丹参多酚酸盐对心衰大鼠基质金属蛋白酶-3及其抑制因子-1表达的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对心衰大鼠基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)及其抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠完全随机分成模型组,丹参多酚酸盐低剂量组、高剂量组,卡托普利组,卡托普利和丹参多酚酸盐高剂量联合组(简称中西药联合组),正常对照组。除正常对照组,其余大鼠运用阿霉素腹腔注射制造心衰模型,正常对照组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水,每周1次,共6周。在开始造模的同时,各组开始相关干预。8周后,检测心功能,行心肌组织天狼猩红染色,检测心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)、心肌血管周围胶原面积与管腔面积的比例(perivasular circumferentiall area,PVCA)。荧光PCR检测心肌MMP-3、TIMP-1的mRNA水平,Western blot检测心肌MMP-3、TIMP-1的表达情况。结果与模型组相比,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组均有不同程度的降低心肌CVF、PVCA(P<0.05,P<0.01,P<0.01),中西药联合组较卡托普利组更明显(P<0.05);丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组心肌组织中MMP-3的mRNA水平及蛋白表达较模型组均降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),且中西药联合组低于卡托普利组(P<0.05);与模型组相比,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组均能上调心肌组织TIMP-1的mRNA水平及蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.01),且中西药联合组高于卡托普利组(P<0.05)。结论丹参多酚酸盐能降低心肌间质胶原,其机制可能与下调MMP-3及上调TIMP-1的表达有关。

来曲唑与克罗米酚对子宫内膜整合素α_Vβ_3和基质金属蛋白酶组织抑制因子-3表达的影响

目的 比较来曲唑（LE）与克罗米酚（CC）促排卵治疗时对植入窗期子宫内膜整合素αvβ3和基质金属蛋白酶组织抑制因子-3（TIMP-3）表达的影响。方法 收集2004年3～10月在本中心服用LE或CC促排卵治疗20例患者植入窗期子宫内膜（LE组9例，CC组11例），另取12例自然月经周期的相应时期内膜作为对照。通过免疫组织化学法测定整合素αvβ3和TIMP-3的表达强度。结果 三组子宫内膜整合素αvβ3的表达强度无显著性差异；TIMP-3表达强度CC组高于LE和对照组。结论 LE和CC都不影响植入窗期子宫内膜中整合素αvβ3的表达。CC使TIMP-3的表达信号明显加强。

单侧输尿管梗阻大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2的表达及益气活血法的影响

目的:肾间质纤维化是肾脏疾病进展到肾功能衰竭的共同通路。通过观察益气活血法中药制剂对肾间质纤维化大鼠肾组织基质金属蛋白酶3,基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:实验于2006-12/2007-06在首都医科大学解剖与组织胚胎学系实验室完成。①实验动物:Wistar雄性大鼠30只,采用随机数字法分为模型组、西药蒙诺组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组和假手术组。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。②实验方法:其中前5组行单侧输尿管梗阻致肾小管间质纤维化模型手术,假手术组打开大鼠腹腔后,分离其左侧输尿管,不结扎即关闭腹腔。益气活血法中药制剂主要由生黄芪,当归,赤白芍,丹参,黄芩,车前草,牛膝等组成。西药组、中药小剂量组、中药中剂量组和中药大剂量组于手术前2d开始灌胃给药,1次/d,其药量分别为:西药组蒙诺10mg/(kg·d)、小剂量组0.018mL/(kg·d)、中剂量组0.036mL/(kg·d)、大剂量组0.072mL/(kg·d),连续给予2周。模型组及假手术组用相同体积的生理盐水灌胃。③实验评估:6组大鼠于术后14d麻醉后处死,观察梗阻肾脏病理改变,并用免疫组织化学方法检测肾组织对基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2的表达,通过医学病理图像分析系统对基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2的积分光密度进行统计学分析。结果:30只大鼠全部进入结果分析。肾组织切片免疫组织化学方法结果显示:基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2主要表达部位在肾小管上皮,少量表达在肾间质和肾小球。基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶3在模型组的表达较假手术组明显减弱,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药大、中剂量组及西药蒙诺组的表达较模型组显著增强,积分光密度差异有显著性意义(P<0.05)。金属蛋白酶组织抑制因子2在模型组的表达较假手术组显著增强,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药大、中剂量组及西药蒙诺组的表达较模型组有所减弱,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药小剂量组无论基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶3还是金属蛋白酶组织抑制因子2的表达与模型组相比均较为相似,两组间积分光密度比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:大鼠输尿管梗阻后呈现出的病理损害可能和肾组织基质金属蛋白酶3,基质金属蛋白酶2与金属蛋白酶组织抑制因子2的表达失衡有关,益气活血法可以上调基质金属蛋白酶2,基质金属蛋白酶3的表达,下调金属蛋白酶组织抑制因子2的表达,显示在抑制或延缓肾间质纤维化的进程中具有一定的作用。

基质金属蛋白酶-3和金属蛋白酶组织抑制因子-1在兔下颌牵张成骨改建期的表达及意义

目的 研究基质金属蛋白酶_3(MMP_3)和金属蛋白酶组织抑制因子_1(TIMP_1)在下颌骨牵张后形成的新骨组织中的定位表达。方法 对 8只成熟大耳白兔按每天 1mm的牵张速率延长双侧下颌骨 6mm ,在牵张结束后第 4周处死动物 ,取牵张区新骨标本作组织学和免疫组化检测。结果 MMP_3与TIMP_1在牵张骨痂中均呈高水平表达 ,MMP_3阳性信号主要定位于新生骨小梁边缘的成骨细胞和埋入新骨基质中的骨细胞 ,TIMP_1则定位于成骨细胞。

基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因转染血管平滑肌细胞移植对急性心肌梗死后早期心肌重塑的影响

目的研究基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor-3of matrix metalloproteinases,TIMP-3)基因转染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)移植,对急性心肌梗死(acute myocardialinfarction,AMI)后早期心脏结构变化的影响,并探讨其可能的机制。方法取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。另取61只Wistar雌性大鼠建立左冠状动脉远端结扎的AMI动物模型,将存活的54只大鼠模型随机分为三组,每组18只。于冠状动脉结扎后立即向缺血部心室壁内注射含有1×106个TIMP-3基因转染VSMCs(A组)、1×106个VSMCs(B组)或不含细胞的PBS液(C组)各0.5ml。术后1周,进行心脏形态学检测观察大鼠心脏结构变化,免疫组织化学染色验证TIMP-3基因转染VSMCs在缺血心肌中的存活情况,Western blot法测定大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)蛋白的含量。结果成功分离、培养VSMCs,纯度达98%,TIMP-3基因成功转入VSMCs中。术后1周,A组大鼠梗死心肌面积占左室游离壁面积的百分比为28.73%±1.56%,小于B组39.63%±1.84%和C组46.32%±2.16%(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。A组大鼠左室容积指数为5.27±0.21mm3/g,小于B组6.69±0.34mm3/g和C组9.67±0.88mm3/g(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。免疫组织化学染色见TIMP-3基因转染VSMCs被成功植入缺血心肌并在其中存活。Western blot法示A组大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白含量为300704.8±3692.8,高于B、C组的195548.8±3014.2及177991.1±2502.1(P<0.01);B组高于C组(P<0.01)。A组MMP-9蛋白含量为594827.4±5708.5,低于B、C组的921461.4±8887.4及1044445.0±8788.6(P<0.01);B组低于C组(P<0.01)。结论将TIMP-3基因转染的VSMCs移植入心肌缺血区可明显抑制AMI后早期心肌重塑。

长蛇灸对强直性脊柱炎患者血清基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶组织抑制因子1的影响

目的：观察长蛇灸对早中期强直性脊柱炎患者血清基质金属蛋白酶3（MMP-3）和基质金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP-1）的影响。方法：将60例早中期强直性脊柱炎患者随机分为两组,治疗组30例,采用长蛇灸进行治疗;对照组30例,口服柳氮磺胺吡啶治疗。观察两组患者治疗前后血清MMP-3和TIMP-1水平的变化。结果：两组患者治疗后血清MMP-3明显下降（P〈0·01~0·05）,但治疗组下降更显著,与对照组比较,有极显著性差异（P〈0·01）;两组患者治疗后血清TIMP-1明显升高（P〈0·01）,但治疗组升高更显著,与对照组比较,有显著性差异（P〈0·05）。结论：长蛇灸治疗早中期强直性脊柱炎,可减少致炎因子的释放,调节异常的基质降解和减少血管形成等炎症的病理因素,缓解AS炎症、减少软骨和骨质破坏。

大鼠基质金属蛋白酶抑制因子-1 pRNAT-U6.2小干扰RNA表达载体的构建

目的：构建大鼠基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）小干扰RNA的真核表达质粒pRNAT．U6．2 siRNA。方法：依据siRNA设计原则确定以序列447～465nt、522～540nt、142～160nt为TIMP-1 siRNA靶序列，体外分别合成两端含BamHI和XhoI酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火后克隆于pGEM—T载体，r17和SP6为引物进行PCR鉴定；双酶切pGEM—T将其定向克隆到siRNA表达载体pRNAT—U6．2，用pRNAT—U6．2的插入鉴定引物进行PCR鉴定，阳性重组质粒测序。结果：DNA测序证实合成的并被克隆人真核表达载体pR—NAT．U6．2的siRNA插入序列与设计完全符合。结论：TIMP-1 siRNA表达载体构建成功，为后期研究TIMP-1 pRNAT—U6．2 siRNA作用、意义及效果奠定了实验基础。

基质金属蛋白酶抑制因子3甲基化与急性白血病的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)基因启动子区域甲基化在急性白血病发病机制中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)法检测50例急性白血病患者骨髓单个核细胞、巨核细胞白血病CHRF细胞株、人组织细胞淋巴瘤U937细胞株、人慢性粒细胞白血病K562细胞株及10名健康供者外周血单个核细胞内TIMP3基因启动子区域的甲基化情况。结果50例患者骨髓单个核细胞、3种白血病细胞株及健康供者外周血单个核细胞中均未检测到TIMP3启动子区域甲基化。结论TIMP3基因启动子区域甲基化与急性白血病发病可能无相关性。

平滑肌细胞移植对心肌梗死后早期心肌基质金属蛋白酶2、9和抑制因子3含量的影响

目的评价平滑肌细胞移植对心肌梗死后早期心肌间质重构的影响。方法选用48只雌性Wistar大鼠,采用随机数字表法分成对照组(n=24)和平滑肌细胞移植组(n=24),经左冠状动脉远端结扎后建立心肌梗死动物模型,立即对梗死区边缘行室壁注射含有1×106个平滑肌细胞或不含细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)0.5ml。在移植后1周,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫杂交观察大鼠心肌内基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白变化。结果植入的平滑肌细胞能够存活;平滑肌细胞移植组大鼠缺血区TIMP-3mRNA(1.06±0.22vs.0.81±0.19,t=-2.358,P=0.033)及其蛋白含量(3.33±0.53vs.1.63±0.47,t=-6.802,P<0.001)明显高于对照组;平滑肌细胞移植组大鼠缺血区MMP-2、MMP-9mRNA(0.49±0.12vs.1.16±0.18,t=8.453,P<0.001;0.45±0.12vs.0.80±0.11,t=5.884,P<0.001)及其蛋白含量(3.98±1.08vs.6.05±0.91,t=4.139,P=0.001;0.39±0.14vs.0.57±0.17,t=2.409,P=0.031)明显低于对照组。结论移植的平滑肌细胞可在心肌梗死区及其周围存活,并且增加梗死后心肌中TIMP-3mRNA和蛋白的含量,降低MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白含量,抑制心肌不良重构。

人转化生长因子β3、结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶抑制剂1基因重组慢病毒多表达质粒的构建及活性检测

背景:前期试验显示单个病毒载体介导的多基因共表达系统能够显著提高椎间盘退变转基因疗效。目的:构建人转化生长因子β3、结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶抑制剂1基因重组慢病毒多表达质粒。方法:应用全基因合成技术,以"自剪切多肽2A"串联目的基因,并克隆到慢病毒表达质粒构建重组慢病毒质粒Lenti-TGF-β3-P2A-CTGF-T2A-TIMP1。转染293细胞后,应用RT-PCR和Western-Blot技术分别检测转染后不同时间点目的基因mRNA和蛋白质表达水平。结果与结论:RT-PCR和Western-blot技术检测结果显示重组质粒成功表达了3种目的基因,并于转染后48h左右达到峰值,"2A"结构下游基因蛋白质表达量约为上游基因的80%。说明成功构建了携带人转化生长因子β3、结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶抑制剂1基因的慢病毒多表达质粒。

泥蚶基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因的克隆及镉免疫表达研究

通过已构建的泥蚶转录组文库EST,利用SMART RACE技术扩增得到泥蚶Tg-TIMP-3基因全长c DNA序列,并对其进行生物信息学和组织表达相关分析。结果显示,泥蚶Tg-TIMP-3 c DNA全长为804 bp,其中开放阅读框为570 bp,编码189个氨基酸;氨基酸序列比对发现其氨基酸序列与其他动物的相似性并不高,与长牡蛎的相似性仅为35.8%,但TIMP基因的两个功能域(N端和C端)相对保守。qRT-PCR检测结果显示:Tg-TIMP-3 mRNA在鳃中表达最高,外套膜和肝胰腺次之,表达量最低的是血液。在不同浓度重金属镉(Cd)攻毒后,泥蚶鳃中的Tg-TIMP-3 mRNA表达量先略微下调后显著上调达到最高,其中25μg/L和250μg/L镉攻毒后在6 h时表达量达到最高(P<0.01),500μg/L镉攻毒后在9 h时表达量达到最高,48 h后各浓度组Tg-TIMP-3基因表达受到不同程度抑制。研究表明,Tg-TIMP-3对重金属Cd免疫防御或解毒中可能起重要作用,而泥蚶鳃组织中的Tg-TIMP-3 mRNA表达对不同浓度Cd的抗逆免疫反应的灵敏度和时序上存在一定差异。

基质金属蛋白酶抑制因子-1小干扰RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的:构建基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)小干扰RNA慢病毒表达载体并转染肝星形细胞T6观测其转染效率及对TIMP-1mRNA的沉默效应。方法:用PCR扩增在线确定的TIMP-1特异性小干扰RNA序列,与T载体连接,用BamHI和XhoI分别双酶切并将其粘末端亚克隆入pRNAT-U6.2,用pR-NAT-U6.2的插入鉴定引物进行PCR鉴定并测序;包装产生TIMP-1pRNAT-U6.2/lentisiRNA的慢病毒表达载体,将其转染T6细胞,荧光照相及FQ-PCR检测转染效果及TIMP-1mRNA表达。结果:TIMP-1pRNAT-U6.2/LentisiRNA慢病毒表达载体可显著抑制T6TIMP-1mRNA表达。结论:成功构建能高效转染真核细胞的TIMP-1pRNAT-U6.2/LentisiRNA病毒表达载体,为进一步研究其在体抑制TIMP-1mRNA表达提供了实验工具。

促红细胞生成素对单侧输尿管梗阻小鼠肾组织中基质金属蛋白酶-3及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2的影响

[目的]通过分析促红细胞生成素(EPO)对基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)的作用,探讨了EPO对肾间质纤维化进展过程的影响.[方法]选取2~4周龄雄性昆明种幼鼠,随机分为假手术组、肾间质纤维化模型组(UUO组)和EPO治疗组(EPO组).UUO组和EPO组采用结扎单侧输尿管的方法制作肾间质纤维化小鼠模型,EPO组于术后1 d开始腹腔注射给予EPO溶剂1000 U/(kg·d),共14 d,假手术组和UUO组腹腔注射给予等量生理盐水.于术后第3、7、14天取材,采用脲酶法检测眼球血清中BUN含量、肌氨酸氧化酶法检测SCr含量;采用HE和Masson染色技术观察肾组织病理变化,利用Banff分级法对肾间质损伤进行半定量评分,并采用Image-Pro Plus图像分析软件定量分析肾间质纤维化程度;采用免疫组织化学染色技术检测肾组织中MMP-3、TIMP-2蛋白表达,并使用Image-Pro Plus图像分析系统选取积分光密值为参数进行半定量分析.[结果]生物化学观察结果显示,各时间点UUO组SCr、BUN含量均明显高于假手术组(P<0.05)及EPO组(P<0.05).病理观察结果显示,随时间推移UUO组肾小球数量逐渐减少,肾单位大量消失,肾小管管腔塌陷,结构破坏严重,肾皮质变薄;EPO组各时间点肾组织病理改变明显减轻,肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积均明显低于UUO组(P<0.05),但均明显高于假手术组(P<0.05).免疫组织化学观察结果显示,各时间点UUO组中MMP-3和TIMP-2表达均明显高于同时间点的假手术组(P<0.05),EPO组中MMP-3表达均明显高于UUO组(P<0.05);EPO组各时间点TIMP-2蛋白表达均明显高于同时间点的假手术组、而低于同时间点的UUO组(P<0.05).[结论]EPO可能通过调节肾组织中MMP-3、TIMP-2蛋白表达抑制肾间质纤维化,从而起到保护肾组织的作用.

正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因对小鼠成纤维细胞表达细胞外基质的影响

目的 观察正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP- 1)基因对小鼠成纤维细胞生物学行为的影响。方法 应用正、反义人金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP- 1)逆转录病毒表达载体转染 NIH3T3细胞 ,观察其对 NIH3T3细胞增殖的影响 ,Northern blot检测细胞 胶原 (α1)、MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1m RNA的表达 ,酶谱法分析细胞培养液中 MMP- 2、MMP- 9的蛋白表达 ;EL ISA测定细胞培养液中 FN、 、 、 型胶原的含量。结果 正义转染组显示出促细胞生长作用 (P<0 .0 1) ;反义转染组显示抑制细胞生长作用 (P<0 .0 1) ;TIMP- 1m RNA在各组均有表达 ,反义转染组表达明显减弱。正义转染组细胞培养液中 FN及 、 、 型胶原含量明显增高 (P<0 .0 1) ,MMP- 2 ,MMP- 9含量降低 ;而反义转染组 FN及 、 、 型胶原含量明显降低 (P<0 .0 1) ,MMP- 2 ,MMP- 9含量增高。结论 正义 TIMP- 1促进NIH3T3细胞的增殖 ,反义 TIMP- 1则抑制 NIH3T3细胞的增殖 ;反义 TIMP- 1通过抑制细胞 TIMP- 1的表达而促进小鼠成纤维细胞的 FN及 、 、 型胶原降解。

肝硬化患者血清中基质金属蛋白酶-3、基质金属蛋白组织抑制因子-1水平与肝硬化进程的研究

目的 探讨肝硬化患者血清中的基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和基质金属蛋白组织抑制因子-1 （TIMP-1）值对于肝硬化进程的影响.方法 分析台州恩泽医疗集团路桥医院2011年1月～2012年6月收治的30例乙型肝炎后肝硬化代偿期患者（代偿组）及30例失代偿期患者（失代偿组）的临床资料,30名健康者作为正常对照组.采用BAS-ELISA法测定MMP-3的血清含量,同时采用ELISA双抗体夹心法测定TIMP-3的浓度;计算TIMP-1/MMP-3的比值.对比两组患者的MMP-3、TIMP-1的临床指标的异同.结果 ①代偿组患者血清MMP-3水平[（20.32±3.10） ng/mL]显著高于正常对照组血清MMP-3水平[（17.45±2.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜ 0.05）;代偿组患者血清TIMP-1水平[（1.72±0.40）ng/mL]显著高于正常对照组[（1.49±0.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;代偿组TIMP-1/MMP-3值为（0.088±0.010）,比正常对照组TIMP-1/MMP-3值（0.086±0.010）有所升高,但差异无统计学意义（P＞0.05）.②失代偿组患者血清MMP-3水平[（22.73±5.20）ng/mL]显著高于正常对照组[（17.45±2.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者血清TIMP-1水平[（2.24±0.30）ng/mL]显著高于正常对照组[（1.49±0.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值为（0.103±0.020）,显著高于正常对照组（0.086±0.010）,差异有统计学意义（P＜0.05）.③失代偿组患者血清中MMP-3水平显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者血清TIMP-1水平显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜ 0.05）.结论 代偿期肝硬化患者MMP-3以及TIMP-1皆显著升高,TIMP-1/MMP-3比值有升高趋势.失代偿期肝硬化患者MMP-3以及TIMP-1皆显著升高,TIMP-1/MMP-3比值显著升高.MMP-3/TIMP-1的比值与TIMP-1的表达与肝硬化程度有关.

miR-182、信号传导和转录激活因子3、基质金属蛋白酶-7与食管癌老年患者临床病理及预后的关系

目的分析微小RNA(miR)-182、信号传导和转录激活因子(STAT)3、基质金属蛋白酶(MMP)-7与食管癌老年患者临床病理及预后的关系。方法 67例老年食管癌患者,收集其癌组织和癌旁组织,分析食管癌miR-182、STAT3、MMP-7表达和临床病理与预后的关系。结果 miR-182、STAT3、MMP-7癌组织高表达率均分别显著高于癌旁组织[52.24%(35/67)和14.93%(10/67),64.18%(43/67)和17.91%7(12/67),55.22%(37/67)和16.42%(11/67)](P<0.05)。miR-182、STAT3、MMP-7高表达与性别、年龄、肿瘤直径无关(P>0.05);miR-182、STAT3、MMP-7高表达与分化程度、T分期、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05)。相关性分析可见,miR-182、STAT3、MMP-7均呈正相关,miR-182、STAT3、MMP-7高表达者2年生存率均分别低于低表达者,Cox比例风险显示,淋巴结转移、miR-182、STAT3、MMP-7高表达为食管癌患者预后独立危险因素。结论 miR-182、STAT3及MMP-7高表达可作为老年食管癌患者生物学行为与预后的参考指标,并为其治疗提供理论依据。

镁钙合金浸提液对人结肠黏膜上皮细胞中基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶抑制因子3表达的影响

目的研究不同浓度镁钙合金浸提液对人结肠黏膜上皮细胞NCM460中基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)表达的影响。方法用镁钙合金制成不同浓度(体积分数10%、50%和100%)的浸提液,并将NCM460细胞制成5×10~6L^(-1)的细胞悬液,分为空白对照组及实验1、2、3组,空白对照组每孔加入含体积分数10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔高糖培养基2 000μL,实验1、2、3组每孔分别加入体积分数10%、50%及100%的镁钙合金浸提液2 000μL,分别培养1、3、5 d,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测NCM460细胞中MMP9和TIMP3 mRNA的表达,免疫印迹法检测NCM460细胞中MMP9和TIMP3蛋白表达。结果培养1 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA、TIMP3 mRNA表达水平均显著低于空白对照组(P<0.05);培养3、5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平仍显著低于空白对照组(P<0.05),实验2、3组NCM460细胞中MMP9mRNA表达水平均显著高于空白对照组和实验1组(P<0.05);培养5 d后,实验3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平显著高于实验2组(P<0.05)。培养3、5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平均显著高于培养1 d后;培养5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平与培养3 d后比较差异无统计学意义(P>0.05),实验2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平均显著高于培养3 d后(P<0.05)。培养1 d后,实验2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著高于实验1组(P<0.05)。培养3 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),实验2组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著低于实验1、3组(P<0.05)。培养5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。实验1组NCM460细胞中培养3、5 d后的TIMP3 mRNA表达水平均显著高于培养1 d后(P<0.05),培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养3 d后(P<0.05)。实验2组NCM460细胞中培养3 d后的TIMP3mRNA表达水平显著低于培养1 d后(P<0.05),培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养1、3 d后(P<0.05)。实验3组NCM460细胞中培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养1、3 d后(P<0.05)。培养5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);实验2、3组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平均显著高于空白对照组和实验1组(P<0.05);实验3组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平与实验2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05);实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3蛋白表达水平两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高浓度的镁钙合金浸提液对NCM460细胞中的MMP9及TIMP3基因表达有一定的影响,容易导致早期炎症反应的发生,其机制可能与浸提液中的钙离子浓度有关。

血清基质金属蛋白酶抑制因子-1、半乳糖凝集素-3水平与未足月胎膜早破患者发生绒毛膜羊膜炎的关系

目的观察血清基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、半乳糖凝集素-(Gal-3)在未足月胎膜早破(PPROM)患者中的表达,并分析二者水平对PPROM患者绒毛膜羊膜炎发生的影响。方法选取2019年9月至2021年5月河南科技大学第一附属医院新区医院接收的92例PPROM患者作为研究对象。依据病理检查结果判定PPROM患者绒毛膜羊膜炎发生情况并进行分组,设计患者基线资料填写表,询问并记录研究所需资料,检测患者确诊时血清TIMP-1、Gal-3水平,并分析血清TIMP-1、Gal-3水平对PPROM患者绒毛膜羊膜炎发生的影响。结果92例PPROM患者分娩后经病理检查,发生绒毛膜羊膜炎48例,占52.17%(48/92);发生组确诊时血清TIMP-1水平低于未发生组,确诊时血清Gal-3水平高于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05);组间其他资料比较,差异无统计学意义(P>0.05);经logistic回归分析,结果显示,血清TIMP-1水平过表达是PPROM患者发生绒毛膜羊膜炎的保护因素(OR<1,P<0.05),血清Gal-3水平过表达是PPROM患者绒毛膜羊膜炎发生的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论血清TIMP-1、Gal-3水平对PPROM患者绒毛膜羊膜炎发生具有一定影响,且血清TIMP-1水平低表达、Gal-3水平过表达提示PPROM患者绒毛膜羊膜炎发生风险较高。

携带基质金属蛋白酶组织抑制因子的重组腺病毒对人乳头瘤病毒阳性子宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

目的研究携带基质金属蛋白酶组织抑制因子-3(TIMP-3)的重组腺病毒(Ad-TIMP-3)对人乳头瘤病毒(HPV)阳性子宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。方法采用Ad-TIMP-3感染HeLa-Luc和CaSki细胞,MTT法检测Ad-TIMP-3对HeLa-Luc和CaSki细胞增殖的影响,平板克隆形成实验检测Ad-TIMP-3与X线联合应用对细胞生长能力的影响。将经过不同处理的HeLa-Luc细胞接种于裸鼠腋下,分别观察正常对照组、单独病毒组、单独放射组和联合应用组裸鼠体内肿瘤的生长情况,绘制生长曲线。结果 Ad-TIMP-3能显著抑制HeLa-Luc和CaSki细胞增殖,呈现剂量效应关系。Ad-TIMP-3与X线联合应用可显著减少HeLa-Luc和CaSki细胞平板克隆形成数(P均<0.05)。单独病毒组、单独放射组和联合应用组裸鼠移植瘤重量分别为(0.216±0.098)、(0.276±0.073)和(0.044±0.043)g,均明显低于正常对照组的(0.534±0.218)g(P均<0.05),联合应用组明显低于单独病毒组和单独放射组(P均<0.05)。单独病毒组、单独放射组和联合应用组的抑瘤率分别为59.60%、48.30%和91.80%。结论 Ad-TIMP-3能抑制子宫颈癌细胞增殖,与X线联合应用可显著提高子宫颈癌细胞对放射治疗的敏感性,抑制子宫颈癌细胞体内致瘤能力。

基质金属蛋白酶-3在强直性脊柱炎中的作用和意义探讨

目的通过比较强直性脊柱炎(AS)病人抗肿瘤坏死因子(TNF)-α单克隆抗体药物(remicade)治疗前后的膝关节滑膜细胞的基因谱变化,找出缓解AS病情相关的主要基质金属蛋白酶(MMP)-3,并探讨MMP-3潜在调控的作用和在AS发病中的作用机制和意义。方法从AS病人在remicade治疗前和治疗3个月后的关节滑膜细胞的基因表达谱(用含1176基因的cDNA微阵列检测)结果中筛选的靶基因即差异表达最显著的MMP-3为特异性刺激因子,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测它诱导健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)的炎症相关基因TNF-α、c-jun和c-fos的表达。结果比较AS病人治疗前后的关节滑膜细胞基因差异表达的结果,MMP-3治疗后下调最显著(P=0.0147)。与MMP-3聚类在一起的基因有111个,和MMP-3相关性最强的基因是金属蛋白酶抑制剂前体(TIMP)-1;MMP-3能显著诱导PBMC的TNF-α、c-jun和c-fos的表达。结论在remicade治疗AS过程中,下调MMP-3是最重要的环节之一;通过检测MMP-3在关节滑膜细胞组织中的表达水平可作为AS诊断和病情进展监控的参考指标;MMP-3下调,可能使TNF-TNFR2-JNK-AP-1信息通道的激活状态减弱,从而减少致炎因子的释放,调整异常的基质降解和血管形成等病理因素,缓解AS炎症、减少软骨和骨质破坏的作用。