微小扇头蜱microRNA文库建立及miR-275靶蛋白Vg-2的生物信息学分析

【目的】建立饱血状态雌性微小扇头蜱的microRNA文库,鉴定所含microRNA的种类,分析miR-275靶蛋白Vg-2的二、三级结构,检测其信号肽、跨膜结构域、磷酸化及糖基化位点,预测其优势抗原表位。【方法】以雌性、饱血状态的微小扇头蜱为研究对象,通过高通量测序技术建立其microRNA文库,利用软件miRDP及检索miRBase数据库,鉴定饱血状态雌性微小扇头蜱所含的microRNA种类;运用在线软件EXPASY、PRABI与SWISS-MODEL等分析Vg-2蛋白质理化性质,推断其二、三级结构;运用在线软件SignalP 5.0、TMHMM、NetPhos 3.1及NETCGlyc 1.0检测该蛋白的信号肽、跨膜结构域、磷酸化与糖基化位点;利用在线软件ABCpred Prediction、Scratch、IEDB和NetCTL预测Vg-2蛋白的B、T细胞优势抗原表位。【结果】获得成熟的microRNA 383个,其中67个为已被鉴定和注释的microRNA,316个为新发现的microRNA;微小扇头蜱的Vg-2基因序列全长5040 bp,共编码1679个氨基酸;Vg-2蛋白为亲水性酸蛋白,分子大小为189.89 kDa,理论等电点(pI)为6.08,其二级结构以无规则卷曲为主要结构成分,而其三级结构却以β-折叠为主要结构成分;Vg-2蛋白存在268个磷酸位点,20个糖基化位点,无信号肽和跨膜结构域,拥有58个B细胞优势抗原表位和8个T细胞优势抗原表位。【结论】在饱血状态雌性微小扇头蜱体内含有383个microRNA,受miR-275调控的Vg-2蛋白为结构不稳定的亲水性酸蛋白,具有良好的抗原性与免疫源性。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

植物微小RNA(microRNA)研究进展

真核细胞中存在大量的非编码RNA,～22nt的小RNA是其中一类非常重要的调控RNA,主要包括siRNA和miRNA两种类型,二者均由类似RNaseⅢ的核酸内切酶-Dicer加工产生,随后进入沉默复合体抑制靶基因表达。miRNA分子与siRNA类似,但miRNA的前体在基因组上具有独立的转录单位,可自身折叠成发卡结构,其靶基因主要是与器官发生及生长发育相关的转录因子以及调控蛋白。miRNA在生物生长发育的各个时期都扮演着重要的角色,调控许多重要的生物途径,处于基因调控网络的核心位置。

长链非编码RNA GC1靶向微小RNA-551b-3p抑制食管癌的作用及分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)鸟苷酸环化酶1(GC1)对食管癌的影响,并探讨其靶向微小RNA-551b-3p(miR-551b-3p)的分子机制。方法建立食管癌荷瘤裸小鼠模型,随机分为GC1、miR-551b-3p上、下调组及其对应对照组与模型组共9组,每组8只。末次给药次日处死裸小鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率;取肿瘤组织检测LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平和细胞周期因子(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x(Bax)基因与蛋白表达水平;观察肿瘤组织病理改变;采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率;采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GC1与miR-551b-3p的调控关系。另取人食管癌细胞株Eca109分为9组,每组3个复孔,其中基因干扰组命名同上,另设置空白组,培养48h后观察细胞LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平、形态学改变、凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平。结果动物实验:与模型组和相应对照组比较,GC1上调组与miR-551b-3p下调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均上升,抑瘤率、细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均下降;GC1下调组与miR-551b-3p上调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均下降,抑瘤率和细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均上升;GC1上调组LncRNA GC1基因表达水平上升,GC1下调组LncRNA GC1基因表达水平下降(P<0.05)。与转染野生型GC1的腺病毒载体相比,转染突变型GC1的腺病毒载体的miR-551b-3p荧光素酶相对活性上升(P<0.05)。细胞实验:LncRNA GC1和miR-551b-3p基因表达水平、细胞形态学改变与凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平变化趋势均与动物实验相同。结论下调LncRNA GC1、上调miR-551b-3p表达水平均可抑制食管癌进展,且下调LncRNA GC1可靶向上调miR-551b-3p,并降低CyclinD1和Bcl-2活性、上升p21和Bax活性。

加味七方胃痛颗粒通过MicroRNA let-7c促进胃癌细胞凋亡机制研究

目的探讨加味七方胃痛颗粒抗胃癌机制。方法细胞随机分为6组,分别加入对应的血清及慢病毒进行干预,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭,以及miR-let-7c、MTDH、ERK、NF-кB、CyclinD1的水平。结果相较于空白组,CCK8实验中,含药血清组与miR-let-7c mimics组可抑制细胞增殖,miR-let-7c inhibitor组可促进细胞增殖;流式细胞术实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可促进细胞凋亡;细胞划痕实验中含药血清组与miR-let-7c mimics组抑制细胞迁移,miR-let-7c inhibitor组促进细胞迁移;Transwell侵袭实验中,含药血清组与miR-let-7c mimics组抑制细胞侵袭,miR-let-7c inhibitor组促进细胞侵袭;RT-PCR实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可降低MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平,增加miR-let-7c水平;miR-let-7c inhibitor组可增加MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的表达水平,降低miR-let-7c水平;Western Blot实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可降低MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平,miR-let-7c inhibitor组可增加MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平。结论加味七方胃痛颗粒可促进胃癌细胞凋亡,机制可能是通过上调miRNA-let-7c靶向下调MTDH水平,从而抑制ERK/NF-кB通路的表达实现的。

微小RNA-23靶向线粒体分裂蛋白1调控炎症反应和氧化应激保护脓毒症肾小管上皮细胞损伤

目的探讨微小RNA-23(microRNA-23,miR-23)和线粒体分裂蛋白1(fission protein 1,FIS1)在脓毒症肾小管上皮细胞中的作用关系以及miR-23靶向FIS1对细胞炎症反应和氧化应激的调控。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2),用脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导建立脓毒症模型;利用双荧光素酶报告基因验证miR-23和FIS1的相互作用。将HK-2细胞采用随机数字表法随机分组,用miR-23的模拟物/抑制物和FIS1的真核表达载体/小干扰RNA单独或联合处理,细胞计数试剂检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6和IL-10水平。结果LPS诱导的HK-2细胞miR-23 mRNA表达量为对照组的(0.60±0.12)倍(P<0.05),FIS1 mRNA表达量为对照组的(2.16±0.21)倍(P<0.05),FISI蛋白表达水平是对照组的(2.69±0.28)倍(P<0.05)。miR-23可以与FIS1的3'-UTR区形成互补结合,负向调控FIS1。miR-23 mimic组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml,FIS1 siRNA组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.015±0.004)、(0.043±0.007)和(0.020±0.008)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05),两组的IL-10分别为(0.325±0.011)和(0.376±0.018)ng/ml,高于空白对照组(P<0.05)。miR-23 inhibitor组的TNF-α和IL-6分别为(0.117±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml,pcD-NA3.1-FIS1组TNF-α和IL-6分别为(0.168±0.024)和(0.147±0.030)ng/ml,均高于空白对照组(P均<0.05),miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组的IL-10分别为(0.149±0.012)和(0.121±0.024)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05)。miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.060±0.010)、(0.084±0.009)和(0.048±0.008)ng/ml,均高于miR-23 mimic组的(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml(P<0.05),IL-10为(0.149±0.025)ng/ml,低于miR-23 mimic组的(0.325±0.011)ng/ml(P<0.05)。miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.049±0.007)、(0.056±0.008)和(0.037±0.006)ng/ml,均低于miR-23 inhibitor组的(0.117±0.015)、(0.085±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml(P<0.05),IL-10为(0.325±0.027)ng/ml,高于miR-23 inhibitor组的(0.149±0.012)ng/ml(P<0.05)。MiR-23 mimic组和FIS1 siRNA组ROS分别为(1328±84)和(1300±70),均低于空白对照组(P<0.05),miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组ROS分别为(1825±80)和(1930±105),均高于空白对照组(P<0.05)。miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组ROS为(1538±96),高于miR-23 mimic组的(1328±84)(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组ROS为(1490±70),低于miR-23 inhibitor组的(1825±80)(P<0.05)。MiR-23 mimic组和FIS1 siRNA组MDA分别为(17.34±2.18)μmol/L和(12.05±2.47)μmol/L,均低于空白对照组(P<0.05);miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组MDA分别为(52.20±7.48)μmol/L和(46.25±6.50)μmol/L,均高于空白对照组(P<0.05);miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组MDA为(35.44±3.03)μmol/L,高于miR-23 mimic组的(17.34±2.18)μmol/L(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组MDA为(40.26±4.87)μmol/L,低于miR-23 inhibitor组的(52.20±7.48)μmol/L(P<0.05)。miR-23 mimic组和FIS1 siRNA组细胞增殖率分别为(183±14)%和(171±11)%,均高于空白对照组(P<0.05),两组凋亡率分别为(7.89±1.21)%和(11.22±2.98)%,均低于空白对照组(P<0.05);miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组细胞增殖率分别为(134±10)%和(127±9)%,均低于空白对照组(P<0.05),凋亡率分别为(23.22±2.54)%和(28.15±3.12)%,均高于空白对照组(P<0.05);miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组细胞增殖率为(148±12)%,低于miR-23 mimic组的(183±14)%(P<0.05),凋亡率为(17.02±2.29)%,高于miR-23 mimic组的(7.89±1.21)%(P<0.05);miR-23 inhibitor+FIS1 siRNA组细胞增殖率为(160±8)%,高于miR-23 inhibitor组的(134±10)%(P<0.05),凋亡率为(14.27±2.00)%,低于miR-23 inhibitor组的(23.22±2.54)%(P<0.05)。结论LPS诱导的肾小管上皮细胞miR-23和FIS1异常表达与细胞的炎症反应和氧化应激过程有关。miR-23通过靶向负调控FIS1,减轻HK-2细胞的炎症反应和氧化应激水平,对脓毒症肾小管上皮细胞损伤起保护作用。

微小RNA-122在乙型肝炎病毒相关肝细胞癌诊断及预后中的意义

目的探讨血清微小RNA(microRNA,miR)-122在乙型肝炎病毒相关肝细胞癌(hepatitis B virus associated hepatocellular carcinoma,HBV-HCC)诊断和预后中的意义。方法以2019年3月至2020年9月在汉中市中心医院就诊的126慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者、128例HBV-HCC患者作为研究对象,以128例健康人作为健康对照组。实时荧光定量-PCR法测定血清miR-122水平,评价miR-122联合甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、维生素K缺乏/拮抗剂II诱导的蛋白质(protein induced by vitamin K absence/antagonist II,PIVKA-II)诊断HBV-HCC的临床价值及miR-122在HBV-HCC预后中的意义。结果相较于健康对照组,CHB组和HBV-HCC组丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、PIVKA-II水平显著升高(P均<0.05),且HBV-HCC组较CHB组升高更明显(P<0.05)。另外,HBV-HCC组AFP水平高于其余2组(P均<0.05)。MiR-122在健康对照组、CHB组和HBV-HCC组的相对表达水平逐渐降低(P均<0.05)。经受试者工作特征曲线分析,miR122对HBV-HCC具有较高的诊断价值,尤其是联合AFP、PIVKA-II时诊断价值最高。以miR-122中位值分层,miR-122低表达组患者中肝纤维化患者比例明显更高,并且HBV DNA水平更高(P均<0.05)。此外,存在肝纤维化的HBV-HCC患者miR122水平显著低于未存在肝纤维化的HBV-HCC患者(P<0.05)。随访期间,33例HBV-HCC患者死亡,3例失访。肝癌巴塞罗那分期B期、不完整肿瘤包膜、手术切缘>1 cm、miR-122低表达是影响HCC患者死亡的独立性因素(P均<0.05)。HCC患者中miR-122高表达组(≥0.521)总生存时间[33.3(17.5,46.8)个月]显著长于miR-122低表达组[15.0(6.5,32.4)个月](χ^(2)=49.349,P=0.001)。结论MiR-122可能参与HBV相关肝炎向HCC的进展,并可能作为HBV-HCC和预后的生物标志物。

基于GEO数据库分析脓毒症相关性死亡的潜在差异表达基因和微小RNAs

目的基于基因表达数据库(GEO)运用生物信息学筛选与脓毒症相关性死亡相关的潜在差异表达基因和微小RNAs(miRNAs)。方法从GEO数据库下载人类血液样本基因表达谱芯片数据集GSE48080和GSE54514,选择两个时点(诊断脓毒症时、脓毒症病程中),使用GEO2R在线工具对脓毒症存活患者和非存活患者进行差异表达基因(DEGs)筛选。通过基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,研究脓毒症相关性死亡DEGs涉及的病理生理过程和潜在信号通路。使用STRING在线工具构建DEGs蛋白-蛋白相互作用(PPI),使用Cytoscape软件构建PPI网络拓扑,使用CytoHubba工具筛选枢纽(Hub)基因。使用NetworkAnalyst构建Hub基因的目标miRNAs,使用RT-qPCR验证本院脓毒症存活患者和非存活患者相关基因表达变化。结果在脓毒症病程中,脓毒症存活患者和非存活患者基因表达呈现异质性,共筛选出15个DEGs。KEGG通路富集分析显示,金黄色葡萄球菌感染、NOD样受体信号通路、硫代谢和集管酸分泌四个途径存在显著富集。PPI和CytoHubba分析筛选出10个Hub基因(SLC4A1、EPB42、LTF、LCN2、DEFA4、HBM、HBG1、GMPR、CAMP、OLFM4)。NetworkAnalyst分析预测了10个关键miRNAs。RT-qPCR验证结果显示,5个Hub基因(SLC4A1、EPB42、LCN2、DEFA4、OLFM4)与上述分析中的趋势一致。结论基于GEO数据库的生物信息学分析,脓毒症存活患者和非存活患者在脓毒症病程中存在差异表达基因,为探索脓毒症相关性死亡的生物标志物提供了数据支持。

环状RNA ACAP2调节微小RNA-421与B细胞易位基因2轴对心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circACAP2组、pcDNA3.1-circACAP2+模拟物(mimic)NC组、pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,每组各10只。将缺氧H9c2细胞置于24孔板中,瞬时转染细胞,分为缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+mimic NC组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,另取正常培养的H9c2细胞作为对照组。检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌梗死情况、心肌组织病理变化、circACAP2、miR-421、BTG2 mRNA表达情况、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、H9c2细胞活力和凋亡、心肌组织BTG2蛋白表达、H9c2细胞BTG2蛋白表达。结果MI组circACAP2、BTG2 mRNA表达高于假手术组(1.84±0.21 vs 1.00±0.10,1.68±0.17 vs 1.00±0.10),miR-421表达低于假手术组(0.49±0.05 vs 1.00±0.11,P<0.05);与假手术组比较,MI组梗死面积、CK-MB、LDH活性升高,LVFS、LVEF降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circACAP2组心肌损伤减轻,LVFS、LVEF升高,梗死面积、CK-MB、LDH活性降低(P<0.05);与缺氧+si-NC组比较,缺氧+si-circACAP2组细胞活力升高,凋亡率、CK-MB和LDH活性降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-circACAP2组心肌损伤加重,LVFS、LVEF降低,梗死面积、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组细胞活力降低,凋亡率、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05)。结论circACAP2在MI大鼠和H9c2细胞中表达上调,沉默circACAP2可能通过调节miR-421/BTG2轴改善心脏功能,减少心肌损伤,提高心肌细胞活力。

子宫内膜癌组织中MicroRNA差异表达的分析

目的筛选子宫内膜癌差异表达的微小RNA(MicroRNA,miRNA),为深入研究miRNA与子宫内膜癌发生和发展的关系奠定基础。方法应用miRNA表达芯片检测子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中miRNA的表达谱。采用实时定量PCR法检测两种子宫内膜组织中差异表达的miRNA,初步验证miRNA芯片结果的可靠性。结果与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中有14个miRNA表达上调,6个miRNA表达下调。实时定量PCR验证结果与芯片结果一致。结论miRNA在子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织间存在差异表达,miRNA表达谱分析将为子宫内膜癌的诊断与治疗提供新的依据。

微小RNA在肾组织纤维化中作用的研究进展

糖尿病、高血压、肾小球肾炎以及其它肾脏疾病常常发展为慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)。预计到2030年,慢性肾病引发肾脏功能衰竭和心脏并发症将成为全球第13大死因,而到2040年将上升到第5位死因[1]。CKD的组织病理学特点,一个是持续性肾组织炎症反应,另一个是以过多细胞外基质沉积为特征的肾小管间质和肾小球纤维化[2]。

左西孟旦治疗慢性心力衰竭的临床疗效及对神经激素、左室重构、微小RNA的影响

目的:探讨左西孟旦治疗慢性心力衰竭(CHF)的临床疗效及对患者神经激素、左室重构、微小RNA的影响。方法:选取2022年1~12月期间于某院治疗的120例CHF患者作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组60例。对照组患者给予常规治疗,观察组患者在对照组治疗基础上加用左西孟旦注射液,共治疗2周。比较两组患者神经激素[醛固酮(ALD)、去甲肾上腺素(NE)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)]、左室重构指标[平均室壁应力(MWS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室质量指数(LVMI)、左房容积指数(LAVI)]、微小RNA[微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)、微小RNA-497(miR-497)和微小RNA-30a(miR-30a)]、临床疗效及不良反应发生情况。结果:治疗后,两组患者血清ALD、NE、AngⅡ水平均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);MWS、LVEDD、LVMI、LAVI均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);血清miR-19b-3p、miR-497均升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05);血清miR-30a均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组患者临床治疗总有效率(90.00%)高于对照组(68.33%,P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论:在常规治疗基础上联合左西孟旦治疗CHF临床疗效较好,可有效改善患者血清神经激素、微小RNA水平,抑制左室重构,且不会增加不良反应的发生风险。

血清microRNA-17上调与椎间盘突出症患者腰腿痛的关系

目的探讨腰椎间盘突出症患者血清microRNA-17(miR-17)表达水平及其与腰腿痛、功能障碍、椎间盘退变分级的相关性。方法选择2021年1月至2022年1月在该院就诊的96例腰椎间盘突出症患者作为观察组,收集同期在该院健康体检的96例受试者作为对照组。采用qPCR检测血清miR-17表达水平,采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,观察miR-17与TNF-α、IL-6的相关性,观察miR-17、TNF-α、IL-6与疼痛视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)、霍普金斯症状检查表-25(HSCL-25)的相关性。结果观察组miR-17、TNF-α和IL-6水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清miR-17、TNF-α和IL-6水平与椎间盘突出位置不存在相关性(P>0.05)。血清miR-17与TNF-α、IL-6水平呈显著正相关(P<0.05),TNF-α和IL-6呈显著正相关(P<0.05)。血清miR-17、TNF-α、IL-6水平与腰痛和腿痛VAS评分及ODI指数呈显著正相关(P<0.05)。血清miR-17、TNF-α和IL-6水平与HSCL-25抑郁和焦虑维度呈正相关(P<0.05)。结论血清miR-17表达与椎间盘突出症患者疼痛评分增加相关,并与炎症因子表达呈正相关,炎症反应可能是miR-17与疼痛相关的机制。

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞微小RNA的差异表达及其与免疫炎症反应的相关性

目的检测强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA(miRNA)的表达及其与免疫炎症反应的关系。方法选取AS患者(AS组)及健康志愿者(对照组),每组15例。利用高通量测序技术筛选PBMC中miRNA表达,利用实时定量PCR检测6个差异表达miRNA水平,ELISA检测外周血细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-17、IL-23表达,Spearman法分析差异miRNA与疾病活动、免疫炎症指标的相关性。结果与对照组相比,AS患者组共有44个miRNA差异表达,其中有22个上调,22个下调(差异倍数≥1);其中miR-1-3p、miR-133a-5p表达明显上调,miR-127-5p、miR-345-3p、miR-136-3p表达明显下调;且AS患者TNF-α、IL-1β、IL-17、IL-23表达明显升高,miR-1-3p与TNF-α、C反应蛋白(CRP)、Bath强直性脊柱炎疾病活动性指数(BASDAI)呈正相关,miR-133a-5p与TNF-α呈正相关,miR-127-5p与红细胞沉降率(ESR)、脊柱疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分呈负相关,miR-345-3p与IL-17呈负相关,miR-136-3p与IL-17、BASDAI呈负相关。结论AS患者PBMC中miRNA异常表达,差异表达miRNA与患者疾病活动及免疫炎症指标存在相关性。

基于公共数据库筛选淋巴特异性解旋酶过表达肺腺癌细胞的差异微小RNA及其关键基因对预后的影响

目的 分析淋巴特异性解旋酶(LSH)在肺腺癌PC9细胞过表达后微小RNA(miRNA)的表达差异,并预测其潜在调控基因。方法 采用高通量测序技术检测LSH过表达的PC9细胞系中的总miRNA,并筛选核质比有差异的候选miRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对候选miRNA的核质比进行验证,应用生物信息学方法对调控基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及基因本位(GO)功能富集分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络对miRNA核靶点进行筛选,利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库探究候选靶基因对肺腺癌患者预后的影响。结果 通过对LSH过表达PC9细胞进行测序及基因差异分析,共筛选出5个核质比差异的miRNA:hsa-miRNA-30e-5p、hsa-miRNA-378i、hsa-miRNA-378f、hsa-miRNA-423-5p、hsa-miRNA-4284,其中核内miRNA-4284增加最为显著。经KEGG与GO富集分析发现这些miRNA可能通过结合靶基因参与了RAS信号通路的调控。通过PPI网络及肺癌预后预测发现,差异miRNA可下调CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达,增加肺腺癌患者的死亡风险。结论 LSH过表达的肺腺癌PC9细胞核和细胞质中出现多个显著差异表达的miRNA,以核内miRNA-4248变化最为明显,生物信息学分析发现差异miRNA可能通过下调CXCR4的表达增加肺腺癌患者的死亡风险。

长链非编码RNA SLCO4A1-AS1靶向微小RNA-615-5p对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)靶向微小RNA-615-5p(miR-615-5p)对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析LncRNA SLCO4A1-AS1和miR-615-5p在食管癌组织、细胞系中表达情况。将si-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1、miR-NC、miR-615-5p模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA SLCO4A1-AS1、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p分别转染Eca109细胞。CCK-8和流式细胞术用于检测细胞活力和凋亡率;平板克隆实验用于检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测培养液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用双荧光素酶报告基因法确定LncRNA SLCO4A1-AS1与miR-615-5p的关系。结果食管癌组织、细胞系中LncRNA SLCO4A1-AS1表达上调,miR-615-5p表达下调。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1表达后,细胞活力、细胞克隆形成数量以及培养液中IL-6和TNF-α水平降低,miR-615-5p表达量、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率升高,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC比较,si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率降低,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA SLCO4A1-AS1能够促进食管癌的发生和发展。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1能够减少食管癌细胞的增殖,降低炎症因子的表达,诱导癌细胞凋亡。

微小RNA(microRNA)与儿童支气管哮喘关系的研究进展

微小RNA(miRNA)是一种小分子非编码RNA,通常在转录后水平调节基因表达,并参与多种生物学过程。与哮喘气道炎症密切相关的miRNA包括miR-1、miR-155、miR-145-5p、miR-223、miR-146a、miR-1165-3p。其中,大部分miRNA主要通过增加2型辅助T(Th2)细胞因子的分泌,减少Th1细胞因子的分泌或促进T细胞向Th2细胞方向分化参与哮喘的发生。miR-375、miR-182-5p、miR-221在哮喘中可促进支气管平滑肌细胞的增生和肥大,而异常表达的miR-451a、miR-448-5p、miR-203a-3p能引起上皮间质转化加重气道重塑。此外,miRNA表达谱还与肺功能等客观指标相关。上述单个或多个miRNA的组合有望作为儿童哮喘的生物标志物,也是未来哮喘治疗的潜在靶点。

部分微小RNA在宫颈癌患者血清中的表达及早期筛查的意义研究

目的探讨微小RNA(miR)-126-3p、miR-199a-3p、miR-150-5p、miR-221-3p在宫颈癌患者血清中的表达及早期筛查的意义。方法选取2020年12月至2022年12月河北省邯郸市中心医院住院治疗患者及同期于该院行体检的、宫颈癌前筛查未见明显异常的健康女性作为研究对象。根据健康状况不同分为宫颈癌组(61例)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组(40例)和对照组(健康女性,40例)。比较组间以上4种miR的相对表达情况差异,分析miR相对表达水平与宫颈癌患者临床及病理指标的相关性及对宫颈癌的预测价值。结果宫颈癌组患者血清中miR-126-3p、miR-199a-3p的相对表达水平低于对照组和HSIL组,miR-150-5p、miR-221-3p的相对表达水平高于对照组和HSIL组,差异均有统计学意义[(0.31±0.06)比(0.50±0.08)、(0.38±0.08),(2.56±0.36)比(3.38±0.51)、(3.25±0.60),(2.91±0.49)比(1.42±0.49)、(2.20±0.53),(3.24±0.96)比(1.83±0.63)、(2.02±0.62)](均P<0.05)。宫颈癌组患者国际妇产科联盟分期Ⅰ期+Ⅱ期和Ⅲ期者血清miR-126-3p、miR-221-3p相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。miR-126-3p联合miR-199a-3p检测预测宫颈癌的敏感度为95.0%、特异度为76.3%,miR-150-5p联合miR-221-3p检测的敏感度为91.7%、特异度为85.0%。结论miR-126-3p、miR-199a-3p、miR-150-5p、miR-221-3p在宫颈癌和癌前病变患者血清中异常表达,与宫颈癌的发生发展密切相关,对于宫颈癌诊治可能提供新的靶点。miR-150-5p联合miR-221-3p检测预测宫颈癌的敏感度及特异度均较高,可以考虑作为宫颈癌早期筛查的标志物。

外泌体微小RNA与骨关节疾病:作用与机制

背景:外泌体是一种细胞以胞吐形式分泌到胞外的囊泡状结构,其中包含了大量的微小RNA,具有重要的细胞间通讯作用。外泌体中的微小RNA依靠外泌体运输,能够进入靶细胞发挥重要的生物学调控效应。在常见的骨关节疾病中,由于骨骼代谢异常或受损会释放大量的外泌体,其中一些外泌体微小RNA促进骨关节疾病的进展。因此,外泌体微小RNA与骨骼系统关系密切,对许多骨关节疾病的发生发展以及诊疗都具有重要意义。目的:综述外泌体微小RNA在骨代谢和骨关节疾病中的研究进展。方法:以“外泌体,细胞外囊泡,微小RNA,miRNA,骨,骨疾病,骨形成,骨再生,骨吸收,骨破坏”为中文检索词,“exosomes,extracellular vesicle,microRNA,miRNA,bone,bone diseases,bone formation,bone regeneration,bone resorption,bone destruction”为英文检索词,在中国知网、迈特思创和PubMed数据库进行检索,最终纳入86篇文献进行归纳总结。结果与结论:外泌体中的微小RNA可以通过影响骨形成和骨吸收调控骨代谢,并且与骨折愈合、骨质疏松症、骨关节炎、类风湿性关节炎、股骨头坏死和骨肉瘤等骨关节疾病的发生发展关系密切,外泌体微小RNA将是未来诊治某些骨关节疾病的有效手段。但目前关于外泌体微小RNA在骨关节疾病中的研究有限,想要利用外泌体微小RNA诊断治疗骨关节疾病仍然需要更多的探索和研究。

桃红四物汤对缺血性脑卒中损伤后微小RNA的影响

目的研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对缺血性脑卒中的微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的影响,探讨THSWD治疗缺血性脑卒中的分子机制。方法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导的局灶性脑缺血大鼠模型,采用单细胞RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠miRNA表达谱。采用GO和KEGG富集分析方法分析miRNA作用于靶基因的功能。对表达差异显著的miRNA进行RT-qPCR实验验证。结果THSWD干预后,MCAO大鼠脑梗死区有13个miRNA表达发生变化,其中6个miRNA表达上调,7个miRNA表达下调。利用miRanda进行预测,确定了这13个miRNA的靶基因,构建了miRNA-mRNA网络,通过RT-qPCR验证了其中6个差异表达的miRNA(rno-miR-653-5p、rno-miR-216b-5p、rno-miR-3547、rno-miR-217-5p、rno-miR-758-3p和rno-miR-223-3p)。结论THSWD可以通过逆转某些miRNA的异常表达来治疗缺血性脑卒中。