微小RNA⁃34a调控儿童急性淋巴细胞白血病细胞CEM/C1生长和迁移的分子机制研究

目的研究微小RNA⁃34a(miR⁃34a)对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞CEM/C1增殖、迁移的影响以及可能作用机制。方法选取重庆市第十三人民医院血液科2017年10月至2018年12月住院32例ALL病儿骨髓样本。另选取该院同期25例原发性血小板减少症病儿的骨髓样本作为对照组。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测miR⁃34a在ALL骨髓样本的表达量;CEM/C1细胞按随机数字表法分为对照组、阴性对照(NC)组、miR⁃34a组;对照组细胞常规培养,NC组和miR⁃34a组CEM/C1细胞分别在Lipofectamine 2000介导下转染阴性对照质粒以及miR⁃34a模拟物,qPCR检测转染效率;细胞计数试剂盒8(CCK⁃8)实验检测CEM/C1细胞的增殖,Transwell检测细胞迁移;在线软件TargetScan预测miR⁃34a与Krüppel样因子4(KLF4)的靶向关系,双荧光素酶报告基因进一步进行验证。结果与对照组相比,ALL骨髓样本中miR⁃34a的表达量下调[(0.33±0.05)比(1.00±0.08),t=15.680,P<0.001]。与对照组(1.00±0.08)相比,NC组miR⁃34a的表达量(0.99±0.08)无明显变化,miR⁃34a组CEM/C1细胞中miR⁃34a的表达量(3.21±0.23)上调(F=423.135,P<0.05)。对照组、NC组、miR⁃34a组细胞培养48 h后细胞活性分别为(0.65±0.05)、(0.69±0.06)、(0.42±0.04),F=40.818,P<0.001;迁移细胞数分别为(142.36±12.47)个、(137.45±13.49)个、(79.89±6.23)个,F=57.683,P<0.001,差异有统计学意义。与NC与KLF4⁃wt共转染的细胞相比,miR⁃34a与KLF4⁃wt共转染的细胞荧光素酶活性[(0.45±0.03)比(1.00±0.06),t=20.083,P<0.001]降低;与NC与KLF4⁃mut共转染的细胞相比,miR⁃34a与KLF4⁃mut共转染的细胞荧光素酶活性差异无统计学意义[(1.03±0.07)比(1.01±0.07),t=0.495,P>0.05]。结论miR⁃34a在ALL中表达量下调,其可通过对靶基因KLF4的调控影响CEM/C1细胞增殖、迁移。

微小RNA-34a通过靶向CD44调节膀胱癌细胞J82周期

目的观察微小RNA-34a(miR-34a)对膀胱癌细胞J82周期的影响,并探索其中的机制。方法于J82中转染miR-34a前体或miR-34a抑制物并验证转染效率,结合此前研究报道和生物信息学预测miR-34a的靶点,后通过荧光素酶报告实验验证miR-34a靶标基因CD44,通过Western blot和实时定量PCR方法检测CD44及其周期相关蛋白及信使RNA表达水平的变化,利用流式细胞仪检测膀胱癌细胞J82周期的变化。结果 miR-34a在膀胱癌细胞J82和组织中表达下调,转染miR-34a前体和抑制物后,获得满意的转染效果;双荧光素酶报告实验证实miR-34a对CD44的3'UTR活性显著调节,并伴随相关周期相关因子表达水平变化,同时观测到其对膀胱癌细胞J82周期的影响。miR-34a mimics明显降低膀胱癌细胞J82中CD44的表达,miR-34a inhibitor明显上调膀胱癌细胞J82中CD44的表达;CD44可以部分回复mir-34a对膀胱癌细胞J82周期的影响。结论微小RNA-34a通过直接靶向CD44调节膀胱癌细胞J82周期的变化。

妊娠期糖尿病患者血清miR⁃27、miR⁃34c与胰岛素抵抗的相关性

目的探究妊娠期糖尿病(GDM)患者血清微小RNA⁃27(miR⁃27)、微小RNA⁃34c(miR⁃34c)表达水平与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法选取2016年7月至2019年12月郑州大学第五附属医院收治的158例GDM孕妇为GDM组,并选取同期162例健康孕妇为对照组。比较两组孕妇一般资料及血清miR⁃27、miR⁃34c、空腹血糖(FBS)、空腹胰岛素(FINS)水平、胰岛素抵抗指数(HOMA⁃IR);分析GDM孕妇血清miR⁃27、miR⁃34c与HOMA⁃IR的关系及GDM发生的影响因素。结果GDM组孕妇体重指数、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(HDL)、高密度脂蛋白(HDL)、血清miR⁃27、FBS、FINS和HOMA⁃IR水平均高于对照组,miR⁃34c水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GDM患者血清miR⁃27表达水平与HOMA⁃IR水平呈正相关(P<0.05),血清miR⁃34c表达水平与HOMA⁃IR水平呈负相关(P<0.05)。体重指数、TG、miR⁃27、HOMA⁃IR是影响GDM发生的危险因素(P<0.05),miR⁃34c是影响GDM发生的保护因素(P<0.05)。结论GDM孕妇血清miR⁃27表达上调,miR⁃34c表达下调,miR⁃27、miR⁃34c与IR有关,两者可能与IR相互影响,进而影响GDM发生发展。