miR-203a-3p对食管癌细胞侵袭迁移能力的影响及其与Survivin的靶向调控关系

目的观察微小RNA(miR)-203a-3p对食管癌细胞侵袭、迁移能力的影响并分析其与Survivin的靶向调控关系。方法收集对数生长期的食管癌细胞TE-1及正常食管黏膜上皮细胞HEEC,RT-qPCR法检测细胞miR-203a-3p、Survivin mRNA。双荧光素酶报告基因检测法分析miR-203a-3p与Survivin的靶向调控关系。将TE-1细胞分为对照组、miR-203a-3p模拟组、miR-203a-3p抑制组及阴性对照组。miR-203a-3p模拟组转染miR-203a-3p mimic,miR-203a-3p抑制组转染miR-203a-3p inhibitor,阴性对照组转染miR-203a-3p NC,对照组不进行转染,RT-qPCR法验证转染效率。采用MTT法检测转染后2、12、24、36、48 h的细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果食管癌细胞中miR-203a-3p mRNA表达低于正常食管黏膜上皮细胞,Survivin mRNA表达高于正常食管黏膜上皮细胞(P均<0.05)。TargetScan数据库分析显示,Survivin基因在3′UTR端存在7个连续的可以与miR-203a-3p互补的核苷酸序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,共转染Survivin-WT和miR-203a-3p mimic质粒的TE-1细胞荧光素酶活性低于其他细胞(P<0.05)。培养12、24、36、48 h时细胞活力miR-203a-3p抑制组>对照组、阴性对照组>miR-203a-3p模拟组(P均<0.05);细胞迁移距离及侵袭细胞数miR-203a-3p抑制组>对照组、阴性对照组>miR-203a-3p模拟组(P均<0.05)。结论miR-203a-3p高表达可抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向负调控Survivin有关。

血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370在急性髓系白血病患者中的水平及意义

目的分析微小核糖核酸-21(miR-21)、微小核糖核酸-148b(miR-148b)、微小核糖核酸-203(miR-203)、微小核糖核酸-370(miR-370)在急性髓系白血病患者中的水平及意义。方法选择2020年5月至2022年11月该院收治的急性髓系白血病患者202例作为急性髓系白血病组,选择同期体检健康者242例作为健康对照组。检测并比较两组血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370水平,比较治疗后不同疗效(完全缓解和非完全缓解)及不同临床特征急性髓系白血病患者血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370单独及联合检测对急性髓系白血病的诊断价值。结果急性髓系白血病组血清miR-21水平高于健康对照组(P<0.05),血清miR-148b、miR-203、miR-370水平低于健康对照组(P<0.05)。治疗后,202例急性髓系白血病患者非完全缓解117例,完全缓解85例;非完全缓解急性髓系白血病患者血清miR-21水平高于完全缓解患者(P<0.05),血清miR-148b、miR-203、miR-370水平低于完全缓解患者(P<0.05)。不同性别、年龄、骨髓原始细胞比例的急性髓系白血病患者血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);白细胞计数>10×10^(9)/L的急性髓系白血病患者血清miR-21水平高于白细胞计数≤10×10^(9)/L的患者(P<0.05),血清miR-148b、miR-203、miR-370水平低于白细胞计数≤10×10^(9)/L的患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370联合检测诊断急性髓系白血病的曲线下面积(AUC)为0.810(95%CI:0.770~0.845),高于miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370单项检测诊断的AUC[0.797(95%CI:0.757~0.834)、0.803(95%CI:0.763~0.839)、0.775(95%CI:0.733~0.813)、0.735(95%CI:0.691~0.775)],差异均有统计学意义(Z=2.426,P=0.015;Z=2.152,P=0.033;Z=2.780,P=0.010;Z=3.423,P=0.001)。结论急性髓系白血病患者血清miR-21水平升高,miR-148b、miR-203、miR-370水平降低,且不同白细胞计数及治疗后不同疗效患者血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370水平也有差异,该4项指标联合检测对急性髓系白血病的诊断准确性更高,也许可作为急性髓系白血病患者诊治的新靶点。

血清miRNA-21和miRNA-203在上皮性卵巢癌中的表达及诊断价值

目的探讨微小核糖核酸21(miR-21)和微小核糖核酸203(miR-203)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达情况,及两者与血清糖类抗原125(CA125)在EOC诊断中的临床价值。方法采用QPCR检测40例EOC患者(EOC组)、40例上皮性卵巢良性肿瘤患者(良性组)和42例健康女性(正常对照组)血清miR-21和miR-203的表达情况;同时采用电化学发光法检测上述3组人群血清CA125的表达水平;分析miR-21和miR-203的表达与EOC临床病理特征的关系,用受试者工作特征曲线(ROC)评价两者的临床诊断价值并分别计算CA125、miR-21和miR-203单独和联合检测在EOC诊断中的灵敏度和特异度。结果 EOC组miR-21和miR-203的相对表达量分别为2.27±0.48和3.61±0.71,均高于良性组的1.20±0.22和1.47±0.38以及正常对照组的1.00±0.33和1.00±0.28,差异有统计学意义(P<0.05);而良性组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。miR-21和miR-203表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、绝经状态、病理类型和CA125水平无关(P>0.05);CA125单独检测的特异度最高,为82.50%;CA125、miR-21和miR-201联合检测的灵敏度最高,达95.00%。结论 miR-21和miR-203可能在EOC的发生、发展中发挥原癌基因的作用;血清CA125、miR-21和miR-203三者联合检测可提高EOC诊断的灵敏度。

miR-203在肿瘤研究中的进展

微小RNA(miRNA)是由长为18～25个核苷酸组成的内源性非编码单链小RNA,通过与特定的靶mRNA结合来抑制mRNA翻译过程而调节基因的表达,与恶性肿瘤的发生、发展、侵袭、转移密切相关。miR-203是一类来源于上皮基底细胞且特异性高表达于上皮细胞的非编码小RNA,由于其与恶性肿瘤的高度相关性及表达矛盾性,近年来已经成为miRNA领域的研究热点。现就miRNA-203在不同恶性肿瘤中表达及其甲基化、靶基因等热点研究进展予以综述。

miRNA-203联合TSGF、CEA检测在胃癌诊断中的应用

目的分析微小核糖核酸-203(miRNA-203)联合肿瘤生长因子(TSGF)、癌胚抗原(CEA)检测在胃癌诊断中的应用。方法选择2015年7月至2016年7月来该院就诊的40例胃癌患者为观察组,选择同期30例健康志愿者为对照组,分析研究对象的外周血清CEA、miRNA-203、TSGF水平。结果观察组患者miRNA-203相对表达量为(0.26±0.16)U/mL,明显低于对照组的(0.84±0.09)U/mL(P<0.05);观察组TSGF、CEA表达水平及阳性率明显高于对照组(P<0.05)。miRNA-203相对表达量随分期递增而减少(F=5.60,P=0.007 5)。TSGF、CEA表达水平随分期递增而增加(P<0.05);不同分期CEA阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),而不同分期TSGF阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。miRNA-203联合TSGF、CEA检测的敏感度为95.00%,明显高于单项检测或者2项指标联合检测结果,差异有统计学意义(P<0.05)。miRNA-203联合TSGF、CEA检测的诊断符合率为97.50%,特异度为90.00%,优于单项或者两项联合结果(P<0.05)。结论采用miRNA-203联合TSGF、CEA检测,可以及时准确诊断胃癌,具有较高的特异度与诊断符合率,在临床上有较高的诊断价值。

miR-203a-3p靶向GLS1调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的 探究微小核糖核酸(micro RNAs,miRNA,miR)-203a-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RTPCR)检测HCC细胞、人正常肝细胞以及临床HCC组织中mi R-203a-3p相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测mi R-203a-3p对HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测mi R-203a-3p的潜在靶基因(GLS1),双荧光素酶实验进行验证;探究HCC细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)对HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β和c-Myc表达。结果 HCC癌组织中mi R-203a-3p(0.32±0.07)表达明显低于癌旁正常组织(1.02±0.03),差异有统计学意义(t=41.105,P<0.001);HCC细胞Hep G2(0.34±0.05),HCCLM3(0.58±0.06),Huh7(0.43±0.05),Hep3B(0.29±0.04)中mi R-203a-3p相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2(1.01±0.02)中mi R-203a-3p表达,差异有统计学意义(F=119.080,P<0.001)。与Blank组相比,mi R-203a-3p过表达组HCC细胞增殖(0.61±0.05 vs 1.24±0.06),迁移率(21.43%±2.01%vs 60.22%±3.14%)及侵袭能力(76.54±13.56 vs221.06±16.54)均明显降低,差异有统计学意义(t=14.849,13.900,10.562,均P<0.001)。GLS1是mi R-203a-3p的靶基因,mi R-203a-3p靶向负调控GLS1表达。HCC细胞中GLS1高表达呈现高酶活性,HCC细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank组和si RNA-NC组明显降低,差异有统计学意义(F=64.754,35.627,均P<0.001)。GLS1抑制组细胞增殖(0.59±0.04)、迁移率(30.15%±1.02%)和侵袭能力(69.59±15.74)较Blank组明显降低(1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52),差异均有统计学意义(t=16.499,16.278,11.215,均P<0.001)。mi R-203a-3p过表达和GLS1表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β和c-Myc的表达,差异均有统计学意义(t=11.129~28.213,均P<0.001)。转染GLS1可逆转mi R-203a-3p对HCC细胞生物学行为及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论 HCC中mi R-203a-3p显著低表达,其过表达能够抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1调控谷氨酰胺代谢及mi R-203a-3p靶向GLS1调控Wnt/β-catenin信号通路活性有关。

儿童血管瘤中miR-203与FGF-2的表达及意义

目的分析微小RNA-203(microRNA-203,miR-203)和成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factors-2,FGF-2)在儿童血管瘤(hemangioma of infancy,HOI)中的表达水平并探讨其临床意义。方法选取2016年3月至2017年8月收治的55例HOI患者为HOI组,并将其分为增殖期(31例)与消退期(24例),另以术后正常组织标本为对照组(34例)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组miR-203与FGF-2 mRNA表达水平,免疫组织化学法检测FGF-2蛋白表达情况。观察的临床指标包括血管生长素(angiogenin,ANG)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptorα,GRα)、糖皮质激素受体β(glucocorticoid receptorβ,GRβ)。Pearson法比较分析HOI组患儿各指标间的相关性;Logistic多因素回归法分析HOI发生的相关影响因素。结果与对照组(1.01±0.15)相比,HOI组miR-203(0.73±0.24)表达水平显著降低(P<0.05),且增殖期(0.72±0.21)显著高于消退期(0.59±0.19)(P<0.05);HOI组FGF-2 mRNA(2.38±0.74)表达水平显著高于对照组(1.02±0.14)(P<0.05),且消退期(2.37±0.79)显著高于增殖期(2.03±0.68)(P<0.05);Pearson分析显示miR-203与FGF-2、ANG、VEGF、bFGF呈显著负相关(P<0.05),而FGF-2与之呈显著正相关(P<0.05);Logistic分析显示miR-203与FGF-2表达水平是HOI发生的影响因素。结论miR-203在HOI中低表达,而FGF-2呈高表达,两者在HOI分期中表达变化比较差异显著,对临床诊断HOI及治疗具有重要意义。

胃癌中miR-203的表达水平及其与临床病理参数和预后的关系

目的检测微小核糖核酸(microRNA,miR)-203在胃癌组织中的表达水平,探讨其与胃癌患者临床病理参数和预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测86例胃癌组织及相应癌旁组织中miR-203表达水平,分析miR-203表达水平对胃癌患者临床病理参数和3年总生存率的影响。结果 miR-203在胃癌组织中相对表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(0.34±0.06 vs 1.02±0.19,P<0.05)。miR-203的表达与胃癌患者肿瘤大小、病理分化程度及TNM分期有关(P均<0.01),与患者年龄、性别及淋巴结转移无关(P均>0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,miR-203低表达者3年生存率显著低于miR-203高表达者3年生存率(46.38%vs 88.24%,P<0.01)。COX分析结果表明,miR-203低表达、TNM分期高是影响胃癌患者预后的独立危险因素(HR=0.477,95%CI:0.298~0.762,P<0.01;HR=2.503,95%CI:1.110~5.644,P<0.01)。结论 miR-203在胃癌组织中低表达,与患者肿瘤大小、病理分化程度、TNM分期及3年生存率有关,是影响胃癌患者预后的独立危险因素。