肺炎支原体肺炎患儿血清腺嘌呤核苷酸离子通道型7、维生素D表达水平与疾病严重程度的关系

目的探讨肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿血清腺嘌呤核苷酸离子通道型7(adenine nucleotideionchanneltype7,P2X7)、维生素D表达水平及其与疾病严重程度的关系。方法选取2015年7月至2017年5月于河北省秦皇岛市妇幼保健院就诊的MPP患儿共136例,按照病情严重程度分为严重组(52例)和非严重组(84例)。选择同期来院体检的健康儿童50例作为对照组。比较三组患儿血清P2X7、25-羟基维生素D3、炎性因子和免疫球蛋白水平,分析其与MPP严重程度的相关性。结果严重组患儿血清P2X7、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1beta,IL-1β)水平显著高于非严重组和对照组(P<0.05),而25-羟基维生素D3、IgA、IgG水平显著低于非严重组和对照组(P<0.05)。MPP患儿P2X7与TNF-α、IL-1β正相关,25-羟基维生素D3与IgA正相关,而与IgG负相关(P<0.05)。P2X7、25-羟基维生素D3、TNF-α、IL-1β、IgA、IgG均为严重MPP的独立影响因素(P<0.05)。结论血清P2X7、维生素D表达水平与MPP存在显著相关性,高P2X7水平以及低25-羟基维生素D3水平预示着更严重的MPP。

1,25(OH)_2D_3对嘌呤霉素氨基核苷酸肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的观察1,25(OH)2D3对嘌呤霉素氨基核苷酸肾病(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用并探讨可能的作用机制。方法72只SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、PNA组(PAN)和1,25(OH)2D3治疗组(T)。一次性尾静脉注射PAN100mg/kg体重建立PAN肾病动物模型。于3、7、14、21d分批处死动物,分别检测不同时间点24h尿蛋白和肾功能,PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变,RT-PCR、免疫组化、western-blot分别检测nephrin,BMP-7,p-Smad1/5/8的表达。结果(1)PAN大鼠24h尿蛋白、尿素氮、血肌酐均高于同期的NC组,且足细胞足突增宽融合;T组各时间段24h尿蛋白和肾功能较PAN组显著降低(P<0.05),肾脏病理改变减轻。(2)与NC组比PAN大鼠nephrin表达减少并由正常的沿毛细血管襻线状分布向颗粒状、团快状改变。T组大鼠nephrin的表达显著增强且保持着正常的沿毛细血管襻线状分布。(3)PAN组BMP-7mRNA和蛋白的表达以及p-Smad1/5/8的表达均低于NC组;T组BMP-7mRNA和蛋白的表达以及p-Smad1/5/8的表达显著升高。结论1,25(OH)2D3能有效的抑制嘌呤霉素氨基核苷酸诱导的足细胞损伤,减少蛋白尿;1,25(OH)2D3对足细胞损伤的保护作用可能与调控BMP-7信号的活化有关。

Let-7d*在增生性血管疾病中的表达及其作用机制

目的探究Let-7d*在增生性血管疾病中的表达及其相关作用机制。方法分别构建球囊损伤模型与平滑肌细胞增殖模型,研究Let-7d*在这两种模型中的表达趋势,并调控Let-7d*的表达,研究其相关生物学功能。结果在球囊损伤诱导新生内膜生长的模型中,Let-7d*的表达水平较在正常颈动脉中明显降低,同时在增殖的血管平滑肌细胞中的表达也明显下调。在体内动物模型中Let-7d*对球囊损伤大鼠颈动脉血管内膜的增殖具有抑制作用,在体外细胞模型中Let-7d*是血管平滑肌细胞生长的一个强有力的负性调控因子。结论Let-7d*在增殖的血管平滑肌细胞和内膜增生的血管壁中的表达下调,且Let-7d*对血管平滑肌细胞生长及大鼠颈动脉新生内膜增生均有明显的抑制作用。

肾细胞癌组织中高表达的miRNA let-7i-5p通过透明质酸结合蛋白4调控769-P细胞的恶性生物学行为

目的:探讨miRNA let-7i-5p在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织中的表达水平及其对RCC细胞769-P的增殖、迁移、侵袭和透明质酸结合蛋白4(hyaluronan-binding protein 4,HABP4)表达的影响。方法:利用TCGA RCC数据库及GEO数据库对let-7i-5p在RCC组织中的表达进行meta分析。体外常规培养人RCC细胞769-P并对其进行转染,根据转染物不同分为过表达组(转染let-7i-5p模拟物)、抑制组(转染let-7i-5p抑制物)和对照组(转染NC序列)。采用CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验及WB法检测let-7i-5p对769-P细胞增殖活力、划痕愈合率、穿膜侵袭细胞数及HABP4表达水平的影响。双荧光素酶报告基因实验验证let-7i-5p与HABP4 mRNA的靶向关系。结果:分析TCGA RCC数据库及5个GEO数据集(GSE23085、GSE47582、GSE95385、GSE16441和GSE71302)中数据结果显示,let-7i-5p在RCC组织中的表达水平显著高于正常肾组织(均P<0.05)。体外实验结果显示,与对照组相比,过表达组在24、48及72 h时细胞增殖活力显著升高,而抑制组显著降低(均P<0.01);过表达组的划痕愈合率[(37.276±2.058)%vs(15.663±2.949)%,P<0.01]和穿膜侵袭细胞数[(377.000±34.044)vs(255.667±25.384)个,P<0.01]均显著升高,而抑制组的划痕愈合率[(8.791±2.568)%vs(15.663±2.949)%,P<0.05]和穿膜侵袭细胞数[(170.333±14.978)vs(255.667±25.384)个,P<0.01]均显著降低。在野生型HABP4-3’URT质粒组中,过表达let-7i-5p可显著抑制细胞的荧光素酶活性(P<0.01);而在突变型HABP4-3’URT质粒组中,过表达let-7i-5p对细胞的荧光素酶活性无影响(NS,P>0.05)。WB检测结果显示,与对照组相比,过表达组的HABP4和E-cadherin的水平均降低(均P<0.01)、CDK2的水平升高(P<0.01),而抑制组则相反(均P<0.01)。结论:Let-7i-5p在RCC组织中呈高表达,其可能通过靶向HABP4基因来促进769-P细胞的增殖、迁移和侵袭。

Let-7家族启动子区多态性与胃癌的关联研究

目的探讨let-7i启动子区rs10877887和let-7a-1/let-7f-1/let-7d簇启动子区rs13293512多态性与胃癌发生的关系。方法采用TaqMan探针法检测172例胃癌患者和224例健康对照中rs10877887和rs13293512的分布频率,运用χ2检验分析其与胃癌的相关性。结果胃癌患者中rs10877887CC、CT/CC基因型和C等位基因频率明显高于健康对照组(20.9%vs.13.4%,63.4%vs.53.1%,42.2%vs.33.3%),调整优势比(OR)分别为1.98、1.53和1.46(P=0.02、0.04和0.01)。rs13293512位点在胃癌组和健康对照组中的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论let-7i启动子区rs10877887多态性与中国汉族人群胃癌的发病有关。

帕金森病相关微小RNA的研究进展

微小 RNA （microRNA ，miRNA ）是一类由内源基因编码的长度约为20～25个核苷酸的非编码单链RN A分子，它们广泛存在于植物、线虫、果蝇到人类的细胞中。1993年第一次在L ee等［1］从秀丽隐杆线虫（C ．Elegans）的研究中被发现，作为一种调控线虫发育的基因，其产物并不是蛋白质，而编码的是一种小片段的 RNA ，随后基因let-7［2］等一系列相似非编码小RN A被发现并进行了广泛研究，

基于阴阳理论探讨肾素-血管紧张素系统在原发性高血压中的作用

肾素-血管紧张素系统(RAS)在人体血压的调节中具有重要作用,主要由血管紧张素转换酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1)通路与血管紧张素转换酶2-血管紧张素Ⅱ水解产生的7肽-Mas受体[ACE2-Ang(1-7)-Mas]通路及相关微小核苷酸(miRNA)组成。二者在维持原发性高血压(HTN)稳定中生理功能相互拮抗,与中医阴阳理论互根互用、消长平衡、对立制约等内涵一致。笔者尝试提出HTN是由于RAS相关miRNA与两条轴失衡所导致;当ACE-AngⅡ-AT1轴过度激活时,采用平肝潜阳、化痰祛湿、通窍活血等方法治疗;当ACE2-Ang(1-7)-Mas轴表达不足时,采用补益气血、滋养肝肾、益精填髓等方法治疗。

索拉菲尼对骨肉瘤细胞的抑制作用及分子机制研究

目的研究索拉菲尼对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及其分子机制。方法将人骨肉瘤细胞(HOS细胞)分为对照组及索拉菲尼组,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法观察索拉菲尼对HOS细胞活力的影响,用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白变化,用Real-time PCR检测let-7d变化情况。结果索拉菲尼可抑制HOS细胞活力,并呈剂量和浓度依赖性;同时,索拉菲尼可以抑制Lin28表达,同时促进let-7d表达;过表达Lin28可以逆转索拉菲尼的促凋亡作用。结论索拉菲尼通过调控Lin28/le-7d环路来促进骨肉瘤细胞凋亡。

基于多元功效成分的瓜蒌皮药材产地现代干燥加工方法研究

目的比较不同干燥方式对瓜蒌皮药材品质的影响,优选出适宜的瓜蒌皮药材产地现代干燥加工方法。方法收集安徽产新鲜瓜蒌皮,分别采用传统与现代产地加工干燥方法[40、50、60、70℃控温热风干燥,40、50、60、70℃微波真空干燥(真空度-0.08 MPa),50、60、70℃中短波红外干燥,-80℃真空冻干干燥,晒干,阴干]加工处理,结合干燥样品外观性状,以药效成分(5种黄酮类芦丁、木犀草苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素、橘红素,3种三萜类葫芦素D、葫芦素B、葫芦素E)、营养滋补类成分(2种糖类葡萄糖、果糖,18种氨基酸类苯丙氨酸、L-亮氨酸、异亮氨酸、L-色氨酸、γ-氨基丁酸、L-蛋氨酸、L-缬氨酸、脯氨酸、L-酪氨酸、反式-4-羟基-L-脯氨酸、L-苏氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-丝氨酸、L-天门冬酰胺、L-瓜氨酸、L-精氨酸、L-赖氨酸,12种核苷类胸腺嘧啶核苷、2′-脱氧尿苷、腺嘌呤、尿苷、腺苷、2′-脱氧肌苷、肌苷、胞嘧啶、鸟嘌呤、2′-脱氧鸟苷、胞苷、鸟苷)共40种资源性化学成分的组成及含量为评价指标,对不同干燥加工方法所得瓜蒌皮药材样品的品质进行综合评价。利用主成分分析(PCA)法,优选瓜蒌皮最佳现代干燥加工方法。结果不同干燥品中,药效成分及营养滋补类成分含量差异较大,其中果糖及葡萄糖质量分数分别为9.78%~21.32%、4.46%~15.63%;70℃微波真空干燥处理获得的瓜蒌皮所含黄酮类和四环三萜类成分总量最高,40℃控温热风干燥处理的总量最低。通过对14种不同干燥方式获得的瓜蒌皮样品进行综合评价分析,发现70℃控温热风干燥、70℃中短波红外干燥、-80℃真空冻干干燥、50℃微波真空干燥和60℃控温热风干燥方式获得的样品有效成分含量均优于传统晒干。结论结合药材的外观性状、色泽、质地、干燥时间及功效成分含量等因素,基于目前企业设备现状,建议70℃控温热风干燥为瓜蒌皮产地加工条件;基于未来新型设备的发展,70℃中短波红外干燥可作为瓜蒌皮产地加工的发展方向。研究结果将为瓜蒌皮药材产地加工的规范化和品质特征的形成提供借鉴。