动态心电图联合血清组蛋白去乙酰化酶4和微小RNA-139-5p在急性心肌梗死诊断和预后评估中的应用价值

目的探究动态心电图(DCG)联合血清组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4),微小RNA-139-5p(miR-139-5p)在急性心肌梗死(AMI)诊断和预后评估中的应用价值。方法选取2021年1月至2023年1月衡水市人民医院收治的AMI患者102例,根据出院后6个月内是否发生心血管不良事件(MACE)分为良好组66例和不良组36例;另选同期健康体检者70例为对照。所有研究对象行DCG检查;采用酶联免疫法检测血清HDAC4水平,qRT-PCR法检测血清miR-139-5p表达。ROC曲线预测血清HDAC4、miR-139-5p及DCG联合血清HDAC4、miR-139-5p对AMI诊断及预后的价值;四表格法分析DCG对AMI诊断及预后的价值。结果AMI患者血清HDAC4水平显著低于健康体检者,miR-139-5p水平显著高于健康体检者(P<0.05)。良好组患者血清HDAC4水平高于不良组患者,miR-139-5p水平低于不良组患者(P<0.05)。HDAC4诊断AMI的AUC为0.789,敏感度为63.73%,特异度为82.86%;miR-139-5p诊断AMI的AUC为0.791,敏感度为73.53%,特异度为81.43%;DCG诊断AMI的AUC为0.782,敏感度为73.53%,特异度为82.86%。DCG联合血清HDAC4、miR-139-5p水平诊断AMI的AUC为0.916,显著高于单项检测(Z_(HDAC4-联合)=3.735,P<0.001,ZmiR-139-5p-联合=3.467,P<0.001;ZDCG-联合=4.444,P<0.001)。HDAC4诊断AMI患者预后的AUC为0.898,敏感度为80.56%,特异度为86.36%;miR-139-5p诊断AMI患者预后的AUC为0.857,敏感度为77.78%,特异度为80.30%;DCG诊断AMI患者预后的AUC为0.790,敏感度为77.78%,特异度为80.30%;DCG联合血清HDAC4、miR-139-5p水平诊断AMI患者预后的AUC为0.931,显著高于单项检测(Z_(HDAC4-联合)=2.005,P=0.045,ZmiR-139-5p-联合=2.707,P=0.007;ZDCG-联合=3.969,P<0.001)。结论DCG联合血清HDAC4、miR-139-5p水平在AMI的诊断和预后评估中具有重要应用价值。

lncRNA CYTOR靶向miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节因子RNA(CYTOR)靶向微小RNA-139-5p(miR-139-5p)对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养三阴性乳腺癌细胞株HCC1806,取传3代、对数生长期、生长状态良好的细胞进行后续实验。通过starBase数据库预测lncRNA CYTOR与miR-139-5p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-139-5p的靶向关系。取HCC1806细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组。阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组分别转染NC mimics、lncRNA CYTOR siRNA、miR-139-5p mimics、lncRNA CYTOR siRNA+miR-139-5p mimics,转染48 h更换新鲜培养基,继续培养24 h。空白对照组常规培养,不予转染。收集各组上述细胞,采用RT-qPCR法检测miR-139-5p、性别决定区Y框蛋白8(SOX8)mRNA表达,采用EdU法检测细胞增殖能力,采用Western blotting法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)、SOX8表达。结果经starBase数据库预测,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在靶向调控关系。lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量均高于空白对照组和阴性对照组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05);lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量高于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组(P均<0.05);而空白对照组与阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组与miR-139-5p过表达组miR-139-5p、SOX8 mRNA相对表达量以及EdU阳性细胞比例和ABCG2、SOX8蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论lncRNA CYTOR可通过靶向miR-139-5p调控ABCG2和SOX8表达,从而促进三阴性乳腺癌细胞增殖。

AFAP1-AS1靶向调控微小RNA-139-5p及对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1(AFAP1-AS1)对胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法使用GEPIA分析来自TCGA数据库和GTEx项目中胰腺癌和正常组织的AFAP1-AS1水平,Kaplan-Meier Plotter数据库分析AFAP1-AS1与胰腺癌患者临床预后的关系。采用实时定量PCR(qPCR)检测人胰腺导管细胞(hTERT-HPNE)和胰腺癌细胞(AsPC-1、PANC-1、CFPAC-1、BxPC-3和SW1990)的AFAP1-AS1水平,脂质体介导AFAP1-AS1特异性小干扰RNA(si-AFAP1-AS1)转染SW1990细胞(si-AFAP1-AS1组)并设转染阴性对照无关序列的si-NC组和仅经脂质体处理而未行转染的对照组;MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测SW1990细胞增殖、迁移和侵袭情况,双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与微小RNA-139-5p(miR-139-5p)的靶向关系。结果胰腺癌组织的AFAP1-AS1水平高于正常组织(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析结果显示,AFAP1-AS1水平与胰腺癌的总生存期无关(HR=1.53,95%CI:0.98~2.39,P=0.057),而与无复发生存期有关(HR=10.08,95%CI:1.35~75.19,P=0.006),其中AFAP1-AS1高水平者的复发风险升高。胰腺癌细胞的AFAP1-AS1水平均高于hTERT-HPNE细胞(P<0.05),选取AFAP1-AS1水平最高的SW1990细胞进行后续的干扰实验。与对照组和si-NC组相比,si-AFAP1-AS1组SW1990细胞的增殖活性在处理72 h后降低而miR-139-5p水平升高(P<0.05);si-AFAP1-AS1组的穿膜细胞数和划痕愈合率分别为(61.818±5.036)个和(21.542±2.310)%,低于对照组的(182.851±11.027)个和(81.849±4.473)%及si-NC组的(190.352±11.228)个和(78.764±3.291)%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。野生型AFAP1-AS1序列和miR-139-5p模拟物共转染细胞较突变型AFAP1-AS1和miR-139-5p模拟物共转染的荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论胰腺癌组织和细胞中AFAP1-AS1高表达且可能通过靶向miR-139-5p来促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,进而加速癌症进程,AFAP1-AS1/miR-139-5p轴有望成为胰腺癌诊治的潜在靶点。

宫颈癌患者血清miR-139、miR-622表达水平与病理特征、预后的关系

目的探讨血清微小RNA(miR)-139、miR-622表达水平与宫颈癌患者病理特征及预后的关系。方法选取2016年2月至2018年2月在中国人民解放军海军第九七一医院进行治疗的100例宫颈癌初诊患者作为宫颈癌组,另选取同期在中国人民解放军海军第九七一医院体检的60例健康者作为对照组,收集所有研究对象临床病理特征资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-139、miR-622的表达水平。以宫颈癌组血清miR-139、miR-622表达水平的均值为界限,将宫颈癌组患者分为miR-139高表达组、低表达组和miR-622高表达组、低表达组。对所有宫颈癌患者随访5年,根据随访结果,将患者分为生存组与死亡组,比较两组相关临床资料。绘制Kaplan-Meier生存曲线分析不同血清miR-139、miR-622表达水平对患者预后的影响。采用多因素Logistic回归分析miR-139、miR-622对宫颈癌患者预后的影响。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-139、miR-622单独及联合检测对宫颈癌患者预后的预测价值。结果宫颈癌组血清miR-139表达水平明显低于对照组,miR-622表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-139高表达组纳入24例患者、低表达组纳入76例患者;miR-622高表达组纳入70例患者、低表达组纳入30例患者。miR-139高表达组、低表达组国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-622高表达组、低表达组FIGO分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌患者5年随访率100%,其中生存患者78例,纳入生存组,死亡患者22例,纳入死亡组。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,血清miR-139低表达组5年生存率[73.68%(56/76)]低于高表达组[91.67%(22/24)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.279,P=0.039);miR-622高表达组5年生存率[72.86%(51/70)]低于低表达组[90.00%(27/30)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.791,P=0.029)。死亡组血清miR-139表达水平明显低于生存组,血清miR-622表达水平明显高于生存组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-622高表达是宫颈癌患者死亡的危险因素(P<0.05),miR-139高表达是宫颈癌患者死亡的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-139、miR-622单独及联合预测宫颈癌患者预后的曲线下面积分别为0.826、0.828、0.889,联合预测效果优于单独预测(Z二者联合-miR-139=2.085,P=0.037;Z二者联合-miR-622=2.216,P=0.027)。结论宫颈癌患者血清miR-139表达水平明显降低,miR-622表达水平明显升高,其表达水平与患者FIGO分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度有关,且miR-139、miR-622均是宫颈癌患者预后的影响因素,检测二者表达水平对预测宫颈癌患者预后具有一定价值。

超声造影定量参数联合血清微小RNA-139-5p、微小RNA-15a检测在卵巢浆液性囊腺癌病人中应用价值

目的分析超声造影定量参数联合血清微小RNA-139-5p(miR-139-5p)、微小RNA-15a(miR-15a)检测在卵巢浆液性囊腺癌病人中应用价值及意义。方法选取2017年6月至2019年9月重庆市北碚区中医院收治的92例卵巢浆液性囊腺癌病人为腺癌组及92例卵巢浆液性囊腺瘤病人为腺瘤组。行超声造影检查与血清miR-139-5p、miR-15a水平检测,观察超声造影定量参数(始增时间、达峰时间、增强强度)、血清miR-139-5p、miR-15a水平两组间差异,多因素logistic回归分析各指标与卵巢浆液性囊腺癌的相关性,ROC曲线评估其对卵巢浆液性囊腺癌的诊断效能,Pearson相关分析各指标与淋巴结转移的关系。结果腺癌组超声造影始增时间、达峰时间、血清miR-15a水平分别为(14.16±2.51)s、(22.28±4.64)s、(0.04±0.02),均低于腺瘤组的(17.48±3.09)s、(29.30±4.97)s、(0.11±0.06)(P<0.05),超声造影增强强度与血清miR-139-5p水平分别为(89.24±12.83)dB、(8.76±2.90),均高于腺瘤组的(73.38±10.74)dB、(4.09±2.52)(P<0.05);logistic回归分析显示,超声造影始增时间、达峰时间、增强强度、血清miR-139-5p、miR-15a均与卵巢浆液性囊腺癌具有相关性(P<0.05);ROC曲线显示,超声造影定量参数与血清指标联合诊断卵巢浆液性囊腺癌的AUC为0.896,高于各单一指标,其诊断敏感度为90.22%,特异度为78.26%;有淋巴结转移卵巢浆液性囊腺癌病人超声造影始增时间、达峰时间、血清miR-15a水平分别为(12.53±2.92)s、(19.84±3.69)s、(0.02±0.01),均低于无淋巴结转移病人的(15.59±2.24)s、(24.42±4.87)s、(0.06±0.03),超声造影增强强度、血清miR-139-5p水平分别为(97.35±14.06)dB、(10.14±3.08),均高于无淋巴结转移病人(82.12±11.63)dB、(7.55±2.86)(P<0.05);Pearson相关性分析显示超声造影始增时间、达峰时间及血清miR-15a水平与卵巢浆液性囊腺癌病人淋巴结转移呈负相关,超声造影增强强度及血清miR-139-5p水平与卵巢浆液性囊腺癌病人淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。结论应用超声造影定量参数联合血清miR-139-5p、miR-15a检测可显著提升卵巢浆液性囊腺癌早期诊断效能,且其水平与淋巴结转移密切相关,可为临床诊治提供可靠依据。

微小RNA-139-5p对AS患者血管平滑肌细胞增殖和迁移作用的研究

目的:检测微小RNA-139-5p(miR-139-5p)在动脉粥样硬化(AS)患者中的表达情况,分析miR-139-5p的临床价值及对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)生物学功能的调控作用。方法:采用荧光定量PCR技术检测112例AS患者(AS组)和78例健康志愿者(对照组)血清miR-139-5p的表达情况,用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估miR-139-5p对AS的诊断价值。采用CCK-8实验和Transwell实验分析miR-139-5p对HVSMCs增殖和迁移能力的影响。结果:与对照组相比,AS组患者miR-139-5p的表达明显下调(P<0.001),同时AS组患者血清miR-139-5p的表达水平与颈动脉内中膜厚度(CIMT)呈负相关(r=-0.7579,P<0.001)。miR-139-5p诊断AS的ROC曲线下面积(AUC)为0.888,具有较高敏感性(86.6%)和特异性(84.6%)。miR-139-5p低表达会促进HVSMCs的增殖和迁移能力,相反miR-139-5p过表达会显著地抑制HVSMCs的增殖和迁移能力(P<0.001)。结论:miR-139-5p的低表达可能是AS的潜在诊断标志物,过表达miR-139-5p可能通过抑制HVSMCs的增殖和迁移发挥改善AS的潜能。

结肠癌患者血清微小RNA-193a-5p和微小RNA-139-5p表达检测及其对预后的影响

目的:检测结肠癌患者血清微小RNA-193a-5p(miR-193a-5p)和微小RNA-139-5p(miR-139-5p)表达水平,分析其对预后的影响。方法:选取结肠癌患者109例为结肠癌组,选取同期体检健康者100例为健康组。收集两组临床资料,采用实时荧光定量PCR检测血清miR-193a-5p和miR-139-5p的表达。分析miR-193a-5p和miR-139-5p表达与结肠癌患者临床病理特征的关系。采用Cox风险比例模型分析结肠癌患者预后的影响因素。绘制Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果:结肠癌组miR-193a-5p和miR-139-5p表达明显低于健康组(均P<0.001)。结肠癌患者血清miR-193a-5p和miR-139-5p表达与性别、年龄、病理分型、肿瘤部位、肿瘤直径无明显相关性(均P>0.05),与临床分期、分化程度、局部浸润深度和淋巴结转移具有明显相关性(均P<0.001)。Cox风险比例模型分析结果显示,临床分期、分化程度、局部浸润深度、淋巴结转移、miR-193a-5p和miR-139-5p是结肠癌患者预后的影响因素(均P<0.05)。miR-193a-5p低表达组患者5年总生存率明显低于miR-193a-5p高表达组,miR-139-5p低表达组患者5年总生存率明显低于miR-139-5p高表达组(均P<0.05)。结论:血清miR-193a-5p和miR-139-5p在结肠癌患者中表达均明显降低,可能在结肠癌中发挥着抑癌基因的作用。检测血清中miR-193a-5p和miR-139-5p的表达水平有助于结肠癌的诊断及预后评估,可能成为结肠癌早期诊断和预后判断的分子标志物。

长链非编码前列腺癌相关转录因子6靶向微小RNA-139-3p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录因子6(PCAT6)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响和分子机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测20例骨肉瘤组织和与其对应的癌旁组织中PCAT6和微小RNA-139-3p(miR-139-3p)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证PCAT6对miR-139-3p的靶向调控关系。将PCAT6小干扰RNA(si-PCAT6)、miR-139-3p模拟物(miR-139-3p mimics)分别转染骨肉瘤细胞SAOS2,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SAOS2细胞增殖活力,流式细胞术检测SAOS2细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和P21、的表达水平。将si-PCAT6和miR-139-3p抑制物(anti-miR-139-3p)共转染至SAOS2细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移侵袭能力以及凋亡变化。结果与瘤旁组织相比,骨肉瘤组织中PCAT6的表达水平[(2.76±0.27)比(1.01±0.09)]显著升高,miR-139-3p的表达水平[(0.51±0.05)比(1.00±0.08)]显著降低(P<0.05)。miR-139-3p是PCAT6的靶基因,PCAT6靶向负性调控miR-139-3p表达。抑制PCAT6表达或过表达miR-139-3p均可下调SAOS2细胞CyclinD1和Bcl-2蛋白表达,上调p21和Bax蛋白表达,降低细胞活力,促进细胞凋亡(P<0.05)。抑制miR-139-3p表达可逆转si-PCAT6对骨肉瘤SAOS2细胞增殖抑制和凋亡的影响(P<0.05)。结论lncRNA PCAT6在骨肉瘤组织中表达上调,抑制miR-139-3p通过靶向miR-139-3p抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡。

上皮性卵巢癌组织中miR-21-5p、miR-29-3p、miR-139-5p表达变化及意义

目的观察上皮性卵巢癌(EOC)组织中miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p的表达变化,并探讨其临床意义。方法收集卵巢组织标本182例,其中正常卵巢组织56例、良性上皮性肿瘤(BEOT)42例、EOC 84例。采用实时荧光定量PCR技术测定组织标本中的miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p,并分析其与EOC患者临床病理特征的关系。结果与正常卵巢组织、BEOT组织相比,EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p相对表达量增加,miR-139-5p相对表达量降低(P均<0.05);正常卵巢组织与BEOT组织比较,差异无统计学意义。与中高度分化、Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移的EOC组织相比,低分化、Ⅲ~Ⅳ期和有淋巴结转移的EOC组织miR-21-5p和miR-29-3p高表达者多,miR-139-5p高表达者少(P均<0.05)。结论 EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p表达上调并可能发挥促癌作用,miR-139-5p表达下调并可能具有一定抑癌作用,三者均可作为EOC的预后指标或者治疗靶标。

非小细胞肺癌组织miR-139-5p和CTNNB1蛋白表达与放射敏感性的关系

目的探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-139-5p(miR-139-5p)、钙黏蛋白相关蛋白(CTNNB1)表达与患者放射敏感性的关系。方法选取2017年2月—2021年5月于唐山市人民医院放化七科和肿瘤内科就诊的非小细胞肺癌患者癌组织156例为研究对象(研究组);另选取非小细胞肺癌患者86例癌旁正常肺组织作为对照组;根据放射治疗敏感性评定标准,将研究组患者分为进展亚组(n=28)、稳定亚组(n=42)、缓解亚组(n=86)。采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测肺癌组织、癌旁正常肺组织miR-139-5p、CTNNB1蛋白表达;分析非小细胞肺癌患者癌组织miR-139-5p、CTNNB1蛋白表达与临床病理特征及放射敏感性的关系;Spearman法分析非小细胞肺癌患者癌组织miR-139-5p表达水平与CTNNB1蛋白阳性表达的相关性;Logistic回归分析影响非小细胞肺癌患者放射敏感性的因素。结果研究组癌组织miR-139-5p表达水平低于对照组(t/P=15.204/0.000),CTNNB1蛋白阳性表达率高于对照组(χ^(2)/P=59.206/0.000);miR-139-5p低表达患者中有淋巴结转移、组织分化程度低、TNM分期Ⅳ期患者比例高于miR-139-5p高表达患者(χ^(2)/P=16.006/0.000、24.669/0.000、22.213/0.000);CTNNB1蛋白阴性表达患者中有淋巴结转移、组织分化程度低、TNM分期Ⅳ期患者比例低于CTNNB1蛋白阳性表达患者(χ^(2)/P=21.922/0.000、22.959/0.000、30.108/0.000);非小细胞肺癌患者癌组织miR-139-5p表达水平与CTNNB1蛋白阳性表达呈负相关(r/P=-0.503/0.000);缓解亚组、稳定亚组、进展亚组miR-139-5p低表达率及CTNNB1蛋白阳性表达率依次升高(χ^(2)/P=25.762/0.000、18.721/0.000);CTNNB1蛋白阳性表达、TNM分期高是影响放射敏感性的独立危险因素[OR(95%CI)=2.872(1.546~5.335)、2.732(1.459~5.115)],miR-139-5p高表达是影响放射敏感性的保护因素[OR(95%CI)=0.845(0.750~0.952)]。结论非小细胞肺癌组织中miR-139-5p表达下调、CTNNB1蛋白阳性表达上调,且一定程度上影响放射敏感性。

miR-139-3p在低氧诱导凋亡的心肌细胞中的表达及其作用研究

目的:探讨微小RNA-139-3p(miR-139-3p)在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡模型中的表达及其意义。方法:在正常和低氧条件下,采用RT-qPCR检测乳大鼠原代心肌细胞miR-139-3p的表达水平;进一步将miR-139-3p抑制剂和miR-139-3p抑制剂阴性对照转染到心肌细胞后,将细胞置于37℃密闭的缺氧盒中(95%N_2和5%CO_2)培养12 h,采用流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡情况。结果:低氧培养12 h后,与正常培养组(n=3)比较,低氧组(n=3)心肌细胞中的miR-139-3p相对表达量显著上调(P<0.05)。低氧组心肌细胞凋亡率也显著升高(P<0.05)。与miR-139-3p抑制剂阴性对照组(n=3)比较,miR-139-3p抑制剂组(n=3)的心肌细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论:miR-139-3p在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡模型中表达上调。抑制miR-139-3p的表达能降低低氧诱导的心肌细胞凋亡。

miR-139下调Notch1/Hes1通路促进骨髓间充质干细胞归巢于哮喘大鼠肺组织抑制Th2细胞炎症反应

目的研究微小RNA-139(miR-139)调控Notch信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSC)归巢及哮喘气道炎症的影响。方法24只SD大鼠随机均分为正常对照组、模型组、BMSC组。采用卵清蛋白致敏建立哮喘模型,尾静脉输注BMSC。HE染色观察肺组织病变情况,流式细胞术检测肺组织BMSC标志物CXC趋化因子受体4(CXCR4)的表达,免疫荧光染色法观察支气管上皮细胞CXCR4表达,ELISA检测肺组织1型辅助T(Th1)细胞炎症因子γ干扰素(IFN-γ)、Th2细胞炎症因子白细胞介素4(IL-4)的水平,Western blot法检测肺组织缺刻基因1(Notch1)、锯齿样基因1(Jagged1)、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组肺组织CXCR4、IL-4、Notch1、Hes1表达升高,Th1细胞/Th2细胞比值、miR-139水平降低。BMSC输注后发现,与模型组比较,BMSC组肺组织、支气管上皮细胞CXCR4表达升高,Th1细胞/Th2细胞比值、miR-139水平升高。Notch1、Hes1表达降低。相关性分析显示,肺组织CXCR4表达与支气管上皮细胞CXCR4表达、Th1细胞/Th2细胞比值、miR-139呈正相关。支气管上皮细胞CXCR4表达与Th1细胞/Th2细胞、miR-139呈正相关,与Notch1呈负相关。Th1细胞/Th2细胞比值与miR-139呈正相关。结论miR-139可下调Notch通路,促进BMSC归巢于哮喘肺组织,通过免疫调节抑制Th2细胞炎症反应。

结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平及肠道菌群的变化及其与复发转移的关系

目的分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与临床病理的关系、肠道菌群的变化及其与复发转移的关系。方法选取2019年3月至2021年3月入该院接受根治术治疗的结肠癌患者共126例作为结肠癌组,另选取同期在该院接受体检的体检健康者共83例作为健康对照组。观察两组血清miR-139-3p和miR-377-3p的表达水平及肠道菌群状态情况,对比不同临床特征的结肠癌患者血清指标表达水平,对比不同复发转移情况的结肠癌患者肠道菌群的变化情况,分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与其临床病理及肠道菌群表达的相关性。结果结肠癌组血清miR-139-3p和miR-377-3p较健康对照组均呈更高表达,差异有统计学意义(均P<0.05);结肠癌组术前、术后的双歧杆菌数量均低于健康对照组,大肠杆菌数量均高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);结肠癌组中发生复发转移、低分化、临床分期处于Ⅲ期的患者血清miR-139-3p和miR-377-3p呈更高表达,差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p表达水平与结肠癌患者临床分期、复发转移均呈正相关,与临床分化程度呈负相关(均P<0.05);复发转移组患者双歧杆菌数量较未复发转移组明显更低,大肠杆菌数量较未复发转移组相比明显升高,差异有统计学意义(均P<0.05);Pearson相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p与结肠癌患者大肠杆菌数量呈正相关,上述两项指标与双歧杆菌数量呈负相关(均P<0.05)。结论结肠癌根治术后双歧杆菌属高表达和大肠杆菌属低表达意味着结肠癌患者复发转移风险更低,血清miR-139-3p和miR-377-3p与结肠癌患者临床分期、肿瘤分化程度、复发转移及肠道菌群变化均密切相关,后续临床针对结肠癌患者可通过监测上述两项血清指标及肠道菌群来辅助评估患者临床病情严重程度,对优化完善诊疗方案、降低患者复发转移风险具有积极作用。

脑脊液miR-139、miR-22水平对肺腺癌脑转移瘤的诊断价值研究

目的分析脑脊液微小RNA-139(miR-139)、微小RNA-22(miR-22)水平对肺腺癌脑转移瘤的诊断价值。方法选取2017年6月至2021年12月于该院收治并确诊为肺腺癌脑转移瘤患者80例作为肺腺癌脑转移组,单纯肺腺癌无转移患者60例作为肺腺癌无转移组。采用实时荧光定量PCR检测所有患者脑脊液中miR-139、miR-22水平。分析肺腺癌脑转移瘤患者脑脊液中miR-139、miR-22水平与临床病理参数的关系及这两个微小RNA水平的相关性,影响肺腺癌患者发生脑转移瘤的危险因素,以及miR-139、miR-22对肺腺癌患者发生脑转移瘤的诊断价值。体外培养肺腺癌细胞A549,并随机分为对照(Control)组、miR-139模拟物(mimic)组、miR-22 mimic组、miR-139抑制物(inhibitor)组、miR-22 inhibitor组,检测各组miR-139、miR-22水平及细胞侵袭和迁移能力。结果与肺腺癌无转移组相比,肺腺癌脑转移组患者脑脊液中miR-139、miR-22水平显著降低(P<0.05)。肺腺癌脑转移瘤患者脑脊液中miR-139、miR-22水平与原发肿瘤数目、原发肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。肺腺癌脑转移瘤患者脑脊液中miR-139与miR-22水平呈正相关(P<0.05)。miR-139低表达、miR-22低表达是影响肺腺癌患者发生脑转移瘤的独立危险因素(P<0.05)。脑脊液中miR-139、miR-22单独及二者联合诊断肺腺癌患者发生脑转移瘤的曲线下面积分别为0.827、0.795、0.953。过表达miR-139、miR-22可显著抑制A549细胞的侵袭和迁移,而抑制miR-139、miR-22则可以观察到相反的结果(P<0.05)。结论肺腺癌脑转移瘤患者脑脊液中miR-139、miR-22均呈低水平,二者对肺腺癌脑转移瘤的诊断均具有一定价值。

MiR-139-5p靶向RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知障碍的影响

目的探究微小RNA(miR)-139-5p靶向受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合系列蛋白激酶结构域蛋白(MLKL)信号通路对慢性脑低灌注(CCH)大鼠认知障碍的影响。方法将60只SPF级SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、miR-NC组、miR-139-5p mimic组、miR-139-5p mimic+RIPK1抑制剂Nec-1组(miR-139-5p mimic+Nec-1组),每组12只。除Sham组外,其余组均采用永久性结扎双侧颈总动脉构建CCH模型。采用新物体识别实验、Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠海马组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素6(IL-6)水平。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测大鼠海马组织miR-139-5p及RIPK1、RIPK3、MLKL m RNA表达。Western blot法检测大鼠海马组织RIPK1、RIPK3、MLKL、突触素(SYP)、突触后密度蛋白95(PSD95)、α-突触核蛋白(α-SYN)蛋白的表达。双萤光素酶报告基因实验验证miR-139-5p和RIPK1的靶向关系。结果与Sham组相比,Model组大鼠分辨系数降低,目标象限停留时间缩短,海马组织miR-139-5p、GSH-Px、SOD水平降低,SYP、PSD95蛋白表达降低(P<0.05),逃避潜伏期延长,海马组织MDA、TNF-α、IL-6水平升高,RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA和蛋白、α-SYN蛋白表达升高(P<0.05)。与Model组、miR-NC组相比,miR-139-5p mimic组相关指标的表达趋势与上述相反(P<0.05)。Nec-1进一步促进了上调miR-139-5p表达对CCH大鼠认知功能的恢复(P<0.05)。miR-139-5p和RIPK1存在结合位点。结论上调miR-139-5p可能通过靶向抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路减轻CCH大鼠的认知障碍。

miR-139调控巨噬细胞极化在过敏性哮喘中的作用

目的:研究微小RNA-139(miR-139)调控巨噬细胞极化在过敏性哮喘小鼠中的作用。方法:6~8周龄的雌性野生型C57BL/6小鼠随机分为正常对照组和哮喘模型组。通过尘螨蛋白(Df1)联合氢氧化铝佐剂雾化攻击的方法诱导致敏和激发C57BL/6小鼠建立过敏性哮喘模型,对照组小鼠腹腔注射PBS进行致敏和雾化吸入磷酸盐缓冲液激发。末次雾化吸入24 h后获取小鼠肺泡灌洗液(BALF),采用qRT-PCR检测过敏性哮喘小鼠BALF中miR-139表达水平;分别静脉注射miR-139 antagomir及其对照PBS至过敏性哮喘小鼠;通过HE及PAS染色观察过敏性哮喘小鼠气管周围炎症细胞浸润水平;通过小鼠肺功能仪,观察各组小鼠的气道高反应性;通过流式细胞术检测气道组织中相关炎性细胞数目;通过ELISA检测BALF上清液炎症细胞因子的表达;采用流式细胞术检测BALF中M1/M2巨噬细胞比例变化;qRT-PCR检测BALF细胞M1/M2巨噬细胞相关标志物。结果:过敏性哮喘小鼠BALF中miR-139表达增高(P<0.05);抑制miR-139表达水平后过敏性哮喘小鼠气道炎症程度减轻,BALF中炎性细胞及炎性细胞因子表达水平下降(P<0.05);BALF中M2型巨噬细胞比例及其相关标志物表达减少。结论:干扰miR-139表达水平可抑制M2型巨噬细胞极化,有效降低Df1诱导的小鼠过敏性哮喘易感性。

外周血miR-29b、miR-139水平与Th1/Th2的相关性及对银屑病的诊断价值

目的探讨外周血微小RNA(miR)-29b、miR-139水平与外周血辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2的相关性及对银屑病的诊断价值。方法选取2020年4月至2021年4月在该院入院治疗的89例银屑病患者为银屑病组,根据银屑病疾病分期将患者分为活动期37例和静止期52例,根据皮损严重程度分为轻度组24例、中度组36例和重度组29例。另选取同期来该院进行体检的体检健康者60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测外周血miR-29b、miR-139及T细胞转录因子(T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA3)水平;流式细胞仪检测外周血Th1、Th2细胞比例;酶联免疫吸附试验检测血清Th1、Th2相关细胞因子水平;Pearson相关分析银屑病患者外周血miR-29b、miR-139水平与Th1/Th2、T-bet、GATA3的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血miR-139、miR-29b水平对重度银屑病的诊断价值。结果银屑病组miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平、Th1细胞比例、Th1/Th2均高于对照组(P<0.05),miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例均低于对照组(P<0.05);活动期患者miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平、Th1细胞比例、Th1/Th2高于静止期患者(P<0.05),miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例低于静止期患者(P<0.05);Th1细胞比例、Th1/Th2、miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平随着皮损严重程度增加呈升高趋势,Th2细胞比例、miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平随着皮损严重程度增加呈降低趋势(P<0.05);银屑病患者外周血miR-139水平与Th1/Th2、T-bet呈正相关,与GATA3呈负相关(P<0.05);miR-29b水平与Th1/Th2、T-bet呈负相关,与GATA3呈正相关(P<0.05)。miR-139、miR-29b联合诊断重度银屑病的曲线下面积为0.917,灵敏度为93.10%,特异度为81.64%,二者联合诊断效能优于miR-139、miR-29b单独诊断(Z=2.882、1.993,P=0.004、0.043)。结论银屑病患者外周血miR-139水平升高,miR-29b水平降低,与Th1/Th2、Th1/Th2相关细胞水平及转录因子具有一定的相关性,二者联合对银屑病的诊断具有较高效能。

微小RNA-139-5p对食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的探讨微小RNA-139-5p(miR-139-5p)在食管鳞状细胞癌(ESCC)发生发展中的作用及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响和分子机制。方法收集2017年2月至2018年3月在郑州大学第一附属医院胸外科手术获得的75例ESCC组织和癌旁正常食管组织标本。实验分2组:ESCC(n=75)和正常食管组织(n=75)。采用GEO数据集和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ESCC组织和细胞中miR-139-5p的表达。将miR-139-5p抑制剂、miR-139-5p模拟物、阴性对照、对照siRNA、T盒转录因子1(TBX1)siRNA、pcDNA3.1和pcDNA3.1-TBX1转染ESCC Eca109和TE1细胞,用qRT-PCR检测转染后ESCC细胞中miR-139-5p和TBX1的表达水平,分别用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和Transwell小室检测ESCC细胞的增殖和侵袭。双荧光素酶报告实验分析miR-139-5p与TBX1的相互作用,qRT-PCR、Western印迹法和免疫组织化学检测TBX1在ESCC组织中的表达,Western印迹法检测转染后E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达。结果ESCC组织中miR-139-5p水平明显低于正常组织(1.17±0.43比5.16±3.62,P<0.001)。Log-rank检验发现,高miR-139-5p表达水平的ESCC患者(n=43)生存率显著高于低miR-139-5p水平的ESCC患者生存率(n=32)(67.44%比25.00%,P=0.005)。ESCC细胞中miR-139-5p的表达水平均显著低于正常食管上皮细胞Het-1A(均P<0.001)。miR-139-5p高表达的Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭能力明显低于阴性对照(NC)转染的Eca109和TE1细胞(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验表明,miR-139-5p能结合致TBX1的3′-非翻译区。miR-139-5p模拟物或抑制剂分别抑制或促进Eca109和TE1细胞TBX1蛋白表达(均P<0.05)。TBX1下调显著抑制Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭,而TBX1的过表达显著促进Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭(均P<0.05)。此外,pcDNA3.1-TBX1能部分逆转miR-139-5p介导的细胞侵袭能力的抑制(均P<0.05),而TBX1 siRNA能部分逆转miR-139-5p抑制剂介导的侵袭能力的增强(均P<0.05)。结论miR-139-5p通过靶向TBX1抑制ESCC细胞的增殖和侵袭。

长链非编码RNA C9ORF139靶向miR-24-3P/TAOK1调控急性髓系白血病细胞增殖的作用和机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)C9ORF139靶向微小RNA(miR)-24-3P/TAOK1调控急性髓系白血病(AML)细胞增殖的作用和机制。方法:AML细胞株(人急性早幼粒白血病细胞株HL-60以及人单核白血病细胞株THP-1)购自中国科学院,分为4组:A组为阴性对照(siNC)组,B组为干扰C9ORF139(siC9ORF139)组,C组为siC9ORF139+miR-24-3P抑制剂组,D组为miR-24-3P+TAOK1过表达(oe-TAOK1)组。采用实时荧光定量逆转录(qRT)-PCR检测4组AML细胞株HL-60、THP-1中的表达水平。细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的凋亡情况,Transwell实验检测4组细胞的迁移、侵袭能力,Western印迹法检测p-丝氨酸/苏氨酸激酶(p-raf)、p-丝裂原活化蛋白激酶(p-MEK)、p-细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)表达。构建荧光素酶报告基因质粒,验证C9ORF139、miR-24-3P、TAOK1的结合能力。裸鼠皮下肿瘤细胞接种分为HL-60(A组)和HL-60(B组)。结果:敲减细胞中C9ORF139基因并培养120 h后,在HL-60及THP-1细胞中,B组细胞增殖能力(0.62±0.02、0.82±0.02)、迁移能力(0.22±0.03、0.05±0.01)、侵袭能力(0.20±0.02、0.13±0.03)均低于A组(1.30±0.02、1.83±0.07;0.99±0.02、0.99±0.02;1.00±0.01、1.00±0.01)(均 P<0.05)。共转染miR-24-3抑制剂后,细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均高于B组(均 P<0.05)。共转染miR-24-3P与oe-TAOK1质粒后,细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均高于B组(均 P<0.05)。当干扰细胞中C9ORF139基因后,与A组凋亡水平(0.31±0.27、2.49±0.33)相比,B组(28.56±8.07、17.74±1.91)均较高(均 P<0.05);当共转染miR-24-3P抑制剂后,C组细胞凋亡水平(2.34±0.09、3.06±0.06)均低于B组(均 P<0.05);在共转染miR-24-3P与oe-TAOK1质粒组中,D组细胞凋亡水平(2.16±1.29、4.80±0.37)均低于B组(均 P<0.05)。在HL-60、THP-1细胞中,当C9ORF139未突变时,miR-24-3P组荧光素酶活性均低于miR-NC组(均 P<0.05)。当C9ORF139序列中与miR-24-3P结合位点突变后,miR-24-3P组荧光素酶活性与miR-NC组差异无统计学意义( P>0.05)。当TAOK1未突变时,miR-24-3P组荧光素酶活性低于miR-NC组( P<0.05);当TAOK1序列中与miR-24-3P结合位点突变后,miR-24-3P组荧光素酶活性与miR-NC组差异无统计学意义( P>0.05)。当干扰HL-60细胞中C9ORF139基因并培养72 h后,B组Raf、MEK及ERK分子磷酸化表达水平均低于A组(均 P<0.05)。第14天,A组肿瘤体积高于B组[(284.49±57.61)比(125.70±18.64)mm 3, P=0.017]。HL-60 A组肿瘤重量高于B组[(847.80±159.36)比(408.40±113.16)mg, P=0.001]。 结论:lncRNA C9ORF139通过调控miR-24-3P上调TAOK1促进AML细胞的增殖、侵袭、迁移,C9ORF139表达具有促进AML裸鼠皮下肿瘤生长的作用。

藏红花素对慢性心力衰竭大鼠心肌损伤和能量代谢的影响

目的探讨藏红花素调控微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/激活转录因子4(ATF4)轴对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌损伤及能量代谢的影响。方法选择SPF级雄性SD大鼠84只,随机分为假手术组、模型组、藏红花素低、中、高剂量组、卡托普利组、藏红花素+miR-139-5p抑制剂组,每组12只。检测大鼠心功能指标、心肌组织病理学形态、细胞凋亡率、心肌损伤指标、心力衰竭指标、炎性指标、氧化应激指标、心肌组织ATP含量、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、miR-139-5p、ATF4mRNA表达水平,验证miR-139-5p与ATF4的靶向关系。结果与模型组比较,藏红花素各剂量组心肌细胞凋亡率、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)、TNF-α、白细胞介素1β(IL-1β)、丙二醛、ATF4mRNA表达降低,LVEF、左心室短轴缩短率(LVFS)、超氧化物歧化酶(SOD)、ATP含量、SDH活性、miR-139-5p表达升高(P<0.05)。藏红花素+miR-139-5p抑制剂组心肌细胞凋亡率高于藏红花素高剂量组[(22.68±3.25)%vs(11.94±1.38)%,P<0.05]。与藏红花素高剂量组比较,藏红花素+miR-139-5p抑制剂组LVEDD、LVESD、cTnI、cTnT、CK-MB、NT-proBNP、TNF-α、IL-1β、丙二醛、ATF4mRNA表达升高,LVEF、LVFS、SOD、ATP含量、SDH活性、miR-139-5p表达降低(P<0.05)。miR-139-5p与ATF4存在靶向关系。结论藏红花素可改善CHF大鼠心肌损伤及能量代谢,其机制可能与调控miR-139-5p/ATF4轴有关。