老年2型糖尿病患者血清微小RNA-125a-3p和基质金属蛋白酶9水平与颈动脉粥样硬化的关系

目的 探讨老年2型糖尿病(T2DM)患者血清微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法 选取2020年4月至2023年5月内蒙古自治区人民医院收治的200例老年T2DM患者(T2DM组),根据颈动脉内中膜厚度(CIMT)分为CAS亚组和非CAS亚组,另选取同期45例老年体检健康者为对照组。收集T2DM患者临床资料,检测研究对象血清miR-125a-3p、MMP-9水平。分析T2DM患者血清miR-125a-3p、MMP-9水平与CIMT、空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的相关性,多因素Logistic回归分析T2DM患者CAS的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-3p、MMP-9对T2DM患者CAS的预测价值。结果 T2DM组血清miR-125a-3p、MMP-9水平均高于对照组[(1.58±0.30)比(1.09±0.22)、(24±8)μg/L比(14±5)μg/L](均P<0.001)。200例T2DM患者中137例CIMT≥1.0 mm, CAS发生率为68.5%(137/200)。CAS亚组miR-125a-3p、MMP-9水平均高于非CAS亚组(均P<0.05)。T2DM患者血清miR-125a-3p与MMP-9水平呈正相关(r=0.778,P<0.001),二者与CIMT、空腹血糖、HbA1c、甘油三酯、LDL-C均呈正相关(均P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,血脂异常、病程延长和HbA1c、LDL-C、miR-125a-3p、MMP-9升高为T2DM患者CAS的独立危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-3p、MMP-9联合预测老年T2DM患者CAS的曲线下面积大于二者单独预测(0.864比0.799、0.796)。结论 老年T2DM患者血清miR-125a-3p、MMP-9水平升高与CAS密切相关,可能成为T2DM患者CAS的辅助预测指标。

前列腺癌组织中ABCC4、miR-125b-5p表达水平与患者术后预后的关系

目的 探究前列腺癌(PCa)组织中三磷酸腺苷结合盒转运体C4(ABCC4)、微小RNA-125b-5p(miR-125b-5p)表达水平与患者术后3年内生存的关系。方法 选取2017年11月至2020年2月在该院确诊的PCa患者60例,术中收集PCa组织(PCa组)和癌旁组织(对照组)。检测样本中ABCC4 mRNA、miR-125b-5p表达水平及ABCC4的表达情况;对患者术后随访3年。分析PCa组织中ABCC4 mRNA和miR-125b-5p表达水平的相关性,二者与临床病理特征及预后的关系,影响PCa患者预后的因素,二者对患者3年内生存的预测价值。结果 PCa组ABCC4 mRNA表达水平和阳性表达率高于对照组,miR-125b-5p表达水平低于对照组(P<0.05);PCa组织中ABCC4 mRNA与miR-125b-5p表达水平呈负相关(P<0.05);PCa组织ABCC4 mRNA、miR-125b-5p表达水平与肿瘤分期、血清前列腺特异性抗原、Gleason评分、肿瘤转移有关(P<0.05);ABCC4 mRNA高表达组、miR-125b-5p低表达组患者3年累积生存率分别低于ABCC4 mRNA低表达组、miR-125b-5p高表达组(P<0.05);死亡组PCa组织中ABCC4 mRNA表达水平高于生存组,miR-125b-5p表达水平低于生存组(P<0.05);ABCC4 mRNA表达偏高、miR-125b-5p表达偏低是PCa患者预后不良的独立危险因素(P<0.05);相较于ABCC4 mRNA、miR-125b-5p各自单独预测PCa患者3年内生存的曲线下面积(AUC),二者联合检测的AUC更高(P<0.05)。结论 ABCC4在PCa患者癌组织中呈高表达,miR-125b-5p呈低表达,二者联合检测对PCa患者3年内生存有较高预测效能。

血清微小RNA-499a-5p、成纤维细胞生长因子9、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤患者病情严重程度和预后的关系

目的探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系。方法选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例)。根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例)。以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例)。另外,选取同期体检健康者151例为健康组。分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能。结果轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症并发ALI患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P<0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P<0.05)。miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关。miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估。

孕早期孕妇促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体及微小RNA-873-5p水平与妊娠期糖尿病相关性研究

目的:分析研究孕早期促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)及微小RNA-873-5p(miR-873-5p)水平与妊娠期糖尿病(GDM)的相关性。方法:选取定期产检的GDM孕妇命名为GDM组(n=109),另选同期在本院产检的糖耐量正常孕妇为对照组(n=60)。收集两组孕妇的一般资料及孕早期实验室检测指标(TSH、TPOAb、miR-873-5p),采用单因素、多因素分析TSH、TPOAb、miR-873-5p水平与GDM的关系;并绘制ROC曲线分析血清TSH、TPOAb、miR-873-5p水平对GDM的预测价值。结果:GDM组的血清TSH、TPOAb、miR-873-5p水平均高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄>30岁(OR=1.982)、孕前BMI≥24 kg/m^(2)(OR=2.020)、TSH升高(OR=2.113)、TPOAb升高(OR=2.307)及miR-873-5p水平升高(OR=2.059)是发生GDM的独立危险因素(均P<0.05);ROC曲线分析显示,血清TSH、TPOAb、miR-873-5p及联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.830、0.829、0.762、0.936,联合检测优于单一检测(P<0.05)。结论:TSH、TPOAb及miR-873-5p在GDM孕妇体内呈高表达,可能成为GDM发生的辅助预测指标。

circ_0114427靶向微小RNA-330-5p调控脂多糖诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症反应

目的探讨circ_0114427对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的影响及其机制。方法体外培养人肺泡上皮细胞,分别转染si-circ_0114427、微小RNA(miR)-330-5p mimics或共转染si-circ_0114427与anti-miR-330-5p后,用10 mg/L LPS处理24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中circ_0114427和miR-330-5p表达量;采用蛋白免疫印迹评估活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase3)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(Cleaved-caspase9)蛋白水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达;采用流式细胞术分析细胞凋亡。采用双荧光素酶报告实验验证circ_0114427和miR-330-5p的互作关系。结果肺泡上皮细胞经LPS处理后,细胞中circ_0114427表达升高,miR-330-5p表达降低(P<0.05)。敲减circ_0114427或上调miR-330-5p可以抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡、Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9表达以及IL-6和TNF-α水平(P<0.05)。circ_0114427靶向结合并负调控miR-330-5p。miR-330-5p下调可以逆转circ_0114427敲低对LPS诱导的细胞凋亡和炎症的抑制作用。结论敲减circ_0114427可抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症,这可能与miR-330-5p上调有关。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)22调控微小RNA(miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞(CAL-27、SCC-25和HSC-3),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组(未进行转染)、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数(PI)];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR-27b-3p的靶向作用关系。结果与癌旁组织比较,OSCC癌组织中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低(P<0.05);与HOK细胞比较,CAL-27、SCC-25和HSC-3细胞中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低,且SCC-25细胞中SNHG22与miR-27b-3p的表达与HOK细胞差异最大(P<0.05)。与Ctrl组比较,si-SNHG22组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著减少(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05);与si-SNHG22组比较,si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05)。双荧光素酶实验显示SNHG22与miR-27b-3p存在靶向作用关系。结论SNHG22在OSSC中高表达,miR-27b-3p在OSSC中低表达,SNHG22可能通过海绵化miR-27b-3p促进SCC-25细胞增殖、侵袭和迁移,SNHG22/miR-27b-3p轴可能是OSCC一个新的诊断和治疗靶点。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

紫檀芪调控微小RNA-340-5p/髓细胞白血病-1轴对胆囊癌SD细胞生物学行为的影响实验研究

目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌SD(GBC-SD)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人GBC-SD细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理GBC-SD细胞,然后检测细胞存活率。将GBC-SD细胞分为对照组(DMEM培养基常规培养GBC-SD细胞)、PTS组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞)、PTS+空载质粒组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染空载质粒)、PTS+miR-340-5p沉默组[加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染miR-340-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。分别检测各组GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和MCL-1 mRNA表达。蛋白印迹法检测MCL-1及增殖凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-340-5p与MCL-1的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测PTS对裸鼠肿瘤生长及miR-340-5p/MCL-1轴的影响。结果:随着PTS浓度的升高,GBC-SD细胞存活率逐渐降低(均P<0.05)。与对照组比较,PTS组细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数、MCL-1 mRNA和蛋白、Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达降低,细胞凋亡率、miR-340-5p、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高(均P<0.05)。沉默miR-340-5p可逆转PTS对GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-340-5p/MCL-1轴的作用效果(均P<0.05)。miR-340-5p与MCL-1存在靶向调控关系。PTS能抑制裸鼠肿瘤生长和MCL-1 mRNA和蛋白表达,促进miR-340-5p表达(均P<0.05)。结论:PTS可通过上调miR-340-5p表达下调MCL-1表达,抑制GBC-SD细胞增殖、迁移和侵袭,促进GBC-SD细胞凋亡。

尿液前列腺特异性抗原联合微小RNA-21-5p对前列腺癌的早期诊断价值

目的探讨尿液前列腺特异性抗原(PSA)联合微小RNA-21-5p(miR-21-5p)对前列腺癌(PCa)的早期诊断价值。方法选取2020年1月至2022年12月重庆市合川区人民医院收治的73例PCa患者为病例组,75例良性前列腺增生(BPH)患者为对照组。检测两组尿PSA、miR-21-5p水平,分析PSA和miR-21-5p对PCa早期诊断价值。结果病例组患者尿液PSA、miR-21-5p水平明显高于对照组(P<0.05)。随着Gleason分级、TNM分期的升高,PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平逐渐升高(P<0.05);存在转移的PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平高于未转移患者(P<0.05)。PSA、miR-21-5p及串联联合试验诊断PCa的受试者操作特征曲线下面积为0.841、0.878、0.947,其中联合诊断的特异度显著高于单独检测(P<0.05)。结论PCa患者尿PSA、miR-21-5p水平明显升高,PSA、miR-21-5p可作为PCa诊断和病理分级的参考指标,联合检测对PCa具有更高诊断效能。

长链非编码RNA SLCO4A1-AS1靶向微小RNA-615-5p对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)靶向微小RNA-615-5p(miR-615-5p)对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析LncRNA SLCO4A1-AS1和miR-615-5p在食管癌组织、细胞系中表达情况。将si-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1、miR-NC、miR-615-5p模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA SLCO4A1-AS1、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p分别转染Eca109细胞。CCK-8和流式细胞术用于检测细胞活力和凋亡率;平板克隆实验用于检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测培养液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用双荧光素酶报告基因法确定LncRNA SLCO4A1-AS1与miR-615-5p的关系。结果食管癌组织、细胞系中LncRNA SLCO4A1-AS1表达上调,miR-615-5p表达下调。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1表达后,细胞活力、细胞克隆形成数量以及培养液中IL-6和TNF-α水平降低,miR-615-5p表达量、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率升高,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC比较,si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率降低,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA SLCO4A1-AS1能够促进食管癌的发生和发展。抑制LncRNA SLCO4A1-AS1能够减少食管癌细胞的增殖,降低炎症因子的表达,诱导癌细胞凋亡。

免疫性血小板减少症患儿 T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p 和微小RNA-181a-5p表达水平检测及临床意义

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)患儿T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)和微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及临床意义。方法:以158例ITP患儿为ITP组,依据临床分型不同分为慢性ITP组(34例)、持续性ITP组(60例)和新诊断ITP组(64例)。另选取同期健康儿童102例为对照组。所有患儿均给予静脉滴注人免疫球蛋白及口服醋酸泼尼松片等常规治疗,均治疗5 d。比较ITP组与对照组全血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))细胞及血清甲状腺自身抗体[甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较慢性ITP组、持续性ITP组和新诊断ITP组患儿全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较ITP患儿治疗前、治疗5 d后全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。结果:与对照组比较,ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平更低,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平更高(均P<0.05)。慢性ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平低于持续性ITP组和新诊断ITP组,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平高于持续性ITP组和新诊断ITP组(均P<0.05)。与治疗前比较,治疗5 d后ITP患儿全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平升高,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平降低(均P<0.05)。结论:ITP患儿存在T淋巴细胞亚群失衡、甲状腺自身抗体和miR-106b-5p高表达以及miR-181a-5p低表达情况。治疗期间积极检测患儿全血T淋巴细胞亚群及血清甲状腺自身抗体、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平,有助于患儿的疗效评估。

胃癌组织微小RNA-181d-5p和三基序蛋白22表达与患者术后5年内生存相关性研究

目的:探讨胃癌组织微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)和三基序蛋白22(TRIM22)表达与患者术后5年内生存的关系。方法:收集110例胃癌患者(均是胃腺癌)术中切除的胃癌组织标本及癌旁组织标本。荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测miR-181d-5p和TRIM22蛋白表达。患者术后随访5年,记录生存情况。Starbase数据库预测miR-181d-5p与TRIM22结合位点,并验证miR-181d-5p与TRIM22的靶向关系。比较癌旁和胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达,不同临床病理特征患者胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达差异。分析胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达与患者预后的关系,胃癌患者预后的影响因素,以及胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22及它们与不同临床病理特征的相关性。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低(均P<0.05)。肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期在miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者中的比例分别高于肿瘤高分化、黏膜或膜下层浸润、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期(均P<0.05)。miR-181d-5p与TRIM22具有靶向结合位点,miR-181d-5p可负向调控TRIM22表达。miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者5年总生存率分别低于miR-181d-5p低表达和TRIM22阳性表达患者(均P<0.05)。影响胃癌患者术后5年内生存的独立危险因素有miR-181d-5p高表达、TRIM22阴性表达、肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ期(均P<0.05)。胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22、肿瘤分化程度呈负相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关(均P<0.05);TRIM22与肿瘤分化程度呈正相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈负相关(均P<0.05)。结论:胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低,两者与患者临床病理特征和术后5年内生存有密切关系。

长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。

基于生物信息学分析肝硬化与miR-125a-5p和miR-125b-5p的相关研究

目的:基于生物信息学分析肝硬化与miR-125a-5p和miR-125b-5p的功能富集通路以及关键基因,以期为肝硬化诊断与治疗提供新思路。方法:通过miRDB、miRWalk和TargetScan数据库获得miR-125a-5p和miR-125b-5p的靶基因,从GEO数据库获得肝硬化相关数据集GSE14323和GSE25097,筛选正常组织样本和肝硬化组织样本差异表达基因,将GSE25097和GSE14323所得差异表达基因取交集,获得肝硬化数据集的共表达基因,将miR-125a-5p和miR-125b-5p的靶基因与肝硬化数据集GSE14323和GSE25097的共表达基因取交集得到核心基因,对核心基因进行GO和KEGG富集以及构建PPI网络互作图。结果:GO富集分析中主要在糖氧代谢过程和线粒体外膜的活性中富集,KEGG富集分析中主要在脂肪酸生物合成和类固醇生物代谢等中富集,通过构建PPI网络互作图,得到miR-125a-5p和miR-125b-5p与肝硬化相关的4个关键基因NPL、H6PD、KIAA0319L和RFX5。结论:得到的相关通路以及4个关键基因NPL、H6PD、KIAA0319L和RFX5以期为肝硬化发病机制以及肝硬化发生发展过程中相关分子靶点和早期筛查的手段提供新思路,从而指导疾病诊疗计划和管理。

微小RNA-129-5p和高迁移率族蛋白B1在缺血性脑卒中患者中的表达水平及临床意义

目的探讨微小RNA-129-5p(miR-129-5p)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在缺血性脑卒中(IS)患者中的表达水平及临床意义。方法选取2019年2月至2021年2月河北省第七人民医院收治的94例IS患者为观察组,另选取75例健康体检者为对照组。根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将观察组分为轻度组32例、中度组43例、重度组19例。根据90 d随访的改良Rankin量表评分分为预后良好组65例,预后不良组29例。检测血清miR-129-5p、HMGB1水平,并收集观察组临床资料。采用Pearson相关性分析血清miR-129-5p和HMGB1的关系。多因素Logistic回归分析IS患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-129-5p和HMGB1对IS患者预后的预测价值。结果观察组血清miR-129-5p和HMGB1水平与对照组相比差异有统计学意义(t=3.038、24.863,P<0.05)。观察组血清miR-129-5p水平随神经功能缺损程度的加重而降低,HMGB1水平随之升高(F=83.466、8.423,P<0.05)。Pearson相关性分析显示,观察组血清miR-129-5p和HMGB1水平呈负相关(r=-0.406,P<0.05)。预后良好组和预后不良组的同型半胱氨酸、梗死体积、入院时NIHSS评分、发病到入院时间、miR-129-5p和HMGB1水平间差异具有统计学意义(t=4.636、4.034、11.618、19.522、8.063、6.177,P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-129-5p和HMGB1水平对IS患者预后不良预测价值的曲线下面积分别为0.832、0.859。多因素Logistic回归分析显示,患者入院时NIHSS评分、发病到入院时间、HMGB1、miR-129-5p是IS患者预后不良的影响因素(OR=5.361、4.465、7.245、0.806,P<0.05)。结论IS患者血清miR-129-5p低水平、HMGB1高水平与神经功能缺损程度有关,且对不良预后有一定的预测价值。

血清血管紧张素转化酶2及微小RNA-26b-5p对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗术后心肌损伤的预测价值

目的探讨血清血管紧张素转化酶2(ACE2)、微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌损伤的预测价值。方法选取2019年11月至2021年1月在华北石油管理局总医院行PCI手术的急性冠状动脉综合征患者122例,根据PCI术后6个月是否发生心肌损伤,分为心肌损伤组39例和心肌未损伤组83例。收集所有患者临床资料,采用酶联免疫吸附法检测血清ACE2水平、实时荧光定量PCR法检测血清miR-26b-5p水平,Pearson法分析血清ACE2与miR-26b-5p水平的相关性,受试者工作特征曲线评价血清ACE2、miR-26b-5p水平对急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的预测价值。结果与心肌未损伤组相比,心肌损伤组术后6个月肌钙蛋白I(cTnI)、术后6个月肌酸激酶同工酶(CK-MB)较高,差异有统计学意义(t=40.656、27.486,P<0.05)。与心肌未损伤组相比,心肌损伤组血清ACE2水平较高,血清miR-26b-5p水平较低,差异均有统计学意义(t=11.159、14.842,P<0.05);血清miR-26b-5p与ACE2水平呈负相关(r=-0.567,P<0.05);血清ACE2、miR-26b-5p水平预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.796、0.878,敏感度分别为87.20%、85.50%,特异度分别为60.20%、82.10%;两者联合预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的AUC为0.916,敏感度、特异度分别为89.70%、79.50%。结论急性冠状动脉综合征PCI术后心肌损伤患者血清ACE2呈高表达,血清miR-26b-5p呈低表达,ACE2、miR-26b-5p可预估急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤,两者联合预测价值较好。

血清微小RNA-19b-3p、微小RNA-933水平对老年慢性心力衰竭患者心功能及预后的评估价值

目的 探讨血清微小RNA-19b-3p(miR-19b-3p)、微小RNA-933(miR-933)水平对老年慢性心力衰竭患者心功能、预后的评估价值。方法 选取收治的108例老年慢性心力衰竭患者作为研究组。研究组中,根据纽约心脏学会(NYHA)分级,分为Ⅱ级患者35例,Ⅲ级患者40例,Ⅳ级患者33例。选择同期体检的90例健康人群作为对照组。入院后检测血清miR-19b-3p、miR-933水平。采用超声心动图测量心功能指标[左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)]。采用Pearson相关分析法分析血清miR-19b-3p、miR-933水平与心功能的关系。根据老年慢性心力衰竭患者入院1年内是否发生终点事件分为发生组(n=34)和未发生组(n=74)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-19b-3p、miR-933对老年慢性心力衰竭预后的预测价值。采用多因素Cox回归分析法分析老年慢性心力衰竭患者预后的影响因素。结果 研究组血清miR-19b-3p、miR-933水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心功能分级Ⅳ级患者血清miR-19b-3p、miR-933及LVEF水平低于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,LVEDD大于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,差异有统计学意义(P<0.05)。老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(r=0.554、-0.368,P<0.001);血清miR-933水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(r=0.505、-0.410,P<0.001)。发生组血清miR-19b-3p、miR-933水平低于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-19b-3p、miR-933预测老年慢性心力衰竭患者预后的曲线下面积(AUC)为0.835(95%CI:0.785~0.885)、0.843(95%CI:0.790~0.890),二者联合预测的AUC为0.901(95%CI:0.851~0.951)。血清miR-19b-3p(HR=3.762,95%CI:1.854~7.634)、miR-933(HR=3.480,95%CI:1.903~6.364)及美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分(HR=3.047,95%CI:1.837~5.051)为老年慢性心力衰竭患者预后不良的影响因素(P<0.05)。结论 老年慢性心力衰竭患者的血清miR-19b-3p、miR-933水平均呈低表达。miR-19b-3p、miR-933水平变化与心功能及预后密切相关,其可作为预测老年慢性心力衰竭患者预后不良的有效指标。

艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性类风湿关节炎疗效及对患者血清微小RNA-141和微小RNA-335-5p表达的影响

目的:观察艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性类风湿关节炎(RA)的疗效及对患者血清微小RNA-141(miR-141)和miR-335-5p表达的影响。方法:将难治性RA患者80例随机分为甲氨蝶呤组(单纯甲氨蝶呤治疗,40例)和联合艾拉莫德组(艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗,40例),均治疗3个月。比较两组临床疗效、免疫功能指标、骨代谢指标、炎症因子水平、症状改善情况以及miR-141和miR-335-5p表达水平。记录治疗期间不良反应发生情况。结果:联合艾拉莫德组总有效率高于甲氨蝶呤组(P<0.05)。两组血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX-Ⅰ)、类风湿因子(RF)、分泌型糖蛋白-3α(Wnt-3α)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-141水平,以及28个关节疾病活动度(DAS28)评分、关节压痛指数、关节肿胀指数较治疗前降低,且联合艾拉莫德组低于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。血清miR-335-5p、骨碱性磷酸酶(B-ALP)水平较治疗前升高,且联合艾拉莫德组高于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。晨僵时间较治疗前缩短,且联合艾拉莫德组短于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。治疗期间,联合艾拉莫德组与甲氨蝶呤组总不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:相较于单纯甲氨蝶呤治疗,艾拉莫德联合甲氨蝶呤可进一步改善难治性RA患者免疫功能,改善相关细胞因子水平及炎症反应,缓解患者症状,同时具有良好安全性。艾拉莫德的治疗作用可能与调控血清miR-141、miR-335-5p水平有关。

微小RNA-145-5p靶向Toll样受体4参与动脉粥样硬化泡沫细胞炎症和氧化应激反应

目的 探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对动脉粥样硬化细胞模型中炎性反应和氧化应激过程的调控作用。方法 体外构建人单核细胞白血病细胞源性泡沫细胞,分为模型组和对照组,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞内miR-145-5p相对表达。采用TargetScan数据库预测miR-145-5p与Toll样受体4(TLR4)的靶向关系。将293T细胞分为野生型+模拟物(mimic)组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物)、野生型+mimic NC组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照)、突变型+mimic组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物)、突变型+mimic NC组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照),采用双荧光素酶实验验证miR-145-5p与TLR4的靶向关系。体外诱导泡沫细胞,分为mimic组(转染miR-145-5p模拟物)、mimic NC组(转染模拟物阴性对照)、抑制物(inhibitor)组(转染miR-145-5p抑制物)、inhibitor NC组(转染抑制物阴性对照),采用qRT-PCR、Western blot检测TLR4 mRNA及蛋白表达,酶联免疫吸附检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β和IL-6表达,生化相关试剂盒测定活性氧、丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 与对照组比较,模型组miR-145-5p表达明显降低(0.29±0.01 vs 1.00±0.08,t=11.180,P<0.01)。双荧光素酶实验显示,miR-145-5p mimic组荧光素酶活性较mimic NC组显著降低,差异有统计学意义(t=8.612,P<0.01)。与mimic NC组比较,mimic组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显降低,miR-145-5p表达、SOD活性明显升高(P<0.05,P<0.01)。与inhibitor NC组比较,inhibitor组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显升高,miR-145-5p表达、SOD活性明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 miR-145-5p通过靶向TLR4抑制动脉粥样硬化细胞模型中的炎症和氧化应激反应。

微小RNA-181c-5p和Kruppel样因子6在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征关系研究

目的:检测子宫内膜样腺癌组织中微小RNA-181c-5p(miR-181c-5p)和Kruppel样因子6(KLF6)的表达,探讨其相关性及临床意义。方法:选择49例子宫内膜样腺癌行手术治疗的患者作为观察组,选择49例增生期子宫内膜组织作为对照组。应用实时荧光定量PCR法检测术后组织中miR-181c-5p的表达,应用免疫组化方法检测KLF6的表达。应用线性相关分析观察miR-181c-5p和KLF6的关系,应用K-M生存分析观察miR-181c-5p和KLF6与术后生存时间的关系。结果:观察组miR-181c-5p表达量明显低于对照组(P<0.05),KLF6的阳性率明显低于对照组(P<0.05)。观察组miR-181c-5p与KLF6表达与肿瘤肌层浸润深度、宫颈管累犯及病理分级密切相关(均P<0.05),且两者具有正相关性,两者的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。结论:子宫内膜样腺癌中miR-181c-5p和KLF6均异常表达且具有正相关性,联合检测miR-181c-5p和KLF6的表达对判断肿瘤预后可能有一定价值。