lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-132-5p对帕金森病细胞损伤的保护机制

目的探究长链非编码RNA KCNQ1OT1(lncRNA KCNQ1OT1)靶向调控微小RNA-132-5p(miR-132-5p)对帕金森病细胞损伤的保护机制。方法SH-SY5Y细胞通过1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)诱导建立帕金森病细胞模型,检测SH-SY5Y细胞中lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达,验证lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p的调控关系。结果与Con组相比,MMP+组lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达量较高(P<0.05)。低表达lncRNA KCNQ1OT1、干扰miR-132-5p表达均可减轻MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及炎性损伤,抑制细胞死亡,lncRNA KCNQ1OT1靶向正调控miR-132-5p表达,miR-132-5p过表达逆转了lncRNA KCNQ1OT1低表达对MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤及凋亡。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-132-5p表达减轻了MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤,抑制了细胞凋亡。

LncRNA MIR503HG靶向miR-32-5p调控 ITGA6表达对非小细胞肺癌增殖与迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR503HG、微小RNA(miRNAs)-32-5p、整合素α(ITGA)6在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对NSCLC细胞增殖和迁移的影响。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中提取273例NSCLC患者癌组织及其对应癌旁组织的LncRNA、miRNA及转录组mRNA的芯片数据,R软件中MAX STAT函数包统计分析LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6在NSCLC中的表达。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测80例NSCLC患者癌组织标本和NSCLC细胞系中LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6 mRNA表达。双荧光素酶实验证明LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6的关系。依次以LncRNA MIR503HG-mimic-NC、LncRNA MIR503HG-mimic、miR-32-5p-agomir-NC、miR-32-5p-agomir、LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir、LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir+pcDNA3.1-ITGA6、miR-32-5p-agomir+pcDNA3.1-ITGA6转染H1299细胞,另设定正常(Normal)组细胞。EDU染色实验与Transwell小室实验检测各组细胞体外增殖与转移活性;裸鼠体内皮下种植肿瘤模型检测细胞体内生长与转移能力。Western印迹检测ITGA6、E-钙黏蛋白(cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达。结果 在线分析结果显示,与癌旁组织和BEAS-2B细胞相比,LncRNA MIR503HG、ITGA6 mRNA在NSCLC组织和NSCLC细胞表达升高,miR-32-5p mRNA下降,差异具有统计意义(均P<0.05)。双荧光素酶实验证实LncRNA MIR503HG靶向miR-32-5p表达,miR-32-5p靶向ITGA6表达。过表达LncRNA MIR503HG可增强H1299细胞的体外增殖与转移及体内生长与转移能力,ITGA6和Vimentin表达升高,E-cadherin表达降低,miR-32-5p-agomir可部分逆转这一作用,而pcDNA3.1-ITGA6可部分修复这一逆转作用,差异均具有统计意义(P<0.05)。结论 下调LncRNA MIR503HG表达能降低H1299细胞增殖与转移能力,发挥抑癌效应,其机制可能与靶向miR-32-5p调控ITGA6表达水平有关,为NSCLC的治疗提供靶点。

miR-126对七氟烷麻醉致老龄大鼠认知功能障碍的影响及机制

目的 观察微小RNA(miR)-126对七氟烷麻醉致老龄大鼠认知功能障碍的影响,并探讨相关作用机制。方法 采用随机数字表法将60只大鼠分成对照(Control组)、七氟烷麻醉(Model)组、miR-126激动剂对照(agonist NC)组和miR-126激动剂(agonist)组,每组15只。采用3%七氟烷麻醉4 h建立麻醉造模,agonist NC和agonist组大鼠于麻醉前1 d经侧脑室注射miR-126 agonist或agonist NC进行干预。术后2 d进行Morris水迷宫验测试大鼠认知功能;苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理学变化;Tunel染色观察海马组织细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测海马组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测海马组织中miR-126表达水平;Western印迹检测海马组织中磷脂酰肌醇3激酶[PI3K(p110α亚基)]、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)、AKT、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和裂解凋亡蛋白酶(Cleaved-caspase)-3蛋白表达水平。结果 与Control组比较,Model组逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间明显缩短,穿越平台次数明显减少,海马组织损伤明显严重,海马组织细胞凋亡率、IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显升高,miR-126表达水平明显降低,PI3K(p110α亚基)、p-AKT、Bcl-2蛋白表达量明显降低,Bax和Cleaved-casapse-3蛋白表达量明显升高(P均<0.05);与Model组比较,agonist组逃避潜伏期明显明显缩短,原平台象限停留时间明显延长,穿越平台次数明显增加,海马组织损伤明显改善,海马组织细胞凋亡率、IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显下降,miR-126表达水平明显增加,PI3K(p110α亚基)、p-AKT、Bcl-2蛋白表达量明显上升,Bax和Cleaved-casapse-3蛋白表达量明显下降(P均<0.05),而agonist NC组以上各指标无显著性变化(P>0.05)。结论 miR-126通过激活PI3K/AKT信号通路抑制细胞凋亡及炎症反应,改善七氟烷诱导的老龄大鼠认知功能障碍。

长链非编码RNA MIR4435-2HG靶向微小RNA-1-3p调控信号通路磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B对胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的探讨长链非编码RNA MIR4435-2HG(LncRNA MIR4435-2HG)通过调控微小RNA-1-3p(miR-1-3p)的表达对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法体外培养正常胰腺细胞系hTERT-HPNE与胰腺癌细胞系PANC-1、SW1990、PaTu8988、BxPC-3,将胰腺癌PaTu8988细胞按照随机数字表法分为si-MIR4435-2HG组(转染MIR4435-2HG siRNA)、si-con组(转染siRNA Control)、miR-1-3p组(转染miR-1-3p mimics)、miR-con组(转染miR-1-3p阴性对照)、si-MIR4435-2HG+an⁃ti-miR-1-3p组(共转染MIR4435-2HG siRNA与miR-1-3p抑制剂)、si-MIR4435-2HG+anti-miR-con组(共转染MIR4435-2HG siR⁃NA与miR-1-3p抑制剂的阴性对照),同时将未经任何处理的细胞作为NC组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测细胞中MIR4435-2HG与miR-1-3p的表达;双荧光素酶报告基因检测MIR4435-2HG与miR-1-3p的相互作用。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析敲低MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞增殖的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白的表达。结果MIR4435-2HG在胰腺癌细胞中的表达水平明显高于正常胰腺细胞;MIR4435-2HG可特异性结合miR-1-3p并调控其表达活性;敲低MIR4435-2HG与上调miR-1-3p表达后,可抑制胰腺癌PaTu8988细胞增殖,明显减弱细胞迁移及侵袭能力[其中NC组、miR-con组、si-MIR4435-2HG组增殖活性分别为48 h:(1.21±0.10)、(1.18±0.12)、(0.86±0.09),细胞迁移数量分别为(90.56±9.16)、(88.56±8.91)、(26.49±2.10),细胞侵袭数量分别为(160.79±16.12)、(155.09±15.49)、(69.23±7.10),均P<0.05],下调PaTu8988细胞中cyclin D1、MMP2、MMP9、p-Akt、PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达;抑制miR-1-3p表达可促进胰腺癌PaTu8988细胞增殖、迁移及侵袭。结论敲低LncRNA MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-1-3p表达并抑制PI3K/Akt信号通路活化而降低细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达,进而减弱胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

miR-182调控线粒体凋亡通路对冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡的影响

目的 探究微小RNA(miR)-182调控线粒体凋亡通路对冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法 选取健康SD成年大鼠30只,8~10周龄,15只作为假手术组,15只建立冠心病模型,建模成功后获取建模大鼠心肌组织细胞,经培养、转染后分为上调miR-182a、下调miR-182组、对照组。采用RT-PCR技术检测miR-182、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)相关基因表达,观察3组细胞增殖、凋亡变化,免疫组化法检测心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western印迹检测Bcl-2、Bax表达水平。结果 在1、3、6 h与对照组比较,下调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较高,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较低,上调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较低,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与下调miR-182组相比,上调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较低,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-182通过下调表达水平调控线粒体凋亡通路Bcl-2、Bax水平低表达,从而抑制冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡,对心肌细胞具有一定保护作用。

长链非编码RNA MIR22HG通过微小RNA-9-3p调节CTLA4抑制前列腺癌

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR22HG通过微小RNA-9-3p(miR-9-3p)调节细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制前列腺癌的机制。方法收集26例前列腺癌组织样本和26例前列腺增生组织样本,培养VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测前列腺癌组织、前列腺增生组织及4种前列腺癌细胞的MIR22HG和miR-9-3p mRNA水平。筛选MIR22HG和miR-9-3p mRNA表达较高的细胞。将筛选出的细胞按不同干预方法分为OE-CTLA4(CTLA4过表达组)、OE-MIR22HG(MIR22HG过表达组)、miR-9-3p mimic(miR-9-3p过表达组)、OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic(MIR22HG及miR-9-3p联合过表达组)、OE-NC+NC mimic(转染对照组)、NC mimic(miR-9-3p过表达对照组)。采用TargetScan数据库及荧光素酶报告基因实验验证MIR22HG与miR-9-3p及miR-9-3p与CTLA4是否存在靶向抑制关系。采用qRT-PCR及Western blot检测各组细胞MIR22HG和miR-9-3p mRNA及CTLA4蛋白表达。取裸鼠96只,按干预方法不同分为OE-NC+NC mimic组(转染对照)、OE-MIR22HG组(MIR22HG过表达)及OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic组(MIR22HG及miR-9-3p联合过表达),每组32只。接种后4周期间,每周检测小鼠原位移植瘤并统计瘤体的质量和体积变化。结果前列腺癌细胞VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞中,PC3细胞MIR22HG mRNA相对较低,miR-9-3p mRNA相对较高,因此选择PC3细胞进行研究。在PC3细胞中成功过表达MIR22HG,荧光素酶报告基因实验验证了MIR22HG和miR-9-3p的靶向抑制关系,过表达MIR22HG,miR-9-3p表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。TargetScan数据库预测免疫基因CTLA4和miR-9-3p的靶向关系,荧光素酶报告基因实验验证miR-9-3p和CTLA4的靶向抑制关系,过表达miR-9-3p,CTLA4表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达MIR22HG的裸鼠皮下肿瘤的质量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic组裸鼠皮下肿瘤的质量、体积与OE-NC+NC mimic组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MIR22HG与miR-9-3p存在靶向负调节关系,miR-9-3p与CTLA-4存在靶向调节关系,MIR22HG/miR-9-3p可能通过抑制CTLA4达到免疫治疗前列腺癌的目的。

土木香内酯上调miR-3178抑制胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨土木香内酯调控微小RNA(miR)-3178对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法不同浓度的土木香内酯作用于QBC939细胞48 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖,划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测QBC939细胞、胆管癌组织中miR-3178的相对水平。转染miR-3178模拟物至QBC939细胞,检测过表达对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响。转染miR-3178抑制物至QBC939细胞,检测抑制miR-3178表达联合土木香内酯对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果土木香内酯显著增加QBC939细胞抑制率、凋亡率、miR-3178的相对水平(P<0.05),降低克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数(P<0.05),呈剂量依赖性。与癌旁组织比较,胆管癌组织中miR-3178表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-3178显著增加QBC939细胞抑制率和凋亡率(P<0.05),降低克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数(P<0.05)。抑制miR-3178表达部分逆转了土木香内酯对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论土木香内酯通过上调miR-3178表达抑制胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-132在慢性心力衰竭大鼠下丘脑室旁核表达

目的建立慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型,分析并观察微小RNA(miR)-132在下丘脑室旁核(PVN)中的表达特点及作用。方法36只SD大鼠依据随机数字原则分成正常对照(Ctrl)组、假手术(Sham)组、CHF组各12只。以左冠状动脉前降支结扎的手术模式建立CHF模型,判断成功的标志是借助BL-420生物信号系统检测得到的心功能数据中左室舒张末压力(LVEDP)≥15 mmHg。苏木素-伊红(HE)染色观察心脏组织形态改变;血浆利钠肽(BNP)和去甲肾上腺素(NE)水平测定用酶联免疫吸附试验(ELISA);PVN中miR-132的表达用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法;高效液相色谱(HPLC)检测神经递质谷氨酸在PVN的表达。结果实验得到的所有数据在Ctrl组和Sham没有显著区别;与Ctrl组和Sham组相比,CHF组miR-132和谷氨酸在PVN表达明显增高(P<0.05)、CHF组心肌组织出现显著病理学改变、心功能下降、血浆BNP和NE水平明显增高(均P<0.05)。结论下丘脑PVN过表达的miR-132可能通过影响PVN交感输出参与CHF发生和发展。

血清miR-30a、miR-221在老年急性心肌梗死患者中表达及意义

目的 探讨血清微小RNA(miR)-30a、miR-221在老年急性心肌梗死患者中表达特点及意义。方法 选取老年急性心肌梗死患者86例为急性心肌梗死组,健康志愿者50例为对照组。采集空腹肘静脉血5 ml,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清miR-30a、miR-221表达水平;进行全球急性冠脉事件登记(GRACE)评分,分为低危组(总积分≤108分)、中危组(总积分109~140分)、高危组(总积分>140分);进行心脏彩超检查,记录心室重构相关超声指标;出院后进行1年随访,将全因死亡、再次血运重建、恶性心律失常纳入不良预后进行分析。结果 急性心肌梗死组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于对照组(P<0.01)。冠脉病变三支组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于双支病变和单支病变组,双支病变组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于单支病变组(P<0.05)。随着老年急性心肌梗死患者GRACE危险评分的增加,血清miR-30a、miR-221表达水平逐渐升高。左心房内径(LAD)、左心室后壁厚度(LVPWD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室质量指数(LVMI)、左心室重构指数(LVRI)在各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);随着老年急性心肌梗死患者GRACE危险评分的增加,LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI逐渐升高,LVRI逐渐降低。老年急性心肌梗死血清miRNA-30a表达水平与LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI呈显著正相关,与LVRI呈显著负相关(P<0.01);血清miR-221表达水平与LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI呈显著正相关(P<0.01),与LVRI呈显著负相关(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清miR-30a、miR-221对老年急性心肌梗死患者预后均具有较高的预测价值(P<0.05),其中联合检测的预测价值最高[曲线下面积(AUC)=0.924]。结论 老年急性心肌梗死患者血清miR-30a、miR-221高表达,且与冠脉病变支数、GRACE评分、心室重构密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。

lncRNA GABPB1-IT1靶向下调miR-501抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制

目的:探讨lncRNA GABPB1-IT1靶向下调miR-501抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制。方法:qRT-PCR方法检测宫颈癌HeLa、Caski、SiHa细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞中GABPB1-IT1表达水平。宫颈癌SiHa细胞分成Control组、Vector组(转染pcDNA)、GABPB1-IT1组(转染pcDNA-GABPB1-IT1)、GABPB1-IT1+miR-NC组(转染pcDNA-GABPB1-IT1和mimics control)、GABPB1-IT1+miR-501组(转染pcDNA-GABPB1-IT1和miR-501 mimics)。CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭;Western blotting检测细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达。利用starbase数据库对GABPB1-IT1的靶基因进行分析,通过荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。结果:宫颈癌HeLa、Caski、SiHa细胞中GABPB1-IT1表达水平低于正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞(均P<0.05)。宫颈癌HeLa、Caski细胞中GABPB1-IT1表达水平高于宫颈癌SiHa细胞(均P<0.05)。与Control组、Vector组比较,GABPB1-IT1组宫颈癌SiHa细胞存活率降低,细胞迁移和侵袭数目减少,细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达水平升高(均P<0.05)。与GABPB1-IT1+miR-NC组比较,GABPB1-IT1+miR-501组宫颈癌SiHa细胞中miR-501水平升高,细胞存活率、细胞迁移数目和侵袭数目均升高,细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达水平升高,E-cadherin蛋白表达水平降低(均P<0.05)。GABPB1-IT1靶向下调miR-501表达水平。结论:lncRNA GABPB1-IT1靶向下调miR-501抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移。

药物性肝损伤患者血清miR-21和miR-124 a水平变化及其临床意义探讨

目的探讨药物性肝损伤(DILI)患者血清微小RNA(miR)-21和miR-124a水平变化及其临床意义.方法2019年3月~2022年3月我院收治的87例DILI患者和60例同期体检的健康人,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR21和miR-124a mRNA水平,采用ELISA法检测核转录因子-κB(NF-κB)和白介素-6(IL-6)水平.结果在DILI发生时,血清ALT、AST、GGT和TBIL峰值水平分别为(143.6±51.8)U/L、(158.2±38.8)U/L、(131.6±26.8)U/L和(41.9±9.6)μmol/L;DILI患者血清miR-21、miR124a mRNA、NF-κB和IL-6水平分别为(1.4±0.3)、(2.6±0.4)、(3615.4±526.4)pg/ml和(12.7±1.8)pg/ml,均显著高于健康人[分别为(1.0±0.1)、(1.1±0.1)、(692.2±144.6)pg/ml和(3.4±0.7)pg/ml,P<0.05];混合型DILI患者血清NF-κB和IL-6水平分别为(3874.5±282.5)pg/ml和(14.4±2.6)pg/ml,均显著高于肝细胞型DILI患者[分别为(3609.8±296.4)pg/ml和(12.6±1.5)pg/ml,P<0.05]或胆汁淤积型DILI患者[分别为(3437.2±253.7)pg/ml和(11.7±1.3)pg/ml,P<0.05];混合型、肝细胞型和胆汁淤积型DILI患者血清miR-21和miR-124a水平无显著性差异(P>0.05).结论DILI患者血清miR21和miR-124a水平随肝功能损伤的出现而升高,但在三型不同肝损伤类型患者其水平无显著性差异,对临床分型的判断无指导意义.

下调miR-21-5p对急性脑出血模型大鼠血脑屏障的保护作用及机制

目的分析下调微小RNA(miR)-21-5p对急性脑出血模型大鼠血脑屏障的保护作用及机制。方法48只SPF级SD大鼠,分为空白组、模型组、上调组、下调组各12只,空白组不做任何处理,模型组、上调组、下调组构建急性脑出血大鼠模型,miR-21-5p慢病毒滴定,采用实时荧光定量(RT)-聚合酶联反应(PCR)检测miR-146a基因表达量,采用透射电镜检测血脑屏障通透性,采用酶联免疫吸附试验检测细胞色素(Cyt)-C、基质金属蛋白酶(MMP)-9、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,采用Western印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路蛋白表达量。结果与上调组相比,下调组miR-21-5p表达量明显降低,Cyt-C、MMP-9、血脑屏障通透性、SOD、MDA表达量明显升高,PI3K/Akt信号通路蛋白表达量明显降低(均P<0.05)。结论下调miR-21-5p可能经作用于PI3K/Akt信号通路抑制氧化应激,发挥保护急性脑出血大鼠血脑屏障的作用。

老年急性胰腺炎患者血清miR-29a表达水平及其对并发急性肾损伤的预测价值

目的探讨血清微小RNA(miR)-29a水平对老年急性胰腺炎(AP)患者并发急性肾损伤(AKI)的预测价值。方法124例老年AP患者,分为轻症AP(MAP组,n=91)与重症AP(SAP组,n=33),并根据住院期间是否发生AKI分为AKI组(n=29)与非AKI组(n=95);另选取同期老年健康体检者40例为对照组。比较各组血清miR-29a相对表达量差异,分析miR-29a与一般临床指标的关系,并应用受试者工作特征(ROC)曲线评价AP并发AKI的预测效能。结果与对照组相比,SAP组、MAP组血清miR-29a相对表达量显著增高,且SAP组显著高于MAP组(P<0.05);AP患者血清miR-29a水平与急性生理与慢性健康评估(APACHE)-Ⅱ评分、Ranson评分和C反应蛋白(CRP)水平均呈显著正相关(P<0.05)。AKI组血清miR-29a相对表达量显著高于非AKI组(P<0.05)。Logisitic回归分析显示,APACHEⅡ评分、CRP和血清miR-29a均是老年AP患者并发AKI的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-29a相对表达量预测老年AP患者并发AKI的曲线下面积为0.934(95%CI:0.873~0.971),最佳截断值为2.4时,其敏感度为93.10%,特异度为75.79%。结论血清miR-29a在老年AP患者中呈高表达与病情严重程度相关,并对预测AP并发AKI有较高价值。

不同程度病变宫颈组织miR-424表达水平及其临床意义

目的探讨微小RNA(miR)-424在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌患者宫颈组织中的表达情况及其临床意义。方法齐齐哈尔医学院附属第一医院就诊并最终获得宫颈组织病理学诊断的40~69岁女性患者,收集宫颈组织;采用实时荧光定量PCR检测不同病变程度宫颈组织中miR-424的相对表达水平并进行比较。结果共收集129例不同程度病变患者的正常和病变宫颈组织样本(CINⅠ组25例,CINⅡ组30例,CINⅢ组28例,宫颈癌组46例)。不同病变程度宫颈组织中miR-424的表达差异有统计学意义(F=47.009,P=0.000),且随着病变程度的增加,miR-424的表达水平呈下降趋势。miR-424高表达所占比例与宫颈组织病变程度相关(χ2=8.377,P=0.039),而与人乳头瘤病毒(HPV)感染情况不相关。结论miR-424在不同病变宫颈的表达水平存在差异,随着宫颈病变程度的加重,其表达水平呈降低趋势,并且宫颈病变程度影响miR-424的表达水平。

转染miR-214抑制物的口腔鳞癌细胞SCC15增殖、迁移、侵袭能力变化及其机制

目的观察转染miR-214抑制剂的口腔鳞癌SCC15细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化,并探讨其机制。方法取体外培养的口腔鳞癌SCC15细胞,分为观察组、阴性对照组和空白对照组,观察组和阴性对照组分别用Lipofectamine2000转染miR-214抑制物、无关序列,空白对照组不转染。采用实时荧光定量PCR法检测转染24 h时各组细胞中miR-214的表达,用CCK-8法观察转染24、48、72 h各组细胞增殖情况,用划痕实验观察转染24 h时各组细胞迁移能力,用Transwell实验观察转染24 h时各组侵袭能力,用Western blotting法检测转染24 h时各组细胞中的Wnt通路拮抗因子Dickkopf相关蛋白-3(DKK-3)及Wnt通路关键基因β-catenin蛋白。结果转染24 h时,与阴性对照组和空白对照组相比,观察组细胞miR-214相对表达量低,划痕愈合百分比低,穿膜细胞数少,β-catenin蛋白相对表达量低,DKK-3蛋白相对表达量高(P均<0.05)。转染48、72 h观察组OD值低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论转染miR-214抑制物的口腔鳞癌SCC15细胞增殖、迁移及侵袭能力下降。其机制可能是因为转染miR-214抑制物能抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白DKK-3、β-catenin蛋白表达。

长链非编码RNA LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制。方法收集漯河市中心医院2015年10月至2018年5月因结直肠癌手术切除的组织标本20例,以距离结直肠癌边缘≥3 cm的癌旁正常组织标本20例为对照。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中lncRNALINC01419和微小RNA-132-3p(miR-132-3p)表达。构建干扰lncRNALINC01419或miR-132-3p过表达的结直肠癌SW620细胞,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,Transwell检测细胞迁移、侵袭,蛋白质印迹法(Westernblotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达。生物信息学预测结合双荧光素酶报告实验分析lncRNALINC01419和miR-132-3p的靶向关系。si-LINC01419和anti-miR-123-3p共转染,观察抑制miR-132-3p表达对干扰lncRNALINC01419诱导的SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。结果与癌旁组织[(1.00±0.09)、(1.01±0.08)]比较,结直肠癌组织中lncRNALINC01419表达量(2.74±0.26)明显增加(P<0.05),miR-132-3p表达量(0.51±0.05)显著减少(P<0.05)。干扰lncRNALINC01419或miR-132-3p过表达显著抑制SW620细胞增殖、迁移、侵袭、cyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,并促进细胞凋亡、P21、Bax蛋白表达。lncRNA LINC01419靶向调控miR-132-3p的表达。抑制miR-132-3p表达逆转了干扰lncRNALINC01419对结直肠癌细胞SW620增殖、迁移、侵袭的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论lncRNALINC01419通过靶向miR-132-3p调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭。

大黄[庶虫]虫丸经TGF-β_(1)/Smads/miR-29通路干预大鼠心肌纤维化的机制

目的:运用经方大黄[庶虫]虫丸(DHZCW)干预大鼠心肌纤维化模型,观察其对大鼠心肌纤维化的影响并探讨其作用机制。方法:选用SPF级雄性昆明种大鼠36只,分为空白组、模型组和DHZCW低、中、高剂量组(0.056、0.084、0.168 g·kg^(-1))、卡托普利组(10 mg·kg^(-1))组,每组6只。除空白组外,其余各组在大鼠腹腔注射异丙肾上腺素溶液5 mg·kg^(-1),连续15 d,复制心肌纤维化模型。造模开始时便同时给药,给药后28 d处死各组大鼠,取血清及心脏组织进行相关检测。采用苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色,观察组织炎症、细胞变性、坏死及纤维化等情况。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠和大鼠血清中的羟脯氨酸(HYP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、大鼠血清中透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测关键通路蛋白转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测关键通路基因TGF-β_(1)、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7、微小RNA(miR)-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p的mRNA表达水平。结果:与空白组比较,模型组中的纤维化病理损伤改变明显,血清HYP、TNF-α、IL-1β、IL-6、HA、LN和PCⅢ含量均升高(P<0.01),TGF-β_(1)、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量升高(P<0.01),Smad7蛋白含量降低(P<0.01)。TGF-β_(1)、α-SMA、Smad2、Smad3mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Smad7、miR-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5pmRNA表达降低(P<0.01);与模型组比较,给药28 d后,DHZCW高、中、低剂量组和卡托普利组血清HYP、TNF-α、IL-1β、IL-6、HA、LN和PCⅢ含量均降低(P<0.01),除低剂量组,TGF-β_(1)、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量降低,Smad7升高(P<0.01);DHZCW高剂量组中TGF-β_(1)、Smad2、α-SMA、Smad3 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01),Smad7、miR-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p mRNA升高(P<0.05);DHZCW中剂量组的TGF-β_(1)、Smad2、Smad3的mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),而Smad7 mRNA升高(P<0.01);DHZCW低剂量组TGF-β_(1)、Smad2 mRNA降低(P<0.01)。结论:DHZCW能改善大鼠心肌纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β_(1)/Smads/miR-29通路有关,且在0.056~0.168 g·kg^(-1)存在剂量依赖性,高剂量组效果更加稳定。

微小RNA-204对前列腺癌细胞株CL1的生长调节及其机理研究

目的:探讨微小RNA(mi R)-204对前列腺癌细胞株CL1的生长调节及其机理。方法:获得mi R-204高表达的CL1稳转细胞株(CL1-mi R-204)及其阴性对照的CL1稳转细胞株(CL1-对照)后,观察其细胞生长速度,检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)磷酸化水平及AKT总蛋白和p27蛋白的表达,并检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通道抑制剂LY294002对2种细胞生长的影响。结果:mi R-204能促进CL1的生长;升高AKT在苏氨酸(T308)和丝氨酸(S473)2个位点的磷酸化水平;抑制AKT下游的靶基因p27蛋白表达水平。加入LY294002后,CL1-对照和CL1-mi R-204的生长速度都降低。但CL1-mi R-204的生长速度下降得更明显。结论:mi R-204可能是通过AKT信号通路来促进CL1的生长。

miR-21靶向PDCD4调控HPV16+及HPV18+宫颈癌细胞增殖的实验研究

高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌发生的危险因素,微小RNA(microRNA,miR)-21在宫颈癌中表达增多且与高危型HPV载量呈正相关,抑制miR-21能够靶向程序性死亡因子4(Programmed cell death 4,PDCD4)抑制肝癌细胞的增殖,但抑制miR-21对高危型HPV感染宫颈癌细胞增殖的调控作用及机制未阐明。因此,为研究miR-21靶向PDCD4调控HPV16+及HPV18+宫颈癌细胞增殖的作用,本研究培养了HPV16+Siha细胞及HPV18+HeLa细胞,转染阴性对照(Negative control,NC)抑制物、miR-21的抑制物、NC siRNA、PCDC4 siRNA后检测细胞活力及miR-21、PDCD4、β-catenin、cyclinD1的表达,验证miR-21对PDCD4的靶向调控。结果显示,转染miR-21抑制物后,Siha细胞和HeLa细胞的增殖活力及细胞中β-catenin、cyclinD1的表达均降低,细胞中PDCD4的表达增加;转染miR-21模拟物后,含有PDCD4基因3′UTR的双荧光素酶报告基因的荧光活力降低;转染PDCD4 siRNA后,miR-21抑制物抑制细胞活力、增加细胞PDCD4表达的作用被逆转。本研究提示,miR-21能够在HPV16+及HPV18+宫颈癌细胞靶向抑癌基因PDCD4,抑制miR-21表达能够增加PDCD4表达并抑制细胞增殖。