冠心病患者血清外泌体微小核糖核酸-141-3p对内皮细胞损伤的影响研究

目的:检测冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清外泌体中微小核糖核酸-141-3p (miR-141-3p)的表达变化,并分析miR-141-3p对人血管内皮细胞损伤的影响。方法:收集冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清(n=8)和健康人对照(n=8),用外泌体提取试剂盒提取血清外泌体RNA,使用qRT-PCR的方法检测血清外泌体中miR-141-3p的表达变化;将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)转染NC mimic或miR-141-3p mimic后使用ox-LDL诱导损伤,MTT法检测细胞活性,检测Annexin-V/PI染色结果评价细胞凋亡情况;生物信息学分析预测并验证miR-141-3p作用的靶基因。结果:与健康人的对照血清外泌体相比,冠状动脉粥样硬化患者的血清外泌体中miR-141-3p的表达显著增加(P<0.01)。在HUVECs中过表达miR-141-3p可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡,维持细胞活性(P<0.05);靶基因预测结果显示与细胞凋亡和增殖相关的基因PTEN可能是miR-141-3p的靶基因,进一步验证结果显示miR-141-3p过表达导致PTEN表达的下调(P<0.05)。结论:冠心病患者血清外泌体中miR-141-3p的表达上调,miR-141-3p可通过下调靶基因PTEN发挥抑制血管内皮细胞凋亡的保护性作用。miR-141-3p可能成为抗动脉粥样硬化治疗的新靶点。

黄芩素通过miR-141-3p/sirt7介导的线粒体自噬发挥帕金森病神经保护作用的机制研究

目的探讨黄芩素(Baicalein)对帕金森病(PD)神经保护的可能机制。方法在本研究中,采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导小鼠的PD模型,研究黄岑素的保护作用机制。首先,对黄芩素干预后的PD模型小鼠进行神经学评分,高效液相色谱电化学法检测纹状体多巴胺含量,TUNEL和Fluoro-Jade B染色检测凋亡细胞及神经元。采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制PD模型小鼠线粒体自噬,通过Jc-1染色检测黄芩素干预后的PD模型小鼠的线粒体膜电位,通过Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62。在PD模型体内转染agomiR-141-3p,通过qRT-PCR检测转染效率,通过Jc-1和Wb检测线粒体膜电位和自噬相关蛋白的变化情况。通过Starbase网站(https://starbase.sysu.edu.cn/)、双荧光素酶切报告实验在293T细胞中分析miR-141-3p和SIRT7的靶向关系,qRT-PCR检测SIRT7在PD模型体内的表达水平。结果PD严重影响了小鼠的神经功能,下调了线粒体膜电位水平及线粒体自噬相关蛋白LC3的表达水平、上调了P62的表达水平。而黄芩素提高了PD模型小鼠的神经学评分,一定程度上还原了多巴胺与神经元的数目,恢复了线粒体膜电位水平及LC3和P62的表达水平;黄芩素抑制了PD小鼠miR-141-3p的表达,上调miR-141-3p可以逆转黄芩素促线粒体膜电位上升、LC3 z-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上升及P62表达下降;而miR-141-3p可以靶向负调控SIRT7,通过下调SIRT7同样可以逆转黄芩素促线粒体膜电位上升、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调及P62表达下调;黄芩素可以使SIRT7表达上调,而过表达miR-141-3p可以抑制SIRT7的表达。结论黄芩素通过下调miR-141-3p靶向负调控SIRT7介导线粒体自噬,从而对PD神经发生保护。

miR-141基因干扰靶向PTEN影响小鼠BMSCs成骨分化的实验研究

目的 探讨微小核糖核酸-141(micro-RNA-141,miR-141)基因干扰靶向蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)对小鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化的影响。方法 取小鼠BMSCs并鉴定;构建miR-141 mimics、miR-141 inhibitor、miR-141 mimics-NC、miR-141 inhibitor-NC质粒,分别转染小鼠BMSCs,并记为过表达组、沉默组、过表达对照组、沉默对照组,另取小鼠BMSCs常规培养记为空白对照组。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色、茜素红染色检测各组成骨分化能力;检测各组miR-141、PTEN通路相关基因及蛋白表达;验证miR-141是否可靶向调控PTEN。结果 与空白对照组、过表达对照组相比,过表达组ALP定量,AKT、GSK3β mRNA及蛋白表达,Runx2、Osterix蛋白表达,p-AKT、p-GSK3β均下降(P<0.05),钙化结节大小、数量、密度均显著减少,miR-141 mRNA表达及PTEN mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与空白对照组、沉默对照组相比,沉默组ALP定量,AKT、GSK3β mRNA及蛋白表达,Runx2、Osterix蛋白表达,p-AKT、p-GSK3β均升高(P<0.05),钙化结节也显著增多,miR-141 mRNA表达及PTEN mRNA和蛋白表达低于其余4组(P<0.05);荧光素酶活性实验验证miR-141可靶向调控PTEN。结论 miR-141过表达可激活PTEN信号通路抑制小鼠BMSCs成骨分化,而miR-141基因沉默可下调PTEN,上调AKT、GSK3β表达,增加p-AKT、p-GSK3β水平,并促进成骨标志蛋白表达,促进小鼠BMSCs成骨分化。

血清微小RNA-141-3p、微小RNA-150-5p与鼻咽癌患者临床病理特征和放疗敏感性的关系研究

目的:探讨血清微小核糖核酸(miRNA)-141-3p、miR-150-5p与鼻咽癌(NPC)患者临床病理特征和放疗敏感性的关系。方法:收集2019年1月~2022年7月在我院接受放疗的92例NPC患者为NPC组,根据放疗疗效分为抵抗组和敏感组,另选取同期80名在我院体检的健康志愿者为对照组。比较对照组、NPC组血清miR-141-3p、miR-150-5p表达。分析NPC患者血清miR-141-3p、miR-150-5p表达与临床病理特征的关系。利用单因素和多因素Logistic回归分析NPC患者放疗抵抗的影响因素。结果:与对照组比较,NPC组血清miR-141-3p表达升高,miR-150-5p表达降低(P<0.05)。NPC患者血清miR-141-3p、miR-150-5p表达在不同分化程度、TNM分期和淋巴结转移中比较有差异(P<0.05)。92例NPC患者放疗抵抗发生率为22.83%(21/92)。单因素分析显示,抵抗组TNM分期Ⅲ~Ⅳa期和miR-141-3p≥2.60比例高于敏感组,miR-150-5p≥0.80比例低于敏感组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,miR-141-3p≥2.60为NPC患者放疗抵抗的独立危险因素,miR-150-5p≥0.80为独立保护因素(P<0.05)。结论:NPC患者血清miR-141-3p高表达,miR-150-5p低表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和放疗敏感性有关,有望成为NPC患者放疗抵抗的评价指标。

血浆微小核糖核酸-101-3p和微小核糖核酸-141-3p在脓毒症患儿中表达的意义

目的探讨血浆微小核糖核酸-101-3p(miR-101-3p)及微小核糖核酸-141-3p(miR-141-3p)在脓毒症患儿中的表达及其临床意义。方法选择2016年1月至2019年10月三亚市人民医院收治的153例脓毒症患儿,根据其病情严重程度分为脓毒症非休克组(94例)和脓毒症休克组(59例);根据脓毒症患儿28 d的生存情况,将其分为存活组(107例)和死亡组(46例),另选取60例健康儿童作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测所有研究对象血浆miR-101-3p及miR-141-3p表达水平。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miR-101-3p、miR-141-3p及降钙素原(PCT)水平对脓毒症诊断及预后评估的价值。采用Pearson相关分析脓毒症患儿血浆miR-101-3p及miR-141-3p表达水平与PCT、急性生理和慢性健康Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭评分(SOFA评分)、白细胞计数及C反应蛋白水平的相关性。结果脓毒症休克组和脓毒症非休克组血浆miR-101-3p、miR-141-3p及PCT水平均高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001),且脓毒症休克组血浆miR-101-3p(4.25±1.46比1.86±0.75)、miR-141-3p(3.17±1.08比1.20±0.52)及PCT[(20.75±9.36)μg/L比(5.80±2.40)μg/L]水平均明显高于脓毒症非休克组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。死亡组和存活组血浆miR-101-3p、miR-141-3p及PCT水平均明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001),且死亡组血浆miR-101-3p(4.83±1.62比1.40±0.58)、miR-141-3p(3.50±1.13比0.96±0.47)及PCT[(26.30±11.72)μg/L比(3.25±2.16)μg/L]水平均明显高于存活组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。ROC曲线分析显示,miR-101-3p、miR-141-3p及PCT联合诊断脓毒症的曲线下面积(AUC)和95%可信区间(95%CI)明显高于miR-101-3p、miR-141-3p或PCT单独指标[0.908(0.850~0.970)比0.810(0.748~0.873)、0.784(0.723~0.844)、0.825(0.764~0.883),Z1=4.682、Z2=5.380、Z3=4.417,均P<0.05],其敏感度为92.5%,特异度为84.0%。miR-101-3p、miR-141-3p及PCT联合预测脓毒症患儿死亡的AUC和95%CI明显高于miR-101-3p、miR-141-3p或PCT单独指标[0.930(0.872~0.986)比0.848(0.786~0.907)、0.792(0.730~0.853)、0.820(0.762~0.878),Z1=4.537、Z2=5.728、Z3=5.106,均P<0.05],其敏感度为94.6%,特异度为87.0%。相关性分析显示,脓毒症患儿血浆miR-101-3p及miR-141-3p表达水平与PCT(r=0.804、0.773,均P<0.001)、APACHEⅡ评分(r=0.738、0.695,均P<0.001)及SOFA评分(r=0.752、0.764,均P<0.001)均呈正相关。结论脓毒症患儿血浆miR-101-3p及miR-141-3p表达水平明显升高,与脓毒症患儿的严重程度相关,miR-101-3p及miR-141-3p联合PCT对儿童脓毒症诊断及预后评估具有较高价值。

胃癌组织lncRNA H19、miR-141表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系

目的探讨胃癌组织长链非编码RNAH19(lncRNAH19)、微小核糖核酸141(miR-141)表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择胃癌患者81例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测lncRNAH19、miR-141表达。比较胃癌组织与癌旁正常组织lncRNAH19、miR-141表达变化,分析胃癌组织lncRNAH19、miR-141表达与患者临床病理特征的关系。采用Spearman相关分析法分析胃癌组织lncRNAH19表达与miR-141表达的关系。以胃癌组织lncRNAH19、miR-141相对表达量的均数为界,将患者分为lncRNAH19、miR-141低表达者与高表达者,采用Kaplan-Meier法分析不同lncRNAH19、miR-141表达与患者术后生存时间和术后5年生存率的关系。结果胃癌组织lncRNAH19相对表达量明显高于癌旁正常组织,miR-141相对表达量明显低于癌旁正常组织(P均<0.05)。胃癌组织lncRNAH19相对表达量与肿瘤直径、浸润深度、TNM分期、远处转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、组织分化程度无关(P均>0.05);胃癌组织miR-141相对表达量与肿瘤直径、组织分化程度、TNM分期有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、浸润深度、远处转移无关(P均>0.05)。Spearman相关分析显示,胃癌组织lncRNAH19相对表达量与miR-141相对表达量呈负相关关系(r=-0.954,P<0.05)。81例胃癌患者中,lncRNAH19低表达者40例、高表达者41例,miR-141低表达者39例、高表达者42例。Kaplan-Meier生存分析显示,lncRNAH19高表达者术后生存时间和术后5年生存率均明显低于lncRNAH19低表达者,miR-141低表达者术后生存时间和术后5年生存率均明显低于miR-141高表达者(P均<0.05)。结论胃癌组织lncRNAH19高表达、miR-141低表达,二者表达呈负相关关系;胃癌组织lncRNAH19、miR-141表达与肿瘤的发生、发展有关,有可能成为胃癌诊断和预后判断的潜在生物标志物。

鼻咽癌患者血清中miR-141-3p和miR-155-3p的表达水平及其临床意义

目的:探讨鼻咽癌患者血清中miR-141-3p及miR-155-3p的表达水平及临床意义。方法:选取2017年01月至2020年09月我院收治的95例鼻咽癌患者和45例健康对照组作为研究对象,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141-3p及miR-155-3p表达水平。应用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线分析血清中miR-141-3p及miR-155-3p表达水平对鼻咽癌的诊断价值。Pearson相关分析分析鼻咽癌患者血清中miR-141-3p与miR-155-3p表达水平的相关性。结果:鼻咽癌组血清中miR-141-3p(3.25±1.28 vs 0.64±0.17)及miR-155-3p(1.47±0.83 vs 0.35±0.08)表达水平均明显高于对照组(P均<0.001)。鼻咽癌患者血清中miR-141-3p及miR-155-3p表达水平升高与临床分期高、分化程度低、淋巴结转移及远处转移相关(P均<0.001)。ROC曲线显示,血清中miR-141-3p及miR-155-3p表达水平诊断鼻咽癌的最佳截断值分别为2.18、0.97,两项联合诊断鼻咽癌的曲线下面积(0.940,95%CI:0.877~0.998)最大,其敏感度和特异度为97.0%和86.2%。相关分析显示,鼻咽癌患者血清中miR-141-3p与miR-155-3p表达水平呈正相关(r=0.853,P<0.001)。结论:鼻咽癌患者血清中miR-141-3p及miR-155-3p表达水平明显升高,有望作为鼻咽癌诊断的潜在标志物。

sICAM-1和miR-155与miR-141对糖尿病肾病血液透析并发血流感染的预测价值

目的研究血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、外周血微小核糖核酸-155(miR-155)、微小核糖核酸-141(miR-141)对糖尿病肾病(DN)血液透析并发血流感染的预测价值及患者感染病原菌分布情况。方法选取2018年6月-2022年9月江南大学附属医院收治的119例DN血液透析并发血流感染患者作为B组,收集同期在医院接受治疗的132例DN血液透析未并发血流感染患者作为A组,统计两组一般资料,比较两组血清sICAM-1、外周血miR-155、miR-141表达情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sICAM-1、外周血miR-155、miR-141单独及联合对DN血液透析患者并发血流感染的预测价值,统计DN血液透析并发血流感染患者感染病原菌分布情况。结果B组血清sICAM-1、外周血miR-155、miR-141表达水平高于A组(P<0.05);血清sICAM-1、外周血miR-155、miR-141联合预测DN血液透析患者并发血流感染的曲线下面积(AUC)值高于三者单独预测(P<0.05),敏感度高于血清sICAM-1、外周血miR-141(P<0.05),特异度低于血清sICAM-1、外周血miR-141(P<0.05);DN血液透析并发血流感染患者革兰阴性菌占比63.71%,革兰阳性菌占比33.06%,真菌占比3.23%。结论血清sICAM-1、外周血miR-155、miR-141联合对DN血液透析患者并发血流感染具有较好的预测价值,同时DN血液透析并发血流感染患者主要感染病原菌种类较多。

miR141对前列腺癌LNCaP细胞周期的影响及其机制研究

目的观察miR141对LNCa P细胞的增殖及其细胞周期的影响。方法收集温州医科大学附属第二医院2015年12月—2017年6月前列腺癌患者癌组织及癌旁组织,采用q PCR检测miR141表达情况;同时检测LNCa P细胞miR141表达情况。将LNCa P细胞分为LNCa P组(不进行转染)、mimics组(转染miR141-mimics)与inhibitor组(转染miRNA-141 inhibitor)。观察其转染效率,并用MTT法检测3组细胞的增殖率,流式细胞仪检测3组细胞的细胞周期情况,通过WB检测P27、CDK4和Cyclin D1表达情况。结果在癌组织中miR-141的水平显著高于癌旁组织(P<0.05),在LNCa P细胞中miRNA-141的水平相比于癌组织较低(P<0.05),但略高于癌旁组织。LNCa P细胞转染miRNA-141-mimics后,miRNA-141表达显著升高(P<0.05),转染miRNA-141-mimics及miRNA-141 inhibitor后,miRNA-141表达略高于LNCa P细胞。在LNCa P转染miRNA-141 mimics 48 h时,细胞增殖率相比于LNCa P及inhibitor组要低,说明miRNA-141能阻碍LNCa P细胞的增殖。在LNCa P转染miRNA-141 mimics后,细胞周期在G_1期发生阻滞。mimics组与LNCa P组、inhibitor组相比,P27明显升高,而CDK4和Cyclin D1则明显下降。结论 miR141影响LNCa P的增殖,能使LNCa P阻滞在G_1期。

miR-141的靶蛋白在子痫前期患者胎盘组织中表达的研究进展

子痫前期是导致孕产妇和围产儿死亡的妊娠期特发性疾病之一,至今具体发病机制尚未阐明,目前认为子痫前期主要与胎盘组织过度氧化应激、细胞凋亡及广泛的血管内皮功能障碍有关。近年研究发现,微小核糖核酸(mi RNA)通过直接或间接影响其靶蛋白的表达参与许多疾病的病理生理过程,主要影响细胞增殖、新陈代谢、分化及凋亡等。研究显示,mi R-141在子痫前期患者外周血和胎盘组织中的表达水平较正常孕妇明显升高,考虑可能与子痫前期的发病机制有关。通过Star Base数据库及Target Scan等软件进行生物信息学分析结果提示mi R-141主要的靶蛋白有丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)、表皮细胞生长因子受体(EGFR)、Yes相关蛋白-1(YAP1/YAP)、信号转导及转录激活子4(STAT4)等。本文将对mi R-141的靶蛋白在子痫前期患者胎盘组织中表达的研究进展进行综述。