乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(HCC)患者血清微小核糖核酸(miR)-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义。方法选取2018年1月至2020年10月该院收治的90例HBV相关性HCC患者作为HBV相关性HCC组。另选取同期该院的90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达。分析miR-125a-5p、miR-127-3p表达与HBV相关性HCC患者病理特征的关系。根据HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达的平均值分为高、低表达组,通过Kaplan-Meier法绘制各组不同的生存曲线。通过Cox回归分析影响HBV相关性HCC患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达对HBV相关性HCC患者死亡的预测价值。结果HBV相关性HCC组血清miR-125a-5p、miR-127-3p相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期、淋巴结转移的HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-125a-5p高表达组3年总生存率(64.58%)高于miR-125a-5p低表达组(38.10%),miR-127-3p高表达组3年总生存率(66.00%)高于miR-127-3p低表达组(35.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.770、9.507,P=0.005、0.002)。HBV相关性HCC患者死亡的独立危险因素为肿瘤最大径≥5 cm、低分化、有脉管侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移,其独立保护因素为miR-125a-5p、miR-127-3p升高。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合预测的曲线下面积(AUC)为0.907,高于血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达单独预测的AUC(0.790、0.787),差异有统计学意义(Z=2.691、3.152,P=0.007、0.002)。结论HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p低表达,与肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期和预后有关,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合对HBV相关性HCC患者预后有较高的预测价值。

微小RNA-133a-5p在丙泊酚防治大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及作用机制

目的观察微小RNA-133a-5p(miR-133a-5p)在丙泊酚防治大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中的作用,并探讨其可能作用机制。方法①丙泊酚对I/R大鼠肝功能及肝组织miR-133a-5p、有丝分裂原激活蛋白激酶6(mitogen-activated protein kinase 6,MAPK6)mRNA表达的影响观察:取18只大鼠分为丙泊酚组、模型组及对照组,每组6只。丙泊酚组及模型组对肝脏组织进行缺血再灌注操作,丙泊酚组在缺血再灌注操作的同时注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)。再灌注结束时采集各组大鼠下腔静脉血4 mL,采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT),采血后处死各组大鼠分离肝脏组织,采用qRT-PCR法检测大鼠肝组织miR-133a-5p、MAPK6 mRNA。②miR-133a-5p抑制剂联合丙泊酚对I/R大鼠肝功能及肝组织miR-133a-5p、MAPK6mRNA表达的影响观察:另取24只大鼠分为甲、乙、丙、丁组,每组6只。四组均对肝脏组织进行缺血再灌注操作,甲组在缺血再灌注操作的同时注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)及miR-133a-5p抑制剂,乙组、丙组在缺血再灌注操作的同时分别注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)、丙泊酚+等量生理盐水,丁组不做任何处理。再灌注结束时采集各组大鼠下腔静脉血4 mL,采用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST,采血后处死各组大鼠分离肝脏组织,采用qRT-PCR法检测四组大鼠肝组织miR-133a-5p、MAPK6mRNA。结果与对照组相比,模型组大鼠血清AST、ALT活性升高,肝脏组织miR-133a-5p相对表达量降低、MAPK6mRNA相对表达量升高(P均<0.01);与模型组相比,丙泊酚组大鼠血清AST、ALT水平降低,肝组织miR-133a-5p相对表达量升高、MAPK6mRNA相对表达量降低(P均<0.05)。与乙组相比,甲组大鼠血清ALT和AST水平高,肝组织MAPK6mRNA相对表达量高(P均<0.01);与乙和丙组相比,丁组大鼠血清ALT和AST水平升高,肝组织MAPK6mRNA相对表达量高(P均<0.01)。结论注射丙泊酚后肝脏I/R大鼠的肝损伤程度减轻,肝脏组织miR-133a-5p表达升高、MAPK6 mRNA表达降低。抑制miR-133a-5p表达可逆转丙泊酚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的防治作用。丙泊酚可能通过促进肝脏组织miR-133a-5p表达,抑制肝组织MAPK6 mRNA表达,减轻大鼠的肝脏I/R损伤。

血清Cx43 miR-125a-5p对四肢骨折延迟愈合临床诊断价值

目的 探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)、细胞间隙连接蛋白43(Cx43)在四肢骨折患者血清中的表达水平及与骨折延迟愈合的关系。方法 选取2018年1月至2021年12月秦皇岛市第一医院收治的188例四肢骨折患者为研究对象,其中骨折延迟愈合患者30例作为延迟组,正常愈合患者158例为对照组。收集两组一般资料,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定两组对象血清miR-125a-5p、Cx43水平;利用受试者工作特征(ROC)曲线评价Cx43、miR-125a-5p水平对四肢骨折延迟愈合的预测价值;logistic回归分析影响四肢骨折延迟愈合发生的危险因素。结果 本研究中188例四肢骨折患者共有30例发生延迟愈合,发生率为15.96%;术后6周、术后12周时,延迟组血清Cx43表达水平低于对照组,miR-125a-5p水平高于对照组(P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,Cx43(OR=0.127,95%CI:0.021~0.775)、miR-125a-5p(OR=3.056,95%CI:1.092~8.552)、年龄(OR=1.142,95%CI:1.008~1.294)、吸烟(OR=1.537,95%CI:1.115~2.117)、骨折类型(OR=1.671,95%CI:1.084~2.577)、合并糖尿病(OR=2.024,95%CI:1.074~3.812)、合并骨质疏松(OR=1.525,95%CI:1.128~2.062)是影响四肢骨折延迟愈合发生的因素;ROC曲线结果显示,术后6周和术后12周血清Cx43、miR-125a-5p水平联合预测四肢骨折患者延迟愈合的曲线下面积(AUC)分别为0.944、0.964,均高于单一指标检测。结论 骨折延迟愈合患者血清中Cx43表达下调,miR-125a-5p表达上调,二者均是骨折延迟愈合的危险因素,联合检测二者表达水平对骨折延迟愈合有较高的预测价值。

微小RNA-98-5p靶向调控核糖核苷酸还原酶小亚基M2调控宫颈癌细胞顺铂的耐药性

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p对顺铂(DDP)耐药宫颈癌细胞顺铂敏感性的调控及其机制。方法用脂质体法将DDP+miR-NC组(转染miR-NC)、DDP+miR-98-5p组(转染miR-98-5p mimics)、DDP+si-NC组(转染si-NC)、DDP+si-核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)组(转染si-RRM2)、DDP+miR-98-5p+pc DNA组(共转染miR-98-5p mimics和pc DNA)、DDP+miR-98-5p+pc DNA-RRM2组(共转染miR-98-5p mimics和pc DNA-RRM2)转染至He La/DDP组细胞;Real-time PCR、Western blotting、CCK-8、迁移实验(Transwell)和双荧光素酶报告基因检测细胞中miR-98-5p、RRM2、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、基因金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达、细胞的抑制率、半数抑制浓度(IC50)、迁移和侵袭及荧光活性。结果与He La组细胞相比,He La/DDP组细胞中miR-98-5p表达显著降低,RRM2表达显著升高,IC50值显著升高(P<0.05);过表达miR-98-5p或抑制RRM2可明显抑制He La/DDP细胞的增殖、迁移和侵袭,下调cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白,上调P21蛋白;miR-98-5p明显抑制野生型RRM2细胞的荧光活性,并且过表达RRM2反转了miR-98-5p对He La/DDP细胞增殖、迁移侵袭的抑制作用。结论MiR-98-5p可抑制顺铂耐药宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,增强对顺铂的敏感性,其机制与靶向RRM2相关,将可为顺铂耐药宫颈癌细胞的治疗提供方向。

miR-125a-5p靶向RRM2调控A549/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探究微小RNA-125a-5p(microRNA-125a-5p, miR-125a-5p)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:使用ENCORI在线数据库分析miR-125a-5p在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)的方法检测人肺上皮正常细胞(BEAS-2B)与非小细胞肺癌细胞系(A549、A549/DDP、SK-MES-1)中miR-125a-5p的表达水平;使用RT-qPCR与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测A549、A549/DDP细胞中核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)的表达情况;生物信息学方法分析miR-125a-5p与RRM2的靶向调控序列;双荧光素酶基因报告实验与Western blot测定miR-125a-5p与RRM2在A549/DDP细胞中的调控关系;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的存活率与半数抑制浓度(half inhibitory concentration, IC_(50));流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在非小细胞肺癌组织与细胞系中miR-125a-5p的表达水平显著降低(P<0.05);与A549细胞相比,A549/DDP细胞中RRM2的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-125a-5p部分恢复了顺铂对A549/DDP细胞的抑制作用,使细胞存活率显著降低(P<0.05),凋亡率显著增加(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-125a-5p能够靶向结合RRM2(P<0.05);过表达RRM2逆转了miR-125a-5p对A549/DDP的作用,降低了A549/DDP对顺铂的敏感性(P<0.05)。结论:miR-125a-5p可通过靶向下调RRM2基因的表达,从而部分恢复A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

不明原因复发性流产患者绒毛组织中hsa-miR-125a-5p及其靶基因表达的研究

目的检测不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织中差异微小RNA(miRNA)hsa-miR-125a-5p及其可能靶基因基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达,探索hsa-miR-125a-5p与URSA发病的可能关系。方法选取2020年1月至2021年10月于北京市海淀区妇幼保健院诊治的25例URSA患者为研究对象(URSA组),同期28例正常早孕妇女作为对照(对照组)。采用实时荧光定量PCR方法检测两组绒毛组织中hsa-miR-125a-5p的相对表达量和MMP-2 mRNA水平;采用免疫组化方法检测MMP-2的蛋白水平。结果URSA组绒毛组织hsa-miR-125a-5p的相对表达量显著高于对照组[(1.54±0.59)vs.(0.43±0.12),P<0.05],而MMP-2 mRNA[(0.22±0.21)vs.(2.61±1.22)]和蛋白表达水平[(11.15±3.11)vs.(71.67±18.05)]均显著低于对照组(P<0.05)。结论URSA患者绒毛组织中hsa-miR-125a-5p的表达异常,可能影响其靶基因MMP-2的正常表达,从而导致胚胎粘附和植入能力下降、滋养细胞侵袭能力受损,导致复发性流产发生。

miR-125a-5p抑制胶质瘤细胞增殖和糖酵解的初步研究

目的研究微小核苷酸125a-5p(miR-125a-5p)在胶质母细胞瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和糖酵解的影响。方法定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测miR-125a-5p在人源胶质母细胞瘤组织中的表达情况;利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测miR-125a-5p对细胞活力的影响;分别利用三磷酸腺苷(ATP)和乳酸试剂盒检测miR-125a-5p对ATP和乳酸生成的影响。结果 miR-125a-5p在胶质母细胞瘤组织中的表达明显低于肿瘤周边组织;miR-125a-5p对胶质瘤细胞具有生长抑制作用;miR-125a-5p减少了胶质瘤细胞中ATP和乳酸的产生;miR-125a-5p和有氧糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-DG)具有协同抑制胶质瘤细胞增殖的作用。结论 miR-125a-5p抑制胶质瘤细胞的增殖和糖酵解,将来可能是潜在的胶质瘤治疗新靶点。

miR-125a-5p通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的上皮-间充质转化

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)通过GSK-3β/Snail信号通路对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:RT-qPCR检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,同时检测miR-125a-5p质粒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的转染效率;趋化运动实验与Transwell侵袭实验检测趋化运动能力和侵袭能力;Western blot检测EMT相关标志物的变化,同时检测磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)的蛋白水平及Snail的转核情况。结果:乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P<0.05);miR-125a-5p在转染miR-125a-5p质粒的MDA-MB-231细胞中表达水平明显增高;MDA-MB-231细胞的趋化运动能力在表皮生长因子(EGF)浓度为10μg/L时最强;在EGF刺激下,与MDA-MB-231/NC细胞组相比,MDAMB-231/miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显降低,上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)表达量升高,波形蛋白(vimentin)和p-GSK-3β的蛋白水平明显降低,同时Snail转核受到明显抑制;与MDA-MB-231/miR-125a-5p+Con细胞组相比,MDA-MB-231/miR-125a-5p+GAB2细胞组的侵袭能力明显增强,E-cadherin表达量降低,vimentin和p-GSK-3β的蛋白水平明显升高,同时促进Snail转核。结论:miR-125a-5p可通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。

微小RNA-186-5p对肾癌细胞增殖与侵袭能力的影响

目的观察微小RNA-186-5p(MiR-186-5p)对肾癌细胞侵袭和增殖的影响并探讨可能存在的机制。方法培养正常肾小管上皮细胞系HK-2、原代及转染MiR-186-5p的肾癌细胞(Caki-2细胞),Real-time PCR检测MiR-186-5p的水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法评估各组细胞的存活率,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blotting检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)水平。结果肾小管上皮细胞系HK-2和转染了MiR186-5p的Caki-2细胞的MiR186-5p水平均显著高于Caki-2细胞(P<0.05)。HK-2细胞和Caki-2细胞的存活率接近100%,而转染了MiR-186-5p的Caki-2细胞的存活率显著降低至72.86%(P<0.05)。与HK-2细胞的迁移数目相比,Caki-2细胞迁移较多(P<0.05);转染MiR-186-5p的Caki-2细胞迁移较少(P<0.05)。与HK-2细胞内Akt和mTOR分子磷酸化水平相比,Caki-2细胞内Akt和mTOR分子磷酸化水平显著增加(P<0.05);而转染了MiR-186-5p的Caki-2细胞内Akt和mTOR分子的磷酸化水平有所下降(P<0.05)。结论MiR-186-5p能够有效抑制肾癌细胞的侵袭与增殖,可能与其抑制Akt/mTOR信号通路的激活相关。

血清miR-122-5p、miR-618、miR-202联合检测对原发性肝癌的诊断价值分析

目的分析血清微小核糖核苷酸-122-5p(miR-122-5p)、微小核糖核苷酸-618(miR-618)、微小核糖核苷酸-202(miR-202)联合检测对原发性肝癌的诊断价值。方法选取应急总医院2022年1月~2023年1月收治的原发性肝癌患者118例纳入原发性肝癌组,另择同期120例良性肝脏疾病患者纳入良性组,120例健康体检者为健康对照组,回顾性收集临床资料。比较3组研究对象血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平,通过Pearson相关性分析分析血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平之间的相关性;以原发性肝癌组作为阳性组,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的诊断价值。结果原发性肝癌组血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平低于良性组和健康对照组,良性组低于健康对照组,差异有统计学意义(F=193.644、88.486、105.045,P<0.05)。年龄≥60岁、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、乙型肝炎病毒(HBV)感染、肿瘤数目多发的原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平更低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202间表达水平均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的预测价值分析曲线下面积(AUC)分别为0.839、0.814、0.807、0.932,灵敏度分别为85.59%、84.75%、79.66%、88.98%,特异度分别为75.00%、68.75%、70.00%、85.42%,联合检测均为最高。结论随着原发性肝癌发生及病情进展患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202表达水平降低,联合检测对原发性肝癌的诊断价值较高。

miR-30a-5p启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝损伤中的作用

目的:探讨微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)启动子区DNA甲基化在肝损伤中的作用。方法:随机选取4周龄胱硫醚β-合成酶(CBS)基因正常(CBS+/+)小鼠(n=12)及单基因敲除(CBS+/-)小鼠(n=12),均给予高蛋氨酸饮食8周。HL-7702细胞体外常规培养,分为对照(control)组、同型半胱氨酸(Hcy)组和Hcy+5-氮杂胞苷(AZC)组。全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;微板法测定肝细胞ALT和AST水平;小鼠肝脏石蜡切片行HE染色观察肝脏损伤情况;细胞活力染色检测肝细胞活力;RT-qPCR法检测小鼠肝脏组织和肝细胞中miR-30a-5p的表达;Pearson相关性分析肝脏miR-30a-5p表达与血清ALT和AST水平的相关性;巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测小鼠肝脏组织以及肝细胞中miR-30a-5p启动子区DNA甲基化水平的变化。结果:与CBS+/+对照组相比,CBS+/-组小鼠血清的Hcy、ALT和AST水平显著升高(P<0.05);HE染色显示肝细胞肿胀,可见核碎裂、溶解;肝脏miR-30a-5p表达明显降低(P<0.01);小鼠肝脏组织中miR-30a-5p的表达与血清ALT和AST的水平呈负相关(r2=0.4557,P=0.0003;r2=0.4626,P=0.0003);miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01)。在细胞水平,与control组相比,Hcy组的ALT和AST水平升高(P<0.05,P<0.01),细胞活力显著降低,肝细胞miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01),而使用AZC后miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平降低(P<0.05),miR-30a-5p的表达上调(P<0.05)。结论:miR-30a-5p启动子区DNA高甲基化可能在肝损伤中发挥重要作用。

卵巢癌患者miR-497、miR-125a-5p的表达及与其临床特征和生存率的关系

目的:分析卵巢癌患者癌组织中微小RNA-497(miR-497)和微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)的表达情况及其临床意义。方法:选取2018-06—2019-12在本院手术治疗的96例卵巢癌患者作为研究对象,将手术切除的卵巢癌组织作为试验组,癌旁(>2cm)正常组织为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-497和miR-125a-5p的表达情况;比较不同临床病理特征卵巢癌患者miR-497和miR-125a-5p表达水平的差异;分析卵巢癌患者三年生存率与miR-497和miR-125a-5p水平的关系;分析影响卵巢癌患者生存率的危险因素。结果:试验组miR-497和miR-125a-5p的表达量均明显低于对照组(P<0.01);与Ⅰ-Ⅱ期卵巢癌患者相比,Ⅲ-Ⅳ期患者miR-497、miR-125a-5p表达水平均较低(P<0.01),与无淋巴结转移患者相比,淋巴结转移者miR-497、miR-125a-5p表达水平均较低(P<0.05);miR-497、miR-125a-5p低表达组生存率均明显低于高表达组(P<0.05);COX回归分析显示miR-497低表达及miR-125a-5p低表达是影响卵巢癌患者生存率的独立危险因素。结论:卵巢癌患者癌组织中miR-497和miR-125a-5p表达下调,其表达水平与卵巢癌患者三年生存率密切相关。

miR-125a-5p靶向LIMK1逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织及其细胞株A549和A549/DDP中miR-125a-5p和LIM激酶1(LIMK1)的表达;在A549/DDP细胞中上调或下调miR-125a-5p或LIMK1表达,分别采用MTT法、流式细胞术和Western blot检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达;TargetScan在线预测、萤光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和LIMK1的靶向关系;共表达miR-125a-5p和LIMK1,检测细胞活力、凋亡率及耐药相关蛋白表达。结果:在非小细胞肺癌组织及其细胞株中,miR-125a-5p表达下调,LIMK1表达上调(P<0.05);萤光素酶报告基因实验表明miR-125a-5p可负向调控LIMK1表达。过表达miR-125a-5p或敲减LIMK1表达使A549/DDP细胞的活力下降,细胞凋亡率增加,顺铂的IC50减小,耐药相关蛋白表达下调(P<0.05)。过表达LIMK1则使miR-125a-5p对A549/DDP细胞活力和耐药相关蛋白表达的抑制作用减弱。结论:miR-125a-5p能通过抑制LIMK1基因表达,下调耐药相关蛋白表达,从而逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。

子宫内膜异位症患者血浆miR-125a-3p、miR-140-5p的水平变化及临床意义

目的探讨子宫内膜异位症患者血浆微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)、微小RNA-140-5p(miR-140-5p)的水平变化及临床意义。方法选取该院收治的60例子宫内膜异位症患者作为研究组,选取同期体检健康女性50例作为对照组。比较两组miR-125a-3p、miR-140-5p、糖类抗原125(CA125)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关分析探讨研究组miR-125a-3p、miR-140-5p水平与CA125、VEGF、TNF-α、IL-1β水平的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析各指标对子宫内膜异位症的诊断价值。结果研究组miR-125a-3p、miR-140-5p、VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-125a-3p、miR-140-5p水平与VEGF、CA125、TNF-α、IL-1β水平均呈正相关(P<0.05),miR-125a-3p水平与miR-140-5p水平呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-125a-3p诊断子宫内膜异位症的曲线下面积(AUC)为0.862,灵敏度为86.7%,特异度为78.0%;miR-140-5p诊断子宫内膜异位症的AUC为0.759,灵敏度为71.7%,特异度为72.0%。结论子宫内膜异位症患者存在血浆miR-125a-3p、miR-140-5p高表达,对子宫内膜异位症具有一定的诊断价值。

miR-125a-5p靶向MEIS2基因对垂体瘤AtT20细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)是否可靶向调控MEIS2基因表达并分析其对垂体瘤AtT20细胞增殖及凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测AtT20细胞及小鼠正常垂体细胞(NPC)中miR-125a-5p及MEIS2 mRNA表达量。采用瞬时转染技术分别将miR-125a-5p mimic质粒、anti-miR-125a-5p抑制剂及si-MEIS2质粒转染至AtT20细胞。双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p与MEIS2的靶基因关系,同时共转染miR-125a-5p mimic与pcDNA-MEIS2验证miR-125a-5p是否通过靶向MEIS2表达发挥作用。MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测各组细胞MEIS2蛋白表达。结果qRT-PCR检测结果显示,与NPC比较,miR-125a-5p在AtT20细胞中表达水平显著降低,MEIS2 mRNA表达水平显著升高;与miR-NC组比较,miR-125a-5p组miR-125a-5p表达水平显著升高。Western blotting检测结果显示,与NPC比较,AtT20细胞中MEIS2蛋白表达水平显著升高;与si-NC组比较,si-MEIS2组MEIS2蛋白表达水平显著降低;与miR-125a-5p+pcDNA组比较,miR-125a-5p+pcDNA-MEIS2组MEIS2蛋白表达水平显著升高。双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-125a-5p可直接调控MEIS2基因表达。MTT检测结果显示,与miR-NC组比较,miR-125a-5p组细胞增殖能力显著降低,抑制MEIS2表达细胞增殖能力显著降低;与miR-125a-5p+pcDNA组相比,miR-125a-5p+pcDNA-MEIS2组细胞增殖能力显著升高。流式细胞术检测结果均与MTT检测结果呈反向关系。结论miR-125a-5p通过负向调控MEIS2进而抑制垂体瘤AtT20细胞增殖能力并促进细胞凋亡。

sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p在不稳定性心绞痛中的表达及相关性研究

目的探讨可溶性VCAM-1分子(sVCAM-1)、N末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)、微小核糖核苷酸126-5p(miR-126-5p)在不稳定性心绞痛中的表达及相关性研究。方法选取2021年3月至2022年3月我院收治的胸痛患者160例,其中不稳定性心绞痛患者90例作为研究组,另外70例为对照组。对比两组临床特征病例特征的相关性;分析对比研究组和对照组sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p的水平;比较sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p在不同冠状病变血管支数与不同Gensini评分的相关性,并采用ROC曲线分析sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p的诊断价值。结果研究组总胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显高于对照组(P<0.05);研究组sVCAM-1、NT-pro BNP水平均高于对照组,而miR-126-5p的表达低于对照组(P<0.05);三支病变组患者sVCAM-1、NT-pro BNP水平明显高于双支病变组、单支病变组,且双支病变组高于单支病变组,而miR-126-5p表达低于双支病变组、单支病变组,且双支病变组低于单支病变组(P<0.05);高分组sVCAM-1、NT-pro BNP水平明显高于低分组、中分组,且中分组高于低分组,而miR-126-5p表达低于低分组、中分组,且中分组低于低分变组(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p联合检测在不稳定型心绞痛具有较高的诊断价值。结论sVCAM-1、NT-pro BNP表达水平与不稳定心绞痛患者病变情况及严重程度呈正相关,而与miR-126-5p的表达水平呈负相关,联合检测具有较高的诊断价值。

Circ_DOCK1调节miR-122-5p/PPIB轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状核糖核苷酸_胞质分裂作用因子1(Circ_DOCK1)通过调节微小核糖核苷酸-122-5p(miR-122-5p)/肽酰脯氨基顺反异构酶B(PPIB)轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR检测结直肠癌患者癌组织与癌旁组织中的circ_DOCK1、miR-122-5p、PPIB表达水平。取人结直肠细胞SW480,脂质体转染法转染circ_DOCK1干扰质粒(sh-circ_DOCK1)、miR-122-5p抑制物(anti-miR-122-5p)和模拟物(miR-122-5p mimics),以CCK-8法、划痕试验和Transwell实验检测结直肠癌细胞的增殖、迁移和凋亡情况。以生物信息学和荧光素酶报告基因实验分析circ_DOCK1与miR-122-5p的靶向关系。结果结直肠癌组织的circ_DOCK1、PPIB mRNA表达水平高于癌旁组织,miR-122-5p表达水平低于癌旁组织。与挽救组和NC-circ_DOCK1组比较,sh-circ_DOCK1组的circ_DOCK1和PPIB mRNA表达量下降,miR-122-5p表达量升高,且细胞转染48 h和72 h的A值及细胞迁移率和穿膜细胞数均降低(P<0.05);挽救组和NC-circ_DOCK1组的数据比较差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学软件预测circ_DOCK1含有与miR-122-5p互补的核苷酸序列。转染miR-122-5p mimics后,circ_DOCK1的野生型荧光素酶报告质粒相对活性降低,转染anti-miR-122-5p后,circ_DOCK1的野生型荧光素酶报告质粒相对转录活性增加(P<0.05),circ_DOCK1突变型荧光素酶报告质粒相对活性值变化无统计学意义(P>0.05)。结论circ_DOCK1在结肠癌组织中的表达上调,且能通过调节miR-122-5p/PPIB轴影响结直肠癌的增殖、迁移和侵袭,可考虑经circ_DOCK1作为结直肠癌的分子靶向治疗研究方向。

miR-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清中表达水平变化及临床意义

目的分析微小核糖核苷酸(miRNA)-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清中相对表达水平变化及临床意义。方法收集2019年5月至2021年3月绵阳市中心医院收治的124例子宫内膜癌患者作为子宫内膜癌组,另选择同期体检的124例健康女性作为健康对照组。应用实时荧光定量PCR检测两组血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相对表达水平。比较两组血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相对表达水平,分析其与肿瘤临床分期、淋巴结转移的关系,通过Pearson相关分析miR-125b、miR-29a、miR-425-5p之间的相关性。结果子宫内膜癌组血清miR-425-5p相对表达水平明显高于健康对照组,血清miR-125b、miR-29a相对表达水平明显低于健康对照组(P<0.05);Ⅰ~Ⅱ期子宫内膜癌患者血清miR-125b、miR-29a相对表达水平高于Ⅲ~Ⅳ期患者,血清miR-425-5p相对表达水平低于Ⅲ~Ⅳ期患者(P<0.05);中高分化子宫内膜癌患者血清miR-125b、miR-29a水平高于低分化患者,血清miR-425-5p表达水平低于低分化患者(P<0.05);淋巴结转移的子宫内膜癌患者miR-125b、miR-29a相对表达水平高于无淋巴结转移患者,血清miR-425-5p相对表达水平低于无淋巴结转移患者(P<0.05);浅肌层浸润的子宫内膜癌患者血清miR-125b、miR-29a相对表达水平高于深肌层浸润患者,血清miR-425-5p相对表达水平低于深肌层浸润患者(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,子宫内膜癌患者miR-425-5p与miR-125b、miR-29a均呈负相关(r=-0.419、-0.436,P<0.05)。结论miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清中相对表达水平升高,miR-125b、miR-29a在子宫内膜癌患者血清中相对表达水平降低,且其与临床分期、淋巴结转移密切相关,可能作为子宫内膜癌诊断、治疗的新型靶点。

甘草素通过调控miR-216b-5p对肺腺癌细胞增殖凋亡及化疗敏感性的作用研究

目的探讨甘草素通过调控微小核糖核酸-216b-5p(miR-216b-5p)对肺腺癌细胞增殖凋亡及化疗敏感性的作用。方法取人肺腺癌H1299细胞进行细胞培养,随机分为对照组及甘草素10、20、40、60、80 mg·L^(-1)组。检测药物半数抑制浓度(IC50)值、细胞增殖活性、细胞凋亡率及miR-216b-5p、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA和蛋白相对表达量。结果与对照组比较,甘草素各浓度组IC50值降低,细胞增殖活性、细胞凋亡率升高,miR-216b-5p mRNA相对表达量升高,Bcl-2 mRNA相对表达量及p-mTOR、Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05);随着甘草素浓度增加,IC50值逐渐下降,细胞增殖活性、细胞凋亡率逐渐上升,miR-216b-5p mRNA相对表达量逐渐上升,Bcl-2 mRNA相对表达量及p-mTOR、Bcl-2蛋白相对表达量逐渐下降(P<0.05)。结论甘草素可抑制肺腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,提升化疗敏感性,作用机制可能与上调miR-216b-5p表达、抑制mTOR信号通路有关。

Circ-PNPT1抑制miR-125a-5p/TXNRD1轴促进高糖诱导的滋养层细胞增殖与侵袭

目的探讨环状RNA-多核糖核苷酸核苷转移酶(Circ-PNPT1)对高糖(HG)诱导的滋养层细胞(HTR-8/SVneo)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法在HTR-8/SVneo细胞中抑制Circ-PNPT1表达或过表达miR-125a-5p,并使用25mmol/L的葡萄糖诱导培养,检测HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭,westernblot检测TXNRD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检验Circ-PNPT1、TXNRD1与miR-125a-5p的靶向关系。结果HG诱导的HTR-8/SVneo细胞中Circ-PNPT1、TXNRD1mRNA及蛋白表达水平显著升高,细胞存活率、迁移与侵袭细胞数、miR-125a-5p、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低(P<0.05);抑制Circ-PNPT1表达或过表达miR-125a-5p可显著促进HG诱导的HTR-8/SVneo迁移与侵袭,并提高MMP-2、MMP-9蛋白表达水平(P<0.05);抑制miR-125a-5p表达或过表达TXNRD1可部分减弱抑制Circ-PNPT1表达或过表达miR-125a-5p对HG诱导的HTR-8/SVneo细胞迁移与侵袭的促进作用,并下调MMP-2、MMP-9蛋白表达水平(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,Circ-PNPT1、TXNRD1与miR-125a-5p存在靶向关系。结论Circ-PNPT1在高糖诱导的滋养层细胞中上调表达,抑制Circ-PNPT1通过调节miR-125a-5p/TXNRD1轴,促进滋养层细胞增殖、迁移和侵袭。