子宫内膜癌组织中dMMR蛋白和miRNA Let-7表达水平及临床价值的研究

目的探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中微小RNA Let-7(miRNA Let-7)表达水平与DNA错配修复(DNA mismatch repair,dMMR)蛋白表达缺失的关系及意义。方法选取2016年5月~2022年12月在江苏省连云港市妇幼保健院行根治性手术切除的子宫内膜癌患者74例,分别用免疫组织化学法检测dMMR蛋白(包括MLH1,PMS2,MSH2,MSH6)的表达、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA Let-7的相对表达量,按照dMMR蛋白表达情况,将EC患者分为表达完整组(n=43)和表达缺失组(n=31),采用Logistic多因素回归分析与dMMR蛋白缺失相关的危险因素、绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估相关因素的预测价值。结果74例EC病例中,miRNA Let-7的表达水平在肌层浸润<1/2组显著高于肌层浸润≥1/2组,差异具有统计学意义(t=1.79,P=0.04);dMMR蛋白表达的缺失率为41.89%,且年龄<55岁组和miRNA Let-7低表达组(<0.715)患者中的dMMR蛋白缺失率高于≥55岁组和miRNA Let-7高表达组(≥0.715),差异具有统计学意义(χ2=3.92,4.50,均P<0.05);Logistic多因素回归分析结果显示miRNA Let-7表达水平是发生dMMR表达缺失的独立危险因素(P=0.012);Spearman相关分析表明,miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失呈明显负相关(r=-0.247,P=0.034);ROC曲线分析结果显示,miRNA Let-7表达水平对于预测EC患者中发生dMMR蛋白的缺失具有一定的价值,其AUC为0.737,最佳临界值为0.77,敏感度和特异度分别为0.651,0.806。结论子宫内膜癌患者中miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失具有相关性,也是发生dMMR蛋白缺失的危险因素,有望为预测dMMR的表达缺失提供帮助。

微小RNA-23靶向线粒体分裂蛋白1调控炎症反应和氧化应激保护脓毒症肾小管上皮细胞损伤

目的探讨微小RNA-23(microRNA-23,miR-23)和线粒体分裂蛋白1(fission protein 1,FIS1)在脓毒症肾小管上皮细胞中的作用关系以及miR-23靶向FIS1对细胞炎症反应和氧化应激的调控。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2),用脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导建立脓毒症模型;利用双荧光素酶报告基因验证miR-23和FIS1的相互作用。将HK-2细胞采用随机数字表法随机分组,用miR-23的模拟物/抑制物和FIS1的真核表达载体/小干扰RNA单独或联合处理,细胞计数试剂检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6和IL-10水平。结果LPS诱导的HK-2细胞miR-23 mRNA表达量为对照组的(0.60±0.12)倍(P<0.05),FIS1 mRNA表达量为对照组的(2.16±0.21)倍(P<0.05),FISI蛋白表达水平是对照组的(2.69±0.28)倍(P<0.05)。miR-23可以与FIS1的3'-UTR区形成互补结合,负向调控FIS1。miR-23 mimic组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml,FIS1 siRNA组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.015±0.004)、(0.043±0.007)和(0.020±0.008)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05),两组的IL-10分别为(0.325±0.011)和(0.376±0.018)ng/ml,高于空白对照组(P<0.05)。miR-23 inhibitor组的TNF-α和IL-6分别为(0.117±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml,pcD-NA3.1-FIS1组TNF-α和IL-6分别为(0.168±0.024)和(0.147±0.030)ng/ml,均高于空白对照组(P均<0.05),miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组的IL-10分别为(0.149±0.012)和(0.121±0.024)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05)。miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.060±0.010)、(0.084±0.009)和(0.048±0.008)ng/ml,均高于miR-23 mimic组的(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml(P<0.05),IL-10为(0.149±0.025)ng/ml,低于miR-23 mimic组的(0.325±0.011)ng/ml(P<0.05)。miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.049±0.007)、(0.056±0.008)和(0.037±0.006)ng/ml,均低于miR-23 inhibitor组的(0.117±0.015)、(0.085±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml(P<0.05),IL-10为(0.325±0.027)ng/ml,高于miR-23 inhibitor组的(0.149±0.012)ng/ml(P<0.05)。MiR-23 mimic组和FIS1 siRNA组ROS分别为(1328±84)和(1300±70),均低于空白对照组(P<0.05),miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组ROS分别为(1825±80)和(1930±105),均高于空白对照组(P<0.05)。miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组ROS为(1538±96),高于miR-23 mimic组的(1328±84)(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组ROS为(1490±70),低于miR-23 inhibitor组的(1825±80)(P<0.05)。MiR-23 mimic组和FIS1 siRNA组MDA分别为(17.34±2.18)μmol/L和(12.05±2.47)μmol/L,均低于空白对照组(P<0.05);miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组MDA分别为(52.20±7.48)μmol/L和(46.25±6.50)μmol/L,均高于空白对照组(P<0.05);miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组MDA为(35.44±3.03)μmol/L,高于miR-23 mimic组的(17.34±2.18)μmol/L(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组MDA为(40.26±4.87)μmol/L,低于miR-23 inhibitor组的(52.20±7.48)μmol/L(P<0.05)。miR-23 mimic组和FIS1 siRNA组细胞增殖率分别为(183±14)%和(171±11)%,均高于空白对照组(P<0.05),两组凋亡率分别为(7.89±1.21)%和(11.22±2.98)%,均低于空白对照组(P<0.05);miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组细胞增殖率分别为(134±10)%和(127±9)%,均低于空白对照组(P<0.05),凋亡率分别为(23.22±2.54)%和(28.15±3.12)%,均高于空白对照组(P<0.05);miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组细胞增殖率为(148±12)%,低于miR-23 mimic组的(183±14)%(P<0.05),凋亡率为(17.02±2.29)%,高于miR-23 mimic组的(7.89±1.21)%(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组细胞增殖率为(160±8)%,高于miR-23 inhibitor组的(134±10)%(P<0.05),凋亡率为(14.27±2.00)%,低于miR-23 inhibitor组的(23.22±2.54)%(P<0.05)。结论LPS诱导的肾小管上皮细胞miR-23和FIS1异常表达与细胞的炎症反应和氧化应激过程有关。miR-23通过靶向负调控FIS1,减轻HK-2细胞的炎症反应和氧化应激水平,对脓毒症肾小管上皮细胞损伤起保护作用。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

血清外泌体miRNA-451a对乙型肝炎病毒相关肝细胞癌早期诊断的价值

目的通过检测分析乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)患者和肝硬化(LC)患者血清外泌体微小RNA-451a(exo-miRNA-451a)水平,以了解血清exo-miRNA-451a对HBV相关HCC早期诊断的价值。方法选取2018年1月至2022年12月在常州市第三人民医院接受手术治疗,术后病理证实为HCC的患者60例(HCC组),和同期住医院HBV相关LC患者60例(LC组)。记录入组患者的基线指标甲胎蛋白(AFP)、异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)等。采用qRT-PCR检测血清exo-miRNA-451a表达水平。进行Logistic回归分析,通过独立危险因素的回归系数构建联合预测因子,绘制采用受试者工作曲线(ROC),评价各项指标对HCC的早期诊断价值。结果HCC组血清exo-miRNA-451a水平中位数为853.86(570.99~1984.15),显著高于LC组的239.47(178.62~451.62)(z=-6.309,P=0.000)。以LC组为对照,exo-miRNA-451a的ROC曲线下面积为0.834(95%CI:0.762~0.906,P=0.000),当截断值为472.08时,灵敏度和特异性分别为81.7%和78.3%。根据回归系数构建的联合诊断因子,ROC曲线下面积是0.877,当截断值为710.28时,灵敏度和特异性分别为93.3%和75.0%,模型的拟合优度比较差(χ^(2)=24.27,P=0.002)。结论血清exo-miRNA-451a在HBV相关HCC患者中显著高于LC患者,分析认为其对HBV相关HCC有较好的早期诊断价值。

miRNA调控claudin-2表达对溃疡性结肠炎小鼠巨噬细胞极化的机制

目的探讨微小核糖核酸(MicroRNA,miRNA)通过封闭蛋白2(Recombinant,claudin-2)表达变化对溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及对巨噬细胞极化的调控。方法选取BALB/c雌性小鼠按照体重随机分成对照组、模型组以及上调组和下调组,每组15只。对4组小鼠溃疡性结肠组织进行HE染色,观察分析小鼠溃疡性结肠炎评分情况、炎性因子、免疫细胞、巨噬细胞、claudin-2表达。结果与对照组比较,模型组、上调组、下调组miRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,上调组miRNA表达降低、下调组升高(P<0.05);与上调组比较,下调组miRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,上调miRNA第3 d、5 d、7 d的溃疡性结肠炎模型小鼠明显降低、下调组升高;与上调组比较,下调组miRNA表达升高(P<0.05);与对照组比较,模型组、上调组、下调组T淋巴细胞的糖蛋白(CD4^(+))、白细胞分化抗原(CD8^(+))水平升高(P<0.05);与模型组比较,上调组CD4^(+)、CD8^(+)水平降低,下调组升高(P<0.05);与上调组比较,下调组CD4^(+)、CD8^(+)水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组、上调组、下调组肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)水平升高(P<0.05);与模型组比较,上调组TNF-α、IL-6、IL-8水平降低(P<0.05);与上调组比较,下调组升高(P<0.05);与对照组比较,模型组、上调组、下调组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平升高,巨噬细胞甘露糖受体(CD206)降低(P<0.05);与模型组比较,上调组iNOS水平降低、CD206水平升高,下调组iNOS水平升高、CD206水平降低(P<0.05);与上调组比较,下调组iNOS升高、CD206降低(P<0.05);与对照组比较,模型组、上调组、下调组claudin-2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,上调组claudin-2蛋白表达降低、下调组claudin-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论上调溃疡性结肠炎小鼠miRNA能够调节巨噬细胞极化,从而改善溃疡性结肠炎小鼠。

环状RNA ACAP2调节微小RNA-421与B细胞易位基因2轴对心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circACAP2组、pcDNA3.1-circACAP2+模拟物(mimic)NC组、pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,每组各10只。将缺氧H9c2细胞置于24孔板中,瞬时转染细胞,分为缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+mimic NC组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,另取正常培养的H9c2细胞作为对照组。检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌梗死情况、心肌组织病理变化、circACAP2、miR-421、BTG2 mRNA表达情况、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、H9c2细胞活力和凋亡、心肌组织BTG2蛋白表达、H9c2细胞BTG2蛋白表达。结果MI组circACAP2、BTG2 mRNA表达高于假手术组(1.84±0.21 vs 1.00±0.10,1.68±0.17 vs 1.00±0.10),miR-421表达低于假手术组(0.49±0.05 vs 1.00±0.11,P<0.05);与假手术组比较,MI组梗死面积、CK-MB、LDH活性升高,LVFS、LVEF降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circACAP2组心肌损伤减轻,LVFS、LVEF升高,梗死面积、CK-MB、LDH活性降低(P<0.05);与缺氧+si-NC组比较,缺氧+si-circACAP2组细胞活力升高,凋亡率、CK-MB和LDH活性降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-circACAP2组心肌损伤加重,LVFS、LVEF降低,梗死面积、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组细胞活力降低,凋亡率、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05)。结论circACAP2在MI大鼠和H9c2细胞中表达上调,沉默circACAP2可能通过调节miR-421/BTG2轴改善心脏功能,减少心肌损伤,提高心肌细胞活力。

微小RNA在肾组织纤维化中作用的研究进展

糖尿病、高血压、肾小球肾炎以及其它肾脏疾病常常发展为慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)。预计到2030年,慢性肾病引发肾脏功能衰竭和心脏并发症将成为全球第13大死因,而到2040年将上升到第5位死因[1]。CKD的组织病理学特点,一个是持续性肾组织炎症反应,另一个是以过多细胞外基质沉积为特征的肾小管间质和肾小球纤维化[2]。

基于公共数据库筛选淋巴特异性解旋酶过表达肺腺癌细胞的差异微小RNA及其关键基因对预后的影响

目的 分析淋巴特异性解旋酶(LSH)在肺腺癌PC9细胞过表达后微小RNA(miRNA)的表达差异,并预测其潜在调控基因。方法 采用高通量测序技术检测LSH过表达的PC9细胞系中的总miRNA,并筛选核质比有差异的候选miRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对候选miRNA的核质比进行验证,应用生物信息学方法对调控基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及基因本位(GO)功能富集分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络对miRNA核靶点进行筛选,利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库探究候选靶基因对肺腺癌患者预后的影响。结果 通过对LSH过表达PC9细胞进行测序及基因差异分析,共筛选出5个核质比差异的miRNA:hsa-miRNA-30e-5p、hsa-miRNA-378i、hsa-miRNA-378f、hsa-miRNA-423-5p、hsa-miRNA-4284,其中核内miRNA-4284增加最为显著。经KEGG与GO富集分析发现这些miRNA可能通过结合靶基因参与了RAS信号通路的调控。通过PPI网络及肺癌预后预测发现,差异miRNA可下调CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达,增加肺腺癌患者的死亡风险。结论 LSH过表达的肺腺癌PC9细胞核和细胞质中出现多个显著差异表达的miRNA,以核内miRNA-4248变化最为明显,生物信息学分析发现差异miRNA可能通过下调CXCR4的表达增加肺腺癌患者的死亡风险。

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞微小RNA的差异表达及其与免疫炎症反应的相关性

目的检测强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA(miRNA)的表达及其与免疫炎症反应的关系。方法选取AS患者(AS组)及健康志愿者(对照组),每组15例。利用高通量测序技术筛选PBMC中miRNA表达,利用实时定量PCR检测6个差异表达miRNA水平,ELISA检测外周血细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-17、IL-23表达,Spearman法分析差异miRNA与疾病活动、免疫炎症指标的相关性。结果与对照组相比,AS患者组共有44个miRNA差异表达,其中有22个上调,22个下调(差异倍数≥1);其中miR-1-3p、miR-133a-5p表达明显上调,miR-127-5p、miR-345-3p、miR-136-3p表达明显下调;且AS患者TNF-α、IL-1β、IL-17、IL-23表达明显升高,miR-1-3p与TNF-α、C反应蛋白(CRP)、Bath强直性脊柱炎疾病活动性指数(BASDAI)呈正相关,miR-133a-5p与TNF-α呈正相关,miR-127-5p与红细胞沉降率(ESR)、脊柱疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分呈负相关,miR-345-3p与IL-17呈负相关,miR-136-3p与IL-17、BASDAI呈负相关。结论AS患者PBMC中miRNA异常表达,差异表达miRNA与患者疾病活动及免疫炎症指标存在相关性。

越冬初期和中期西方蜜蜂四个亚种的miRNA及其靶mRNA的比较分析

【目的】明确西方蜜蜂Apis mellifera微小RNA(microRNA,miRNA)在越冬期间的表达量变化,揭示miRNA及其靶mRNA与抗寒性的潜在关系,在miRNA组学层面进一步揭示西方蜜蜂抗寒性的分子机理。【方法】利用sRNA-seq技术鉴定西方蜜蜂4个亚种意大利蜜蜂A.m.ligustica、欧洲黑蜂A.m.mellifera、高加索蜂A.m.caucasica和卡尼鄂拉蜂A.m.carnica在越冬期初期和越冬中期的miRNA;根据P≤0.05且|log 2fold change|≥1标准筛选4个亚种在越冬不同时期的差异表达miRNA(differentially expressed miRNAs,DEmiRNAs)。利用相关生物信息学软件对筛选出的miRNA的靶mRNA进行预测,并对靶mRNA进行GO及KEGG数据库注释。根据靶向结合关系构建DEmiRNA和靶mRNA的调控网络,并利用Cytoscape进行可视化。随机选取ame-miR-263a-5p,ame-miR-184-3p,ame-miR-263b-5p,ame-miR-190-5p,ame-miR-6052-5p,ame-miR-9a-5p,ame-miR-100-5p和ame-miR-306-5p等8个DEmiRNA进行RT-qPCR验证。【结果】鉴定获得越冬期西方蜜蜂4个亚种210个miRNA,包括178个保守的miRNA和32个新的miRNA,长度介于18~30 nt,分布数量最多的长度为22和23 nt,首位碱基为U的miRNA数量最多。西方蜜蜂4个亚种在越冬初期和越冬中期表达量最高的DEmiRNAs为ame-miR-1-3p,ame-miR-276-3p和ame-miR-184-3p。意大利蜜蜂越冬初期vs越冬中期共筛选出22个DEmiRNA,可靶向调控394条mRNA,这些mRNA分别注释到161个GO功能条目和16条KEGG通路上;欧洲黑蜂越冬初期vs越冬中期共筛选出28个DEmiRNA,可靶向调控415条mRNA,这些mRNA分别注释到147个GO功能条目和15条KEGG通路上;高加索蜂越冬初期vs越冬中期共筛选67个DEmiRNA,可靶向调控1021条mRNA,这些mRNA分别注释到171个GO功能条目和21条KEGG通路上;卡尼鄂拉蜂越冬初期vs越冬中期共筛选18个DEmiRNA,可靶向调控330条mRNA,这些mRNA分别注释到147个GO功能条目和13条KEGG通路上。西方蜜蜂4个亚种DEmiRNA与靶mRNA之间形成较为复杂的调控网络。RT-qPCR结果显示8个DEmiRNA的表达趋势与测序数据一致,证实了本研究中测序数据的可靠性。【结论】本研究明确西方蜜蜂4个亚种越冬不同时期的miRNA表达量变化,筛选出多个潜在调控西方蜜蜂越冬期抗寒性的分子候选靶标miRNA,其中ame-miR-14-3p和ame-miR-3786-5p在欧洲黑蜂、高加索蜂和卡尼鄂拉蜂中负调控多个mRNA的表达,在意大利蜜蜂中并没有参与;miRNA通过调控靶基因的表达参与甘油磷酸脂代谢、MAPK信号通路和mTOR等关键信号通路参与西方蜜蜂的抗寒性。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)22调控微小RNA(miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞(CAL-27、SCC-25和HSC-3),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组(未进行转染)、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数(PI)];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR-27b-3p的靶向作用关系。结果与癌旁组织比较,OSCC癌组织中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低(P<0.05);与HOK细胞比较,CAL-27、SCC-25和HSC-3细胞中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低,且SCC-25细胞中SNHG22与miR-27b-3p的表达与HOK细胞差异最大(P<0.05)。与Ctrl组比较,si-SNHG22组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著减少(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05);与si-SNHG22组比较,si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05)。双荧光素酶实验显示SNHG22与miR-27b-3p存在靶向作用关系。结论SNHG22在OSSC中高表达,miR-27b-3p在OSSC中低表达,SNHG22可能通过海绵化miR-27b-3p促进SCC-25细胞增殖、侵袭和迁移,SNHG22/miR-27b-3p轴可能是OSCC一个新的诊断和治疗靶点。

老年腔隙性脑梗死患者血清微小RNA-377和微小RNA-137水平及临床意义

目的分析老年腔隙性脑梗死(LI)患者血清微小RNA(miR)-377、miR-137水平及临床意义。方法选择2021年2月至2022年12月哈励逊国际和平医院收治的老年LI患者248例作为LI组,另选择同期来我院体检的健康者110例作为健康组;根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将老年LI患者248例分为神经缺损组60例(≥2分)和无神经缺损组188例(<2分)。检测血清miR-377、miR-137水平;用Pearson相关性分析和Spearman相关性分析;logistic回归分析老年LI患者神经缺损影响因素;ROC曲线评估血清miR-377、miR-137水平对老年LI及神经缺损诊断的预测价值。结果LI组血清miR-377、miR-137水平低于健康组(P<0.01)。miR-377和miR-137联合评估老年LI的曲线下面积(AUC)为0.782(95%CI:0.735~0.824),高于二者单一检测(P<0.01)。神经缺损组脑动脉硬化、血红蛋白降低、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1、IL-6、IL-17、C反应蛋白(CRP)、改良的Rankin量表(mRS)评分高于无神经缺损组(P<0.05,P<0.01),血清miR-377、miR-137水平低于无神经缺损组(0.61±0.25 vs 0.89±0.28,0.61±0.24 vs 0.85±0.27,P<0.01)。血清miR-377与miR-137水平呈正相关(P<0.01);血清miR-377、miR-137水平与TNF-α、IL-6、CRP、mRS评分均呈负相关(P<0.01)。miR-377、miR-137、TNF-α、IL-6、CRP是老年LI患者神经缺损的影响因素(P<0.01)。miR-377、miR-137联合评估老年LI患者神经缺损的AUC为0.812(95%CI:0.758~0.859),高于二者单一检测(P<0.05,P<0.01)。结论血清miR-377、miR-137水平在老年LI及其神经缺损患者血清中表达较低,检测其水平具有一定临床预测价值。

基于芯片和生物信息学分析结直肠癌肝转移中差异表达的微小RNA及其意义

目的分析有肝转移与无肝转移的结直肠癌微小RNA(microRNA,miRNA)表达的差异及其与结直肠癌肝转移(colorectal liver metastases,CRLM)发生的关系。方法收集2011年2月1日至2018年9月10日浙江大学医学院附属第二医院60例有肝转移(n=29)和无肝转移(n=31)的结直肠癌新鲜标本,采用Agilent芯片检测miRNA表达,利用Gene Spring GX v11.5.1软件筛选出差异表达的miRNA。进一步收集2003年3月1日至2012年12月31日浙江大学医学院附属第二医院62例有肝转移(n=31)和无肝转移(n=31)的结直肠癌4%甲醛固定的石蜡包埋(formalin-fixed and paraffinembedded,FFPE)标本,对差异miRNA表达进行验证。利用Gene Ontology(GO)功能数据库及Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)数据库进行靶基因的信号通路的富集,推测CRLM相关通路。TCGA数据库分析CRLM组织与正常肝脏组织中miR494、miR19a、miR223和miR20a的表达。通过反向传播(back propagation,BP)神经网络模型构建CRLM的预测模型。结果对新鲜结直肠癌样本肝转移组和无肝转移组进行miRNA芯片分析,筛选出差异表达的miRNA,包括miR19a、miR20a、miR223和miR494。实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)验证显示,FFPE肝转移组和无肝转移组miR19a、miR20a、miR223和miR494的表达水平比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Meier法分析显示,FFPE肝转移组miR494、miR19a和miR223高表达和低表达患者总生存期比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。TCGA数据库分析显示,miR494、miR19a、miR223和miR20a在正常肝脏组织和CRLM组织中的表达比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。通过BP神经网络模型构建miR494、miR19a、miR223和miR20a联合预测CRLM发生的准确度高,曲线下面积(area under the curve,AUC)为1.000。结论miR494、miR19a、miR223和miR20a在CRLM患者原发灶中差异表达,与患者生存相关。miR494、miR19a、miR223和miR20a共同预测CRLM发生的准确度高。

调心安神针法对缺血再灌注心律失常大鼠心肌组织微小RNA的影响

目的观察调心安神针法对缺血再灌注心律失常(RA)大鼠心肌组织微小RNA(miRNA1、miRNA133a)表达的影响以了解调心安神针法治疗缺血再灌注心律失常的作用机制。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组及胺碘酮组,针刺组施以调心安神针刺法预处理7 d(取穴:灵台、神道、双侧内关、百会)。采用结扎/松解左冠状动脉前降支的方法制作RA模型大鼠。造模完毕后,酶联免疫法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,苏木精-伊红染色观察心肌组织,RT-PCR法检测缺血区中央部位心内膜心肌miRNA1、miRNA133a的表达水平。结果针刺组、胺碘酮组CK-MB和LDH的含量较模型组明显降低(P<0.01)。针刺组、胺碘酮组miRNA1表达均较模型组明显降低(P<0.01),且胺碘酮组低于针刺组(P<0.01);针刺组和胺碘酮组miRNA133a表达均较模型组明显增加(P<0.05),针刺组与胺磺酮组差异无统计学意义(P>0.05)。结论调心安神针法预处理和注射胺碘酮均能改善心肌损伤,减少心律失常的发生,其机制可能与通过下调缺血再灌注心律失常大鼠心肌组织miRNA1表达,上调miRNA133a的表达有关。

血清微小RNA-21、微小RNA-210与非小细胞肺癌患者术后复发的相关性

目的分析血清微小RNA(miR)-21、miR-210与非小细胞肺癌(NSCLC)根治性切除术后复发的关系。方法纳入2019年1月至2021年12月收治入新疆医科大学第一附属医院的NSCLC患者为研究对象,所有患者拟行肺癌根治术,以随访2年为终点,观察随访期间复发事件。根据是否复发将本研究患者分为复发组和未复发组。术前行肿瘤标志物检查、血清miR-21、miR-210检查,并分析患者基线资料,采用Cox回归分析血清miR-21、miR-210与NSCLC根治性切除术后复发的关系,并绘制决策曲线检验血清miR-21、miR-210对NSCLC根治性切除术后复发的预测效能。结果本研究共收录NSCLC患者165例,158例患者完成随访,随访成功率95.76%,其中53例患者随访期间复发,复发时间18.00(13.00,21.00)个月,复发率为33.54%。复发组高级别肿瘤占比、TNMⅢ期占比高于未复发组,血清细胞角蛋白片段19(CYFRA21-1)、miR-21、miR-210表达高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,在排除了其他外界因素的影响后,血清miR-21、miR-210表达升高仍然与NSCLC根治性切除术后2年内复发有关(P<0.05)。绘制决策曲线,血清miR-21、miR-210预测NSCLC根治性切除术后复发有良好受益率,联合预测受益率最大。结论NSCLC根治性切除术后复发与血清miR-21、miR-210过表达有关,联合检测血清miR-21、miR-210能早期预测复发风险。

生物信息学方法筛选结肠癌相关lncRNA-miRNA网络及其细胞水平的功能验证

目的筛选结肠癌差异表达的lncRNA和miRNA,探讨其与结肠癌预后的关系及相关生物学功能。方法从TCGA数据库收集结肠癌患者的lncRNA和miRNA表达谱数据及临床资料,利用R软件筛选差异表达的lncRNA和miRNA;单因素Cox回归分析与预后显著相关的差异表达lncRNA和miRNA;miRNet数据库构建预后相关的lncRNA-miRNA网络,利用mirPath v.3软件对其进行功能富集分析;R软件构建预后风险模型并对其进行验证。采用CCK-8实验、划痕实验、流式细胞术及qPCR评估敲减TSPEAR-AS2对人结肠癌HCT116细胞增殖、迁移、凋亡及下游miRNA表达的影响。结果筛选出结肠癌组织中1823个差异表达的lncRNA和524个差异表达的miRNA;发现158个lncRNA和31个miRNA与结肠癌的预后相关;构建由8个lncRNA和14个miRNA组成的lncRNA-miRNA网络;GO和KEGG富集分析显示,lncRNA-miRNA网络主要参与肿瘤相关的生物学功能及通路;鉴定出11个能有效评价结肠癌预后特征的关键基因,由这11个关键基因构建的预后风险模型中高风险组生存时间显著短于低风险组(P<0.001),预测1、3和5年生存的AUC分别为0.70、0.74和0.71。敲减TSPEAR-AS2可抑制HCT116细胞增殖、迁移、促进细胞凋亡,并下调hsa-mir-4731-5p和hsa-mir-342-3p的表达。结论成功筛选结肠癌相关lncRNA-miRNA网络,并由此构建的预后风险模型具有良好的预测效能。TSPEAR-AS2参与调控结肠癌细胞的增殖、迁移、凋亡以及下游miRNA表达。

结直肠锯齿状息肉发病机制及微小RNA作用的研究进展

锯齿状息肉(SP)具有一定的恶变潜能,通过独特的锯齿状癌变途径,导致了15%~30%结直肠癌的发生。微小RNA(microRNA或miRNA)是一类小的非编码RNA,与肿瘤的发生发展有关。有研究发现,miRNA在锯齿状息肉(尤其是无蒂锯齿状病变)中存在异常表达,可能参与了结直肠癌的进展。文章对锯齿状息肉的发病机制及miRNA在不同类型锯齿状息肉中的表达差异进行综述。

LncRNA靶向miRNA调控子宫内膜癌发生发展的研究进展

长链非编码RNA(LncRNA)在多种肿瘤进展中扮演重要角色,MicroRNAs(miRNAs)是目前研究最多的LncRNA下游靶点,LncRNA靶向miRNAs可以直接参与肿瘤细胞生物学行为的调控。高表达或低表达的LncRNA可靶向miRNA调控下游信号通路,促进或抑制子宫内膜癌(endometrial cancer, EC)进展。随着对LncRNA/miRNA调控轴在子宫内膜癌研究的深入,LncRNA和miRNA有望成为EC诊疗的新靶点和预后标志物。本文围绕LncRNA及miRNA对EC的调控、lncRNA调控miRNA在EC中的作用进行综述。

微小RNA与心力衰竭诊断治疗及预后评价关系的研究进展

心力衰竭是多种心血管疾病的复杂而共同的终点,由各种类型的心脏病引起。微小RNA(miR)是一类22个核苷酸左右长度的内源性非编码性的小分子RNA,可对细胞的生长、分化、增殖、凋亡等生命活动起调控作用。大量研究表明miR参与多种心力衰竭发生发展的过程,如心肌细胞肥大、心肌纤维化、心脏能量代谢异常等,且miR在各种心血管疾病中有特定的表达谱,预示着miR有望成为心血管疾病的新型生物学标志物。除此之外,目前有60余种基于miR的治疗药物处于不同的开发阶段,例如通过靶miR模拟物或拮抗物、miR抑制剂等方式靶向调节内源性miR水平来治疗,miR可能是新治疗策略的潜在靶标。本综述总结了miR与心力衰竭诊断、治疗及预后评价之间的关系。

部分微小RNA在宫颈癌患者血清中的表达及早期筛查的意义研究

目的探讨微小RNA(miR)-126-3p、miR-199a-3p、miR-150-5p、miR-221-3p在宫颈癌患者血清中的表达及早期筛查的意义。方法选取2020年12月至2022年12月河北省邯郸市中心医院住院治疗患者及同期于该院行体检的、宫颈癌前筛查未见明显异常的健康女性作为研究对象。根据健康状况不同分为宫颈癌组(61例)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(40例)和对照组(健康女性,40例)。比较组间以上4种miR的相对表达情况差异,分析miR相对表达水平与宫颈癌患者临床及病理指标的相关性及对宫颈癌的预测价值。结果宫颈癌组患者血清中miR-126-3p、miR-199a-3p的相对表达水平低于对照组和HSIL组,miR-150-5p、miR-221-3p的相对表达水平高于对照组和HSIL组,差异均有统计学意义[(0.31±0.06)比(0.50±0.08)、(0.38±0.08),(2.56±0.36)比(3.38±0.51)、(3.25±0.60),(2.91±0.49)比(1.42±0.49)、(2.20±0.53),(3.24±0.96)比(1.83±0.63)、(2.02±0.62)](均P<0.05)。宫颈癌组患者国际妇产科联盟分期Ⅰ期+Ⅱ期和Ⅲ期者血清miR-126-3p、miR-221-3p相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。miR-126-3p联合miR-199a-3p检测预测宫颈癌的敏感度为95.0%、特异度为76.3%,miR-150-5p联合miR-221-3p检测的敏感度为91.7%、特异度为85.0%。结论miR-126-3p、miR-199a-3p、miR-150-5p、miR-221-3p在宫颈癌和癌前病变患者血清中异常表达,与宫颈癌的发生发展密切相关,对于宫颈癌诊治可能提供新的靶点。miR-150-5p联合miR-221-3p检测预测宫颈癌的敏感度及特异度均较高,可以考虑作为宫颈癌早期筛查的标志物。