急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-140-3p、Krüpple样因子5表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性

目的探索急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)、Krüpple样因子5(KLF5)表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性。方法选择2022年10月—2024年1月本院收治的285例AIS患者作为研究对象,依据超声结果将患者分为斑块易损组(196例)、斑块稳定组(53例)以及无斑块组(36例);将患者依据斑块狭窄程度分为狭窄重度组(42例)、狭窄中度组(57例)、狭窄轻度组(150例)以及无狭窄组(36例)。收集患者的一般资料,采用实时荧光定量PCR对血清miR-140-3p、KLF5表达水平进行检测;多因素Logistic回归分析AIS患者颈动脉斑块不稳定性的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-140-3p、KLF5水平检测对AIS患者颈动脉斑块不稳定的诊断价值;分析不同狭窄程度血清miR-140-3p、KLF5水平;Pearson法和Spearman法相关性分析血清miR-140-3p、KLF5水平的相关性及二者与AIS患者颈动脉斑块稳定及狭窄程度的相关性。结果斑块易损组患者高血压人数、糖尿病人数、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、膀抑素C(Cys-C)及KLF5水平高于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),血小板(PLT)及miR-140-3p水平低于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),斑块稳定组LDL-C、FIB、D-D、Cys-C及KLF5水平高于无斑块组(P<0.05),PLT及miR-140-3p水平低于无斑块组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示PLT、D-D、FIB、Cys-C、miR-140-3p、KLF5是AIS患者斑块不稳定性的影响因素(P<0.05);ROC分析显示,miR-140-3p、KLF5联合诊断AIS患者颈动脉斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)显著大于miR-140-3p单独诊断的AUC(Z=4.617,P<0.001),KLF5单独诊断的AUC(Z=3.473,P=0.001);随着患者狭窄程度的增加,患者血清miR-140-3p水平降低(F=341.819,P<0.001),血清KLF5水平升高(F=152.186,P<0.001);Pearson法相关性分析显示,血清miR-140-3p水平与血清KLF5水平及斑块稳定性、狭窄程度呈负相关(r=-0.536,-0.529,-0.601,P<0.001),血清KLF5水平与斑块稳定性及狭窄程度呈正相关(r=0.511,0.634,P<0.001)。结论AIS患者血清miR-140-3p水平降低,血清KLF5水平升高,其水平变化与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度密切相关。

微小RNA-452-5p及SRY盒相关基因7在食管癌组织中的表达水平及与临床病理参数和预后的关系研究

目的 探讨微小RNA-452-5p(miR-452-5p)及SRY盒相关基因7(SOX7)在食管癌组织中的表达水平以及临床病理参数和预后的关系。方法 选取2017年6月至2019年5月期间我院收治的106例食管癌患者作为研究对象。检测食管癌患者miR-452-5p、SOX7 mRNA的表达,分析癌组织中miR-452-5p、SOX7 mRNA表达与临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并采用COX单因素和多因素分析影响食管癌预后的危险因素。结果 相比于癌旁组织,癌组织中的miR-452-5p表达水平更高(P<0.05),SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。相比于肿瘤Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度(Tis~T2)食管癌患者,miR-452-5p在有淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ期、浸润深度(T3~T4)癌组织中有更高的表达水平,SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,患者3年总生存率miR-452-5p高表达组为30.4%(17/56),miR-452-5p低表达组为54.0%(27/50),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=6.082,P=0.014);SOX7 mRNA高表达组和SOX7 mRNA低表达组患者患者3年总生存率分别为53.7%(29/54)、28.8%(15/52),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=6.742,P=0.009)。COX单因素回归分析结果显示,miR-452-5p、SOX7 mRNA、肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移与食管癌预后有关。COX多因素回归分析结果显示,影响食管癌预后的独立因素有淋巴结转移、SOX7 mRNA低表达、肿瘤分期Ⅲ期、miR-452-5p高表达、浸润深度(T3~T4)。结论 miR-452-5p在食管癌组织中呈高表达、SOX7 mRNA在食管癌组织中呈低表达,其水平与淋巴结转移、肿瘤分期、浸润深度有关,且密切关联食管癌患者预后。

LINC00092靶向微小RNA-373-5p对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探究长基因间非蛋白编码RNA 92(LINC00092)在骨肉瘤细胞迁移和侵袭进展中的作用及潜在分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测人成骨细胞(hFOB1.19)和骨肉瘤细胞系(SOSP-9607、U2-OS、Saos-2和MG-63)中LINC00092的表达水平。选取MG-63细胞并分成LINC00092组(LINC00092过表达)、pcDNA组(阴性对照)和Control组(空白对照)。采用MTT、Transwell实验和划痕实验体外评估MG-63细胞的增殖、侵袭和迁移能力。通过双荧光素酶报告基因实验、qPCR和Western blot筛选并证实微小RNA-373-5p(miR-373-5p)与LINC00092的靶向作用关系。结果与hFOB1.19细胞相比,LINC00092在不同骨肉瘤细胞系中的表达均显著异常下调(P<0.05)。与pcDNA组相比,LINC00092组MG-63细胞活力、细胞划痕愈合率和细胞穿膜数量均下降。miR-373-5p是LINC00092的直接靶点且受其负调控(P<0.05)。此外,LINC00092组增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA和蛋白水平下调(P<0.05)。结论LINC00092可以靶向负调控miR-373-5p,并影响PCNA和MMP9表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭过程。

乳腺癌组织miR-1247-5p表达及其靶基因生物信息学预测研究

目的:探讨微小核糖核酸-1247-5p(miR-1247-5p)在乳腺癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析。方法:收集2019年6月至2020年12月本院手术治疗的104例乳腺癌患者癌组织及其癌旁组织。RT-PCR检测标本中miR-1247-5p的相对表达量;比较不同临床病理特征患者癌组织miR-1247-5p表达;预测miR-1247-5p的靶基因;采用DAVID数据库对miR-1247-5p靶基因进行功能和通路富集分析;String数据库对miR-1247-5p靶基因进行互作分析。结果:miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织下调(P<0.05)。miR-1247-5p潜在靶基因38个,其靶基因功能主要富集于RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控、基因表达/转录调控、质膜部分、突触小体、蛋白质结合、poly(A)RNA结合等;参与的通路主要富集于癌症通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等。磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)、上皮生长因子受体(EGFR)、假尿苷酸合酶1(PUS1)的编码蛋白质在miR-1247-5p基因靶基因蛋白质互作网络(PPI)中关键节点位置。结论:miR-1247-5p在乳腺癌组织中的表达下调,其靶基因富集于多个生物学过程及与肿瘤相关的信号转导通路上,miR-1247-5p可能通过调控其靶基因的表达参与乳腺癌的发生发展过程。

整合高通量数据探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-182-5p的潜在靶基因

目的探讨miR-182-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况、潜在靶基因、临床意义以及作用机制。方法通过联合高通量数据以及内部逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)数据的1720个样本,整合分析miR-182-5p在NSCLC中的表达情况。绘制受试者工作特征(ROC)曲线和综合受试者工作特征(SROC)曲线以评估miR-182-5p鉴别NSCLC组织和正常肺组织的能力。应用miRWalk 3.0数据库在线预测miR-182-5p的潜在靶基因,对低表达的潜在靶基因进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。使用STRING在线工具构建miR-182-5p潜在靶基因的蛋白互作网络。运用Spearman相关系数评估潜在靶基因与miR-182-5p表达的相关性。结果与正常肺组织对比,miR-182-5p在NSCLC组织中呈高表达,标准化均数差(SMD)为1.33(0.93~1.74)。miR-182-5p区分NSCLC和正常肺组织的曲线下面积(AUC)为0.95(0.92~0.96),敏感度为0.81(0.68~0.89),特异度为0.93(0.86~0.96)。miR-182-5p与EPS15的表达水平存在负相关性(ρ=-0.235,P=0.001)。结论与正常肺组织相比,NSCLC组织中miR-182-5p高表达。EPS15有可能是miR-182-5p在NSCLC的新靶点。

微小RNA-335-5p靶向轴突导向因子3B对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨微小RNA-335-5p(miR-335-5p)靶向轴突导向因子3B(SEMA3B)对子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:细胞转染分为miR-335-5p NC组、miR-335-5p inhibitor组、pcDNA组、pcDNA-SEMA3B组、miR-335-5p NC+si NC组、miR-335-5p inhibitor+si NC组、miR-335-5p NC+si SEMA3B组、miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组,未转染的Ishikawa细胞作为对照组。生物信息学预测和双荧光素酶法验证miR-335-5p和SEMA3B的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-5p和SEMA3B表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹(WB)检测SEMA3B蛋白表达。结果:miR-335-5p和SEMA3B存在靶向关系,并且在子宫内膜癌组织和Ishikawa细胞中检测到miR-335-5p的高表达和SEMA3B的低表达。与miR-335-5p NC组比较,miR-335-5p inhibitor组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-SEMA3B组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。与miR-335-5p NC+si NC组比较,miR-335-5p inhibitor+si NC组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),miR-335-5p NC+si SEMA3B组细胞增殖率显著升高、细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与miR-335-5p NC+si SEMA3B比较,miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组细胞增殖率降低、细胞凋亡率升高(均P<0.05)。与miR-335-5p inhibitor+si NC组比较,miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低(均P<0.05)。结论:抑制miR-335-5p可靶向激活SEMA3B表达,从而促进子宫内膜癌细胞的凋亡、抑制癌细胞增殖。

LncRNA CASC9靶向调节miR-195-5p/VEGFA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因(LncRNA CASC)9对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人OSCC组织与细胞中LncRNA CASC9表达,筛选最佳细胞系。体外培养OSCC细胞SCC15,将细胞分为空白对照(Control)组、si-CASC9组、si-NC组、miR-195-5p mimic组、miR-NC组、si-CASC9+NC inhibitor组、si-CASC9+miR-195-5p inhibitor组、miR-195-5p mimics+pcDNA组、miR-195-5p mimics+VEGFA组,qRT-PCR检测LncRNA CASC9、miR-195-5p表达,CCK-8法检测SCC15细胞增殖,流式细胞仪检测SCC15细胞凋亡,Transwell实验检测SCC15细胞迁移;Western印迹法检测SCC15细胞中血管内皮生长因子(VEGF)A、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-195-5p与LncRNA CASC9、VEGFA的靶向关系。结果LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中表达较癌旁组织显著上调(P<0.05);抑制LncRNA CASC9表达或过表达miR-195-5p可显著抑制SCC15细胞增殖及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,LncRNA CASC9、VEGFA与miR-195-5p存在靶向关系(P<0.05);抑制miR-195-5p表达可显著逆转抑制LncRNA CASC9表达对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05);上调VEGFA表达可显著逆转过表达miR-195-5p对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05)。结论LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中上调表达,抑制LncRNA CASC9表达可通过调节miR-195-5p/VEGFA轴抑制OSCC细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

长基因间非编码RNA 1980靶向微小RNA-335-5p及对胃癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 1980(LINC01980)对微小RNA-335-5p(miR-335-5p)的靶向调控作用及胃癌细胞迁移侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN-45和MGC80-3)的LINC01980和miR-335-5p水平,双荧光素酶报告基因实验验证LINC01980与miR-335-5p的相互关系;将MGC80-3细胞分为4组:对照组(未转染)、LINC01980干扰(si-LINC01980)组(转染si-LINC01980+miR-335-5p无关序列miR-NC)、miR-335-5p抑制物inhibitor(miR-inhibitor)组(转染无关序列si-NC+miR-335-5p inhibitor)和共转染组(转染si-LINC01980+miR-335-5p inhibitor)。MTT、划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞增殖活力、迁移和侵袭能力。结果与GES-1细胞相比,胃癌细胞的LINC01980水平升高,而miR-335-5p水平降低(P<0.05)。野生型LINC01980序列与miR-335-5p模拟物共转染细胞的荧光素酶活性降低且MGC80-3细胞转染si-LINC01980后的miR-335-5p水平升高(P<0.05)。对照组、si-LINC01980组、miR-inhibitor组和共转染组的细胞活力分别为1.508±0.101、0.944±0.077、1.856±0.117和1.404±0.082,划痕愈合率分别为(65.552±3.701)%、(19.920±2.571)%、(88.133±1.264)%和(75.433±7.313)%,穿膜细胞数分别为(80.349±8.763)、(31.151±1.338)、(114.064±2.983)和(78.920±7.811)个,与对照组相比,si-LINC01980组的细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数均降低(P<0.05),miR-inhibitor组均升高(P<0.05),而共转染组的无明显变化(P>0.05)。结论干扰LINC01980可能通过增强miR-335-5p表达来抑制胃癌的进展,LINC01980/miR-335-5p轴有望成为胃癌治疗的潜在靶点。

人软骨肉瘤中miR-140-5p靶基因预测验证及对靶基因表达的调控作用观察

目的预测并验证人软骨肉瘤中miR-140-5p的靶基因,观察人软骨肉瘤中miR-140-5p对靶基因的调控作用。方法①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因预测及验证:采用microRNA. org软件检索miR-140-5p序列,miRBase、miRWalk靶基因预测分析数据库预测miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因,认为miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因可能为葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)。通过NCBI Gen Bank检索GLUT-1 3'UTR序列。构建野生型(WT,正常表达)、突变型(MUT,抑制表达) GLUT-1 3'UTR双荧光素酶报告载体。取人胚肾细胞HEK 293T分为A、B组,分别转染miR-140-5p mimics(促进miR-140-5p表达)+WT型GLUT-1 3'UTR荧光素报告载体、miR-140-5p mimics+MUT型GLUT-1 3'UTR荧光素报告载体,利用荧光素酶活性检测试剂盒测算萤火虫荧光素酶相对活性。②转染miR-140-5p对人软骨肉瘤细胞株JJ012的GLUT-1 mRNA及蛋白表达影响:取对数生长期JJ012细胞分为观察组、对照组,分别转染miR-140-5p mimics、NC mimics(空白无意义),转染24 h时采用qRT-PCR法检测两组细胞GLUT-1 mRNA,采用Western blotting法检测两组细胞GLUT-1蛋白。结果①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的直接靶基因可能为GLUT-1。A、B组荧光素酶活性分别为0. 37±0. 03、0. 93±0. 01,二者比较,P <0. 05。②观察组、对照组细胞GLUT-1 mRNA相对表达量分别为0. 31±0. 10、0. 95±0. 06,二者比较,P <0. 05。观察组、对照组细胞GLUT-1蛋白相对表达量分别为0. 42±0. 13、0. 93±0. 07,二者比较,P <0. 05。结论 miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因可能为GLUT-1。miR-140-5p主要通过靶向结合GLUT-1 3'UTR区域进行mRNA转录后调控。miR-140-5p主要通过直接靶向作用于GLUT-1 3'UTR进而抑制蛋白翻译过程。

胶质瘤组织lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达与临床特征及预后的关系研究

目的探讨胶质瘤组织长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)25、微小RNA(miR)-497-5p表达与临床特征及预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月该院收治的157例胶质瘤患者为胶质瘤组,同期该院100例因颅脑损伤接受手术治疗的患者为对照组。分别取术中切除的胶质瘤组织和正常脑组织检测lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平,术后随访3年。分析lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p的相关性,lncRNA SNHG25、miR-497-5p表达水平与患者临床特征和预后的关系。结果与对照组比较,胶质瘤组lncRNA SNHG25表达水平升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。与肿瘤最大径<4 cm、世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分级Ⅰ~Ⅱ级比较,肿瘤最大径≥4 cm、WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级的胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低(P<0.05)。胶质瘤患者的lncRNA SNHG25表达水平与miR-497-5p呈负相关(r=-0.370,P<0.05)。lncRNA SNHG25高表达组累积生存率低于lncRNA SNHG25低表达组(P<0.05),miR-497-5p低表达组累积生存率低于miR-497-5p高表达组(P<0.05)。WHO中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、lncRNA SNHG25高表达是胶质瘤患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-497-5p高表达则是保护因素(P<0.05)。结论胶质瘤组织中lncRNA SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低,且与肿瘤最大径增大、WHO中枢神经系统肿瘤分级高有关,可导致胶质瘤患者不良预后。

乳腺癌组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达水平与患者术后5年内生存的相关性

目的探究乳腺癌(BC)组织长链非编码RNA癌易感性候选基因2(lncRNA CASC2)、微小RNA-532-3p(miR-532-3p)表达与患者术后5年内生存的相关性。方法选择2015年1月—2018年6月大同市第五人民医院普通外科收治BC患者127例,术中收集BC组织及癌旁正常组织,荧光定量PCR法检测BC组织和癌旁正常组织中lncRNA CASC2、miR-532-3p表达;对BC患者术后进行为期5年的随访,记录患者5年内生存和死亡情况。比较癌旁正常组织和BC组织lncRNA CASC2及miR-532-3p表达,BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达在不同临床病理特征中的差异,生存组和死亡组临床病理特征和BC组织中lncRNA CASC2及miR-532-3p表达的差异。分析BC组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达的相关性;BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达与术后5年内生存的关系;影响BC患者术后5年内生存的因素;lncRNA CASC2、miR-532-3p对BC患者术后5年内生存的预测价值。结果BC组织中lncRNA CASC2表达水平低于癌旁正常组织,miR-532-3p表达水平高于癌旁正常组织(t/P=38.239/<0.001,49.406/<0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例lncRNA CASC2低表达组高于高表达组,而miR-532-3p低表达组低于高表达组(lncRNA CASC2:χ^(2)/P=17.361/<0.001、17.052/<0.001、14.694/<0.001、13.173/<0.001;miR-532-3p:χ^(2)/P=10.733/0.001、9.813/0.002、10.134/0.001、7.444/0.006);127例BC患者术后随访5年,生存99例(生存组),死亡28例(死亡组),肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例及miR-532-3p表达水平死亡组高于生存组,而lncRNA CASC2表达水平死亡组低于生存组[χ^(2)(t)/P=5.211/0.022、27.149/<0.001、27.990/<0.001、4.590/0.032、19.155/<0.001、10.818/<0.001];BC组织中lncRNA CASC2与miR-532-3p表达呈负相关(r/P=-0.561/<0.001);lncRNA CASC2高表达组BC患者术后5年内总生存率为89.23%(58/65),高于lncRNA CASC2低表达组66.13%(41/62)(χ^(2)/P=9.854/0.002);miR-532-3p高表达组BC患者术后5年内总生存率为65.57%(40/61),低于miR-532-3p低表达组89.39%(59/66)(χ^(2)/P=10.466/0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移、lncRNA CASC2低表达、miR-532-3p高表达均是影响BC患者术后5年内生存的独立危险因素[HR(95%CI)=2.255(1.192~4.263)、2.143(1.252~3.666)、3.089(1.386~6.887)、2.219(1.223~4.026)、2.606(1.174~5.788)、2.855(1.592~5.120)];lncRNA CASC2、miR-532-3p及二者联合预测BC患者术后5年内生存的AUC分别为0.840、0.852、0.908,二者联合预测的AUC大于lncRNA CASC2、miR-532-3p各自单独预测的AUC(Z/P=2.246/0.025、2.033/0.042)。结论BC组织中lncRNA CASC2表达下调,miR-532-3p表达上调,且术后5年内死亡的BC患者较存活患者变化更显著,二者表达与临床病理特征相关,对预测BC患者术后5年内生存情况价值较高。

微小RNA-150-5p抑制鼻咽癌细胞恶性增殖及增强放疗敏感性的作用研究

目的 探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在鼻咽癌组织中的表达水平及其对癌细胞增殖和放疗敏感性的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-150-5p的表达水平。常规培养鼻咽癌细胞CNE2进行miR-150-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-150-5p过表达组(miR-150-5p mimic组)。采用MTT实验检测各组CNE2细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测各组CNE2细胞的凋亡情况;采用Western blot检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)的表达。结果 miR-150-5p在鼻咽癌组织中的表达水平为(0.74±0.39),低于癌旁组织中的(1.44±0.54),差异有统计学意义(t=8.140,P<0.001)。转染48 h后,miR-150-5p mimic组CNE2细胞中miR-150-5p的表达水平为(6.31±1.20),高于NC组中的(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=7.647,P<0.001)。MTT实验结果显示,在24、48、72 h时,miR-150-5p mimic组CNE2细胞增殖能力均低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。经0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 Gy放射线辐射后,miR-150-5p mimic组细胞增殖率低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。采用2 Gy射线剂量照射CNE2细胞后,与NC组相比,miR-150-5p mimic组细胞凋亡率增加,CNE2细胞中pPI3K、pAKT和pmTOR蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 鼻咽癌细胞中miR-150-5p表达下调。过表达miR-150-5p抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡,同时可有效增强鼻咽癌细胞的放疗敏感性;其可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路发挥作用,miR-150-5p可能是增强鼻咽癌放疗敏感性药物的作用靶点。

急性髓系白血病患者血清LncRNA PVT1、miR-486-5p表达及预后价值

目的探讨急性髓系白血病(AML)患者血清长链非编码RNA PVT1基因(LncRNA PVT1)、微小RNA-486-5p(miR-486-5p)表达水平与疾病病理特征和预后的关系。方法回顾性选取2017年4月—2019年3月河北北方学院附属第二医院血液科就诊的AML患者100例为AML组,选取同期健康体检者100例为健康对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清LncRNA PVT1、miR-486-5p相对表达量;采用Pearson相关法分析AML患者血清LncRNA PVT1与miR-486-5p水平的相关性;Kaplan-Meier法分析AML患者生存曲线;采用Cox回归分析评价影响AML患者预后的危险因素。结果AML组患者LncRNA PVT1水平高于健康对照组,miR-486-5p水平低于健康对照组(t/P=15.403/<0.001、18.305/<0.001)。Pearson相关性分析显示,AML患者LncRNA PVT1与miR-486-5p水平呈负相关(r=-0.261,P<0.01);不同白细胞计数、骨髓原始细胞比率、NCCN危险分层患者LncRNA PVT1、miR-486-5p水平比较差异有统计学意义(LncRNA PVT1:t/P=2.934/0.004,2.901/0.005,10.985/<0.001;miR-486-5p:t/P=2.598/0.012,2.604/0.012,8.593/<0.001)。LncRNA PVT1高水平表达者3年总生存率低于LncRNA PVT1低水平表达者(χ^(2)/P=14.16/<0.001),miR-486-5p高水平表达者3年总生存率高于miR-486-5p低水平表达者(χ^(2)/P=16.82/<0.001)。Cox回归分析显示,LncRNA PVT1高表达、miR-486-5p低表达、NCCN危险分层高是急性髓系白血病患者预后不良的危险因素[RR(95%CI)=1.982(1.148~2.993),1.668(1.085~2.641),1.659(1.068~2.602)]。结论AML患者LncRNA PVT1高表达,miR-486-5p低表达,二者水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比率、NCCN危险分层和患者预后有关。

微小RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响。方法研究起止时间为2018年3-10月。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量。将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞)。以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系。结果miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)%、(10.21±3.02)%比miR-7-5p组(24.41±8.15)%](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达。结论miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡。

长基因间非编码RNA 472靶向微小RNA-942-5p对非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 472(LINC00472)靶向调控微小RNA-942-5p(miR-942-5p)表达及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用GEPIA分析来自TCGA数据库的969例NSCLC组织(483例腺癌+486例鳞癌)的LINC00472水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系(NCI-H157、NCI-H1975和A549)的LINC00472水平。构建LINC00472过表达质粒pcDNA3.1-LINC00472并采用脂质体法转染A549细胞,根据转染质粒分为3组:未转染任何质粒的空白对照组、转染pcDNA3.1质粒的阴性对照组和转染pcDNA3.1-LINC00472质粒的过表达组。MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测A549细胞的增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测EMT相关因子E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)的水平,LncBase预测LINC00472与miR-942-5p的结合序列并经荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系。结果GEPIA在线分析显示,NSCLC组织的LINC00472水平低于正常组织(P<0.05);NSCLC细胞的LINC00472水平均低于BEAS-2B细胞(P<0.05),选取水平最低的A549细胞进行后续功能实验。过表达组的LINC00472和E-cad水平升高,而miR-942-5p、N-cad和Vim水平降低(P<0.05)。过表达组转染48、72 h后的增殖活力低于其余两组(P<0.05)。过表达组的划痕愈合率为(29.148±3.034)%,低于空白对照组的(84.517±8.722)%和阴性对照组的(87.479±5.672)%,穿膜细胞数为(144.437±12.178)个,亦低于空白对照组的(240.365±14.156)个和阴性对照组的(224.713±17.805)个,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光素酶活性检测结果显示,miR-942-5p模拟物能抑制LINC00472野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论LINC00472在NSCLC组织和细胞中表达均下调,增强LINC00472表达可抑制NSCLC细胞的EMT和侵袭迁移能力,可能通过靶向miR-942-5p来发挥抑癌作用,LINC00472/miR-942-5p轴在NSCLC防治中有一定潜能。

胃癌中微小RNA-424-5p与真核翻译起始因子5A的表达特征研究

目的:观察胃癌中微小RNA-424-5p(miR-424-5p)与真核翻译起始因子5A(eIF5A)的表达特征,分析二者的靶向关系。方法:收集确诊为胃癌并行根治术的患者共65例作为研究对象,留取肿瘤组织和正常胃黏膜组织,应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-424-5p的表达,应用免疫组化法检测eIF5A的表达。选择胃癌MGC-803细胞株,应用双荧光素酶报告基因实验观察miR-424-5p与eIF5A的结合情况。结果:胃癌中miR-424-5p的表达量明显低于正常胃黏膜组织(P<0.05),eIF5A的阳性率明显高于正常胃黏膜组织(P<0.05),miR-424-5p与eIF5A在不同肿瘤最大径、不同浸润深度、有无淋巴结转移分组的比较中有统计学差异(P<0.05)。miR-424-5p与eIF5A呈负相关性(Y=-2.572X+7.662,P<0.05)。miR-424-5p和eIF5A的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-424-5p与eIF5A具有靶向关系。结论:胃癌组织中miR-424-5p表达下调、eIF5A表达升高,且具有靶向负调控关系。miR-424-5p和eIF5A的表达可能与患者术后生存时间有关。

基于生物信息学分析人微小RNA-142-5p的靶基因及其与心血管疾病的关联

目的利用生物信息学技术预测人微小RNA-142-5p(hsa-miR-142-5p)的靶基因,并通过分析靶基因涉及的生物学过程和信号通路初步探讨hsa-miR-142-5p在心血管疾病中的作用。方法使用miRGator v3.0数据库检索hsa-miR-142-5p在各个组织器官中的表达情况。使用PubMed数据库检索hsa-miR-142-5p的相关文献,结合miRBase 22.1和UCSC Genome Browser的检索结果,获得hsa-miR-142-5p定位、碱基序列和物种保守性等基本信息。通过数据库TargetScan、DIANA TOOLS、miRDB、miRWalk进行靶基因预测后取交集,再与miRTarBase数据库中被实验验证的靶基因合并作为基因集。取基因集进行基因本体论功能富集分析和京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析。结果hsa-miR-142-5p在心脏中存在基础表达量,在包括人类在内的26个不同物种中高度保守。共获得包含51个候选基因的靶基因集,靶基因功能富集于心内膜垫融合、胚胎心管形态发生、心脏心室形态发生和心肌肥厚的调节、心脏上皮向间质转化的正调控等心血管相关的生物学过程(P<0.05),并参与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路、黏附连接、转化生长因子β(TGF-β)信号通路、甲状腺激素信号通路、Rap1信号通路和叉头框蛋白O(FoxO)信号通路等调控(均P<0.05)。结论hsa-miR-142-5p的靶基因可能与先天性心脏病、心肌肥厚、心肌纤维化及血管平滑肌细胞和血管内皮细胞的调控相关,而PI3K/Akt信号通路、黏附连接、TGF-β信号通路、甲状腺激素信号通路、Rap1信号通路和FoxO信号通路可能参与上述病理生理。

膝骨关节炎关节液和滑膜中微小RNA-140-5p的表达及临床意义

目的研究膝骨关节炎(KOA)病人关节液和滑膜中微小RNA(miR)-140-5p的表达及临床意义。方法选取2018年5月至2019年5月于北京中医药大学东方医院就诊的51例KOA病人为观察组,依据凯尔格伦-劳伦斯(K-L)分级标准将观察组分为3个亚组:KOAⅡ组(12例)、KOAⅢ组(24例)、KOAⅣ组(15例),另外选取55例同期该院因骨折、截肢等手术治疗的无骨关节炎病人为对照组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测并比较各组关节液和滑膜中miR-140-5p的表达,分析miR-140-5p与KOA病情进展的关系;采用受试者工作曲线(ROC)分析miR-140-5p对KOA的诊断价值。结果观察组关节液(0.51±0.16)、滑膜(0.67±0.21)中miR-140-5p均比对照组[(1.08±0.38)、(1.54±0.35)]低(P<0.05);KOAⅡ组、KOAⅢ组、KOAⅣ组相比,关节液[(0.65±0.17)、(0.51±0.14)、(0.42±0.12)]、滑膜[(0.86±0.22)、(0.69±0.15)、(0.49±0.13)]中miR140-5p均呈依次降低趋势,两两相比差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,KOA病人关节液、滑膜中miR-140-5p与K-L分级均呈负相关(P<0.05);ROC结果显示,关节液、滑膜miR-140-5p诊断KOA的曲线下面积(AUC)分别为0.913、0.931,截断值分别是0.78、1.05,灵敏度、特异度、准确度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比分别为98.04%、78.18%、87.74%、0.76、80.65%、97.73%、4.49、0.03;96.08%、89.09%、92.45%、0.85、89.09%、96.08%、8.81、0.04。结论miR-140-5p在KOA病人关节液及滑膜中均呈低表达,与K-L分级均呈负相关,可能成为KOA病人病情发展的监测指标及治疗靶点。

长基因间非编码RNA 1475调控微小RNA-423-5p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 1475(LINC01475)对微小RNA-423-5p(miR-423-5p)的靶向调控作用及在胃癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测胃癌组织和细胞的LINC01475和miR-423-5p水平并进一步通过双荧光素酶报告基因实验鉴定两者的靶向关系。选择胃癌SGC-7901细胞并分为4组:对照组(未转染)、LINC01475过表达组(转染过表达载体pcDNA3.1-LINC01475+miR-NC)、miR-423-5p过表达组(转染miR-423-5p模拟物mimics+空载体pcDNA3.1)和共过表达组(转染pcDNA3.1-LINC01475+miR-423-5p mimics);采用qPCR、MTT法、划痕实验和Transwell小室实验评估转染效果、细胞活力及迁移侵袭能力的变化。结果与癌旁组织相比,胃癌组织的LINC01475水平降低,而miR-423-5p水平升高,两者水平呈负相关(r=-0.686,P<0.05)。与人正常胃上皮GES-1细胞相比,胃癌细胞的LINC01475水平降低,而miR-423-5p水平升高(P<0.05)。在SGC-7901细胞中,miR-423-5p mimics显著降低了野生型LINC01475的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型LINC01475的荧光素酶活性(P>0.05)。与对照组相比,SGC-7901细胞的活力、划痕愈合率和穿膜细胞数在LINC01475过表达组中降低,而在miR-423-5p过表达组增多(P<0.05);共过表达组的SGC-7901细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论LINC01475可能部分通过抑制miR-423-5p表达在胃癌中发挥抑癌基因的作用。

miR-140-3p靶向调控KMT5B对老年牙髓干细胞成牙本质分化的影响及机制

目的 分析微小RNA(miR)-140-3p靶向调控甲基转移酶(KMT)5B对老年牙髓干细胞成牙本质分化的影响及机制。方法 采用实时荧光定量法进行鉴定miR-140-3p、KMT5B表达量,通过倒置显微镜对矿化结节情况进行观察,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,通过Western印迹对成牙关键转录因子Runt相关转录因子(RUNX)2、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨桥蛋白(OPN)、P21、细胞周期蛋白(Cyclin)D1相对表达量进行检测。结果 与未分化牙髓干细胞对比,分化牙髓干细胞miR-140-3p表达量显著升高,KMT5B表达量显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-miR-140-3p组miR-140-3p表达显著降低(P<0.05),表明干扰miR-140-3p的牙髓干细胞株构建成功,与si-NC组相比,si-miR-140-3p组矿化结节相对数量、Runx2蛋白、DSPP蛋白、OPN蛋白、OD值、CyclinD1显著降低,P21显著升高(P<0.05)。与KMT5B-NC组相比,KMT5B组KMT5B表达量升高(P<0.05),表明上调KMT5B的牙髓干细胞构建成功,与KMT5B-NC组相比,KMT5B组矿化结节相对数量、Runx2蛋白、DSPP蛋白、OPN蛋白、OD值、CyclinD1显著降低,P21显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告试验显示,与KMT5B-NC组相比,KMT5B可使WT-miR-140-3p荧光素酶活性显著降低(P<0.05),对MUT-miR-140-3p荧光素酶活性影响较小(P>0.05)。与si-NC组相比,抑制miR-140-3p表达可使牙髓干细胞中KMT5B表达显著升高(P<0.05),与si-miR-140-3p+anti-KMT5B-NC组相比,si-miR-140-3p+anti-KMT5B组矿化结节相对数量、Runx2蛋白、DSPP蛋白、OPN蛋白、OD值、CyclinD1显著升高,P21显著降低(P<0.05)。结论 干扰miR-140-3p可通过靶向调控KMT5B表达,促进牙髓干细胞成牙本质分化及增殖。