长链非编码RNA GC1靶向微小RNA-551b-3p抑制食管癌的作用及分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)鸟苷酸环化酶1(GC1)对食管癌的影响,并探讨其靶向微小RNA-551b-3p(miR-551b-3p)的分子机制。方法建立食管癌荷瘤裸小鼠模型,随机分为GC1、miR-551b-3p上、下调组及其对应对照组与模型组共9组,每组8只。末次给药次日处死裸小鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率;取肿瘤组织检测LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平和细胞周期因子(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x(Bax)基因与蛋白表达水平;观察肿瘤组织病理改变;采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率;采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GC1与miR-551b-3p的调控关系。另取人食管癌细胞株Eca109分为9组,每组3个复孔,其中基因干扰组命名同上,另设置空白组,培养48h后观察细胞LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平、形态学改变、凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平。结果动物实验:与模型组和相应对照组比较,GC1上调组与miR-551b-3p下调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均上升,抑瘤率、细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均下降;GC1下调组与miR-551b-3p上调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均下降,抑瘤率和细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均上升;GC1上调组LncRNA GC1基因表达水平上升,GC1下调组LncRNA GC1基因表达水平下降(P<0.05)。与转染野生型GC1的腺病毒载体相比,转染突变型GC1的腺病毒载体的miR-551b-3p荧光素酶相对活性上升(P<0.05)。细胞实验:LncRNA GC1和miR-551b-3p基因表达水平、细胞形态学改变与凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平变化趋势均与动物实验相同。结论下调LncRNA GC1、上调miR-551b-3p表达水平均可抑制食管癌进展,且下调LncRNA GC1可靶向上调miR-551b-3p,并降低CyclinD1和Bcl-2活性、上升p21和Bax活性。

非编码RNA在肺纤维化过程中的调控作用

背景:截至目前,肺纤维化的发病机制不明,治疗手段或者药物有限。大量研究发现,非编码RNA在肺纤维化的发生发展过程中发挥重要作用。目的:综述近年来非编码RNA在肺纤维化发病机制中的调控作用,深入了解肺纤维化的发病机制。方法:由第一作者应用计算机检索2000-2024年出版的文献,以“非编码RNA,微小RNA,长链非编码RNA,环状RNA,肺纤维化,综述”等为中文检索词检索中国知网、万方和维普数据库;以“ncRNA,miRNA,lncRNA,circRNA,Pulmonary fibrosis,review”等为英文检索词检索PubMed数据库,按照入选标准最终共纳入65篇文献进行综述。结果与结论:肺纤维化作为一种慢性且通常致命的肺部疾病,不仅可能自发产生,也可能是其他疾病的继发结果,主要特点是肺部间质中细胞外基质的异常增生和大量积累。非编码RNA是指由基因组转录出来的RNA分子,这些RNA分子并不涉及蛋白质的编码过程,凭借其调节能力已成为各种生物学现象中的一线分子参与者之一。非编码RNA在肺纤维化的发病机制中扮演着关键角色,微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)和环状RNA(circRNA)可以通过影响基因表达、转录后修饰以及细胞间的信号传导,参与到肺纤维化的发展过程中,为后续探索肺纤维化疾病的具体分子发生机制提供了新方向,为研发肺纤维化疾病的新靶向药物提供了理论依据及新思路。

长链非编码RNA SLCO4A1-AS1靶向微小RNA-615-5p对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)靶向微小RNA-615-5p(miR-615-5p)对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析LncRNA SLCO4A1-AS1和miR-615-5p在食管癌组织、细胞系中表达情况。将si-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1、miR-NC、miR-615-5p模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA SLCO4A1-AS1、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p分别转染Eca109细胞。CCK-8和流式细胞术用于检测细胞活力和凋亡率;平板克隆实验用于检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测培养液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用双荧光素酶报告基因法确定LncRNA SLCO4A1-AS1与miR-615-5p的关系。结果食管癌组织、细胞系中LncRNA SLCO4A1-AS1表达上调,miR-615-5p表达下调。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1表达后,细胞活力、细胞克隆形成数量以及培养液中IL-6和TNF-α水平降低,miR-615-5p表达量、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率升高,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC比较,si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率降低,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA SLCO4A1-AS1能够促进食管癌的发生和发展。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1能够减少食管癌细胞的增殖,降低炎症因子的表达,诱导癌细胞凋亡。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)22调控微小RNA(miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞(CAL-27、SCC-25和HSC-3),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组(未进行转染)、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数(PI)];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR-27b-3p的靶向作用关系。结果与癌旁组织比较,OSCC癌组织中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低(P<0.05);与HOK细胞比较,CAL-27、SCC-25和HSC-3细胞中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低,且SCC-25细胞中SNHG22与miR-27b-3p的表达与HOK细胞差异最大(P<0.05)。与Ctrl组比较,si-SNHG22组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著减少(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05);与si-SNHG22组比较,si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05)。双荧光素酶实验显示SNHG22与miR-27b-3p存在靶向作用关系。结论SNHG22在OSSC中高表达,miR-27b-3p在OSSC中低表达,SNHG22可能通过海绵化miR-27b-3p促进SCC-25细胞增殖、侵袭和迁移,SNHG22/miR-27b-3p轴可能是OSCC一个新的诊断和治疗靶点。

原发性肝癌组织长链非编码RNA JPX、微小RNA-371a-5p表达水平及其与患者术后5年预后关系研究

目的:探讨原发性肝癌组织长链非编码RNA(lncRNA)JPX、微小RNA-371a-5p(miR-371a-5p)表达水平及其与患者术后5年预后的关系。方法:选取行根治术治疗的105例原发性肝癌患者的癌组织以及距离癌组织3 cm的癌旁正常组织。RT-qPCR检测组织中lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA JPX与miR-371a-5p的靶向关系。术后随访5年根据生存情况将患者分为生存组(64例)和病死组(41例)。比较肝癌组织和癌旁正常组织lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平。比较生存组和病死组临床病理特征及lncRNA JPX、miR-371a-5p水平。Pearson法分析lncRNA JPX、miR-371a-5p水平与肝内转移、肿瘤分化程度、中国肝癌分期(CNLC)、血管侵犯的相关性。多因素Cox回归分析原发性肝癌患者术后5年预后影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析肝癌组织lncRNA JPX、miR-371a-5p对患者术后5年生存的预测价值。结果:肝癌组织中lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平较癌旁正常组织升高(均P<0.05)。lncRNA JPX可正向调控miR-371a-5p表达。lncRNA JPX、miR-371a-5p高表达患者5年总生存率分别低于lncRNA JPX、miR-371a-5p低表达患者(均P<0.05)。生存组无肝内转移、肿瘤高/中分化、CNLCⅠ-Ⅱ期、无血管侵犯患者比例高于病死组,且lncRNA JPX和miR-371a-5p表达水平低于病死组(均P<0.05)。有肝内转移、肿瘤低分化、CNLCⅢa期、有血管侵犯、lncRNA JPX高表达、miR-371a-5p高表达是原发性肝癌患者术后5年生存的独立危险因素(均P<0.05)。肝癌组织lncRNA JPX与miR-371a-5p呈正相关,两者与肝内转移、CNLC分期、血管侵犯呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关(均P<0.05)。lncRNA JPX、miR-371a-5p联合预测患者术后5年生存的曲线下面积(AUC)大于lncRNA JPX及miR-371a-5p单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:原发性肝癌组织lncRNA JPX、miR-371a-5p呈高表达,lncRNA JPX可正向调控miR-371a-5p,两者是患者术后5年生存的独立危险因素,对术后5年生存的预测价值较高。

血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病周围神经病变的关系

目的探究血清长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)及微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)的关系及其预测价值评估。方法以2020年3月至2021年8月保定市第一中心医院收治的老年T2DM患者为研究对象,选择其中发生周围神经病变的75例患者为DPN组,选择未发生周围神经病变的82例患者为非DPN组。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p的水平通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)进行检测;相关性通过Pearson法进行分析;T2DM合并DPN的影响因素通过多因素logistic回归进行分析;受试者操作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN的诊断价值。结果DPN组患者血清LncRNA HCG18水平高于非DPN组,血清miR-185-5p水平低于非DPN组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。DPN组患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p水平呈显著负相关(r=-0.407,P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,LncRNA HCG18、miR-185-5p为T2DM合并DPN发生的影响因素(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN预测的曲线下面积分别为0.841(95%CI 0.775~0.906)、0.857(95%CI 0.793~0.922)。结论老年DPN患者血清LncRNA HCG18水平升高,miR-185-5p水平降低,对老年T2DM患者发生DPN有一定的诊断价值。

长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2/微小RNA-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1轴在食管癌细胞紫杉醇耐药中的作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)/微小RNA(miR)-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)轴在食管癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用机制。方法:构建EC109/PTX细胞,检测食管癌组织和癌旁正常组织,以及食管癌细胞EC109和KYSE150细胞、食管上皮细胞SHEE和EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达。取生长良好的EC109/PTX细胞,分为沉默(siRNA)DLEU2组、阴性对照(siRNA NC)组、siRNA DLEU2+miR-30c-5p抑制剂(inhibitor)组、siRNA DLEU2+inhibitor NC组、siRNA DLEU2+过表达(pcDNA)MAPK1组、siRNA DLEU2+pcDNA NC组和空白组。验证miR-30c-5p与DLEU2、MAPK1的靶向关系。检测各组EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达水平。检测EC109/PTX细胞活性、凋亡情况及对PTX的耐药性。检测谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、MAPK1、P-蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果:食管癌组织和EC109/PTX细胞miR-30c-5p表达降低,DLEU2、MAPK1 mRNA表达增加(均P<0.05)。DLEU2靶向调控miR-30c-5p,miR-30c-5p靶向调控MAPK1。siRNA DLEU2组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA NC组、空白组增加,DLEU2和MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、药物半数抑制浓度(IC 50)以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达降低(均P<0.05)。siRNA DLEU2+miR-30c-5p inhibitor组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA DLEU2+inhibitor NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。siRNA DLEU2+pcDNA MAPK1组细胞凋亡率较siRNA DLEU2+pcDNA NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA DLEU2可减弱EC109/PTX细胞对PTX的耐药性,可能与调控miR-30c-5p/MAPK1轴有关。

长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。

重型颅脑损伤病人血清微小RNA-542-3p、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1表达及其与预后的关系

目的探讨微小RNA-542-3p(miR-542-3p)、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在重型颅脑损伤(STBI)病人血清中的表达及与病人预后的关系。方法2020年1月~2022年7月收治的128例STBI病人为重型组,130例轻、中型TBI病人为对照组,检测病人血清miR-542-3p、lncRNA TUG1表达量,采用Pearson法分析二者相关性。Logistic回归分析血清miR-542-3p、lncRNA TUG1对STBI病人预后不良的影响,并以受试者工作特征(ROC)曲线分析二者对STBI病人预后的预测效能。结果重型组病人血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达量分别低于和高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。STBI病人血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达量呈负相关(r=-0.595,P<0.001)。预后不良组血清lncRNA TUG1与miR-542-3p水平分别高于和低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。高lncRNA TUG1水平是STBI病人预后不良的危险因素(P<0.05),高miR-542-3p水平是保护因素(P<0.05)。血清miR-542-3p、lncRNA TUG1联合预测STBI病人预后的曲线下面积(AUC)(0.939)高于单独预测的AUC(Z=2.410,P=0.016;Z=3.339,P<0.001)。结论STBI病人血清miR-542-3p表达下调,lncRNA TUG1表达上调,二者均可用于STBI病人预后预测,且二者联合的预测价值更高。

长链非编码RNA ZEB1反义RNA1通过靶向微小RNA-224调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA ZEB1反义RNA1(LncRNA ZEB1-AS1)通过靶向微小RNA(miR)-224调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制。方法体外培养淋巴瘤细胞系Raji,分别转染si-NC、si-ZEB1-AS1、miR-NC、miR-224 mimics、si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC、si-ZEB1-AS1+anti-miR-224。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)评估LncRNA ZEB1-AS1和miR-224在淋巴瘤细胞中的表达量;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;通过双荧光素酶报告实验确定LncRNA ZEB1-AS1对miR-224的调控作用;采用Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达水平。结果与对照组比较,淋巴瘤组LncRNA ZEB1-AS1水平升高,miR-224表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-ZEB1-AS1组中LncRNA ZEB1-AS1的表达水平、光密度(OD)值、迁移细胞和侵袭细胞数量,以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-224组miR-224表达水平提高,而OD值、细胞迁移和侵袭数量以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。上调miR-224水平可降低WT-ZEB1-AS1的荧光素酶活性,但不影响MUT-ZEB1-AS1的荧光素酶活性。与pcDNA-NC组相比,pcDNA-ZEB1-AS1组miR-224表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与si-NC组比较,si-ZEB1-AS1组miR-224表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组比较,si-ZEB1-AS1+anti-miR-224组的OD值、迁移和侵袭数量,以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抑制LncRNA ZEB1-AS1从而靶向上调miR-224的表达,能够有效降低淋巴瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

长链非编码RNA 00941、微小RNA-145表达及转化生长因子β1/Smad通路相关因子在胃癌组织中的表达及意义

目的:探究长链非编码RNA00941(Linc00941)、微小RNA-145(miR-145)表达及转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)通路相关因子在胃癌组织中的表达与意义。方法:选取收治的51例胃癌患者,手术治疗后经病理学检查确诊。收集其胃癌组织及其癌旁组织,比较其中Linc00941、miR-145及TGF-β1/Smad通路相关因子表达差异;提取患者的胃癌组织细胞进行组织培养,并对其进行Linc00941、miR-145基因的转染、沉默,分析其对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较较,胃癌组织患者的Linc00941及其信使核糖核酸(mRNA)相对表达水平升高,miR-145及其mRNA相对表达水平降低(均P<0.05)。胃癌组织中的TGF-β1、转化生长因子β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)及Smad2/3均较癌旁组织显著降低(均P<0.05)。NC组、Linc00941转染组及Linc00941沉默组三组间吸光值(A值)及凋亡率两两比较均存在统计学差异(均P<0.05),Linc00941沉默组在培养24、48、72 h时的A值低于NC组,凋亡率高于NC组;Linc00941转染组各时间的A值高于NC组,凋亡率低于NC组(均P<0.05)。与NC组比较较,Linc00941沉默组的细胞迁移数目及细胞侵袭数目均降低,Linc00941转染组均升高,组间两两比较差异存在统计学意义(均P<0.05)。与NC组比较较,miR-145转染组培养24、48、72 h的A值均降低,凋亡率升高;miR-145沉默组的A值升高,细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与NC组比较较,miR-145转染组的细胞迁移数目及细胞侵袭数目均降低,miR-145沉默组均升高,组间两两比较差异存在统计学意义(均P<0.05)。结论:在胃癌组织中,Linc00941及其mRNA相对表达水平升高,miR-145及其mRNA相对表达水平降低,TGF-β1/Smad通路相关因子TGF-β1、TGF-βRⅡ及Smad2/3表达降低,且Linc00941、miR-145表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

长链非编码RNA母系表达基因8通过微小RNA-495-3p调控急性髓性白血病细胞高迁移率族蛋白A1表达及对细胞增殖、凋亡的作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达。将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-lncRNA MEG8组(转染si-lncRNA MEG8)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-495-3p mimic组(转染miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组(转染si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系。结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05),与miR NC+HMGA1 WT组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组、mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic组和si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组24、48 h细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组细胞增殖率最低(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HL-60细胞凋亡率高于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HMGA1蛋白表达低于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路。

长链非编码RNA F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1调节微小RNA-342-3p/自噬相关蛋白10轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1(FBXL19-AS1)调节微小RNA(miR)-342-3p/自噬相关蛋白10(ATG10)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织及正常肠上皮细胞(NCM460)、人CRC细胞系RKO、HCT-8细胞及HCT-8/L-OHP细胞中FBXL19-AS1、miR-342-3p、ATG10 mRNA表达水平。将HCT-8细胞分为shFBXL19-AS1组、shRNA组、shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。将HCT-8/L-OHP细胞分为L-OHP+shFBXL19-AS1组、L-OHP+shRNA组、L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HCT-8、HCT-8/L-OHP细胞增殖及其耐药性。划痕实验检测细胞迁移能力。免疫印迹法(Western blot)检测P-糖蛋白(P-gp)、增殖蛋白(Ki-67)、迁移侵袭增强子因子1(MIEN1)、ATG10蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-342-3p与FBXL19-AS1、ATG10靶向关系。结果:FBXL19-AS1、ATG10 mRNA表达在HCT-8/L-OHP细胞及CRC组织中增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、FBXL19-AS1和ATG10 mRNA表达以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shRNA组和空白组降低,miR-342-3p表达则增加(均P<0.05)。shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、ATG10 mRNA以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shRNA组和空白组降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA FBXL19-AS1通过上调miR-342-3p/ATG10轴抑制CRC细胞的增殖、迁移,改善奥沙利铂耐药性。

长链非编码RNA XIST、微小RNA-212-3p对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)XIST与微小RNA-212-3p(miR-212-3p)对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测LncRNAXIST与miR-212-3p在人正常卵巢上皮细胞IOSE80和KGN细胞株中的表达水平;通过Starbase靶基因数据库预测LncRNAXIST靶向miR-212-3p,并采用双萤光素酶报告实验进行验证;分别将XIST-plasmid和miR-212-3pmimic转染至KGN细胞,通过CCK-8实验、流式细胞术和蛋白质印迹法(Westernblot)实验分析LncRNAXIST与miR-212-3p对KGN细胞增殖和凋亡的影响。结果与IOSE80细胞系比较,在KGN细胞中LncRNAXIST呈低表达,miR-212-3p呈高表达(P<0.001);StarBase靶基因数据库预测显示,XIST与miR-212-3p存在结合位点;miR-212-3p mimic可降低XIST-WT的萤光素酶活性(P<0.01);CCK-8实验和流式细胞术实验结果显示,LncRNAXIST能够抑制KGN细胞增殖,促进细胞凋亡,转染miR-212-3pmimic能够部分抑制LncRNAXIST(P<0.001);Western blot实验结果显示,LncRNA XIST能够抑制B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)表达,促进Bax蛋白的表达,转染miR-212-3p mimic能够部分抑制Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白的表达(P<0.001)。结论LncRNA XIST过表达能够抑制KGN细胞的增殖并促进其凋亡,其机制作用可能是通过靶向miR-212-3p实现的。

非编码RNA和外泌体在妊娠期糖尿病发生机制中的作用及早期诊断价值

背景:近几年有很多关于外泌体非编码RNA与妊娠期糖尿病发生机制的研究,但缺乏不同来源尤其是胎盘来源外泌体的最新系统综述。目的:文章对微小RNA、长链非编码RNA和环状RNA以及外泌体在妊娠期糖尿病中的变化情况及对疾病发生发展的可能作用进行综述,为临床妊娠期糖尿病的早期筛查与治疗提供潜在靶标。方法:从PubMed、Web of Science、中国知网、万方数据及维普数据库进行非编码RNA或外泌体非编码RNA与妊娠期糖尿病相关文献进行检索,最终纳入74篇文献进行综述。结果与结论:①非编码RNA通过调节各种生理功能参与了妊娠期糖尿病的发生发展,为妊娠期糖尿病的研究提供了新的方向。②外泌体在人体中广泛存在,红细胞、上皮细胞和胎盘细胞等均可分泌外泌体,这些不同来源外泌体中的非编码RNA被证明可以在妊娠期糖尿病的发病机制、诊断以及治疗方法中发挥一定的作用。③微小RNA与妊娠期糖尿病:外周血微小RNA在妊娠期糖尿病中的作用主要是影响滋养层细胞、胰腺β细胞功能以及妊娠期糖尿病血糖水平;胎盘微小RNA可反映妊娠期糖尿病的严重程度,并损伤滋养层细胞的功能。④长链非编码RNA与妊娠期糖尿病:外周血长链非编码RNA可以通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路诱导胰岛素抵抗并且有可能为妊娠期糖尿病的诊断与治疗提供新的思路;胎盘长链非编码RNA可以调控妊娠期糖尿病胎盘滋养层细胞增殖迁移,促进妊娠期糖尿病的发生发展。⑤环状RNA与妊娠期糖尿病:外周血和胎盘环状RNA可通过损伤胎盘滋养层细胞增殖迁移与代谢等功能诱导糖尿病的发生发展。⑥外泌体非编码RNA与妊娠期糖尿病:外周血外泌体非编码RNA可影响妊娠期糖尿病血糖水平和葡萄糖稳态,通过影响胎盘功能参与妊娠期糖尿病的发生发展。⑦非编码RNA有潜力成为妊娠期糖尿病早期诊断的标志物,此外工程化的外泌体能更好地实现妊娠期糖尿病的靶向治疗等,这些最新信息为妊娠期糖尿病的基础研究和临床转化提供了参考依据。⑧未来还需改进外周血外泌体的提取和纯化方法,并排除种族、饮食和体力活动等因素以提高结果的可重复性,而循环非编码RNA及外泌体在妊娠期糖尿病的预测和诊断中的临床应用还需要更多的前瞻性临床研究。

长链非编码RNA在脑缺血再灌注损伤炎症反应中研究进展

脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion injury,CIRI)是指脑缺血后再恢复血流时导致神经功能缺损症状进一步加重的现象,严重影响患者的预后。近年来研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)与CIRI后的炎症反应密切相关。从CIRI的机制出发,对近年来发现的影响CIRI炎症反应中LncRNA的表达及其作用机制做一总结,旨在为CIRI的治疗提供新的治疗靶点和研究思路。

长链非编码RNA母源表达基因3减轻去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制

目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母源表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)通过吸附微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)减轻卵巢切除术(ovariectomy,OVX)大鼠心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的作用及机制。方法选择雌性SD大鼠108只,其中48只随机分为假手术组、OVX组、IR组、联合1组(OVX+IR),每组12只;其余60只OVX及心肌IR造模前尾静脉注射阴性对照、lncRNA MEG3、miR-21腺相关病毒,根据造模及腺相关病毒注射情况分为阴性假手术组、阴性模型组、lncRNA MEG3组、miR-21组、联合2组(lncRNA MEG3+miR-21),每组12只。检测心肌梗死面积、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、心肌细胞凋亡率及裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达。培养心肌H9c2细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA MEG3靶向miR-21。结果与假手术组比较,OVX组、IR组和联合1组心肌lncRNA MEG3表达明显降低,miR-21表达明显升高(P<0.05);与OVX组及IR组比较,联合1组lncRNA MEG3表达明显降低,miR-21表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性模型组比较,lncRNA MEG3组心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB、心肌细胞凋亡率、裂解型Caspase-3表达明显降低,LVFS、LVEF明显升高(P<0.05);与lncRNA MEG3组比较,联合2组心肌梗死面积、血清LDH、CK、CK-MB、心肌凋亡率、裂解型Caspase-3表达明显升高,LVFS、LVEF明显降低[(43.58±3.32)%vs(50.37±4.29)%,(57.12±4.28)%vs(68.47±5.61)%,P<0.05]。结论过表达lncRNA MEG3通过吸附miR-21减轻OVX大鼠心肌IR损伤。

小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA在非酒精性脂肪性肝病中的作用

小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)是由细胞分泌的一种细胞外囊泡,产生于多泡体,多泡体与质膜融合并释放到细胞外基质。由于小细胞外囊泡可以携带分子质量相对较小的核酸、蛋白质、脂质,能够执行细胞间物质传递、细胞间通讯等功能。因此,小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA不仅参与细胞正常生理过程,也可以在多种疾病的发生发展过程中起重要作用。本文综述了小细胞外囊泡在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用,小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA不仅有望成为NAFLD诊断的标志物,同时也具有治疗NAFLD的潜在作用,或能为治疗NAFLD提供新思路。

非编码RNA在颞下颌关节炎中的研究进展

颞下颌关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)是一种临床常见疾病,但发病机制尚不明确且缺乏有效的治疗手段,给患者带来很大困扰。因此,探究TMJOA的发病机制,寻找有效的治疗方法具有重要意义。近年来的研究表明,非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA)参与调控TMJOA的发生、发展,在其诊断和治疗方面具有巨大潜力,因此有望成为新的诊断标志物和治疗靶标。本文将对ncRNA在TMJOA中的研究进展作一综述。

糖尿病神经病变过程中非编码RNA的作用及机制

背景:持续性高血糖症被确认为促进神经血管功能障碍,导致不可逆的内皮细胞功能障碍、神经细胞凋亡增加、氧化应激和炎症。这些协同和单独作用导致微血管和大血管病变,以及造成进行性神经病变。非编码RNAs可能为了解该疾病的病因、发病机制、治疗方法提供新的策略。目的:查阅国内外相关文献,综述非编码RNAs在糖尿病神经病变发生发展中的作用和机制,为非编码RNA在糖尿病神经病变预防和诊疗中提供新的思路和途径。方法:检索中国知网、PubMed数据库建库至2022年所发表的文献,中文关键词“非编码RNA;lncRNA;miRNA;糖尿病周围神经病变;表达谱”;英文关键词“Noncoding RNA;lncRNA;miRNA;Diabetes peripheral neuropathy;Expression profile”,将检索到的文献进行归纳、总结、分析,选取61篇文章进行综述。结果与结论:(1)非编码RNA在调节糖尿病周围神经病变的病理生理过程中起着核心作用。在研究最广泛的调节性非编码RNA物种中,有长链非编码RNAs(lncRNAs)、环状RNAs(circRNAs)和微小RNAs(miRNAs)。(2)通过非编码RNA的调节作用,引起相关细胞通路、炎症基因及下游相关细胞因子的激活或抑制,将抑制细胞凋亡,改善炎症水平,从而改变靶基因表达来参与糖尿病神经痛的进程。(3)尽管已发现多种微小RNA、长链非编码RNAs参与糖尿病神经病变疾病,但许多非编码RNAs的作用机制仍不清楚,相同的非编码RNAs可能在不同的模型中发挥不同的作用。因此,有必要进一步研究它们在疾病病因学和病理学中的作用模式,以阐明它们在糖尿病神经病变发病机制中的作用。然而,尚未建立评估非编码RNA活性的标准,需要进一步研究哪些特定非编码RNA在调节中起主导作用。(4)微小RNAs、长链非编码RNAs及其靶基因能够调节进行性神经病变,有望成为临床防治糖尿病周围神经病变的新靶点和预警糖尿病周围神经病变发生及其预后的新型生物标志物。