微小核糖核酸let-7c对肝癌细胞增殖的影响及其靶基因分析

目的分析微小核糖核酸(mi RNA)let-7c通过靶定细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抑制肝癌细胞增殖的临床意义,并探讨其对肝癌细胞增殖的影响以及靶基因。方法选取人低转移肝癌细胞-97L(MHCC-97L)、人高转移肝癌细胞(HCCLM3)、人肝癌组织(HepG2)、人肝癌细胞-7721(SMMC-7721)、人肝细胞LO2、小鼠抗人细胞周期蛋白依赖激酶抗体等进行细胞培养,利用Western blot检测转染后小鼠CDK6表达情况,转染48 h后应用细胞裂解液对三组蛋白进行提取,将材料分为观察组、对照组、空白组,观察组转染let-7c,对照组转染阴性对照miRNA,空白组未进行转染处理;应用二喹啉甲酸法对各孔细胞蛋白浓度进行测定。结果let-7c对肝癌细胞HCCLM3增殖结果显示,于450 nm处观察组、对照组转染后24 h吸光度值差异无统计学意义(P>0.05);转染48 h后观察组、对照组HCCLM3细胞中CDK6蛋白含量发生较大变化,观察组的CDK6蛋白表达量为(0.58±0.05),均低于对照组的(0.81±0.08)与空白组(0.85±0.09)(t=10.107、13.876,均P<0.05);转染后72 h,观察组细胞处于G1期比例为(56.21±3.25)%,明显高于对照组的(45.21±1.56)%与空白组的(46.24±1.98)%,差异均有统计学意义(t=16.146、13.862,均P=0.000)。结论肝癌细胞中let-7c呈低表达,将let-7c上调可有效调控CDK6,从而抑制癌细胞生长,对肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用。

微小核糖核酸-7调控表皮细胞生长因子受体对肝癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨微小核糖核酸(miR)-7是否通过靶向调控表皮细胞生长因子受体(EGFR)对人肝癌细胞侵袭和增殖产生影响。方法传代培养HepG2人肝癌细胞,脂质体转染miR-7后使其表达上调或下调。荧光定量聚合酶链反应检测转染效率。蛋白印迹法检测miR-7上调或下调后肝癌细胞EGFR表达变化。溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法检测miR-7上调或下调后肝癌细胞增殖能力。划痕试验检测miR-7上调或下调后肝癌细胞迁移能力。结果脂质体转染HepG2人肝癌细胞可控制miR-7表达,miR-7表达与肝癌细胞EGFR表达呈负相关。miR-7表达上调时,肝癌细胞增殖和迁移变慢;反之,miR-7表达下调时,肝癌细胞增殖和迁移变快。结论 miR-7靶向调节EGFR表达,其表达与肝癌细胞增殖和迁移呈负相关。miR-7可能是未来肝癌治疗新策略的潜在靶点。

子宫内膜癌组织中dMMR蛋白和miRNA Let-7表达水平及临床价值的研究

目的探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中微小RNA Let-7(miRNA Let-7)表达水平与DNA错配修复(DNA mismatch repair,dMMR)蛋白表达缺失的关系及意义。方法选取2016年5月~2022年12月在江苏省连云港市妇幼保健院行根治性手术切除的子宫内膜癌患者74例,分别用免疫组织化学法检测dMMR蛋白(包括MLH1,PMS2,MSH2,MSH6)的表达、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA Let-7的相对表达量,按照dMMR蛋白表达情况,将EC患者分为表达完整组(n=43)和表达缺失组(n=31),采用Logistic多因素回归分析与dMMR蛋白缺失相关的危险因素、绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估相关因素的预测价值。结果74例EC病例中,miRNA Let-7的表达水平在肌层浸润<1/2组显著高于肌层浸润≥1/2组,差异具有统计学意义(t=1.79,P=0.04);dMMR蛋白表达的缺失率为41.89%,且年龄<55岁组和miRNA Let-7低表达组(<0.715)患者中的dMMR蛋白缺失率高于≥55岁组和miRNA Let-7高表达组(≥0.715),差异具有统计学意义(χ2=3.92,4.50,均P<0.05);Logistic多因素回归分析结果显示miRNA Let-7表达水平是发生dMMR表达缺失的独立危险因素(P=0.012);Spearman相关分析表明,miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失呈明显负相关(r=-0.247,P=0.034);ROC曲线分析结果显示,miRNA Let-7表达水平对于预测EC患者中发生dMMR蛋白的缺失具有一定的价值,其AUC为0.737,最佳临界值为0.77,敏感度和特异度分别为0.651,0.806。结论子宫内膜癌患者中miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失具有相关性,也是发生dMMR蛋白缺失的危险因素,有望为预测dMMR的表达缺失提供帮助。

微小RNAlet-7a及其靶基因K-ras多态性与局部晚期食管鳞癌放化疗疗效的相关性研究

目的探讨微小RNA let-7a及其靶基因K-ras多态性与食管鳞癌患者放化疗疗效的关系。方法收集局部晚期食管鳞癌患者(病例组,92例)和正常体检者(正常组,92例)血液标本。进行微小RNA let-7a rs10877887位点、rs13293512位点及靶基因K-ras rs712位点单核苷酸多态性检测。分析两组间各位点多态性的分型与分布特点及与放化疗疗效、预后及中位PFS的相关性,并运用荧光素酶报告基因实验K-ras是否为微小RNA let-7 a的直接靶基因。结果放化疗疗效与食管鳞癌分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。两组基因多态性分析显示,rs10877887位点多态性无明显差异(P>0.05),rs13293512携带CC基因型的个体以及非TT基因型的个体食管鳞癌的发病风险增加(P<0.05),rs712位点携带TT基因型和非GG基因型的个体食管鳞癌的发病风险明显增加(P<0.05)。同时荧光索酶报告实验证明K-ras是微小RNA let-7a的直接靶基因。预后分析发现,rs10877887位点对疗效和预后无影响(P>0.05);rs13293512携带CC基因型的个体,rs712位点携带TT基因型和非GG基因型的个体,有效率明显降低,中位PFS生存时间明显减少(P<0.05)。COX回归分析,显示淋巴有效治疗转移、临床分期Ⅳ期、rs13293512位点CC基因型、rs712位点TT基因型是食管鳞癌预后的独立危险因素。结论rs13293512位点CC基因型与rs712位点TT基因型增加局部晚期食管鳞癌术后放化疗抵抗性和患病风险,降低放化疗有效疗效和中位PFS生存时间。在放化疗前对患者进行基因型检测,在一定程度上可以预测患者对放化疗的敏感性。

微小RNA let-7a下调黑素瘤A375细胞系BRAF蛋白的表达

目的:评价微小RNA let-7a对黑素瘤A375细胞系BRAF蛋白表达的影响。方法:采用蛋白印迹法检测BRAF蛋白在A375细胞及黑素细胞的表达;用微小RNA let-7a的模拟物及阴性对照分别转染A375细胞,CCK-8实验检测细胞增殖情况。结果:与黑素细胞相比,BRAF蛋白在黑素瘤A375细胞表达升高;与阴性对照相比,微小RNA let-7a的模拟物转染A375细胞后,抑制细胞增殖,BRAF蛋白表达下降。结论:微小RNA let-7a可抑制黑素瘤A375细胞增殖,下调BRAF蛋白表达。

EHD2、miR-let-7c和lncRNA FOXD2-AS1在人喉鳞状细胞癌组织中的表达及其关联性分析

目的:探讨Eps15同源结构域蛋白2 (EHD2)、微小RNA let-7c (miR-let-7c)和长链非编码RNA (lncRNA)FOXD2-AS1在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达水平,阐明EHD2/miRlet-7c/FOXD2-AS1信号轴与LSCC发生的关联性。方法:收集40例LSCC患者的癌组织标本,按照病理类型分为低级别组(中或高分化,32例)和高级别组(低分化,8例),按照肿瘤淋巴结转移(TNM)临床分期分为TNM早期组(Ⅰ-Ⅱ期,13例)和TNM晚期组(Ⅲ-Ⅳ期,27例),按照有无淋巴结转移分为转移组(21例)和无转移组(19例)。另取40例对应癌旁正常组织标本作为对照组。采用免疫组织化学法检测各组标本中EHD2表达情况,分析其与LSCC患者临床病理参数之间的关系,采用生物信息学方法筛选出miR-let-7c作为候选微小RNA (miRNA),与其启动子区域存在结合位点的FOXD2-AS1作为候选lncRNA。取10对新鲜的LSCC组织标本和癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组样本中EHD2 mRNA、miRNA-let-7c和FOXD2-AS1表达水平,并验证其关联性。结果:与癌旁正常组织比较,LSCC组织中EHD2表达水平明显降低(P<0.01),且TNM早期组患者LSCC组织中EHD2阳性表达率明显高于TNM晚期组(P<0.05),病理类别和有无淋巴结转移与EHD2表达无明显关联(P>0.05)。与癌旁正常组织比较,LSCC组织中miR-let-7c表达水平明显降低(P<0.01),FOXD2-AS1表达水平明显升高(P<0.05)。LSCC组织中FOXD2-AS1与miR-let-7c表达水平呈负相关关系(r=-0.67,P<0.05),miR-let-7c与EHD2 mRNA表达水平呈负相关关系(r=-0.83,P<0.01)。结论:EHD2和miR-let-7c在LSCC组织中呈低表达,可能是新的抑癌基因;FOXD2-AS1在LSCC组织中高表达,可能是新的原癌基因;FOXD2-AS1/miR-let-7c/EHD2信号轴可能参与了LSCC的发生发展。

血清微小RNA Let-7a表达水平对儿童哮喘诊断及严重程度评估的价值

目的研究哮喘儿童循环血清微小RNA Let-7a的表达水平,探讨其在哮喘诊断及疾病严重程度评估中的价值。方法本研究纳入90例哮喘儿童(哮喘组)和90例健康儿童(健康对照组)作为研究对象,采用酶联免疫吸附试验法检测研究对象血清中白细胞介素(IL)-13水平,所有研究对象均接受肺功能检测,通过实时荧光定量PCR测量血浆Let-7a表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清Let-7a对儿童哮喘的诊断价值及其区分重度和中轻度哮喘儿童的能力,采用Pearson线性相关分析血清Let-7a与哮喘儿童肺功能参数和血清IL-13的相关性。结果哮喘组儿童血清Let-7a表达水平显著低于健康对照组儿童(P=0.000),哮喘组儿童血清IL-13水平显著高于健康对照组儿童(P=0.000);哮喘组儿童血清Let-7a表达水平随着哮喘严重程度显著下降(P=0.000)。当最佳临界值为2.09,血清Let-7a诊断哮喘儿童的ROC曲线下面积为0.92(95%CI:0.87~0.95,P=0.001),灵敏度和特异度分别为85.0%和90.0%。当最佳临界值为1.60,Let-7a区分重度和中轻度哮喘的ROC曲线下面积为0.80(95%CI:0.68~0.92,P=0.001),灵敏度和特异度分别为75.0%和93.5%。Let-7a表达水平与IL-13水平呈负相关(r=-0.31,P=0.001),Let-7a表达水平与第1秒用力呼气容积和用力肺活量均呈正相关(r=0.270,P=0.004;r=0.412,P=0.002)。结论Let-7a可用作血清非侵入性标志物,用于诊断哮喘及其严重程度。

血液中低表达的微小RNA let-7b-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探索微小RNA let-7b-5p用于早期诊断非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者的可行性。方法从Gene Expression Omnibus(GEO)数据库获取GSE152702、GSE171517、GSE27486以及GSE40738原始数据集,共包含145例NSCLC患者(NSCLC组)和83位健康人(对照组)的血液样本数据。NSCLC组数据涵盖肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)和肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)。采用Wilcoxon秩和检验和标准化均数差(standardized mean difference,SMD)比较NSCLC组和对照组的let-7b-5p表达水平。通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线的曲线下面积(area under the curve,AUC)以及诊断性meta分析的敏感度和特异度评估let-7b-5p诊断NSCLC(LUAD和LUSC)的效能。结果GSE152702、GSE27486以及GSE40738数据集显示,let-7b-5p在LUAD患者的血液中低表达(均P<0.05),GSE152702数据集还显示LUSC患者的血液中let-7b-5p表达低于对照组(P<0.05)。综合LUAD和LUSC组的SMD结果进一步明确NSCLC组血液中let-7b-5p表达较对照组下调(SMD=-0.50,95%CI:-0.75~-0.26)。ROC曲线和诊断性meta分析显示,血液中let-7b-5p的表达水平可区分NSCLC样本和正常样本(AUC=0.79,敏感度=0.71,特异度=0.76)。ROC曲线分析显示,let-7b-5p在NSCLC中的10个潜在靶基因[碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(basic leucine zipper and W2 domains2,BZW2)、细胞分裂周期蛋白25A(cell division cycle 25A,CDC25A)、细胞分裂周期相关基因8(cell division cycle associated8,CDCA8)、Ⅲ型胶原α-1链(collagen typeⅢalpha 1 chain,COL3A1)、外纺锤体极样蛋白1(extra spindle pole bodies like 1,ESPL1)、高迁移率族AT-hook蛋白1(high mobility group AT-hook 1,HMGA1)、胰岛素样生长因子2结合蛋白3(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3,IGF2BP3)、NME/NM23核苷二磷酸激酶4(NME/NM23 nucleoside diphosphate kinase 4,NME4)、葡萄糖磷酸变位酶2样蛋白1(phosphoglucomutase 2 like 1,PGM2L1)以及核糖核苷酸还原酶调节亚基M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)]可区分LUAD与正常肺样本(AUC=0.765~0.980)以及区分LUSC与正常肺样本(AUC=0.749~0.997)。结论检测血液中的let-7b-5p表达水平可能可作为诊断NSCLC(包括LUAD和LUSC)患者的有效手段。

微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义

目的评估微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义。方法回顾性收取新疆医科大学第七附属医院34例直肠癌患者的肿瘤及邻近非癌组织样本,通过RT-qPCR检测组织中Let-7g-3p的表达水平。再从癌症基因图谱(TCGA)数据库中检索直肠癌患者的注册数据,收集人口统计信息,例如年龄、性别和癌症特征。用Kaplan-Meier法分析总生存率,用Cox比例风险回归模型分析独立预后。结果Let-7g-3p在直肠癌组织中表达降低,且与患者的临床病理学特征相关联。此外,低Let-7g-3p表达与不良预后和直肠癌的侵袭性进展有关。单因素分析结果显示,Let-7g-3p表达水平是直肠癌患者总生存率的重要预后标志物:Let-7g-3p(HR=1.782;95%CI:1.173~2.707;P=0.007);TNM分期(HR=0.305;95%CI:0.200~0.465;P<0.001);转移(HR=0.093;95%CI:0.048~0.180;P<0.001)。多变量分析表明,低表达Let-7g-3p是直肠癌中重要的独立预后标志物:Let-7g-3p(HR=0.518;95%CI:0.339~0.792;P=0.012);TNM分期(HR=2.199;95%CI:1.323~3.656;P=0.002),转移(HR=2.886;95%CI:1.739~4.790;P<0.001)。结论下调Let-7g-3p表达与直肠癌的进展有关,可能作为直肠癌的独立预后标志物。

血清中miR-21和let-7a在胃癌无创性诊断及手术效果评定中的作用

目的:探讨血清中miR-21和let-7a在胃癌无创性诊断以及手术效果评定中的作用。方法:采用荧光定量PCR法分别检测正常对照、胃窦溃疡、胃窦炎性息肉、肠上皮化生及胃窦腺癌患者血清样本及配对胃组织中miR-21和let-7a的表达。结果:血清中miR-21和let-7a的含量与配对组织中二者的表达量呈正相关(rS=0.826和0.889,P<0.001)。术后胃癌患者血清中miR-21含量较术前降低(t=0.511,P=0.030),而let-7a则升高(t=0.770,P<0.001)。5组对象血清中miR-21和let-7a含量差异均有统计学意义(χ2=10.841,P=0.028;χ2=26.460,P<0.001)。与正常对照组相比,胃癌患者血清中miR-21含量升高,肠化及胃癌患者血清中let-7a含量降低。结论:血清中miR-21和let-7a的含量可能成为胃癌的无创诊断及手术效果评定的一种新的有效的生物标记。

let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路减少脑出血大鼠神经元调亡

目的:研究微小RNA let-7a对脑出血(ICH)大鼠神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:从48只健康SD大鼠中随机选取8只作为假手术组,将2μLⅦ型胶原酶注入其余大鼠苍白球以构建ICH模型。将造模后的大鼠随机分为模型(2μL生理盐水)组、let-7a激动剂(agomir)组、阴性对照(NC)agomir组、let-7a拮抗剂(antagomir)组和NC antagomir组,每组8只,在侧脑室注射相应药物。7 d后进行神经功能评分;HE染色观察病理损伤;RT-qPCR和Western blot检测相关蛋白表达水平;TUNEL染色检测神经元凋亡情况;利用生物信息学软件预测let-7a与丝裂原活化的蛋白激酶激酶激酶激酶3(MAP4K3)的靶向关系,并在HEK293T细胞中用双萤光素酶报告基因实验进一步验证。结果:动物实验中,let-7a过表达时,神经功能评分降低,病理损伤减轻,胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)低表达,神经元凋亡减少,cleaved caspase-3和cleaved PARP低表达(P<0. 05)。细胞实验中,MAP4K3是let-7a的靶基因之一,且两者为负向调控;let-7a过表达抑制MAP4K3/MKK4/JNK的表达。结论:let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路,减少ICH大鼠神经元凋亡。

microRNA let-7a调控Caspase家族影响白内障发生的机制研究

目的：探讨microRNA let-7a靶向调控Caspase家族的机制及其在年龄相关性白内障发病过程中的作用。方法收集2014年7~9月在中国医科大学附属第四医院（以下简称“我院”）眼科诊断为年龄相关性白内障（排除其他眼部疾病）的患者晶状体前囊膜标本30例，作为实验组；同时收集我院眼科眼库提供的新鲜人眼透明晶状体前囊膜标本15例，作为对照组。利用生物信息学软件预测let-7a可能调控的Caspase家族中的关键基因；采用实时荧光定量PCR （Real time q-PCR）检测实验组和对照组let-7a及其预测靶基因的表达；利用Lipofectamine 2000瞬时转染let-7a mimic和inhibitor，调节人晶状体上皮细胞中let-7a的表达，利用Real time q-PCR法验证转染效率，并检测预测靶基因的表达变化。结果3种不同的生物信息学软件预测到Caspase家族中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9可能为let-7a的靶基因。与对照组比较，实验组let-7a的表达显著降低，Caspase-3、Cas-pase-8、Caspase-9的表达显著升高。let-7a mimic转染组，let-7a的表达显著升高，Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达显著降低；let-7a inhibitor转染组，let-7a的表达显著降低，Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达显著升高；差异均有高度统计学意义（P＆lt;0.01）。结论let-7a可能通过靶向调控Caspase家族成员Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达，在年龄相关性白内障发病过程中发挥重要作用，let-7a可能成为白内障非手术治疗的新靶点。

Let-7a对人乳腺癌MCF-7细胞的作用及机制探讨

目的观察Let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞株的抑制作用,并探讨其作用机制。方法分别用LipofectamineTM2000介导的Let-7a和siRNA转染人乳腺癌细胞株MCF-7(分别为Let-7a组、空白对照组和阴性对照组),半定量RT-PCR法检测两组C-myc mRNA表达;Western blot法测定转染24 h后C-myc蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖抑制率。结果Let-7a组的C-myc mRNA表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组,P均<0.01;在MCF-7细胞中存在相对分子质量62 kD的特异性条带,与C-myc相对分子质量相符,Let-7a组特异性条带明显弱于对照组;Let-7a组细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组(P<0.05),且具有时间和浓度依赖性。转染24 h后,Let-7a组凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论Let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞增殖有抑制作用;其机制可能为抑制C-myc基因的表达。

Let-7 miRNA家族与胃癌的研究进展

胃癌发病率较高,对人们的健康造成了严重威胁。其早期临床症状并不典型且诊断率低,患者出现明显临床症状时多数已发展为进展期或晚期,此时手术效果及预后不理想。早期胃癌的治疗主要以手术根治为主,而进展期胃癌还需要联合化疗等方式进行后续治疗,但由于化疗药物多耐药,导致预后不佳。miRNA广泛参与了细胞的一系列重要生理活动,包括细胞的增殖、凋亡、发育、分化和代谢等,与胃癌及各类肿瘤的发生发展和预后密不可分。Let-7 miRNA家族是第2个被发现的miRNA。研究发现其在胃癌及各类肿瘤中低表达,但其调控机制尚不清楚。因此,明确Let-7 miRNA家族与胃癌的关系对胃癌的诊断治疗及预后有着十分重要的作用。

细胞周期蛋白25A在非小细胞肺癌中的表达及与Let-7的关系

目的明确细胞周期蛋白25A(CDC25A)在NSCLC组织中的表达及与临床病理特征的关系,并探讨其与miRNA let-7a1、let-7c表达的相关性。方法收集53例肺组织手术标本,其中包括NSCLC组织44例,收集其癌组织和癌旁正常组织(病理证实),和良性肺疾病组织9例。免疫组化Elivision法检测CDC25A蛋白的表达;用Trizol法提取总RNA,采用荧光定量RT-PCR检测CDC25AmRNA的表达,加尾法荧光定量RT-PCR检测let-7a1和let-7c mRNA的表达。结果CDC25A蛋白表达的阳性率在NSCLC组织明显高于癌旁正常组织和良性肺疾病组织(P<0.05)。NSCLC组织中CDC25A蛋白的表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤分化程度、临床分期无关(P>0.05),与吸烟、淋巴结转移相关(P<0.05)。CDC25A mRNA在NSCLC组织中的表达量明显高于癌旁正常组织和良性肺疾病组织(F=6.33,P<0.05),在癌旁正常组织和良性肺疾病组织中表达无明显差异(P>0.05)。Pearson相关分析显示CDC25A与let-7c在NSCLC组织和癌旁正常组织中表达均呈明显负相关(r癌组织=-0.42,r癌旁正常组织=-0.40),与let-7a1之间无明显相关。结论CDC25A在NSCLC组织表达水平明显增高,且与let-7c表达呈明显负相关,推测CDC25A可能是let-7c的下游靶基因。

let-7a1和let-7c在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨人类微小RNA let-7a1和let-7c在肺癌组织中的表达及与临床病理特征之间的关系。方法:收集53例肺组织手术标本及临床资料,其中包括肺癌组织44例(收集其癌组织和癌旁正常组织)和良性肺疾病组织9例。并收集病人吸烟史、肿瘤TNM分期、病理分化程度及有无淋巴结转移等。采用Trizol法提取总RNA,采用荧光定量PCR检测let-7a1和let-7c的表达,分析其在肺癌组织、癌旁正常组织及良性肺疾病组织中的表达差异及与临床特征的关系。结果:肺癌组织中let-7a1和let-7c的相对表达量均低于癌旁正常组织和良性肺疾病组织(P<0.05);癌旁正常组织中let-7a1和let-7c的相对表达量均低于良性肺疾病组织(P<0.05)。let-7a1表达与分化程度、吸烟和TNM分期有关(P<0.05~P<0.01),与淋巴结有无转移无关(P>0.05)。let-7c表达与淋巴结转移、分化程度有关(P<0.01),与吸烟、TNM分期无关(P>0.05)。结论:let-7a1和let-7c基因在肺癌组织中相对表达量降低,并且随临床分期进展、淋巴结转移呈明显下降趋势,提示两者与肺癌的发生、发展及转移密切相关,let-7a1和let-7c可能成为肺癌早期诊断生物标志因子,并可能成为肺癌的靶向治疗新的靶点,为高危人群的早期干预提供实验依据。

变应性鼻炎患者血清miR-Let-7e、sCD48水平变化及其与病情的关系

目的 观察变应性鼻炎(AR)患者血清微小核糖核酸Let-7e(miR-Let-7e)、可溶性CD48(sCD48)水平变化,并探讨其与患者病情的关系。方法 选取AR患者102例为观察组,同期体检健康志愿者60例为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-Let-7e水平,ELISA法检测血清sCD48水平,比较不同临床特征的AR患者血清miR-Let-7e、sCD48水平,分析二者与病情严重程度、变应性鼻炎评分(SFAR评分)、免疫球蛋白E(IgE)的关系。多因素Logistic回归分析影响中重度AR发生的相关因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-Let-7e、sCD48单独及联合检测对中重度AR的预测价值。结果 观察组血清miR-Let-7e、sCD48水平分别为2.32±0.57、(4.52±0.68)μg/L,对照组分别为4.69±0.64、(0.42±0.16)μg/L,两组比较P均<0.05。不同性别、年龄、症状发作时间、变应原的AR患者血清miR-Let-7e、sCD48水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);中重度、SFAR评分≥7分、IgE阳性的AR患者血清miR-Let-7e分别低于轻度、SFAR评分<7分、IgE阴性者,血清sCD48分别高于轻度、SFAR评分<7分、IgE阴性者(P均<0.05)。AR患者血清miR-Let-7e与病情严重程度、SFAR评分、IgE阳性均呈负相关关系,血清sCD48与病情严重程度、SFAR评分、IgE阳性均呈正相关关系(P均<0.05)。血清miR-Let-7e升高是影响中重度AR发生的独立保护因素,血清sCD48升高是影响中重度AR发生的独立危险因素[β分别为-0.456、0.581,OR及95%CI分别为0.634(0.469~0.857)、1.788(1.289~2.480),P均<0.05]。血清miR-Let-7e、sCD48单独与联合预测中重度AR发生的曲线下面积及95%CI分别为0.798(0.740~0.869)、0.823(0.753~0.879)、0.884(0.813~0.934),敏感度分别为59.3%、62.8%、90.8%,特异度分别为78.3%、80.2%、75.3%。结论 AR患者血清miR-Let-7e水平降低、sCD48水平升高,二者与病情严重程度有关,联合检测有助于判断病情。

卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a、Let-7a表达变化及与患者预后的关系

目的观察卵巢浆液性囊腺癌组织中微小RNA-20a(miR-20a)和Let-7a的表达变化,并探讨二者与患者预后的关系。方法卵巢浆液性囊腺癌患者93例,术中留取肿瘤组织。分别留取同期手术治疗的卵巢交界性肿瘤患者(43例)及卵巢浆液性囊腺瘤患者(48例)的肿瘤组织,留取正常卵巢组织(40例份)。采用real-time PCR技术检测不同组织中的miR-20a和Let-7a。采用Kaplan-Meier法分析卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a、Let-7a表达与患者预后的关系。结果各种卵巢肿瘤组织中miR-20a表达量高于正常卵巢组织、Let-7a表达量低于正常卵巢组织(P均<0.05);卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a表达量高于卵巢交界性肿瘤组织及卵巢浆液性囊腺瘤组织、Let-7a表达量低于卵巢交界性肿瘤组织及卵巢浆液性囊腺瘤组织(P均<0.05)。miR-20a、Let-7a与卵巢浆液性囊腺癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移和远处转移发生情况有关(P均<0.05)。卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a与Let-7a表达呈负相关关系(r=-0.489,P<0.05)。卵巢浆液性囊腺癌患者随访至2014年2月28日,miR-20a表达量>1.42者中位生存时间短于miR-20a表达量≤1.42者,Let-7a表达量<0.98者中位生存时间短于Let-7a表达量≥0.98者(P均<0.05)。结论卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a呈高表达、Let-7a呈低表达,二者可能共同参与了卵巢浆液性囊腺癌的发生、发展,并与患者预后有关。

Let-7家族启动子区多态性与胃癌的关联研究

目的探讨let-7i启动子区rs10877887和let-7a-1/let-7f-1/let-7d簇启动子区rs13293512多态性与胃癌发生的关系。方法采用TaqMan探针法检测172例胃癌患者和224例健康对照中rs10877887和rs13293512的分布频率,运用χ2检验分析其与胃癌的相关性。结果胃癌患者中rs10877887CC、CT/CC基因型和C等位基因频率明显高于健康对照组(20.9%vs.13.4%,63.4%vs.53.1%,42.2%vs.33.3%),调整优势比(OR)分别为1.98、1.53和1.46(P=0.02、0.04和0.01)。rs13293512位点在胃癌组和健康对照组中的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论let-7i启动子区rs10877887多态性与中国汉族人群胃癌的发病有关。

Let-7对施万细胞凋亡的调节作用

目的:探讨Let-7对施万细胞凋亡的调控作用及其发挥作用的靶基因。方法:采用Annexin V/PI双染色法检测Let-7对H2O2刺激的原代培养的施万细胞凋亡的调控作用,双荧光素酶报告基因系统检测Let-7对白介素10的3’UTR的直接靶向作用。结果:Let-7能够抑制H2O2刺激的原代培养的施万细胞的凋亡,并可直接作用于白介素10基因的3’UTR。结论:Let-7可以直接靶向IL10的3’UTR,从而通过下调靶基因IL10的表达调控施万细胞的凋亡。