微小RNA-1靶基因多态性与蒙古族早发冠心病发生风险的关联研究

目的:研究内蒙古地区蒙古族人群微小RNA-1靶基因多态性与蒙古族早发冠心病发生风险的关联。方法:此次研究选取50例蒙古族早发冠心病患者和同期检查确定无冠心病人员50例作为研究对象,调查分析两组患者的基本信息以及其微小RNA-1靶基因型。结果:两组患者的性别组成、平均年龄以及TC水平无明显差别(P>0.05);研究组的糖尿病和吸烟人数占比、TG、BMI、CRP、LDL-C指标水平显著高于对照组,HDL-C水平显著低于对照组(P<0.05)。研究组的CC、CT基因型频率均显著低于对照组(P<0.05);对年龄、性别等因素进行调整后,TT基因型的冠心病风险未降低(P>0.05),CT和CT/TT基因型相较于CC基因型的冠心病风险显著降低(P<0.05)。以对照组中位值作为界值分析,高于TC、HDL-C中位水平患者的冠心病风险显著低于低于中位水平患者(P<0.05),高于TG、LDL-C中位水平患者的冠心病风险未见明显提升(P>0.05)。对照组的基因型分布具有代表性。结论:微小RNA-1靶基因分型的变化和蒙古族早发冠心病的发生风险具有密切关联,携带CT和CT/TT基因型人群出现早发冠心病的风险明显降低。

重型颅脑损伤病人血清微小RNA-542-3p、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1表达及其与预后的关系

目的探讨微小RNA-542-3p(miR-542-3p)、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在重型颅脑损伤(STBI)病人血清中的表达及与病人预后的关系。方法2020年1月~2022年7月收治的128例STBI病人为重型组,130例轻、中型TBI病人为对照组,检测病人血清miR-542-3p、lncRNA TUG1表达量,采用Pearson法分析二者相关性。Logistic回归分析血清miR-542-3p、lncRNA TUG1对STBI病人预后不良的影响,并以受试者工作特征(ROC)曲线分析二者对STBI病人预后的预测效能。结果重型组病人血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达量分别低于和高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。STBI病人血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达量呈负相关(r=-0.595,P<0.001)。预后不良组血清lncRNA TUG1与miR-542-3p水平分别高于和低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。高lncRNA TUG1水平是STBI病人预后不良的危险因素(P<0.05),高miR-542-3p水平是保护因素(P<0.05)。血清miR-542-3p、lncRNA TUG1联合预测STBI病人预后的曲线下面积(AUC)(0.939)高于单独预测的AUC(Z=2.410,P=0.016;Z=3.339,P<0.001)。结论STBI病人血清miR-542-3p表达下调,lncRNA TUG1表达上调,二者均可用于STBI病人预后预测,且二者联合的预测价值更高。

微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究

目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组(转染miR-433-3p siRNA)、mimic-NC组(转染miR-433-3p mimic阴性对照)和miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高(P<0.05)。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3p mimic组MGC-803细胞中miR-433-3p表达升高(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。TargetScan网站预测及双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-433-3p与HOXA1在MGC-803细胞中存在靶向关系。结论miR-433-3p能靶向调控HOXA1抑制胃癌MGC-803细胞的增殖、侵袭过程。

长链非编码RNA母系表达基因8通过微小RNA-495-3p调控急性髓性白血病细胞高迁移率族蛋白A1表达及对细胞增殖、凋亡的作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达。将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-lncRNA MEG8组(转染si-lncRNA MEG8)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-495-3p mimic组(转染miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组(转染si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系。结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05),与miR NC+HMGA1 WT组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组、mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic组和si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组24、48 h细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组细胞增殖率最低(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HL-60细胞凋亡率高于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HMGA1蛋白表达低于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路。

整合高通量数据探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-182-5p的潜在靶基因

目的探讨miR-182-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况、潜在靶基因、临床意义以及作用机制。方法通过联合高通量数据以及内部逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)数据的1720个样本,整合分析miR-182-5p在NSCLC中的表达情况。绘制受试者工作特征(ROC)曲线和综合受试者工作特征(SROC)曲线以评估miR-182-5p鉴别NSCLC组织和正常肺组织的能力。应用miRWalk 3.0数据库在线预测miR-182-5p的潜在靶基因,对低表达的潜在靶基因进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。使用STRING在线工具构建miR-182-5p潜在靶基因的蛋白互作网络。运用Spearman相关系数评估潜在靶基因与miR-182-5p表达的相关性。结果与正常肺组织对比,miR-182-5p在NSCLC组织中呈高表达,标准化均数差(SMD)为1.33(0.93~1.74)。miR-182-5p区分NSCLC和正常肺组织的曲线下面积(AUC)为0.95(0.92~0.96),敏感度为0.81(0.68~0.89),特异度为0.93(0.86~0.96)。miR-182-5p与EPS15的表达水平存在负相关性(ρ=-0.235,P=0.001)。结论与正常肺组织相比,NSCLC组织中miR-182-5p高表达。EPS15有可能是miR-182-5p在NSCLC的新靶点。

微小RNA-214靶向调控PTEN对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA-214(miR-214)靶向调控第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为miR-124 mimic组(转染miR-124 mimic)、miR-124 NC组(转染miR-124 NC)、pcDNA3.1-PTEN组(转染pcDNA3.1-PTEN)、miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组(转染miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN)。采用在线生信预测miR-124和PTEN靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因进行验证。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-124和PTEN mRNA表达。采用CCK-8法检测细胞增殖。采用碱性磷酸酶活性测定检测细胞分化能力。采用茜素红染色和骨钙素水平测定检测细胞的矿化。采用Werstern blot检测PTEN、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)水平。结果:与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组野生型PTEN的荧光素酶活性降低(均P<0.05)。与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组miR-124及p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平降低,而pcDNA3.1-PTEN组则相反(均P<0.05)。与miR-124 mimic组比较,miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平升高(均P<0.05)。结论:miR-214通过靶向下调PTEN蛋白表达激活PI3K/AKT信号通路,从而调控成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化。

微小RNA-146a保护脑出血大鼠神经的调控机制

目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控E盒锌指蛋白1基因(ZEB1)表达及其在脑出血大鼠模型中参与神经保护和抑制细胞自噬的相关分子机制。方法将8周龄雄性SD大鼠40只随机分为4组,分别为假手术组、模型组、miR-146a过表达组和miR-146a低表达组,每组10只。除了假手术组,其他3组采用Ⅶ型胶原酶诱导法建立动脉瘤性自发性脑出血大鼠模型。4组大鼠均基于高盐饮食饲养6周,继续饲养20周后处死。比较4组大鼠的神经功能[改良神经严重程度评分(mNSS)]、脑含水量。采用FJC染色检测退变神经元数量;采用TUNEL染色检测细胞凋亡;采用苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-146a和ZEB1 mRNA表达;采用蛋白质印迹(Western blot)检测ZEB1、自噬相关蛋白人重组自噬效应蛋白(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达。结果与假手术组比较,模型组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率增加,miR-146a表达量降低,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,miR-146a过表达组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率下降,miR-146a表达量升高,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,miR-146a低表达组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率增加,而miR-146a表达量降低,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-146a可通过靶向抑制ZEB1基因及其蛋白表达,以及调控细胞自噬活性,进而发挥神经保护作用。

微小RNA-325-3p和叉头框蛋白M1在胃腺癌中的表达及靶向关系研究

目的:探究微小RNA-325-3p(miR-325-3p)与叉头框蛋白M1(FOXM1)在胃腺癌中的表达,分析miR-325-3p与FOXM1的靶向关系。方法:选择人胃腺癌MGC-803、SGC-7901细胞系,分别构建miR-325-3p mimic组、miR-325-3p inhibitor组,并设立空白对照组,应用Western blot法检测FOXM1蛋白的表达,应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-325-3p与FOXM1的靶向关系。收集确诊为胃腺癌并行根治术的42例患者的肿瘤组织和距肿物边缘>2 cm的癌旁正常胃黏膜组织,应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-325-3p的表达,应用免疫组化染色(EnVision法)检测组织中FOXM1的表达。结果:胃癌MGC-803和SGC-7901细胞系miR-325-3p mimic组FOXM1蛋白表达明显低于空白对照组,miR-325-3p inhibitor组FOXM1蛋白表达明显高于空白对照组(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-325-3p与FOXM1具有靶向关系。胃腺癌组织中miR-325-3p相对表达量明显低于癌旁正常胃黏膜组织,FOXM1阳性率明显高于癌旁正常胃黏膜组织(均P<0.05)。miR-325-3p和FOXM1在胃腺癌不同肿瘤最大径、浸润深度方面比较差异有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-325-3p与FOXM1呈负相关(r=-0.630,P=0.027)。结论:胃腺癌中miR-325-3p与FOXM1异常表达,参与肿瘤的形成和进展。miR-325-3p与FOXM1具有靶向调控关系。

微小RNA-3677靶向调控B细胞易位基因1表达及对肝细胞癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨微小RNA-3677(miR-3677)对B细胞易位基因1(BTG1)的靶向调控作用及肝细胞癌(HCC)细胞HepG2侵袭和迁移的影响。方法采用脂质体Lipofectamine 2000向HepG2细胞转染miR-3677抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照序列(NC组)并以未行转染的细胞为对照组,采用实时定量PCR(QPCR)检测miR-3677水平,划痕实验和Transwell实验分别检测划痕宽度和穿膜细胞数目,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3677与BTG1的靶向关系,QPCR检测BTG1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)的mRNA水平,Western blotting检测BTG1、MMP-9、STAT3和磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)的蛋白水平。结果QPCR结果显示Inhibitor组的miR-3677水平为0.241±0.059,低于对照组的1.012±0.123和NC组的1.147±0.168(P<0.05);Inhibitor组的穿膜细胞数和划痕相对宽度分别为(96.5±9.2)个和(62.15±3.29)%,均优于对照组的(174.5±12.9)个和(37.45±2.16)%及NC组的(181.6±16.4)个和(39.47±2.82)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-3677模拟物抑制了BTG1野生型3′端非翻译区的荧光素酶活性,而对突变型的无影响。与其余两组相比,Inhibitor组的BTG1表达水平升高,而MMP9和p-STAT3的水平降低(P<0.05)。结论下调miR-3677水平可抑制HCC细胞的迁移侵袭,该miRNA发挥癌基因的作用,可能与通过靶向BTG1以激活JAK/STAT3信号传导有关,为HCC提供一个新的潜在治疗靶点。

新型微小RNA-9对乳腺癌增殖的影响和靶基因预测生信研究

研究乳腺癌增殖受到新型微小RNA-9的影响和靶基因预测生信。方法 细胞培养和分组、RNA提取和RT-qPCR检测、cck-8与EdU检测增殖、生物信息学网站与软件,统计分析细胞中novel-miR-9表达水平、novel-miR-9对乳腺癌细胞增殖的影响,分析novel-miR-9靶基因预测、和增殖相关的靶基因寻找、相互作用及乳腺癌组织表达。结果 MCF-10A细胞中novel-miR-9表达水平高于MCF-7、MDA-MB-231(P<0.05),但MCF-7、MDA-MB-231细胞中novel-miR-9表达水平之间的差异不显著(P>0.05);MDA-MB-231 9mimic细胞中novel-miR-9表达水平高于MDA-MB-231NC(P<0.05);MCF-7 9mimic细胞中novel-miR-9表达水平高于MCF-7NC(P<0.05)。231 9mimic 3 d后的A值低于9nc(P<0.05),但9nc和231 9mimic 1 d、2 d后的A值之间的差异均不显著(P>0.05);MCF-7 9mimic 2 d、3 d后的A值均对于9nc(P<0.05),但9nc和MCF-7 9mimic 1 d后的A值之间的差异不显著(P>0.05);231 9mimic的生长率低于231nc(P<0.05),MCF-7 9mimic的生长率低于MCF-7nc(P<0.05)。共将乳腺癌相关1188个预测靶基因获取了过来,运用DAVID线上网站将1188个靶基因中和增殖相关的靶基因寻找了出来,发现26个基因对细胞增殖进行直接调控。结论 乳腺癌增殖受到新型微小RNA-9的直接影响,novel-miR-9在多种重要的生物学过程中调控参与,将线索提供给了后续研究。

miR-126过表达和ADAM9基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)过表达和解整联蛋白金属蛋白酶9(ADAM9)基因沉默对胃癌细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人胃低分化腺癌SGC-7901细胞和人正常胃黏膜上皮NGEC细胞,提取细胞中总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2种细胞中miR-126和ADAM9 mRNA表达水平。将处于对数生长期的SGC-7901细胞分为miR-126过表达组(miR-126-OE组)和ADAM9基因沉默组(ADAM9 siRNA组),以LipofectamineTM 2000为载体分别转染miR-126模拟物(miR-126 mimics)和敲低ADAM9的RNA寡核苷酸,并设置相应的阴性对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平。TargerScan网站预测miR-126的靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-126和ADAM9的靶向调控关系,采用RT-qPCR法和Western blotting法检测转染miR-126 mimics后SGC-7901细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法检测,与人正常胃黏膜上皮NGEC细胞比较,胃癌SGC-7901细胞中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),而ADAM9mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。MTT法检测,SGC-7901细胞过表达miR-126或沉默ADAM9基因48和72 h后,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验检测,与相应阴性对照组比较,48 h后miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞迁移率明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验检测,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与相应阴性对照组比较,miR-126-OE组和ADAM9 siRNA组细胞中E-钙黏蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),而N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。靶基因预测,ADAM9的3´-UTR含有与miR-126-3p互补的核苷酸序列。双荧光素酶报告基因实验,ADAM9是miR-126靶向负调控的下游基因。SGC-7901细胞转染miR-126 mimics 48 h后,与mimics NC组比较,miR-126 OE组细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:胃癌SGC-7901细胞中miR-126低表达而ADAM9基因高表达。miR-126过表达可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖活性、迁移和侵袭能力,其机制可能与miR-126靶向负调控ADAM9并抑制胃癌细胞的上皮-间质转化(EMT)进程有关。

环状RNA_0003028靶向微小RNA-498调控生殖器形成抑制基因-1/p53信号通路对人肝癌细胞系Huh7的影响

目的探讨环状RNA(circ)_0003028对人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法人肝癌细胞系Huh7分为小干扰RNA(si)-NC组、si-circ_0003028组、微小RNA(miR)-NC组、miR-498模似物(mimics)组、si-circ_0003028+anti-miR-NC组、si-circ_0003028+anti-miR-498组;Real-time PCR检测肝癌组织及各组细胞中circ_0003028和miR-498表达水平;MTT检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭数;Western blotting检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circ_0003028和miR-498的靶向调控关系。结果肝癌组织中circ_0003028表达水平升高(0.98±0.02 vs 1.36±0.01),miR-498表达水平降低(0.98±0.02 vs 0.63±0.02)(P<0.05)。抑制circ_0003028表达或miR-498过表达后,Huh7细胞中Ki-67(0.85±0.02 vs 0.41±0.02或0.95±0.11 vs 0.37±0.02)、基质金属蛋白酶(MMP)-2(0.71±0.02 vs 0.43±0.03或0.83±0.02 vs 0.41±0.03)、MMP-9(0.74±0.02 vs 0.37±0.02或0.78±0.02 vs 0.39±0.02)蛋白表达水平降低,细胞活性(1.53±0.03 vs 1.05±0.02或1.68±0.02 vs 1.11±0.02)降低;迁移(111.40±2.12 vs 77.22±2.38或108.90±2.30 vs 78.44±1.46)和侵袭(87.89±2.18 vs 49.78±1.98或80.22±1.79 vs 38.22±1.52)细胞数减少,生殖器形成抑制基因-1(SMG-1)(0.76±0.02 vs 1.39±0.02或0.79±0.02 vs 1.39±0.02)、p53(0.77±0.02 vs 1.24±0.03或0.82±0.03 vs 1.45±0.03)、p53-ser15(0.78±0.03 vs 1.50±0.02或0.82±0.02 vs 1.49±0.04)蛋白表达水平升高(P<0.05)。Circ_0003028靶向调控miR-498,沉默miR-498逆转了抑制circ_0003028表达对Huh7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论抑制circ_0003028表达通过靶向miR-498影响SMG-1/p53信号通路而抑制人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

基于生物信息学分析人微小RNA-142-5p的靶基因及其与心血管疾病的关联

目的利用生物信息学技术预测人微小RNA-142-5p(hsa-miR-142-5p)的靶基因,并通过分析靶基因涉及的生物学过程和信号通路初步探讨hsa-miR-142-5p在心血管疾病中的作用。方法使用miRGator v3.0数据库检索hsa-miR-142-5p在各个组织器官中的表达情况。使用PubMed数据库检索hsa-miR-142-5p的相关文献,结合miRBase 22.1和UCSC Genome Browser的检索结果,获得hsa-miR-142-5p定位、碱基序列和物种保守性等基本信息。通过数据库TargetScan、DIANA TOOLS、miRDB、miRWalk进行靶基因预测后取交集,再与miRTarBase数据库中被实验验证的靶基因合并作为基因集。取基因集进行基因本体论功能富集分析和京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析。结果hsa-miR-142-5p在心脏中存在基础表达量,在包括人类在内的26个不同物种中高度保守。共获得包含51个候选基因的靶基因集,靶基因功能富集于心内膜垫融合、胚胎心管形态发生、心脏心室形态发生和心肌肥厚的调节、心脏上皮向间质转化的正调控等心血管相关的生物学过程(P<0.05),并参与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路、黏附连接、转化生长因子β(TGF-β)信号通路、甲状腺激素信号通路、Rap1信号通路和叉头框蛋白O(FoxO)信号通路等调控(均P<0.05)。结论hsa-miR-142-5p的靶基因可能与先天性心脏病、心肌肥厚、心肌纤维化及血管平滑肌细胞和血管内皮细胞的调控相关,而PI3K/Akt信号通路、黏附连接、TGF-β信号通路、甲状腺激素信号通路、Rap1信号通路和FoxO信号通路可能参与上述病理生理。

微小RNA-195通过靶向BIRC5调控肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究

目的:探讨微小RNA-195(miR-195)对肝癌Hep3B细胞凋亡的影响,并探索其下游靶基因。方法:采用MTT实验、流式细胞仪检测miR-195对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。构建双荧光素酶报告基因质粒,采用双荧光素酶报告基因实验验证靶标分子。采用RNA干扰技术检测沉默BIRC5对肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响。结果:与miR-ctrl组相比,miR-195过表达可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-195可靶向作用BIRC5,沉默BIRC5可抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。结论:miR-195可通过靶向调控BIRC5抑制肝癌Hep3B细胞增殖,促进其凋亡。BIRC5可能是肝癌靶向治疗的重要靶标。

微小RNA-9调节同源异形盒1基因对胃癌细胞生物学功能的影响

目的探讨微小RNA-9(miR-9)调节同源异形盒1(HMBOX1)基因对胃癌细胞生物学功能影响的作用。方法将对数生长期的胃癌细胞株BGC-823细胞分为空白组、对照组与miR-9组,对照组与miR-9组分别转染50 nmol/L的miR-9 NC、miR-9 mimics,空白组不进行转染(加入等体积的磷酸盐缓冲液)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测miR-9 mRNA的表达,噻唑蓝法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测HMBOX1蛋白表达情况,上述实验均重复3次,计算其平均值。结果细胞转染后24 h与48 h,miR-9组的miR-9 mRNA相对表达量高于空白组和对照组[(46. 45±11. 82)比(1. 00±0. 12)、(1. 03±0. 13),(55. 45±10. 21)比(1. 02±0. 22)、(1. 11±0. 32)],细胞凋亡指数高于空白组和对照组[(42. 6±1. 5)%比(11. 6±2. 1)%、(13. 2±1. 2)%,(48. 3±1. 5)%比(17. 4±2. 4)%、(15. 3±1. 8)%](均P <0. 05)。细胞转染后24 h与48 h,miR-9组的细胞增殖指数低于空白组和对照组[(0. 42±0. 13)比(1. 11±0. 78)、(1. 07±0. 51),(0. 53±0. 13)比(1. 17±0. 22)、(1. 12±0. 12)],HMBOX1蛋白相对表达水平低于空白组和对照组,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论过表达miR-9能靶向抑制HMBOX1的表达,从而抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,发挥抑癌作用。

MicroRNA-21靶调控NCM460细胞ROCK1基因上调occludin表达

目的:探讨微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系NCM460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因。方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达NCM460细胞系,q PCR检测miR-21表达水平,Western blot检测occludin表达情况。生物信息学方法预测miR-21的靶基因,根据评分和文献检索选择相应靶基因ROCK1进行进一步研究,利用miR-21 mimic和inhibitor转染NCM460细胞,同时检测miR-21以及ROCK1的表达水平;采用双萤光素酶报告基因实验验证ROCK1是miR-21的靶基因。结果:在NCM460细胞中过表达miR-21后可上调紧密连接相关蛋白occludin的表达。生物信息学分析预测ROCK1可能为miR-21的靶基因。在NCM460细胞中过表达miR-21可下调ROCK1的m RNA和蛋白水平,抑制miR-21可上调ROCK1的m RNA和蛋白水平。萤光素酶报告基因验证ROCK1为miR-21的靶基因。结论:在NCM460细胞中,miR-21能上调肠屏障功能相关蛋白occludin的表达。ROCK1是miR-21的靶基因,miR-21可能通过靶调控ROCK1促进occludin的表达。

微小RNA-92a靶向Krüppel样因子2基因促进卵巢癌细胞侵袭的作用

目的 研究微小RNA-92a(miR-92a)靶向Krüppel样因子2(KLF2)基因促进卵巢癌细胞侵袭的作用及机制。方法2019年1月至2020年3月进行本研究。培养卵巢癌细胞系A2780、SKOV3、OVCAR-3及卵巢上皮细胞系HOSEpiC,检测miR-92a的表达水平;SKOV3细胞分为阴性对照(NC)组、miR-92a抑制物组、miR-92a组、pcDNA组、pcDNA+miR-92a组、pcDNAKLF2+miR-92a组,分别转染NC序列、miR-92a、miR-92a抑制物、空白pcDNA质粒、过表达KLF2的pcDNA重组质粒,检测细胞侵袭数目、KLF2表达水平,双荧光素酶报告基因验证miR-92a靶向KLF2基因。结果 A2780、SKOV3、OVCAR-3细胞中miR-92a的表达水平分别为(0.92±0.15)、(1.62±0.19)、(1.21±0.13),均高于HOSEpiC的(0.62±0.09)(P<0.05);与NC组(75.38±13.82)、(0.42±0.08)比较,miR-92a抑制物组SKOV3细胞的侵袭数目(42.38±8.79)减少、KLF2表达水平(0.78±0.20)增加,miR-92a组SKOV3细胞侵袭数目(109.38±21.38)增加、KLF2表达水平(0.29±0.06)减少,野生型KLF2双荧光素酶报告基因的荧光活力降低(P<0.05);与pcDNA组比较、pcDNA+miR-92a组SKOV3细胞的侵袭数目增加,与pcDNA+miR-92a组比较、pcDNAKLF2+miR-92a组SKOV3细胞的侵袭数目减少(P<0.05)。结论 卵巢癌细胞中miR-92a表达增加,miR-92a能够促进SKOV3细胞侵袭、其机制可能与靶向调控KLF2基因表达有关。

微小RNA-193a调控Wilms瘤基因1促进小鼠糖尿病肾病足细胞凋亡

目的探讨微小RNA(mi R)-193a对糖尿病肾病(DN)足细胞凋亡的影响及作用机制。方法通过体外高糖培养足细胞和体内小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型,将细胞或60只小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、mi R-193a抑制阴性对照组、mi R-193a抑制组、mi R-193a过表达阴性对照组和mi R-193a过表达组。使用流式细胞术、免疫组织化学、免疫荧光、TUNEL、Real-time PCR和Western blotting检测DN小鼠和小鼠足细胞凋亡情况。结果DN小鼠和高糖诱导的小鼠足细胞中Nephrin、Podocin表达减弱,细胞凋亡率显著升高,mi R-193a高表达,小鼠肾脏和足细胞中cleaved-Caspase-3和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著下降,而mi R-193a抑制剂(inhibitor)可改善这一过程。DN小鼠和高糖培养的小鼠足细胞中Wilms瘤基因1(WT1)m RNA和蛋白表达水平显著降低,mi R-193a inhibitor干预后WT1蛋白表达显著升高。上调WT1可降低mi R-193a对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告实验证实了mi R-193a和WT1之间的靶向关系。结论MiR-193a下调WT1的表达,促进DN足细胞凋亡。

人类微小RNA-208a的靶基因预测及生物学过程和信号通路的生物信息学分析

目的采用生物信息学技术预测人类微小RNA-208a(hsa-miRNA-208a)靶基因及分析其可能参与的生物学过程及信号通路。方法应用miRbase数据库和UCSC Genome Browser分析工具获取hsa-miRNA-208a的染色体定位、碱基序列和物种保守性等基本信息,利用miRanda、miRDB、Target Scan和miRwalk进行靶基因预测,采用miRwalk网站对靶基因取交集,合并有文献支持和经实验证实的靶基因作为基因集,对基因集进行功能富集分析(GO分析)和信号通路分析。结果hsa-miRNA-208a序列在各物种间高度保守。对Target Scan、miRDB、miRanda和miRwalk预测的靶基因进行交集后共得到16个靶基因(CPEB2、CSNK2A2、DLD、MTF2、FBXO28、LEP、SMAD4、NLK、GPR88、VPS13D、ZNF215、CHD9、SLC7A5、C19orf44、SLC45A3、MAP4K4),miRwalk、DIANA Lab Tar Base检索到已验证的靶基因分别为12个(CASP3、MRGPRX3、FPRL1、MED13、IL10、GATA4、HSH2D、MYH6、MYH7、TNNI3、CDKN1A、PAK3)和3个(SOX6、MTM1、TAB3)。GO分析结果显示靶基因富集于心室肌组织发育、心室形态发育、心腔发育、心肌发育、心脏发育以及细胞发育等生物学过程(P<0.05);信号通路分析结果显示靶基因富集于黏附连接、紧密连接、心肌收缩、Wnt信号通路以及病毒性心肌炎、肥厚型心肌病和扩张型心肌病的相关信号通路中(P<0.05)。结论 hsa-miRNA-208a参与心脏生长发育的生物学过程,与心肌疾病的发生密切相关。

精神分裂症断裂基因1基因多态性与帕利哌酮治疗精神分裂症疗效及微小RNA-134-5p关联性分析

目的观察精神分裂症断裂基因1(dierupted in schizophrenia 1,DISC1)基因多态性与帕利哌酮治疗精神分裂症疗效及微小RNA-134-5p(miR-134-5p)的关联性分析。方法选取2018年3月至2019年3月绵阳市第三人民医院精神分裂症病人109例为疾病组,采用帕利哌酮单药治疗,选取同期健康体检者109例为健康组,检测并比较两组DISC1基因单核苷酸多态性(SNPs)位点间差异。比较疾病组不同基因型病人帕利哌酮治疗前与治疗6个月后阳性和阴性症状量表(PANSS)、精神分裂症认知功能成套测验共识版(MCCB)评分以及血清miR-134-5p水平。结果 DISC1 SNPs位点比较中,疾病组rs821616位点与健康组差异有统计学意义(P<0.05)。疾病组不同基因型病人帕利哌酮治疗后PANSS评分均较治疗前降低,MCCB评分较治疗前升高(P<0.05)。rs821616基因型病人中TT型病人PANSS评分(46.3±7.1)分低于AA型病人(59.4±5.8)分,TT型病人MCCB评分(154.7±32.3)分高于AA型病人(131.3±32.1)分,AT型(0.32±0.07)和TT型(0.41±0.09)病人miR-134-5p水平高于AA型病人(0.30±0.11)。rs11122319基因型病人中GG型、AG型病人PANSS评分低于AA型病人,GG型病人MCCB评分和miR-134-5p水平高于AA型和AG型病人(P<0.05)。rs1417584基因型病人中GG型、AG型病人PANSS评分低于AA型病人,GG型病人MCCB评分高于AA型和AG型,GG型病人miR-134-5p水平高于AA型病人(P<0.05)。结论帕利哌酮可以改善精神分裂症病人症状,改善病人认知功能,提高miR-134-5p水平,不同DISC1基因型病人间治疗效果存在差异。