微小RNA-132在胰腺癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的研究微小RNA-132在胰腺癌患者外周血中的表达和临床意义。方法选择83例胰腺癌患者作为观察组,另外选择接受治疗的50例胰腺炎患者和50例健康体检者作为对照组Ⅰ组和对照Ⅱ组。所有研究对象均采用Trizol法提取细胞当中的微小RNA-132,并通过反转录试剂盒反转录成cDNA,根据实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)试剂盒说明书配制反应体系进行扩增,计算miR-132的相对表达水平。对比三组微小RNA-132相对表达水平,分析微小RNA-132相对表达对胰腺癌的诊断价值。结果①三组微小RNA-132相对表达水平对比,差异有统计学意义(P<0.05);观察组外周血中的微小RNA-132相对表达水平(2.87±0.60)明显高于对照组Ⅰ组的(2.50±0.52)和对照Ⅱ组的(2.02±0.42),对照Ⅰ组高于对照组Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05)。②受试者工作特征曲线(ROC)分析可得,微小RNA-132诊断胰腺癌的最佳临界点为2.79,外周血的微小RNA-132相对表达水平达到2.79,其诊断胰腺癌的曲线下面积(AUC)为0.907,95%CI=(0.864,0.949),敏感度为79.50%,特异度为90.00%,P<0.05。结论胰腺癌患者外周血中的微小RNA-132有明显上调趋势,可将微小RNA-132当做是对胰腺癌患者进行潜在诊断的主要标记物。

微小RNA-132转染对体内外肝癌生长和凋亡的作用

目的观察转染微小RNA-132(miR-132)对体内外人肝癌细胞株MHCC97H生长和凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-q PCR)检测45例肝癌组织及癌旁正常组织中miR-132的表达,CCK-8法、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验和TUNEL实验检验转染miR-132后对体内外MHCC97H细胞生长和凋亡的作用,Western blot法检测体外MHCC97H细胞中p-AKT、Survivin和Caspase 3蛋白的表达,免疫组织化学法检测体内肿瘤组织中Ki-67、Survivin和Caspase 3的表达。结果 miR-132在肝癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织(P<0.05)。在体外实验中,与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞中miR-132的表达明显升高,细胞増殖明显被抑制,G0/G1期细胞比例明显上升,S期细胞比例明显下降,凋亡细胞显著增加(P均<0.05)。转染组细胞中Survivin和p-AKT的表达下调,Caspase 3的表达上调,与空白对照组和阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05)。在体内实验中,转染组裸鼠皮下移植瘤生长明显被抑制,凋亡肿瘤细胞明显增加,Survivin和Ki-67蛋白表达下调,而Caspase 3表达增加(P均<0.05)。结论转染miR-132对体内外肝癌细胞有增殖抑制和凋亡诱导作用,miR-132有望成为肝癌治疗的新靶点。

微小RNA-132-3p对妊娠期糖尿病患者胎盘线粒体功能和葡萄糖代谢的影响

目的探讨微小RNA-132-3p(miR-132-3p)对妊娠期糖尿病患者胎盘线粒体功能和葡萄糖代谢的影响。方法选取2016年1月至2018年9月于新疆医科大学第一附属医院妇科中心行剖宫产的妊娠期糖尿病患者20例,按照治疗方法分为饮食控制组(10例,单独使用饮食治疗)和药物组(10例,使用格列本脲或胰岛素治疗),收集患者剖宫产后胎盘组织。另选取同期于本院住院的无妊娠并发症的健康女性10名为对照组,收集分娩后胎盘组织。采用酶联免疫吸附试验法检测3组入选者胎盘匀浆中人胎盘催乳素(hPL)含量,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胎盘糖代谢相关指标葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、己糖激酶2(HK-2)、磷酸果糖激酶(PFK)、乳酸脱氢酶(LDH)和线粒体呼吸功能相关指标过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、过氧化物酶体增殖物受体γ(PPARγ)表达,采用Taq Man法测定miR-132-3p的表达,分离培养绒毛滋养细胞,以荧光素酶报告基因法寻找miR-132-3p靶基因,以miR-132-3p mimcs转染细胞,RT-PCR检测GLUT1、HK-2、PPARγ表达改变。结果药物组患者年龄、胎盘质量明显高于对照组[(35.3±1.4)岁比(26.1±3.2)岁、(834±50)g比(693±40)g],胎儿/胎盘质量比明显低于对照组[(3.444±0.023)比(5.271±0.021)],差异均有统计学意义(均P<0.05)。饮食控制组h PL含量明显高于对照组,药物组h PL含量明显高于饮食控制组和对照组[(28.6±1.0)mg/mg蛋白比(20.3±1.2)、(10.4±0.7)mg/mg蛋白],差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组和饮食控制组比较,药物组胎盘中糖代谢相关指标GLUT1、HK-2、PFK和LDH显著上调,与对照组比较,饮食控制组、药物组中线粒体呼吸功能相关指标PGC-1α、PPARγ显著下调,且药物组PGC-1α、PPARγ显著低于饮食控制组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-132-3p在药物组胎盘组织及绒毛滋养细胞中相对表达量均明显低于对照组和饮食控制组[(0.54±0.20)比(1.01±0.12)、(1.11±0.24),(0.61±0.19)比(1.03±0.09)、(1.14±0.20)],差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-132-3p可靶向调控GLUT1表达。以miR-132-3p mimics转染药物组绒毛滋养细胞后,GLUT1和HK-2表达明显降低,而PPARγ表达明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论妊娠期糖尿病患者h PL明显升高,线粒体功能降低,糖酵解增加,miR-132-3p表达降低,miR-132-3p表达可调控胎盘绒毛滋养细胞糖酵解。

微小RNA-454、微小RNA-132、液泡膜-ATP酶表达与结肠癌临床病理特征关联性分析

目的 探讨组织微小RNA(miR)-454、miR-132、液泡膜-ATP酶(V-ATPase)表达与结肠癌病人临床病理特征关联性。方法 选取2011年9月至2014年11月新乡医学院第一附属医院行手术切除的96例结肠癌组织标本、96例癌旁正常结肠组织标本、82例良性结肠病变标本为研究对象。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定标本中miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达,分析miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达与结肠癌病人一般资料、临床病理参数的关系,随访5年,统计miR-454、miR-132、V-ATPase高表达、低表达病人3年、5年生存率。结果 结肠癌组织标本中miR-454表达69.86±7.29与V-ATPase mRNA表达5.42±0.41高于良性结肠病变组织10.74±2.03、2.79±0.38、癌旁正常结肠组织标本1.28±0.74、1.96±0.32,miR-132水平表达1.46±0.25低于良性结肠病变组织3.68±0.73、癌旁正常结肠组织标本4.59±1.24(P<0.05);中低分化、Ducks分期C~D期、有淋巴结转移结肠癌病人miR-454与V-ATPase mRNA表达高于高分化、Ducks分期为A~B期、无淋巴结转移病人,miR-132表达低于高分化、Ducks分期为A~B期、无淋巴结转移病人(P<0.05);miR-454、V-ATPase mRNA表达与组织分化程度呈显著负相关,与Ducks分期、淋巴结转移呈显著正相关,miR-132表达与组织分化程度呈显著正相关,与Ducks分期、淋巴结转移呈显著负相关(P<0.05);miR-454、V-ATPase mRNA高表达病人3年(9.23%、33.85%)、5年生存率(44.00%、28.00%)低于低表达(70.97%、61.29%)、(69.57%、55.10%)病人,miR-132高表达病人3年、5年生存率(70.59%、58.82%)高于低表达病人(48.39%、33.87%)(P<0.05)。结论 miR-454、V-ATPase mRNA表达与组织分化程度呈显著负相关,与Ducks分期、淋巴结转移呈显著正相关,miR-132表达与组织分化程度呈显著正相关,与Ducks分期、淋巴结转移呈显著负相关,可为结肠癌恶性化生物学行为特征、病理级别、预后判断提供客观依据。

微小RNA-132和高迁移率族蛋白1在脓毒症患儿外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-132(miR-132)和高迁移率族蛋白1(HMGB1)在脓毒症患儿外周血单个核细胞中的表达及临床意义。方法选取脓毒症患儿87例,根据患儿预后情况分为死亡组(25例)和非死亡组(62例),以体检健康儿童50名作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测脓毒症患儿确诊后12 h内和对照组体检当日外周血单个核细胞中miR-132和HMGB1 mRNA表达,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-132和HMGB1 mRNA相对表达水平对患儿预后的影响。结果脓毒症患儿外周血单个核细胞中miR-132和HMGB1 mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.05);死亡组患儿外周血单个核细胞中miR-132和HMGB1mRNA相对表达量均高于非死亡组(P<0.05);Pearson相关分析显示,脓毒症患儿外周血单个核细胞中miR-132相对表达量与HMGB1 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.521,P<0.001);ROC曲线分析显示,miR-132、HMGB1 mRNA相对表达量在预测患儿预后时,曲线下面积(AUC)分别为0.921 [95%可信区间(CI)0.853~0.989]、0.858(95%CI 0.769~0.947),敏感性分别为84.0%、68.0%,特异性分别为87.1%、90.3%;二者联合检测时,AUC为0.941(95%CI 0.878~1.000),敏感性为88.0%,特异性为91.9%。结论 miR-132和HMGB1在脓毒症患儿外周血单个核细胞中表达升高,且与患儿预后有关,可作为早期评估患儿预后的指标。

重性抑郁障碍患者外周血单个核细胞中微小RNA-132治疗前后的表达水平研究

目的:探讨重性抑郁障碍(MDD)患者外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA(miR)-132表达水平在抗抑郁治疗前后的改变。方法:给予32例MDD患者(MDD组)8周的抗抑郁药治疗;以治疗后汉密尔顿抑郁量表24项(HAMD-24)评分的减分率≥50%为有效;治疗前后采用实时定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)对MDD组患者PBMC中miR-132表达进行定量分析;并与30名健康对照者(对照组)比较。结果:基线期MDD组PBMC中miR-132相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P=0.226);治疗后MDD组PBMC中miR-132相对表达量较基线明显上调(t=-2.356,P=0.025);且有效患者miR-132表达水平较基线明显升高(t=-2.804,P=0.01),无效患者治疗前后PBMC中miR-132表达水平比较差异无统计学意义(z=-0.943,P=0.438)。结论:MDD患者PBMC中miR-132表达水平的变化可能与抗抑郁药的疗效有关。

结肠癌组织中Musashi 1蛋白和微小RNA-132的表达情况及与患者临床特征的关系

目的探讨结肠癌组织中Musashi 1蛋白和微小RNA-132(miRNA-132)的表达情况及与患者临床特征的关系。方法选择80例结肠癌患者的结肠癌组织标本及其癌旁组织标本,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫组织化学染色方法检测两种组织中miRNA-132和Musashi 1蛋白的表达情况,并分析结肠癌组织中Musashi 1蛋白和miRNA-132表达情况与患者临床特征的关系。结果结肠癌组织中Musashi 1蛋白的阳性表达率为68.75%,明显高于癌旁组织的28.75%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。结肠癌组织中miRNA-132的相对表达量为(0.448±0.104),明显低于癌旁组织的(2.167±0.551),差异有统计学意义(P﹤0.01)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、侵及浆膜的结肠癌患者结肠癌组织中Musashi 1蛋白的阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、未侵及浆膜的结肠癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、高+中分化的结肠癌患者结肠癌组织中miRNA-132的相对表达量分别明显高于TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化的结肠癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论结肠癌组织中Musashi 1蛋白表达上调,miRNA-132表达下调,且其表达情况与结肠癌的恶性程度有关。

循环血微小RNA-132和微小RNA-195在慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压患者中的表达及意义

目的探讨循环血微小RNA(miRNA,miR)-132和miR-195在慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺动脉高压(PH)患者中的表达及意义。方法纳入COPD相关PH患者108例作为观察组,同期于我院就诊的COPD但无COPD相关PH患者97例作为对照组。比较两组患者循环血miRNA-132和miR-195相对表达水平、第1秒用力呼气容积(FEV_(1))占预计值的百分比(FEV_(1)%)、FEV_(1)/用力呼气容积(FVC)及肺动脉收缩压(sPAP)。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析循环血miRNA-132和miRNA-195对COPD相关PH的预测价值;采用Pearson相关分析评估循环血miR-132和miR-195与FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC及sPAP的相关性;采用多元logistic回归分析评估COPD相关PH发生的影响因素。结果观察组患者循环血miR-132相对表达水平及sPAP均高于对照组,循环血miRNA-195相对表达水平及FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC均低于对照组(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,循环血miRNA-132、miRNA-195预测COPD相关PHmiR的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.894(95%CI 0.863~0.947)、0.912(95%CI 0.882~0.955)。Pearson相关分析结果显示,COPD相关PH患者循环血miR-132与FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC均呈负相关,与sPAP呈正相关;COPD相关PH患者循环血miR-195与FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC均呈正相关,与sPAP呈负相关(P<0.001)。多元logistic回归分析结果显示,循环血miR-132和miR-195均为COPD相关PH发生的独立危险因素(P<0.05)。结论COPD相关PH患者循环血miR-132呈高表达,而miR-195呈低表达,且二者对COPD相关PH的预测价值良好,为其独立危险因素。

微小RNA-132在脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应中的表达变化

目的观察脂多糖（LPS）诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后微小RNA-132（miR-132）的动态变化，以初步探讨miR-132在肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用。方法将体外去致热源培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为空白对照组和以终浓度1mg／LLPS刺激3、6、12及24h组，分别收集各时间点上清液及细胞，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-0I（TNF-仅）、白细胞介素（IL-113和IL-6）的含量，采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞中miR-132的表达。结果与空白对照组相比，LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后3h上清液中TNF-α．含量（ng／L：364．83±46．29比34．07±8．62，P〈O．01）、IL-113含量（ng／L：153．83±43．67比32．334-10．62，P〈0．05）、IL-6含量（ng／L：183．854-43．52比42．62±11．21，P〈0．05）即明显升高，随时间延长均逐渐升高至12h达峰值（TNF-α：605．09±57．13，IL-1B：377．09±28．55，IL-6：558．04±77．45，均P〈O．01），24h时均有所下降（TNF-α：281．95±41．61，IL-18：263．17±51．36，IL-6：438．74±79．94），但仍显著高于空白对照组（均P〈0．01）。LPS刺激后3h，miR-132表达水平较空白对照组上调了（1．12±0．11）倍（P=0．995），6、12、24hmiR-132表达较空白对照组分别上调了（5．98±0．65）、（7．64±0．53）和（8．92±0．83）倍（均P〈0．01）。结论LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后，miR-132表达随时间延长逐步上调，其可能参与调控大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应。

微小RNA-132对体内外肝癌细胞侵袭和转移的影响

目的观察微小RNA-132（miR-132）对体内外人肝癌细胞侵袭和转移的影响，初步探讨其作用机制。方法实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应（实时-qPCR）检测miR-132在4种肝癌细胞株（MHCC97H、HCCLYH、MHCC97L和SMMC-7721）、人正常肝细胞株HL-7702以及20例发生转移的肝癌组织和25例未发生转移肝癌组织中的表达。采用划痕实验、Transwell小室实验和经裸鼠尾静脉注射肝癌细胞形成的肝癌肺转移模型检验转染miR-132后对体内外肝癌MHCC97H细胞侵袭和转移的影响。蛋白印迹检测体外MHCC97H细胞中钙黏蛋白E（E-cadherin）、钙黏蛋白α（α-eadhefin）、波形蛋白（vimentin）、纤连蛋白（fibronectin）和锌指E盒结合同源盒蛋白2（zincfingerE-boxbindingho-meoboxprotein2，ZEB2）蛋白的表达。免疫组织化学法检测肝癌肺转移灶组织中ZEB2的表达。结果miR．132在4种肝癌细胞株中的表达均明显低于人正常肝细胞（P〈0．05），在伴转移肝癌组织中miR-132的表达明显低于未转移肝癌组织，差异有统计学意义（P〈0．05）。在体外实验，转染组细胞中miR-132的表达明显升高，细胞迁移和侵袭明显抑制，与对照组相比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。转染组细胞中E-cadherin和α-eadhefin蛋白表达上调，而vimentin、fibronectin和ZEB2蛋白的表达下调，与对照组相比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在体内实验中，转染组裸鼠肺转移灶数目明显减少，ZEB2蛋白表达下调。结论miR-132对体内外肝癌细胞侵袭和转移有明显抑制作用，有望成为肝癌治疗的新靶点。

lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-132-5p对帕金森病细胞损伤的保护机制

目的探究长链非编码RNA KCNQ1OT1(lncRNA KCNQ1OT1)靶向调控微小RNA-132-5p(miR-132-5p)对帕金森病细胞损伤的保护机制。方法SH-SY5Y细胞通过1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)诱导建立帕金森病细胞模型,检测SH-SY5Y细胞中lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达,验证lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p的调控关系。结果与Con组相比,MMP+组lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达量较高(P<0.05)。低表达lncRNA KCNQ1OT1、干扰miR-132-5p表达均可减轻MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及炎性损伤,抑制细胞死亡,lncRNA KCNQ1OT1靶向正调控miR-132-5p表达,miR-132-5p过表达逆转了lncRNA KCNQ1OT1低表达对MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤及凋亡。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-132-5p表达减轻了MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤,抑制了细胞凋亡。

血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平对慢性肾小球肾炎患者预后的预测价值

目的探讨血清微小RNA(miR)-181a-5p、miR-132-5p水平与慢性肾小球肾炎患者3年内预后的关系。方法选取2018年1月—2020年4月中国人民解放军联勤保障部队第九〇一医院肾内科收治的慢性肾小球肾炎患者128例作为慢性肾小球肾炎组(肾炎组)和体检健康者130例作为健康对照组(对照组)。检测2组肾功能指标、血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平;分析血清miR-181a-5p、miR-132-5p与肾功能指标的相关性,影响慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的因素,血清miR-181a-5p、miR-132-5p及二者联合预测慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的价值。结果与对照组比较,肾炎组血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平显著降低(t/P=47.860/<0.001、75.095/<0.001),血清尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、胱抑素C(CysC)水平显著升高,肾小球滤过率(eGFR)水平显著降低(t=27.103、16.387、37.145、47.506、28.550,P均<0.001);血清miR-181a-5p与miR-132-5p水平呈正相关,血清miR-181a-5p和miR-132-5p均与UA、BUN、Scr、CysC水平呈负相关,与eGFR水平呈正相关(r=0.572、-0.506、-0.514、-0.493、-0.627、0.605、-0.498、-0.546、-0.481、-0.609、0.612,P均<0.001);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清UA、BUN、SCr、CysC水平显著升高,eGFR、血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平显著降低(t=6.730、3.596、10.629、7.760、12.657、8.881、13.932,P均<0.001);高水平UA、高水平BUN、高水平SCr、高水平CysC、低水平eGFR、低水平miR-181a-5p、低水平miR-132-5p是影响慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的危险因素[OR(95%CI)=2.239(1.256~3.992)、2.768(1.237~6.194)、2.173(1.195~3.950)、1.806(1.204~2.709)、3.022(1.620~5.637)、2.565(1.349~4.879)、3.350(1.226~9.157)];血清miR-181a-5p、miR-132-5p及二者联合预测慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.832、0.801、0.904,其中二者联合预测的AUC显著高于各自单独预测AUC(Z/P=1.714/0.043、2.050/0.020)。结论慢性肾小球肾炎患者血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平较低,二者与肾功能关系密切,二者联合有助于评估患者3年内预后情况。

颅脑损伤患者血清miRNA-124、miRNA-132、NSE和S100B蛋白表达与病情严重程度的关系

目的探讨颅脑损伤患者血清微小RNA(miRNA)-124和miRNA-132与神经元特异性烯醇化酶(NSE)和中枢神经特异性蛋白(S100B)表达与病情严重程度相关性。方法选择颅脑损伤患者112例作为观察组,依据格拉斯哥昏迷评分(GCS)分为轻中度组78例与重度组34例;另选择健康体检者96例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定血清miRNA-124和miRNA-132水平;采用酶联免疫吸附法测定血清NSE和S100B水平。比较各组血清miRNA-124和miRNA-132水平变化,血清NSE和S100B水平变化;采用ROC曲线分析miRNA-124、miRNA-132、NSE和S100B对颅脑损伤预测价值;采用Pearson分析miRNA-124、miRNA-132、NSE、S100B与病情严重程度相关性。结果轻中度组和重度组血清miRNA-124 mRNA表达高于对照组,而血清miRNA-132 mRNA表达低于对照组(P<0.05);重度组血清miRNA-124 mRNA表达高于轻中度组,而血清miRNA-132 mRNA表达低于轻中度组(P<0.05)。轻中度组和重度组血清NSE和S100B水平高于对照组(P<0.05);重度组血清NSE和S100B水平高于轻中度组(P<0.05)。经ROC曲线分析,miRNA-124对颅脑损伤诊断敏感度为75.44%,特异度为43.64%;miRNA-132对颅脑损伤诊断敏感度为67.86%,特异度为35.71%;NSE对颅脑损伤诊断敏感度为86.76%,特异度为65.91%;S100B对颅脑损伤诊断敏感度为79.22%,特异度为62.86%。经Pearson相关性分析,miRNA-124、NSE和S100B与重度颅脑损伤呈线性正相关,而miRNA-132与重度颅脑损伤呈线性负相关(P<0.05)。结论颅脑损伤患者血清miRNA-124、NSE和S100B呈高表达,而miRNA-132呈低表达,且与患者病情严重程度密切相关。

基于Wnt/β-catenin通路探究上调miR-132对认知功能障碍模型大鼠的干预效果

目的 探究上调微小RNA-132(miR-132)对认知功能障碍模型大鼠的干预效果及相关机制。方法 选取40只雄性大鼠,10只为正常组,其余30只建立认知功能障碍模型,并分为模型组、下调组、上调组,下调组尾部静脉注射30 mg/kg下调(antago)miR-132,上调组尾部静脉注射30 mg/kg上调(ago)miR-132,正常组、模型组尾部静脉注射等量生理盐水。检测各组学习、记忆能力,RT-PCR法检测miR-132表达,免疫透射比浊法检测神经生长因子(NGF)β、S100β水平,原位末端标记方法(TUNEL)检测神经元细胞凋亡率,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、总抗氧化能力(TAOC)、过氧化脂质(LPO)水平,Western印迹法检测性别决定区Y框蛋白(SOX)2、无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)3a、β-连环蛋白(catenin)、人类重组蛋白(Beclin)-1、人微管相关蛋白轻链(LC)3-Ⅱ表达。结果 上调组达标所需训练次数、S100β水平、神经元细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、TAOC、LPO水平、Beclin-1、LC3-Ⅱ表达显著低于模型组、下调组(P<0.05)。上调组miR-132、SOX2、Wnt3a、β-catenin表达、NGFβ水平、记忆成绩显著高于模型组、下调组(P<0.05)。结论 上调认知功能障碍模型大鼠miR-132表达,大鼠学习、记忆能力有效改善,NGFβ、S100β水平受到调控,大鼠脑组织炎症反应、氧化应激损伤程度减轻,神经元细胞凋亡率下降,其机制可能是Wnt/β-catenin通路蛋白及自噬蛋白表达受到调控。

高血压性脑出血患者血清miR-132、miR-34a水平及其与预后的关系

目的探讨微小RNA-132(miR-132)、miR-34a在高血压性脑出血患者血清中的表达及其与预后的关系。方法选取2020年6月—2022年6月西南医科大学附属医院、四川绵阳四〇四医院神经外科治疗高血压性脑出血患者120例为观察组。根据患者病情严重程度分为轻度亚组32例、中度亚组58例和重度亚组30例;根据患者预后分为预后良好亚组76例和预后不良亚组44例。另选取同期医院健康体检者120例为健康对照组。检测各组血清miR-132、miR-34a水平;采用多因素Logistic回归分析高血压性脑出血患者预后的影响因素;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-132、miR-34a水平对高血压性脑出血患者预后的预测价值。结果与健康对照组比较,观察组血清miR-132、miR-34a水平显著升高(t/P=11.907/<0.001、12.148/<0.001);血清miR-132、miR-34a水平比较,重度亚组>中度亚组>轻度亚组(F/P=35.229/<0.001、33.573/<0.001);与预后良好亚组比较,预后不良亚组患者糖尿病、家族遗传史比例及收缩压、血清miR-132、miR-34a显著升高[χ^(2)(t)/P=11.666/<0.001、5.083/0.024、3.557/0.001、3.208/0.002、3.592/<0.001],格拉斯哥预后评分(GOS评分)显著降低(t/P=12.458/<0.001)。Logistic回归分析结果显示,miR-132高、miR-34a高、收缩压高、有糖尿病史是高血压性脑出血患者预后的危险因素[OR(95%CI)=2.077(1.352~3.190)、3.458(1.613~7.412)、1.528(1.104~2.116)、2.778(1.448~4.657)],GOS评分高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.682(0.501~0.928)];血清miR-132高、miR-34a高及二者联合预测高血压性脑出血患者预后的AUC分别为0.719、0.727、0.782,二者联合优于单独预测价值(Z/P=2.588/0.011、2.453/0.014)。结论高血压性脑出血患者血清miR-132、miR-34a水平显著上调,两者联合可较好地预测高血压性脑出血患者预后。

过表达miR-132对糖尿病视网膜病变Müller细胞的保护作用及相关机制

目的研究过表达微小RNA(miR)-132对糖尿病视网膜病变Müller细胞的保护作用及相关机制。方法选取10只SPF级大鼠,构建糖尿病视网膜病变模型,建模成功后分离出视网膜Müller细胞,做细胞培养。将Müller细胞分为对照组、沉默组、过表达组,对照组不进行任何处理,沉默组做miR-132沉默(miR-132 inhibitor)转染,过表达组做miR-132过表达(miR-132 mimic)转染。鉴定miR-132转染效率,对比细胞存活、凋亡情况,分析细胞肿瘤抑制因子(PTEN)/磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路蛋白表达情况。结果与对照组相比,沉默组miR-132表达明显降低,过表达组miR-132表达明显升高(P<0.05)。与沉默组相比,过表达组各时间点细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与沉默组相比,过表达组p-PTEN表达量明显降低,p-PI3K、p-AKT、p-促凋亡蛋白(Bad)、Bcl-2表达量明显升高(P<0.05)。结论过表达miR-132可经抑制糖尿病视网膜病变Müller细胞凋亡,增加存活率而发挥保护作用,其作用机制可能与调控PTEN/PI3K/AKT通路相关。

急性脑梗死病人血清miR-132和Ang-1水平变化及其与病情进展的关系

目的:探讨血清微小RNA(miR)-132和血管生成素-1(Ang-1)在急性脑梗死(ACI)病人中表达水平及其与疾病发生进展的关系。方法:选取2019年1月—2020年1月在我院进行治疗的105例急性脑梗死病人作为ACI组,入选同期进行体检的90名健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法测定两组血清miR-132表达水平,同时采用酶联免疫吸附法检测Ang-1表达水平,并进行Logistic多因素分析。利用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-132及Ang-1对急性脑梗死诊断的潜能。结果:与对照组相比,ACI组病人血清miR-132[(0.77±0.39)与(1.00±0.38)]和Ang-1[(1.11±0.35)ng/mL与(1.41±0.40)ng/mL]表达水平降低(P<0.05),且两者呈正相关(r=0.488,P<0.001)。随着脑组织梗死面积增加和神经功能损伤程度加重,ACI病人血清miR-132和Ang-1水平逐渐降低(P<0.05);经多因素Logistic回归分析,血清miR-132和Ang-1水平降低均是ACI发病的重要危险因素(P<0.05);经ROC曲线分析显示,miR-132诊断ACI的曲线下面积为0.835[95%CI(0.762,0.910),P<0.05)],敏感度为78.67%,特异度为73.64%,而Ang-1诊断ACI的曲线下面积为0.716[95%CI(0.616,0.735),P<0.05)],敏感度为68.50%,特异度为59.60%。结论:急性脑梗死病人血清miR-132和Ang-1表达水平均降低,且随着脑梗死面积的增加和神经功能缺损程度加重,两者表达水平逐渐下降。

miR-132基于PGC-1α/SIRT3信号通路对肺炎链球菌诱慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠的干预作用

目的分析微小RNA-132(miR-132)经过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α/去乙酰化酶3(PGC-1α/SIRT3)信号通路对肺炎链球菌诱慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)大鼠的干预作用,为临床上肺炎链球菌所致的AECOPD治疗提供新方向。方法选取60只大鼠,15只作为A组(正常),其余45只构建肺炎链球菌所诱导的AECOPD模型,完成后分为B组、C组、D组各15只。构建miR-132模拟物、miR-132抑制物,将稀释后的miR-132模拟物、miR-132抑制物分别注射于D组、C组肺部,A组、B组注射同剂量生理盐水。对比分析各组肺功能相关指标、外周血白细胞计数、中性粒细胞百分比计数、气道炎症反应情况以及肺组织PGC-1α/SIRT3信号通路蛋白表达情况。结果与A组相比,B组、C组大鼠肺组织miR-132表达降低,D组大鼠肺组织miR-132表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与A组相比,B组、C组、D组FEV0.3/FVC、PIF、PEF、肺组织PGC-1α、SIRT3蛋白表达量均降低,白细胞总数、中性粒细胞百分比计数、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与B组相比,C组FEV0.3/FVC、PIF、PEF、肺组织PGC-1α、SIRT3蛋白表达量均降低,白细胞总数、中性粒细胞百分比计数、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与B组相比,D组FEV0.3/FVC、PIF、PEF、肺组织PGC-1α、SIRT3蛋白表达量均升高,白细胞总数、中性粒细胞百分比计数、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与C组相比,D组FEV0.3/FVC、PIF、PEF、肺组织PGC-1α、SIRT3蛋白表达量均升高,白细胞总数、中性粒细胞百分比计数、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-132过表达可改善肺炎链球菌诱AECOPD大鼠气道炎症,修复肺损伤,分析其机制可能与激活PGC-1α/SIRT3信号通路PGC-1α上调SIRT3表达相关。

miR-132在上皮性卵巢癌中的表达及作用机制研究

目的分析微小RNA-132(miR-132)在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及其对上皮性卵巢癌细胞迁移与侵袭的作用机制。方法收集2018年10月—2020年2月蚌埠医学院第一附属医院妇瘤科手术切除的卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本36份,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢癌组织、癌旁组织中miR-132相对表达水平;体外培养人正常卵巢上皮细胞(IOSE80,正常对照组)和卵巢癌SKOV3细胞,对卵巢癌SKOV3细胞进行转染并分为空白对照组、LV-NC(阴性对照)组和LV-miR-132 mimic(模拟物)组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-132、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA相对表达水平,Transwell法检测各组细胞侵袭率,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,双荧光素酶报告基因检测miR-132与MAPK1靶向关系,蛋白免疫印迹法检测各组细胞MAPK1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白相对表达水平。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中miR-132相对表达水平显著降低(t/P=19.166/0.000)。与正常对照组比较,卵巢癌SKOV3细胞中miR-132相对表达水平显著降低(P<0.05),MAPK1 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞miR-132相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞侵袭率、各时间点迁移率、MAPK1 mRNA和蛋白、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达水平均显著降低(F/P=19.166/0.000,42.795/0.000,64.543/0.000,40.513/0.000,41.805/0.000,32.021/0.000,81.672/0.000,88.132/0.000)。miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组的荧光素酶相对活性低于miR-132 NC+MAPK1-Wt 3′-UTR组,miR-132 mimic+MAPK1-Mut 3′-UTR组的荧光素酶相对活性高于miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组(F/P=17.369/0.000)。结论miR-132在上皮性卵巢癌组织及细胞中均低表达,上调miR-132可能通过靶向下调MAPK1来抑制卵巢癌细胞迁移、侵袭。

丹参酮ⅡA对缺氧缺血性脑病新生大鼠海马组织中miR-132表达的调节作用及其机制

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对新生大鼠缺氧缺血性脑病的干预作用,并阐明其作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TanⅡA组和miR-132抑制剂(miR-132 antagomir)组,每组10只。大鼠双重结扎颈总动脉并放入缺氧舱建立缺血缺氧性脑病模型。TanⅡA组大鼠造模后腹腔注射TanⅡA注射液(24 mg·kg^(-1)),双侧脑室注射2μg miR-132阴性对照质粒(NC);假手术组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水;miR-132 antagomir组大鼠造模后腹腔注射TanⅡA注射液(24 mg·kg^(-1)),双侧脑室注射2μg miR-132 antagomir;各组大鼠连续注射7 d。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和荧光原位杂交检测各组大鼠海马组织中miR-132表达水平和表达强度,采用改良神经功能缺失评分评价各组大鼠神经功能,HE染色观察各组大鼠海马组织病理形态表现,TUNEL法检测各组大鼠海马组织中神经元细胞凋亡率,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠海马组织中单胺类神经递质水平,高尔基染色检测各组大鼠海马组织中树突棘密度,Western blotting法检测各组大鼠海马组织中突触后致密物95(PSD-95)、生长相关蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白2(MAP-2)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中miR-132表达水平和表达强度明显降低(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA组大鼠海马组织中miR-132表达水平和表达强度明显升高(P<0.05);与TanⅡA组比较,miR-132 antagomir组大鼠海马组织中miR-132表达水平和表达强度明显降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺失评分明显升高(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA组大鼠神经功能缺失评分明显降低(P<0.05);与TanⅡA组比较,miR-132 antagomir组大鼠神经功能缺失评分明显升高(P<0.05)。HE染色,假手术组大鼠海马组织无损伤;与假手术组比较,模型组大鼠海马组织损伤严重;与模型组比较,TanⅡA组大鼠海马组织损伤明显改善;与TanⅡA组比较,miR-132 antagomir组大鼠海马组织损伤严重。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织神经元凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA组大鼠海马组织神经元凋亡率明显降低(P<0.05);与TanⅡA组比较,miR-132 antagomir组大鼠海马组织神经元凋亡率明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA组大鼠海马组织中去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺水平明显升高(P<0.05);与TanⅡA组比较,miR-132 antagomir组大鼠海马组织中去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺水平明显降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中树突棘密度明显降低(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA组大鼠海马组织中树突棘密度明显升高(P<0.05);与TanⅡA组比较,miR-132 antagomir组大鼠海马组织中树突棘密度明显降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中PSD-95、GAP-43、MAP-2和BDNF蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA组大鼠海马组织中PSD-95、GAP-43、MAP-2和BDNF蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与TanⅡA组比较,miR-132 antagomir组大鼠海马组织中PSD-95、GAP-43、MAP-2和BDNF蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:TanⅡA可上调缺氧缺血性脑病新生大鼠海马组织中miR-132表达,改善新生大鼠神经功能和海马组织病理损伤,其机制可能与抑制海马神经元凋亡以及增加海马神经递质水平、树突棘密度、突触前蛋白、MAP-2和BDNF蛋白表达有关。