)水平以及HBV DNA、HBV共价闭合环状DNA (cccDNA)水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测相应蛋白水平。RT-qPCR检测人肝星状细胞(LX-2细胞)和HBV相关肝纤维化组织细胞中Circ_MTM1、miR-122-5p的表达情况。应用生物信息学软件StarBaseV3.0预测miR-122-5p的可能靶基因,并应用双荧光素酶检测方法判定miR-122-5p对其靶基因Circ_MTM1表达的调节作用。结果:miR-122-5p在HBV相关性肝纤维化组织和细胞中低表达,而Circ_MTM1在HBV相关性肝纤维化组织和细胞中高表达。miR-122-5p靶向下调Circ_MTM1的表达,通过下调Circ_MTM1可抑制HBV相关肝纤维化的进程。结论:miR-122-5p与Circ_MTM1在HBV相关肝纤维化中存在靶向关系,Circ_MTM1通过调控肝纤维化相关蛋白的水平在HBV相关肝纤维化进程中起到启动子作用。

2型糖尿病患者血清hsa-miR-30c-5p水平表达对微血管并发症的预测价值研究

目的探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血清人微小核糖核酸(homo sapiensmicroRNA,hsa-miR)-30c-5p表达对微血管并发症的预测价值。方法选取2021年5月~2022年9月巴中市中心医院收治的T2DM患者205例为糖尿病组,并根据患者微血管并发症情况将糖尿病组进一步分为并发组(n=124)和未并发组(n=81),另选取同期健康体检者205例为对照组,均采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerasechain reaction,RT-PCR)检测受试者血清hsa-miR-30c-5p表达并进行比较。采用多因素Logistic回归分析影响微血管并发症的因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线预测血清hsa-miR-30c-5p表达对T2DM患者发生微血管并发症的价值。结果并发组、未并发组的血清hsa-miR-30c-5p表达分别为0.58±0.06,0.72±0.08,均低于对照组(0.89±0.21),差异具有统计学意义(t=16.038,7.079,均P=0.001);并发组低于未并发组,差异具有统计学意义(t=14.289,P=0.001)。糖尿病病程[OR(95%CI):3.873(2.976~4.770)]、尿酸[OR(95%CI):2.125(1.211~3.040)]、糖化血红蛋白[OR(95%CI):2.680(1.745~3.616)]均为T2DM患者发生微血管并发症的独立危险因素(均P<0.05),葡萄糖目标范围内时间[OR(95%CI):0.491(0.135~0.846)]、血清hsa-miR-30c-5p[OR(95%CI):0.532(0.146~0.817)]均为T2DM患者发生微血管并发症的保护因素(均P<0.05)。血清hsa-miR-30c-5p表达预测T2DM患者发生微血管并发症的敏感度、特异度、曲线下面积(95%置信区间)分别为81.45%,85.19%,0.802(0.741~0.854)。结论T2DM患者血清hsa-miR-30c-5p表达异常降低,且血清hsa-miR-30c-5p为T2DM患者发生微血管并发症的保护因素,对T2DM患者发生微血管并发症具有一定的预测价值。

妊娠期糖尿病患者血清microRNA-122联合microRNA-7047-5p预测不良围生儿结局价值

目的探讨妊娠期糖尿病患者血清microRNA-122(miR-122)联合microRNA-7047-5p(miR-7047-5p)预测不良围生儿结局价值。方法选取2018年4月—2023年4月亳州市人民医院接收的100例妊娠期糖尿病患者作为观察组,选取同期该院孕检的90例健康孕妇作为对照组。检测两组血糖水平、血清miR-122、miR-7047-5p,采用Pearson法分析评估血清miR-122、miR-7047-5p水平与血糖水平的相关性;根据随访结果将观察组围生儿结局分为良好组(85例)与不良组(15例),比较两组血清miR-122、miR-7047-5p相对表达量,构建受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-122、miR-7047-5p联合预测妊娠期糖尿病患者不良围生儿结局的价值。结果观察组空腹血糖(FBG)、2 h餐后血糖(2 hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平高于对照组(P<0.05)。观察组miR-122相对表达量高于对照组(P<0.05),miR-7047-5p相对表达量低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-122与FBG、2hPG、HbA1c均呈正相关(r=0.167、0.228和0.255,均P<0.05),miR-7047-5p与FBG、2 hPG、HbA1c均呈负相关(r=-0.358、-0.408和-0.386,均P<0.05)。不良组miR-122相对表达量高于良好组(P<0.05),miR-7047-5p相对表达量低于良好组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-122和miR-7047-5p联合预测GDM患者不良围生儿结局的敏感性为73.3%(95%CI:0.449,0.922),特异性为85.9%(95%CI:0.766,0.925),曲线下面积为0.836(95%CI:0.720,0.952)。结论在妊娠期糖尿病患者中,血清microRNA-122和microRNA-7047-5p与血糖水平相关,且两者联合检测可以有效预测GDM患者的不良围生儿结局,具有较高的预测敏感性和特异性。

高、低表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的调控作用

目的探讨高、低表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体对食管鳞癌细胞(ESCC)迁移和侵袭的调控作用及其机制。方法提取转染miR-296-5p过表达和miR-296-5p干扰及其阴性对照物(NC)后的ESCC细胞外泌体,并采用透射电镜与Western blotting法进行鉴定;将ESCC细胞分为三组,干扰组、过表达组分别加入miR-296-5p干扰或过表达细胞的外泌体培养,NC组加入NC转染细胞的外泌体培养48 h;取各组细胞,MTT法检测细胞活力、Transwell法检测细胞侵袭迁移能力,RT-PCR、Western blotting法检测细胞黏附分子3(CADM3)、CADM1、CADM4、钙黏蛋白E(E-cadherin)及血管内皮细胞生成浸润相关蛋白CD31、CD44。结果细胞活力、迁移和侵袭细胞数过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05)。细胞中CADM1、CADM4、E-cadherin基因及蛋白表达水平干扰组>NC组>过表达组,CADM3、CD31、CD44基因及蛋白表达水平过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05)。结论高表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体可能通过调控CADM、E-cadherin、CD31、CD44等基因表达提高ESCC细胞的侵袭、迁移能力。

胶质瘤组织lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达与临床特征及预后的关系研究

目的探讨胶质瘤组织长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)25、微小RNA(miR)-497-5p表达与临床特征及预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月该院收治的157例胶质瘤患者为胶质瘤组,同期该院100例因颅脑损伤接受手术治疗的患者为对照组。分别取术中切除的胶质瘤组织和正常脑组织检测lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平,术后随访3年。分析lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p的相关性,lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平与患者临床特征和预后的关系。结果与对照组比较,胶质瘤组lncRNA SNHG25表达水平升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。与肿瘤最大径<4 cm、世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分级Ⅰ~Ⅱ级比较,肿瘤最大径≥4 cm、WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级的胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。胶质瘤患者的lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p呈负相关(r=-0.370,P<0.05)。lncRNA SNHG25高表达组累积生存率低于lncRNA SNHG25低表达组(P<0.05),miR-497-5p低表达组累积生存率低于miR-497-5p高表达组(P<0.05)。WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、lncRNA SNHG25高表达是胶质瘤患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-497-5p高表达则是保护因素(P<0.05)。结论胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低,且与肿瘤最大径增大、WHO中枢神经系统肿瘤分级高有关,可导致胶质瘤患者不良预后。

长链非编码RNA DLEU2通过miR-30a-5p/CD61对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸淋巴细胞白血病缺失基因2(LncRNA DLEU2)通过靶向微小核糖核酸(miR)-30a-5p/整合素β3(CD61)对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响。方法取人结肠癌细胞株SW1116培养并随机分为si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-30a-5p mimics组、miR-30a-5p抑制剂阴性对照(NC inhibitor)+si-LncRNA DLEU2组及miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组,同时设置未转染细胞为空白组;转染48 h后,采用荧光显微镜检测细胞转染效率,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞LncRNA DLEU2和miR-30a-5p表达、CD61、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-Myc mRNA和蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR检测LncRNA DLEU2与miR-30a-5p的靶向关系、miR-30a-5p与CD61的靶向关系;制作雄性胸腺BALB/c裸鼠异种移植瘤模型评估LncRNA DLEU2对肿瘤生长的影响。结果si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、miR-NC组、miR-30a-5p mimics组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组、miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组转染效率均>85%;与空白组及si-NC组比较,si-LncRNA DLEU2组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组增殖抑制率上升(P<0.05),DLEU2表达下降(P<0.05),miR-30a-5p表达增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达减少(P<0.05);与NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组比较,miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组细胞增殖抑制率下降(P<0.05),miR-30a-5p表达下降,CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达上升(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-30a-5p mimics组miR-30a-5p表达、增殖抑制率增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达下降(P<0.05);LncRNA DLEU2可直接靶向调控miR-30a-5p、miR-30a-5p可直接靶向调控CD61,抑制LncRNA DLEU2表达可降低BALB/c裸鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论沉默LncRNA DLEU2可抑制人结肠癌细胞株SW1116生长和增殖,其机制可能与靶向miR-30a-5p抑制CD61表达,抑制CyclinD1、c-Myc表达相关。

强直性脊柱炎模型小鼠踝关节组织和临床患者PBMC中miR-142-5p,SOCS1 mRNA表达及与免疫功能分析研究

目的探究强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)模型小鼠和临床患者外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cell,PBMC)中微小RNA-142-5p(miR-142-5p),细胞因子信号转导抑制因子1(suppressor ofcytokine signaling 1,SOCS1)mRNA表达及其对免疫功能的影响。方法通过实时荧光定量(quantitative real timePCR,qRT-PCR)检测2022年1月~2023年3月商丘市第一人民医院收治的30例确诊的AS患者(患者组)和30例健康体检者(健康组)的PBMC中miR-142-5p和SOCS1 mRNA水平。采用牛蛋白聚糖联合完全弗氏佐剂诱导AS小鼠模型,然后将小鼠分为对照组、模型组、阴性组和拮抗剂组。对照组和模型组小鼠尾静脉注射生理盐水,阴性组和拮抗剂组小鼠分别尾静脉注射NC-antagomir和miR-142-5p-antagomir。治疗2周后,分别评估各组小鼠的关节炎症状评分。通过苏木精伊红(hematoxylin eosin,HE)染色评价踝关节形态。采用ELISA法检测小鼠血清中Th1细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、Th2细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、Th17细胞因子白细胞介素-17(IL-17)和Treg细胞因子叉头盒蛋白P3(FOXP3)的表达水平。通过qRT-PCR和Western blot检测PBMC和踝关节组织中miR-142-5p,SOCS1,IFN-γ,IL-4,IL-17和FOXP3的mRNA和蛋白表达水平。结果与健康组比较,患者组PBMC中miR-142-5p水平升高(3.03±0.99 vs1.00±0.21),SOCS1 mRNA水平降低(0.41±0.09 vs 1.00±0.18),差异具有统计学意义(t=10.997,15.956,均P<0.001)。与对照组比较,模型组小鼠踝关节组织中miR-142-5p水平(4.00±0.52 vs 1.00±0.04)升高,IFN-γ和IL-17的mRNA和蛋白水平均升高,SOCS1,IL-4和FOXP3的mRNA和蛋白水平均降低,差异具有统计学意义(t=23.356,31.420,48.056,47.224,38.035,29.007,54.183,28.123,55.155,26.758,45.346,均P<0.05);关节炎症状评分升高(7.83±0.94 vs 0.00±0.00,t=22.212,P<0.05),踝关节结构破坏明显;血清中IFN-γ,IL-17水平以及IFN-γ/IL-4比值(0.81±0.08 vs 2.08±0.33)和IL-17/FOXP3比值(0.41±0.03 vs 1.27±0.10)均升高,差异具有统计学意义(t=15.382,35.779,15.412,35.130,均P<0.05)。与阴性组比较,拮抗剂组小鼠踝关节组织中miR-142-5p水平(1.47±0.10 vs 3.89±0.33)降低,IFN-γ和IL-17的mRNA和蛋白水平均降低,SOCS1,IL-4和FOXP3的mRNA和蛋白水平均升高,差异具有统计学意义(t=18.846,22.969,43.454,32.617,23.259,20.881,41.832,11.994,32.977,15.190,35.834,均P<0.05);关节炎症状评分降低(7.42±1.24 vs 2.75±0.75,t=13.233,P<0.05),踝关节形态明显改善;血清中IFN-γ,IL-17水平以及IFN-γ/IL-4比值(1.22±0.11 vs 1.91±0.19)和IL-17/FOXP3比值(0.69±0.05vs 1.23±0.12)均降低,差异具有统计学意义(t=8.688,22.972,8.377,22.007,均P<0.05)。结论miR-142-5p在AS中高表达,使用拮抗剂下调miR-142-5p可能通过上调SOCS1进而降低Th1/Th2和Th17/Treg比值,从而改善AS小鼠的免疫平衡并抑制AS的进展。

乳腺癌组织miR-1247-5p表达及其靶基因生物信息学预测研究

目的:探讨微小核糖核酸-1247-5p(miR-1247-5p)在乳腺癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析。方法:收集2019年6月至2020年12月本院手术治疗的104例乳腺癌患者癌组织及其癌旁组织。RT-PCR检测标本中miR-1247-5p的相对表达量;比较不同临床病理特征患者癌组织miR-1247-5p表达;预测miR-1247-5p的靶基因;采用DAVID数据库对miR-1247-5p靶基因进行功能和通路富集分析;String数据库对miR-1247-5p靶基因进行互作分析。结果:miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织下调(P<0.05)。miR-1247-5p潜在靶基因38个,其靶基因功能主要富集于RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控、基因表达/转录调控、质膜部分、突触小体、蛋白质结合、poly(A)RNA结合等;参与的通路主要富集于癌症通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等。磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)、上皮生长因子受体(EGFR)、假尿苷酸合酶1(PUS1)的编码蛋白质在miR-1247-5p基因靶基因蛋白质互作网络(PPI)中关键节点位置。结论:miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达下调,其靶基因富集于多个生物学过程及与肿瘤相关的信号转导通路上,miR-1247-5p可能通过调控其靶基因的表达参与乳腺癌的发生发展过程。

口腔扁平苔藓患者血清miR-155-5p、SOCS1 mRNA水平与病损程度及Th17/Treg失衡的关系

目的探讨口腔扁平苔藓(OLP)患者血清微小核糖核酸-155-5p(miR-155-5p)、细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)mRNA水平与病损程度及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的关系。方法选择OLP患者76例(观察组),其中非糜烂型28例、糜烂型48例(轻中度糜烂29例、重度糜烂19例),同期随机另选体检健康的志愿者50例(对照组),采集所有研究对象外周静脉血,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-155-5p、SOCS1 mRNA,采用流式细胞术检测Th17、Treg比例并计算Th17/Treg。采用Pearson/Spearman相关分析法分析OLP患者血清miR-155-5p水平与SOCS1 mRNA水平的关系以及二者与外周血Th17、Treg比例和Th17/Treg的关系。结果与对照组比较,观察组血清miR-155-5p水平以及外周血Th17比例和Th17/Treg升高,血清SOCS1 mRNA水平和外周血Treg比例降低(P均<0.05)。非糜烂型OLP及糜烂型OLP轻中度糜烂、重度糜烂患者血清miR-155-5p水平以及外周血Th17比例和Th17/Treg逐渐升高,血清SOCS1 mRNA水平和外周血Treg比例逐渐降低(P均<0.05)。相关性分析显示,OLP患者血清miR-155-5p水平与血清SOCS1 mRNA水平呈负相关关系(r=-0.809,P<0.01);血清miR-155-5p水平与外周血Th17比例、Th17/Treg均呈正相关关系(r/rs分别为0.819、0.820,P均<0.05),与Treg比例呈负相关关系(r=-0.735,P<0.05);血清SOCS1 mRNA水平与外周血Th17比例、Th17/Treg均呈负相关关系(r/rs分别为-0.770、-0.790,P均<0.05),与Treg比例呈正相关关系(r=0.733,P<0.05)。结论OLP患者血清miR-155-5p水平升高、血清SOCS1 mRNA水平降低,二者水平变化与病损程度加重和Th17/Treg失衡密切相关。