外周血循环微小RNA-125a/b对短暂性脑缺血发作后的脑卒中风险预测价值

目的探讨短暂性脑缺血发作后患者外周血循环微小RNA-125a/b(miR-125a/b)水平对缺血性脑卒中的风险预测价值。方法选取2019年5月至2020年6月于石家庄平安医院住院治疗的短暂性脑缺血发作患者150例,根据90 d内有无发生缺血性脑卒中,将其分为缺血性脑卒中组58例和非缺血性脑卒中组92例。采用实时荧光定量PCR法检测miR-125a/b水平,采用Essen脑卒中风险评分(ESRS)、ABCD2、ABCD3-Ⅰ、脑卒中预测工具-Ⅱ(SPI-Ⅱ)对患者行缺血性脑卒中风险预测评分,分析缺血性脑卒中患者miR-125a/b水平与各评分相关性、miR-125a/b水平对短暂性脑缺血发作后发生缺血性脑卒中的预测价值。结果缺血性脑卒中组miR-125a水平低于非缺血性脑卒中组,miR-125b水平、ESRS、ABCD2、ABCD3-Ⅰ、SPI-Ⅱ评分高于非缺血性脑卒中组(t=8.206、8.755、8.925、6.293、4.949、6.508,P<0.05)。缺血性脑卒中患者miR-125a水平与ESRS、ABCD2、ABCD3-Ⅰ、SPI-Ⅱ评分呈负相关(r=-0.511、-0.505、-0.480、-0.487,P<0.05);miR-125b水平与ESRS、ABCD2、ABCD3-Ⅰ、SPI-Ⅱ评分呈正相关(r=0.513、0.504、0.501、0.485,P<0.05)。外周血循环miR-125a/b水平预测短暂性脑缺血发作后发生缺血性脑卒中AUC分别为0.867、0.904,特异度分别为80.40%、95.70%,敏感度分别为82.80%、74.10%;二者联合预测的AUC为0.948,特异度为90.20%,敏感度为86.20%。缺血性脑卒中患者miR-125a水平随脑梗死面积增大而依次降低,miR-125b水平随脑梗死面积增大而依次上升(F=38.207、9.559,P<0.05)。miR-125b是影响短暂性脑缺血发作后发生缺血性脑卒中的危险因素(OR=2.042,P<0.05),miR-125a是影响短暂性脑缺血发作后发生缺血性脑卒中的保护因素(OR=0.513,P<0.05)。结论外周血循环miR-125a/b水平联合检测,对预测短暂性脑缺血发作后发生脑卒中可能有重要意义。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA-20b对头晕患者发生缺血性卒中有预测价值

目的:探讨年龄、血压、单侧肢体无力和言语障碍、持续时间、糖尿病(ABCD2)评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA(miRNA)-20b对头晕患者发生缺血性卒中(IS)的预测价值。方法:收集148例头晕患者,根据是否发生IS分为IS组(109例)和非IS组(39例)。比较分析2组患者一般资料、ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平。多因素Logistic回归分析头晕患者发生IS影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、miR-20b水平对评估头晕患者发生IS的预测价值。结果:IS组年龄、高血压史比例、ABCD2评分、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、泛连接蛋白水平明显高于非IS组,miR-20b水平明显低于非IS组(P均<0.05)。LDL-C升高(OR=2.575,95%CI:1.497~3.353)、ABCD2评分>3分(OR=3.069,95%CI:2.242~5.408)、泛连接蛋白升高(OR=1.089,95%CI:1.018~1.187)为头晕患者发生IS独立影响因素(P均<0.05),miR-20b为独立保护因素(OR=0.351,95%CI:0.220~0.559,P<0.05)。3个指标联合预测头晕患者发生IS的曲线下面积(AUC=0.859,95%CI:0.791~0.926)明显大于ABCD2评分(AUC=0.759,95%CI:0.669~0.849)、泛连接蛋白(AUC=0.656,95%CI:0.554~0.759)、miR-20b(AUC=0.821,95%CI:0.750~0.893)单独预测(P均<0.05)。结论:ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平为头晕患者发生IS独立影响因素,3个指标联合对头晕患者IS风险有预测价值。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

重复经颅磁刺激对阿尔茨海默病患者临床症状及血浆微小核糖核酸-125b、血浆磷酸化Tau-181蛋白的影响

目的:观察重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者认知功能、神经精神行为症状及血浆微小核糖核酸-125b(microRNA-125b,miR-125b)、血浆磷酸化Tau-181蛋白(phosphorylated Tau181 protein,P-tau181)表达的影响。方法:筛选轻中度AD患者34例,随机分为对照组(n=16)和试验组(n=18)。对照组采取认知训练及重复经颅磁伪刺激,试验组采取认知训练结合重复经颅磁真刺激。磁刺激强度为100%的静息运动阈值,频率为10Hz,每日治疗1次,每周治疗5天,持续4周,刺激脑区为左侧前额叶背外侧区和左侧颞叶区。在治疗前、后进行Addenbrooke-Ⅲ认知检查(the AddenbrookeⅢcognitive examination,ACE-Ⅲ)、简易精神状态量表(mini-mental state scale,MMSE)及神经精神症状问卷(neuropsychiatric inventory,NPI)评估,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测微小miR-125b表达量,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测P-tau181的浓度。结果:治疗结束后,试验组ACE-Ⅲ、MMSE和NPI评分以及miR-125b、P-tau181均较组内治疗前显著改善,差异具有显著性意义(P<0.05),且上述指标与对照组治疗后相比,差异具有显著性意义(P<0.05);而对照组各项指标改善不具有显著性意义(P>0.05)。结论:rTMS能改善轻中度AD患者的认知功能及神经精神行为症状,这可能与rTMS促进血浆miR-125b的表达和抑制P-tau181蛋白产生相关。

微小RNA-129-5p和高迁移率族蛋白B1在缺血性脑卒中患者中的表达水平及临床意义

目的探讨微小RNA-129-5p(miR-129-5p)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在缺血性脑卒中(IS)患者中的表达水平及临床意义。方法选取2019年2月至2021年2月河北省第七人民医院收治的94例IS患者为观察组,另选取75例健康体检者为对照组。根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将观察组分为轻度组32例、中度组43例、重度组19例。根据90 d随访的改良Rankin量表评分分为预后良好组65例,预后不良组29例。检测血清miR-129-5p、HMGB1水平,并收集观察组临床资料。采用Pearson相关性分析血清miR-129-5p和HMGB1的关系。多因素Logistic回归分析IS患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-129-5p和HMGB1对IS患者预后的预测价值。结果观察组血清miR-129-5p和HMGB1水平与对照组相比差异有统计学意义(t=3.038、24.863,P<0.05)。观察组血清miR-129-5p水平随神经功能缺损程度的加重而降低,HMGB1水平随之升高(F=83.466、8.423,P<0.05)。Pearson相关性分析显示,观察组血清miR-129-5p和HMGB1水平呈负相关(r=-0.406,P<0.05)。预后良好组和预后不良组的同型半胱氨酸、梗死体积、入院时NIHSS评分、发病到入院时间、miR-129-5p和HMGB1水平间差异具有统计学意义(t=4.636、4.034、11.618、19.522、8.063、6.177,P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-129-5p和HMGB1水平对IS患者预后不良预测价值的曲线下面积分别为0.832、0.859。多因素Logistic回归分析显示,患者入院时NIHSS评分、发病到入院时间、HMGB1、miR-129-5p是IS患者预后不良的影响因素(OR=5.361、4.465、7.245、0.806,P<0.05)。结论IS患者血清miR-129-5p低水平、HMGB1高水平与神经功能缺损程度有关,且对不良预后有一定的预测价值。

晚期结直肠癌患者血清微小RNA-199b和微小RNA-203水平检测及其预后预测价值分析

目的:检测晚期结直肠癌患者血清微小RNA(miR)-199b和miR-203水平,分析其对患者预后的预测价值。方法:选择Ⅳ期结直肠癌患者92例为结直肠癌组,选择结直肠炎患者92例为对照组。采用逆转录聚合酶链式反应检测两组血清miR-199b及miR-203水平并进行比较。根据结直肠癌患者12个月随访结果分为病死组和生存组,分析晚期结直肠癌患者预后的影响因素,评价血清miR-199b及miR-203对晚期结直肠癌患者预后的预测价值,并进行生存分析。结果:结直肠癌组血清miR-199b、miR-203低于对照组(均P<0.05)。92例Ⅳ期结直肠癌患者中病死36例,纳入病死组,其余患者纳入生存组。病死组血清基质金属蛋白酶-14(MMP-14)、趋化因子受体4(CXCR4)水平高于生存组,血清miR-199b、miR-203低于生存组(均P<0.05)。MMP-14和CXCR4是晚期结直肠癌患者病死的风险因素,miR-199b和miR-203是晚期结直肠癌患者病死的保护因素(均P<0.05)。miR-199b与MMP-14、CXCR4呈负相关(r=-0.403、-0.458,均P<0.05),miR-203与MMP-14、CXCR4呈负相关(r=-0.461、-0.479,均P<0.05)。血清miR-199b、miR-203对晚期结直肠癌患者病死均有一定预测价值,且两项联合优于单项(均P<0.05)。血清miR-199b和miR-203高表达组生存率高于低表达组(均P<0.05)。结论:晚期结直肠癌患者血清miR-199b、miR-203水平降低,对患者预后具有良好的预测价值,且两项联合预测价值更高。

微小RNA-125a-5p对人鼻咽癌细胞增殖的影响及机制

目的探究微小RNA-125a-5p(miR-125a)对人鼻咽癌细胞(HK-1细胞)增殖的影响及机制。方法常规培养HK-1细胞及人胚肾细胞永生化细胞系(293T细胞),将HK-1细胞随机分为对照1组、过表达miR-125a组(转染miR-125a mimics)、沉默miR-125a组(转染miR-125a inhibitor);另取部分HK-1细胞随机分为对照2组、miR-125a过表达组(转染miR-125a mimics)及回补组[转染miR-125a mimics同时过表达含PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)]。转染48 h后检测miR-125a表达验证转染效率。用RT-qPCR法检测miR-125a-5p、TAZ mRNA;用Western blotting法检测TAZ蛋白;CCK-8实验、集落形成实验检测细胞增殖能力;通过预测网站TargetScan(http://www.targetscan.org/)和miRDB(http://mirdb.org/)预测miR-125a与TAZ的结合位点。将293T细胞随机分为4组,WT+miR-ctrl组共转染TAZ野生型(TAZ-WT)和miR-125a空载对照(miR-ctrl)、Mut+miR-ctrl组共转染TAZ突变型(TAZ-MUT)和miR-ctrl、WT+miR-125a组共转染TAZ-WT和miR-125a模仿物(miR-125a)、Mut+miR-125a组共转染TAZ-MUT和miR-125a,用双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-125a的下游靶点。结果对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组miR-125a的相对表达量比较差异有统计学意义(P均<0.05)。对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组转染后第2、3、4、5、6天增殖活力(OD450值)比较差异均有统计学意义(P均<0.05)、集落形成数比较差异有统计学意义(P均<0.05)。对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组TAZ蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P均<0.05)。网站预测显示miR-125a与TAZ存在结合位点,设计突变型序列(TAZ-3’UTR MT),miR-125a与TAZ的非编码区结合,miR-125a的直接下游靶点为TAZ。WT+miR-125a组相对荧光强度低于WT+miR-ctrl组、Mut+miR-ctrl组(P均<0.05),Mut+miR-125a组相对荧光强度与WT+miR-ctrl组、Mut+miR-ctrl组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。对照2组、miR-125a mimics组、miR-125a mimics+TAZ组转染后第2、3、4、5、6天增殖活力比较差异有统计学意义(P均<0.05),集落形成数比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论miR-125a可抑制鼻咽癌细胞增殖,其作用机制与抑制其下游靶点TAZ的表达有关。

环状RNA GRIN2B通过调控微小RNA-135b对食管癌细胞增殖和侵袭的影响实验研究

目的:探讨环状RNA GRIN2B(circ-GRIN2B)对食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用RT-qPCR检测circ-GRIN2B在食管癌细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706和正常食管上皮细胞HET-1A中的表达,筛选circ-GRIN2B表达最低的细胞株进行后续实验。在食管癌细胞中转染circ-GRIN2B过表达质粒(circ-GRIN2B组)和空载对照质粒(NC组)。采用平板克隆实验和Transwell实验检测circ-GRIN2B对食管癌细胞增殖和侵袭的影响。采用circRNADb软件预测circ-GRIN2B与微小RNA-135b(miR-135b)的结合位点并用双荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系。采用RT-qPCR检测两组miR-135b表达。采用Western blot检测细胞增殖相关蛋白[周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)、周期素C(Cyclin C)]和侵袭相关蛋白[纤维结合蛋白(FN)、转录因子8(ZLF8)、叉头盒蛋白C2(FOXC2)]表达。结果:与HET-1A细胞比较,circ-GRIN2B在细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706表达降低,且在EC9706细胞中表达量最低(均P<0.05)。circ-GRIN2B组circ-GR IN2B表达量高于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞集落数量少于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞侵袭数目小于NC组(P<0.01)。miR-135b是circ-GRIN2B的靶基因。circ-GRIN2B组miR-135b表达量低于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞增殖相关蛋白和侵袭相关蛋白表达水平较NC组降低(均P<0.05)。结论:circ-GRIN2B在食管癌细胞中低表达,其可能通过下调miR-135b表达抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。

老年2型糖尿病患者血清微小RNA-125a-3p和基质金属蛋白酶9水平与颈动脉粥样硬化的关系

目的 探讨老年2型糖尿病(T2DM)患者血清微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法 选取2020年4月至2023年5月内蒙古自治区人民医院收治的200例老年T2DM患者(T2DM组),根据颈动脉内中膜厚度(CIMT)分为CAS亚组和非CAS亚组,另选取同期45例老年体检健康者为对照组。收集T2DM患者临床资料,检测研究对象血清miR-125a-3p、MMP-9水平。分析T2DM患者血清miR-125a-3p、MMP-9水平与CIMT、空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的相关性,多因素Logistic回归分析T2DM患者CAS的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-3p、MMP-9对T2DM患者CAS的预测价值。结果 T2DM组血清miR-125a-3p、MMP-9水平均高于对照组[(1.58±0.30)比(1.09±0.22)、(24±8)μg/L比(14±5)μg/L](均P<0.001)。200例T2DM患者中137例CIMT≥1.0 mm, CAS发生率为68.5%(137/200)。CAS亚组miR-125a-3p、MMP-9水平均高于非CAS亚组(均P<0.05)。T2DM患者血清miR-125a-3p与MMP-9水平呈正相关(r=0.778,P<0.001),二者与CIMT、空腹血糖、HbA1c、甘油三酯、LDL-C均呈正相关(均P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,血脂异常、病程延长和HbA1c、LDL-C、miR-125a-3p、MMP-9升高为T2DM患者CAS的独立危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-3p、MMP-9联合预测老年T2DM患者CAS的曲线下面积大于二者单独预测(0.864比0.799、0.796)。结论 老年T2DM患者血清miR-125a-3p、MMP-9水平升高与CAS密切相关,可能成为T2DM患者CAS的辅助预测指标。

毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗前后血清白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、微小RNA-302e、核因子-κB mRNA水平变化及意义

目的:探讨毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗前后血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-302e、核因子-κB(NF-κB)mRNA水平变化及意义。方法:选取毛细支气管炎患儿108例为研究对象,均行糖皮质激素治疗。比较糖皮质激素治疗前后患儿血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平变化。采用Pearson法分析IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA间的相关性。根据糖皮质激素治疗效果将患儿分为有效组和无效组,比较不同疗效患儿一般资料及生化指标。分析IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平对糖皮质激素治疗效果的影响,以及它们对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值。结果:糖皮质激素治疗后患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平低于治疗前,miR-302e水平高于治疗前(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患儿血清IL-6与TNF-α、NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.512、0.564,均P<0.05),与miR-302e呈负相关(r=-0.573,P<0.05);患儿血清TNF-α与NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.521,P<0.05),与miR-302e水平呈负相关(r=-0.559,P<0.05);患儿血清miR-302e与NF-κB mRNA水平呈负相关(r=-0.571,P<0.05)。无效组患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平,以及重度病情患儿占比高于有效组,miR-302e水平低于有效组(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平异常以及病情严重程度(重度)是毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的危险因素(均P<0.05)。血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA联合检测对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值高于上述指标单独预测。结论:经糖皮质激素治疗后,毛细支气管炎患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平降低,miR-302e水平升高,四者水平异常是毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的危险因素,联合检测对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值更高。

结核性脑膜炎患者外周血及脑脊液中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163表达的临床意义

目的 分析结核性脑膜炎(TBM)患者外周血及脑脊液(CSF)中微小RNA-155(miRNA-155)、微小RNA-125b(miRNA-125b)、可溶性CD163(sCD163)表达的临床意义。方法 选取2018年1月至2023年1月于新乡医学院第一附属医院就诊的183例TBM患者作为TBM组,根据其病情分为Ⅰ期57例,Ⅱ期73例和Ⅲ期53例。另选同期60例原发性头痛患者作为对照组,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组外周血及CSF中miRNA-155、miRNA-125b表达,以酶联免疫吸附(ELISA)法测定外周血及CSF中sCD163表达。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血及CSF中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163表达对TBM的早期诊断价值。分析外周血及CSF中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163表达与TBM病情程度的关系。结果 TBM组患者外周血及CSF中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163表达水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);外周血中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163诊断TBM的ROC曲线下面积(AUC)依次为0.886、0.865、0.782,CSF中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163诊断TBM的AUC依次为0.925、0.905、0.915(P均<0.05);TBM患者外周血和CSF中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163表达水平比较:Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析显示,TBM患者外周血及CSF中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163表达水平与其病情程度分别呈正相关关系(r=0.810、0.562、0.325、0.611、0.472、0.682,P<0.05)。结论 TBM患者外周血及CSF中miRNA-155、miRNA-125b、sCD163均显著升高,此三项指标可作为TBM患者临床诊断和病情评估的生物学标志物。

运动通过微小RNA-181b/磷酸酶和张力蛋白同源物调控平滑肌表型缓解糖尿病大鼠血管损伤的研究

目的:观察有氧运动对2型糖尿病大鼠血管损伤的作用,探讨潜在的分子调控机制。方法:高糖高脂喂养联合链脲佐菌素注射建立大鼠2型糖尿病模型。选模型鼠20只随机分为糖尿病对照组(DC)和糖尿病运动组(DE),同龄正常饮食大鼠为正常对照组(NC),每组10只。DE组进行8周中等强度的跑台运动,其它组不运动。无创血压仪测试大鼠的心率、血压,HE染色观察血管壁病理学变化,电镜观察血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的超微结构,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血管微小RNA-181b(microRNA-181b,miR-181b)的表达,Western Blot检测血管α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、磷酸肌醇3激酶(phospho inositide-3 kinase,PI3K)、磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue,PTEN)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)等蛋白表达。结果:相比NC组,DC组大鼠心率(heart rate,HR)、收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)、平均血压(mean blood pressure,MBP)显著降低(P<0.001);VSMCs失去典型的长梭形特征,表现为菱形,核膨大而不规则,细胞膜边界不清晰,密体、密斑少见;腹主动脉中膜显著增厚(P<0.05);收缩型特异蛋白α-SMA表达降低而合成型特异蛋白Vimentin表达升高(P<0.01);血管miR-181b的表达升高(P<0.001),其靶蛋白PTEN的表达降低(P<0.01),PI3K、AKT表达升高(P<0.01)。相比DC组,8周有氧运动使DE组的SBP、DBP、MBP显著升高(P<0.05或P<0.001);VSMCs呈长方形,核呈长椭圆形,细胞膜清晰完整,可见少许密体和密斑;收缩型特异蛋白α-SMA表达升高而合成型特异蛋白Vimentin表达降低(P<0.05);血管miR-181b的表达显著降低(P<0.001),PTEN蛋白表达升高而AKT表达下降(P<0.01或P<0.05)。结论:有氧运动具有缓解2型糖尿病大鼠血管损伤的作用,且可能机制为运动激活miR-181b/PTEN通路抑制下游AKT信号从而逆转糖尿病大鼠动脉VSMCs向合成表型转化。

血清人附睾蛋白4联合外泌体miRNA-200a/200b/200c用于糖链抗原125阴性卵巢上皮癌早期诊断的价值

目的研究血清人附睾蛋白4(human epididymal protein,HE4)联合外泌体中的微小RNA(miRNA)-200a/200b/200c用于糖链抗原125(sugar chain antigen,CA125)阴性卵巢上皮癌(epithelial ovarian carcinoma,EOC)早期诊断的价值。方法选取CA125阴性EOC患者120例作为研究对象,设为研究组;另选取同期收治的115例卵巢上皮良性肿瘤患者作为良性组,107例于武汉市第一医院体检的健康女性作为对照组。比较3组HE4、CA125、miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析各项血清指标鉴别CA125阴性EOC及卵巢上皮良性肿瘤的价值。结果研究组HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c水平显著高于良性组、对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经ROC分析证实,血清HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c能够用于CA125阴性EOC的诊断,且HE4+miRNA-200a/b/c联合诊断相对于单独及两两诊断可获得更高的曲线下面积,均有P<0.05。经logistic逐步回归分析证实,HE4≥163.110 pmol/L、miRNA-200a≥2.7002^(-△△CT)、miRNA-200b≥1.6652^(-△△CT)、miRNA-200c≥1.3952^(-△△CT)为CA125阴性EOC发生的危险因素(P<0.05)。结论血清HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c可用于CA125阴性EOC的早期诊断中,且四项指标联合诊断具有更高的敏感度与特异性,值得临床医师关注。

GDM患者miRNA-125b、SFRP5、SerpinB1变化及益生菌联合胰岛素治疗效果

目的:探究微小RNA-125b(miRNA-125b)、分泌型卷曲相关蛋白-5(SFRP5)和丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SerpinB1)对妊娠期糖尿病(GDM)诊断价值及益生菌联合胰岛素治疗效果。方法:选取2020年1月-2022年12月入院接受治疗的GDM孕妇90例纳入病例组,同期待产的90例健康孕妇纳入健康组;病例组给予益生菌冻干粉联合门冬胰岛素治疗,PCR分析miRNA-125b相对表达水平,酶联免疫吸附试验法测定SFRP5和SerpinB1水平;检测病例组空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平、餐后2 h血糖(2 h PG)水平。对比病例组和健康组miRNA-125b、SFRP5和SerpinB1水平,分析miRNA-125b、SFRP5和SerpinB1对GDM诊断价值;对比干预前后病例组miRNA-125b、SFRP5、SerpinB1和血糖水平。结果:病例组miRNA-125b(0.62±0.11)和SFRP5(9.16±1.37 ng/ml)均低于健康组(1.55±0.29、14.96±3.18 ng/ml),SerpinB1(2.89±0.95 ng/ml)高于健康组(2.34±0.58 ng/ml)(均P<0.05);miRNA-125b、SFRP5、SerpinB1联合诊断GDM的ROC曲线下面积为0.941,特异性(93.2%)敏感度(96.5%)高于单独指标检测(P<0.05);病例组治疗3个月后,miRNA-125b和SFRP5水平均高于治疗前,SerpinB1、FBG、2hPG和HbAlc水平均低于治疗前(均P<0.05),发生低血糖2例、皮疹1例、恶心呕吐2例,但症状均较轻,减少用药剂量或停药后症状均消失。结论:相较于健康孕妇,GDM患者miRNA-125b和SFRP5水平降低,SerpinB1水平升高,3项联合检测对GDM有较高诊断价值;应用益生菌联合门冬胰岛素治疗,可明显改善GDM患者miRNA-125b、SFRP5、SerpinB1和血糖水平。

微小RNA-125b作用于SFRP5调节急性心肌梗死后心室重构的实验研究

目的探讨微小RNA-125b(miR-125b)对小鼠急性心肌梗死后心室重构的影响及机制。方法利用左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型,以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。将急性心肌梗死组小鼠随机分3组:假手术组(6只)、急性心肌梗死组(12只)及急性心肌梗死+miR-125b抑制剂转染组(12只)。模型建立2周后,取各组小鼠制备病理切片,石蜡切片HE染色、石蜡切片免疫组化染色及石蜡切片胶原染色(Masson法染色)检测相关指标。结果 HE染色显示:假手术组可见心肌横纹清晰,排列整齐,细胞核明显,细胞无明显肿胀;而急性心肌梗死组则观察到多发散在的坏死灶,界限清晰,可见有明显的成纤维细胞增生,心肌肥大,同时可见较多的纤维化;急性心肌梗死+miR-125b抑制剂转染组,急性心肌梗死的典型生理现象较未加入miR-125b抑制剂转染组有明显改善。免疫组化染色显示:分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)在假手术组小鼠组织中高表达;急性心肌梗死组,SFRP5表达显著下调;而在急性心肌梗死+miR-125b抑制剂转染组,SFRP5表达明显提高。Masson染色显示:假手术组心肌组织被染成均匀红色,可见前壁的厚度较一致,心肌组织胶原纤维少,无条索状及融合的胶原纤维;急性心肌梗死组小鼠左心室前壁心肌梗死区心肌组织被胶原纤维取代,且显著增多,呈条索状,分割包绕心肌束,部分胶原纤维融合,并可见前壁变薄;急性心肌梗死+miR-125b抑制剂转染组,急性心肌梗死后典型生理现象改善,计算胶原容积积分比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论抑制miR-125b表达可改善急性心肌梗死后心室重构,其机制可能是通过抑制SFRP5来实现的。

前列腺癌组织中ABCC4、miR-125b-5p表达水平与患者术后预后的关系

目的 探究前列腺癌(PCa)组织中三磷酸腺苷结合盒转运体C4(ABCC4)、微小RNA-125b-5p(miR-125b-5p)表达水平与患者术后3年内生存的关系。方法 选取2017年11月至2020年2月在该院确诊的PCa患者60例,术中收集PCa组织(PCa组)和癌旁组织(对照组)。检测样本中ABCC4 mRNA、miR-125b-5p表达水平及ABCC4的表达情况;对患者术后随访3年。分析PCa组织中ABCC4 mRNA和miR-125b-5p表达水平的相关性,二者与临床病理特征及预后的关系,影响PCa患者预后的因素,二者对患者3年内生存的预测价值。结果 PCa组ABCC4 mRNA表达水平和阳性表达率高于对照组,miR-125b-5p表达水平低于对照组(P<0.05);PCa组织中ABCC4 mRNA与miR-125b-5p表达水平呈负相关(P<0.05);PCa组织ABCC4 mRNA、miR-125b-5p表达水平与肿瘤分期、血清前列腺特异性抗原、Gleason评分、肿瘤转移有关(P<0.05);ABCC4 mRNA高表达组、miR-125b-5p低表达组患者3年累积生存率分别低于ABCC4 mRNA低表达组、miR-125b-5p高表达组(P<0.05);死亡组PCa组织中ABCC4 mRNA表达水平高于生存组,miR-125b-5p表达水平低于生存组(P<0.05);ABCC4 mRNA表达偏高、miR-125b-5p表达偏低是PCa患者预后不良的独立危险因素(P<0.05);相较于ABCC4 mRNA、miR-125b-5p各自单独预测PCa患者3年内生存的曲线下面积(AUC),二者联合检测的AUC更高(P<0.05)。结论 ABCC4在PCa患者癌组织中呈高表达,miR-125b-5p呈低表达,二者联合检测对PCa患者3年内生存有较高预测效能。

POU6F2-AS2靶向miR-125b调控口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的机制

目的探讨长链非编码基因(LncRNA)-POU6F2-AS2对微小RNA(miR)-125b的调控作用及对口腔鳞状细胞癌(OSCC)增殖、侵袭和转移的影响。方法取正常口腔上皮细胞HOK和OSCC细胞系(CAL-27、TSCCa、Tca8113),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT)-PCR检测各组细胞LncRNA-POU6F2-AS2、miR-125b表达水平。取CAL-27细胞,分为空白对照组、LncRNA-POU6F2-AS2干扰载体(Si-POU6F2-AS2)组、LncRNA干扰阴性对照(Si-NC)组、miR-125b激动剂(miR-125b-mimic)组、miR-125b激动剂阴性对照(miR-125b-NC)组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;Transwell小室法检测细胞迁移侵袭能力;RT-qPCR检测各组细胞LncRNA-POU6F2-AS2、miR-125b表达水平;Western印迹检测各组细增殖标记蛋白(Ki67)、侵袭迁移相关蛋白E-钙黏蛋白(cadherin)及Yes相关蛋白(YAP)、miR-125b下游调控因子-抗氧化蛋白质(PRXL2)、类胡萝卜素2相关因子(NRF)2、钙信号转导因子(TACSTD)2蛋白相对表达水平。共转染Si-POU6F2-AS2与miR-125b抑制剂(miR-125b-inhibitor)及其阴性对照试剂,并分为Si-NC+miR-125b-NC组、Si-NC+miR-125b-inhibitor组、Si-POU6F2-AS2+miR-125b-NC组、Si-POU6F2-AS2+miR-125b-inhibitor组及未转染(空白对照)组,检测各组细胞Ki67、E-cadherin、YAP蛋白相对表达水平。结果与HOK细胞系相比,OSCC细胞CAL-27、TSCCa、Tca8113中LncRNA-POU6F2-AS2表达明显升高,miR-125b表达明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,Si-POU6F2-AS2组及miR-125b-mimic组细胞增殖活性、侵袭迁移能力、LncRNA-POU6F2-AS2表达、Ki67、YAP、PRXL2、NRF2、TACSTD2蛋白表达明显降低,miR-125b表达、E-cadherin表达明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,Si-NC+miR-125b-inhibitor组细胞Ki67、YAP蛋白表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);Si-POU6F2-AS2+miR-125b-NC组细胞Ki67、YAP蛋白表达明显降低,E-cadherin表达明显升高(P<0.05)。与Si-POU6F2-AS2+miR-125b-NC组相比,Si-POU6F2-AS2+miR-125b-inhibitor组细胞Ki67、YAP蛋白表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。结论敲低Lnc RNA-POU6F2-AS2可能通过上调miR-125b表达抑制OSCC细胞的恶性生物学行为。

卵巢早衰病人血清微小RNA-125b表达及与中医证型的相关性分析

目的探讨卵巢早衰病人血清微小RNA(miR)-125b表达水平及与中医证型的相关性分析。方法选取2017年3月至2019年6月郑州市第七人民医院妇科收治的136例卵巢早衰病人作为研究组,选取同期120例该院体检健康者作为对照组,观察两组研究对象及不同中医证型血清miR-125b、抗米勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)/黄体生成素(LH)水平变化,分析miR-125b表达水平与AMH、FSH/LH、中医证型的关系。结果卵巢早衰病人以肾虚肝郁证(41.18%)、肝肾阴虚证(23.53%)、肾虚血瘀证(16.91%)、脾肾阳虚证(14.70%)较为常见;研究组病人血清AMH水平[(1.98±0.64)pmol/L比(10.95±2.62)pmol/L]明显低于对照组(P<0.05),miR-125b[(2.67±0.91)比(1.01±0.29)]、FSH[(47.28±9.15)U/L比(6.05±1.02)U/L]、LH[(30.46±8.24)U/L比(5.32±1.37)U/L]、FSH/LH比值[(1.62±0.52)比(1.05±0.31)]明显高于对照组(P<0.05);肝肾阴虚证组病人血清AMH水平低于肾虚肝郁证、肾虚血瘀证、脾肾阳虚证病人(P<0.05),脾肾阳虚证组低于肾虚血瘀证组(P<0.05);肝肾阴虚证组病人miR-125b、FSH、LH水平高于肾虚肝郁证、肾虚血瘀证、脾肾阳虚证病人(P<0.05),脾肾阳虚证组miR-125b、FSH、LH水平高于肾虚血瘀证、肾虚肝郁证组(P<0.05);肝肾阴虚证组病人FSH/LH比值低于肾虚肝郁证、肾虚血瘀证病人(P<0.05),脾肾阳虚证组低于肾虚肝郁证病人(P<0.05);卵巢早衰病人血清miR-125b表达水平与AMH水平呈负相关(P<0.05),与FSH/LH比值呈正相关(P<0.05);血清AMH与肾虚肝郁证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证呈负相关(P<0.05),miR-125b、FSH/LH比值与肾虚肝郁证、肝肾阴虚证、肾虚血瘀证、脾肾阳虚证呈正相关(P<0.05)。结论卵巢早衰病人血清miR-125b高表达,与AMH水平呈负相关,与FSH/LH比值呈正相关,且肝肾阴虚证、脾肾阳虚证病人血清miR-125b水平变化较为明显,血清AMH与肝肾阴虚证、脾肾阳虚证呈负相关。

急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊经皮冠状动脉介入治疗前后外周血中HOXA远端转录本及微小RNA-125b的表达变化

目的 观察急性ST段抬高型心肌梗死（STEAMI）患者行急诊经皮冠状动脉介入（PCI）治疗前后外周血中长链非编码RNA HOXA远端转录本（HOTTIP）及微小RNA-125b（miRNA-125b）的表达变化，探讨HOTTIP及miRNA-125b在STEAMI中的作用。方法 入选2015年6月至2016年2月于宁夏医科大学总医院心脏中心内科住院的行急诊PCI治疗的STEAMI患者41例（STEAMI组）及排除STEAMI的患者30例（对照组）。STEAMI组患者按照STEAMI发生后行PCI的时间分为0-6 h亚组（11例）、〉6-12 h亚组（13例）和〉12-24 h亚组（17例）。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测对照组患者及STEAMI组患者PCI前后外周静脉血中HOTTIP及miRNA-125b的表达水平，分析HOTTIP、miRNA-125b二者之间及其与心肌肌钙蛋白T（cTnT）和高敏C反应蛋白（hs-CRP）的相关性。结果 STEAMI发生后0-6 h与〉12-24 h，STEAMI组患者HOTTIP及miRNA-125b表达水平与对照组比较，差异均无统计学意义（均P〉0.05）；STEAMI发生后〉6-12 h，HOTTIP及miRNA-125b表达水平明显高于对照组［（1.09±0.06）比（0.18±0.05）、（1.348±0.247）比（0.113±0.024）］，差异有统计学意义（P〈0.05）。PCI前，STEAMI组HOTTIP及miRNA-125b表达水平明显高于对照组（P〈0.05）；PCI后，STEAMI组HOTTIP及miRNA-125b表达水平明显低于PCI前［（0.29±0.08）比（0.78±0.09）、（0.093±0.047）比（0.807±0.043）］，差异有统计学意义（P〈0.05），与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。STEAMI患者PCI后外周血HOTTIP、miRNA-125b与 cTnT明显相关（r=-0.32,P=0.03；r=-0.27,P=0.04），与hs-CRP无相关性（r=-0.13,P=0.31；r=-0.10,P=0.42）。结论 STEAMI患者的HOTTIP及miRNA-125b表达水平明显升高，行PCI治疗后下降，提示其可能参与了STEAMI心肌缺血再灌注损伤的过程。