脑胶质瘤组织中长链非编码RNA核旁斑组装转录本1、微小RNA-149-5p的表达与临床病理特征和预后的相关性

目的 探讨脑胶质瘤组织中长链非编码RNA核旁斑组装转录本1(long non-coding RNA nuclear paraspeckle assembly transcript1,Lnc RNANEAT1)、微小RNA-149-5p(micro RNA-149-5p,mi R-149-5p)的表达与临床病理特征和预后的相关性。方法 选取2014年1月至2017年6月上海中医药大学附属曙光医院收治的103例脑胶质瘤患者为研究对象。分析脑胶质瘤组织与瘤旁组织中的LncRNA NEAT1、mi R-149-5p表达水平、LncRNA NEAT1与miR-149-5p表达水平的相关性以及Lnc RNA NEAT1、mi R-149-5p的表达水平与脑胶质瘤患者临床病理特征的关系。以脑胶质瘤组织中LncRNANEAT1表达量的平均值为分界线将患者分为LncRNA NEAT1高表达组(≥1.69,49例)和Lnc RNA NEAT1低表达组(<1.69,54例);以脑胶质瘤组织中miR-149-5p表达量的平均值为分界线将患者分为miR-149-5p高表达组(≥1.04,53例)和mi R-149-5p低表达组(<1.04,50例)。分析Lnc RNA NEAT1、mi R-149-5p表达水平与脑胶质瘤患者术后5年总生存率的关系。分析脑胶质瘤患者术后5年预后不良的影响因素。结果 脑胶质瘤组织中Lnc RNA NEAT1的表达量为1.69±0.33,显著高于瘤旁组织中的1.19±0.15(t=14.175,P<0.001);脑胶质瘤组织中miR-149-5p的表达量为1.04±0.28,显著低于瘤旁组织中的1.82±0.44(t=15.337,P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,脑胶质瘤组织中Lnc RNA NEAT1与mi R-149-5p的表达水平呈显著负相关(r=-0.728,P<0.001)。Lnc RNA NEAT1、mi R-149-5p的表达水平均与分化程度、WHO分级显著相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,Lnc RNANEAT1高表达组患者术后5年的总生存率显著低于LncRNA NEAT1低表达组(χ^(2)=16.601,P<0.001);miR-149-5p高表达组患者术后5年的总生存率显著高于miR-149-5p低表达组(χ2=19.768,P<0.001)。单因素分析结果显示,低分化、WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级、LncRNANEAT1≥1.69、miR-149-5p≥1.04与脑胶质瘤患者预后不良显著相关(P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,低分化、WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级、Lnc RNA NEAT1≥1.69为脑胶质瘤患者预后不良的独立危险因素(P<0.05),miR-149-5p≥1.04为脑胶质瘤患者预后不良的独立保护因素(P<0.05)。结论 脑胶质瘤组织中的Lnc RNA NEAT1高表达,miR-149-5p低表达,二者表达水平与分化程度、WHO分级密切相关,且均为脑胶质瘤患者术后5年预后不良的独立影响因素。

微小RNA-149靶向调控FOXM1的表达及其对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-149(miR-149)在非小细胞肺癌(NSCLC)中调控细胞增殖和凋亡的相关机制。方法采用Lipofectamine脂质体法将miR-149模拟物(mimics)及其对照载体转染至A549细胞并分为miR-149转染组和miR-149对照组,同时以未转染的A549细胞作对照(未转染组)。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组miR-149水平以评价转染的效果,采用MTT法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测转染后各组细胞增殖和凋亡情况。QPCR检测各组FOXM1基因的表达情况,Western blotting检测FOXM1蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与FOXM1之间靶向作用关系。结果QPCR检测转染48 h后miR-149转染组的miR-149相对表达量为2.493±0.380,高于未转染组的1.077±0.321和miR-149对照组的1.283±0.273,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-149转染组转染24、48、72 h的增殖抑制率分别为(16.51±2.49)%、(22.90±3.65)%和(31.43±5.27)%,均高于其余两组,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-149转染组转染48 h的凋亡率为(29.17±4.48)%,高于未转染组的(5.34±1.72)%和miR-149对照组的(7.62±1.59)%,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-149转染组转染48 h后的FOXM1 mRNA和蛋白水平分别为0.624±0.102和0.349±0.065,均低于未转染组的0.976±0.076和0.654±0.074及miR-149对照组的0.920±0.117和0.718±0.077,差异均有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验表明miR-149可显著抑制野生型FOXM1-3’UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-149可能是通过靶向FOXM1调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,可作为NSCLC分子治疗的有效靶点。

微小RNA-149-5p在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达情况及作用机制

目的探讨微小RNA-149-5p(miRNA-149-5p)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达情况及作用机制。方法选择150例DLBCL患者和70例淋巴结反应性增生患者,分别作为观察组和对照组。采用逆转录聚合酶链法检测两组患者中miRNA-149-5p的相对表达量,采用免疫组织化学染色法检测两组患者中核因子κB(NF-κB)/p65、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、胱天蛋白酶3(caspase 3)、Ki-67蛋白的表达情况。依据miRNA-149-5p表达水平,将DLBCL患者分为miRNA-149-5p高表达组和miRNA-149-5p低表达组,比较两组患者的3年生存率。结果观察组患者的miRNA-149-5p相对表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-149-5p表达情况可能与DLBCL患者的Hans分型有关(P﹤0.01)。观察组患者的NF-κB/p65、Bcl-2、Ki-67蛋白阳性率均明显高于对照组,caspase 3蛋白阳性率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-149-5p高表达组患者的3年生存率为46.4%,明显高于miRNA-149-5p低表达组的17.5%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论 DLBCL患者中miRNA-149-5p表达下调,可能通过凋亡途径影响肿瘤的发生,miRNA-149-5p低表达可能与DLBCL患者预后不良有关。

微小RNA-149单核苷酸多态性与60例汉族类风湿性关节炎患者发病的相关性分析

目的:分析微小RNA(micro RNA,mi RNA,miR)-149单核苷酸多态性与60例汉族类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者发病的相关性。方法:纳入60例汉族类风湿性关节炎患者和25例同期门诊健康体检者,应用限制性内切酶片段长度多态性聚合酶链反应技术(PCR-RFLP)进行基因分析,对比各个基因型与等位基因频率的分布及其与类风湿性关节炎发病机制的关系。结果:60例类汉族风湿关节炎患者的miR-149定量和患者的滑膜增生、滑膜动脉阻力指数、滑膜动脉RI值、类风湿因子呈显著的正相关性(P <0. 05),与C反应蛋白水平及血沉水平等无显著相关性(P> 0. 05); 25例健康志愿者的miR-149定量和各项研究指标均无关联(P> 0. 05);携带CC基因型相对于携带TT基因型罹患类风湿性关节炎的几率更高(P <0. 05);至少携带一个C等位基因相对于携带T等位基因罹患类风湿性关节炎的几率更高(P <0. 05)。结论:汉族类风湿关节炎和微小RNA-149单核苷酸多态性有一定的相关性。

微小RNA-149靶向P-糖蛋白对皮肤基底细胞癌顺铂耐药的影响

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-149靶向P-糖蛋白(P-gp)对皮肤基底细胞癌阿霉素耐药的影响。方法选取2014年8月到2018年8月河南省人民医院皮肤科收治的74例皮肤基底细胞癌患者作为研究对象。根据患者对顺铂化疗的敏感性程度,分为敏感组和耐药组。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析两组肿瘤组织中miR-149表达水平。采用脂质体法转染miR-149模拟物和对照miRNA至皮肤基底细胞株癌细胞株A431,分别作为miR-149组和对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析顺铂对两组细胞增殖能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-149的靶基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析肿瘤组织中靶基因的表达和miR-149对靶基因表达的影响。组间数据比较采用t检验。结果耐药组患者肿瘤组织miR-149表达水平(0.48±0.18)较敏感组miR-149表达水平(1.21±0.23)显著下降,差异有统计学意义(t=3.126,P<0.05)。CCK-8和EdU染色结果显示,经顺铂处理后,miR-149组细胞增殖能力(0.59±0.17)较对照组细胞(1.27±0.21)明显下降,差异有统计学意义(t=3.010,P<0.05)。miR-149组细胞EdU染色阳性率[(35.56±6.90)%]较对照组细胞[(79.32±8.01)%]明显下降,差异有统计学意义(t=3.399,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示P-gp是miR-149靶基因。耐药组肿瘤组织中P-gp蛋白表达水平(1.24±0.19)明显高于敏感组肿瘤组织(0.61±0.18),差异有统计学意义(t=2.091,P<0.05)。miR-149组细胞P-gp蛋白表达水平(0.57±0.18)较对照组细胞(1.97±0.32)明显增加,差异有统计学意义(t=2.581,P<0.05)。结论 miR-149通过调节P-gp蛋白的表达,介导了皮肤基底细胞癌顺铂化疗耐药。

膝关节骨性关节炎患者关节液中miR-34a-5p、miR-149-5p表达水平及临床意义

目的 分析膝关节骨性关节炎(KOA)患者关节液中miR-34a-5p、miR-149-5p的表达及其临床意义。方法 收集2020年1月—2022年6月武汉市第一医院骨科就诊的KOA患者90例的临床资料,按X线片Kellgren-Lawrence(KL)标准分级分为轻度KOA组(1~2级患者)和重度KOA组(3~4级患者),各45例,另选取同期医院健康体检者45例作为健康对照组。利用qRT-PCR检测各组关节液中miR-34a-5p、miR-149-5p的表达量,通过ELISA法检测各组关节液中IL-1β的表达量,Spearman分析关节液中miR-34a-5p、miR-149-5p表达水平与IL-1β、KL分级的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)分析关节液中miR-34a-5p、miR-149-5p表达对KOA严重程度的诊断价值。结果 膝关节液中miR-34a-5p、IL-1β表达水平比较,重度KOA组>轻度KOA组>健康对照组(F/P=19.21/<0.001、14.86/<0.001);膝关节液中miR-149-5p表达水平比较,重度KOA组<轻度KOA组<健康对照组(F/P=63.81/<0.001)。Spearman相关性分析显示,miR-34a-5p表达水平与IL-1β、KL分级呈显著正相关(r/P=0.835/<0.001、0.835/<0.001),miR-149-5p的表达水平与IL-1β、KL分级呈显著负相关(r/P=-0.828/<0.001、-0.943/<0.001)。ROC曲线分析显示,miR-34a-5p、miR-149-5p及二者联合预测KOA严重程度的曲线下面积分别为0.902、0.850、0.976,二者联合预测KOA严重程度的价值高于单项指标(Z/P=240.70/0.046,224.13/0.005)。结论 KOA患者关节液中miR-34a-5p、miR-149-5p的表达异常,且与KOA的临床分级和IL-1β显著相关,可作为诊断和监测KOA疾病活动的潜在标志物。

血清miR-149-3p和CXCR3水平与aSAH后迟发性脑缺血的相关性分析

目的探讨血清微小RNA-149-3p(miR-149-3p)、CXC趋化因子受体3(CXCR3)与动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)后迟发性脑缺血(DCI)的相关性。方法2020年6月~2022年6月前瞻性收集aSAH共175例,采用qRT-PCR法检测血清miR-149-3p,采用酶联免疫吸附法检测血清CXCR3水平。结果175例中,58例发生DCI,发生率为33.1%;117例未发生DCI。与未发生DCI病人比较,DCI病人血清miR-149-3p水平显著降低(P<0.05),CXCR3水平显著升高(P<0.05)。aSAH病人血清miR-149-3p水平与CXCR3水平呈明显负相关(r=-0.462,P<0.001);多因素logsitic回归分析显示,miR-149-3p水平降低、CXCR3水平增高是aSAH后发生DCI的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-149-3p水平≤0.94预测aSAH后发生DCI的曲线下面积(AUC)为0.828,敏感度为82.76%,特异度为72.65%;血清CXCR3水平≥12.81 ng/L预测aSAH后发生DCI的AUC为0.812,敏感度为79.31%,特异度为83.76%;血清miR-149-3p≤0.94联合血清CXCR3联合≥12.81 ng/L预测aSAH后发生DCI的AUC为0.906,敏感度为91.38%,特异度为83.76%。两者联合预测效果更好(P<0.05)。结论aSAH后发生DCI病人血清miR-149-3p水平降低、CXCR3水平升高,是aSAH后发生DCI独立危险因素,可能作为预测aSAH后发生DCI的指标。

lncRNA LINC00339通过下调miR-149-5p表达调控ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响及分子机制。方法:将HBMEC分为对照组(未经任何处理)、ox-LDL(50 mg/L)组、ox-LDL+si-NC组(转染si-NC+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+si-LINC00339组(转染si-LINC00339+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+miR-NC组(转染miR-NC+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+miR-149-5p组(转染miR-149-5p+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+si-LINC00339+anti-miR-NC组(共转染si-LINC00339和anti-miR-NC+50 mg/L ox-LDL)及ox-LDL+si-LINC00339+anti-miR-149-5p组(共转染si-LINC00339和anti-miR-149-5p+50 mg/mL ox-LDL)。RT-qPCR检测LINC00339和miR-149-5p的表达水平;分别检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达;双萤光素酶报告基因实验检测LINC00339和miR-149-5p的靶向关系。结果:ox-LDL诱导的HBMEC中LINC00339的表达水平升高,miR-149-5p的表达水平降低(P<0.05)。抑制LINC00339表达或过表达miR-149-5p可致HBMEC的MDA含量降低,SOD和CAT活性升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05)。LINC00339靶向调控miR-149-5p,敲减miR-149-5p表达逆转了抑制LINC00339表达对ox-LDL诱导的HBMEC氧化损伤的作用。结论:抑制LINC00339表达可能通过上调miR-149-5p表达抑制ox-LDL诱导的HBMEC凋亡和氧化应激反应,从而减轻细胞损伤。

MiR-149 rs22928323位点基因多态性与RA相关性分析

目的探讨微小RNA-149(MiR-149)rs22928323位点基因多态性与类风湿关节炎(RA)发病的关系。方法选取确诊的RA患者90例(RA组)、健康自愿者90例(健康组),收集时间2014年1月-2016年12月,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测两组外周血MiR-149 rs22928323位点的基因型、等位基因频率,并采用多因素分析法研究MiR-149 rs22928323位点基因多态性与RA发病的关系。结果 RA组患者的MiR-149 rs22928323位点TC基因型50.00%高于健康组TC基因型的28.89%(P<0.05),RA组的等位基因T的频率51.67%显著的高于健康组的等位基因T频率36.67%(P<0.05);RA组和健康组的年龄、性别、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、尿WBC比较,差异均无统计学意义(P>0.05);RA组的尿蛋白、抗角蛋白抗体(Anti-keratin antibody ,AKA)阳性率、抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-cyclic citrullinated peptide antibody ,CCP)阳性率均显著的高于健康组(P<0.05);Logistic回归分析显示:AKA阳性表达、CCP阳性表达、等位基因T的频率增加是人群RA发病的独立危险因素(P<0.05)。结论 RNA-149(MiR-149)rs22928323位点等位基因T频率增加是人群RA发病的独立危险因素。

miRNA-372-3p miRNA-149及miRNA-7与妊娠期糖尿病患者胰岛素抵抗和妊娠结局的相关性分析

目的探究微小RNA-372-3p(miRNA-372-3p)、微小RNA-149(miRNA-149)、微小RNA-7(miRNA-7)与妊娠期糖尿病(GDM)患者胰岛素抵抗、妊娠结局的相关性。方法选取2020年1月—2021年1月在台州市第一人民医院就诊的GDM患者63例分为GDM组,选取同时期在本院产检的健康孕妇60例分为对照组。采集两组孕妇基线资料,检测实验室指标,采用实时荧光定量PCR检测miRNA-372-3p、miRNA-149、miRNA-7表达,统计不良妊娠结局发生情况。分析miRNA-372-3p、miRNA-149、miRNA-7对GDM患者发生不良妊娠结局的预测价值。结果GDM组糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、空腹胰岛素(FINS)水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)值均高于对照组,胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)值低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GDM组miRNA-372-3p、miRNA-149、miRNA-7表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。GDM组早产、巨大儿、新生儿低血糖、胎儿窘迫发生率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。建立Logistic回归模型分析miRNA-372-3p、miRNA-149、miRNA-7、HOMA-IR是GDM发生不良妊娠结局的危险因素。ROC分析miRNA-372-3p、miRNA-149、miRNA-7、HOMA-IR预测GDM不良妊娠结局的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.864、0.780、0.722、0.578。HOMA-IR分别与miRNA-372-3p、miRNA-149、miRNA-7呈正相关(P<0.05)。结论miRNA-372-3p、miRNA-149、miRNA-7在GDM患者中显示高表达,高水平的miRNA-372-3p、miRNA-149、miRNA-7是GDM患者发生不良妊娠结局的风险预测因子,三者之间与胰岛素抵抗呈正相关性,参与GDM发病过程。

莱芜地区就诊妇女HPV感染现况与危险因素

目的分析莱芜地区自然就诊妇女人乳头瘤病毒(HPV)感染现况、高危因素及微小RNA(miR)-146a、miR-149-3p的预测价值。方法回顾性选取2020年1月-2022年11月于济南市第二妇幼保健院门诊行宫颈癌筛查的自然就诊妇女1200例为研究对象,按照是否感染HPV分为感染组(268例)和非感染组(932例),并通过调查问卷的方式收集妇女资料。分析莱芜地区自然就诊妇女HPV感染现况及基因型分布情况,通过单因素及多因素分析法分析莱芜地区自然就诊妇女HPV感染的高危因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-146a、miR-149-3p水平单独和联合检测对HPV感染的预测价值。结果1200例自然就诊妇女感染HPV的例数为268例,感染率为22.33%;其中HPV单一感染占66.79%,多重感染占33.21%;HPV单一感染中,HPV16、HPV18、HPV31为最常见亚型;年龄≤30岁、初次性生活年龄≤23岁、有配偶吸烟史、有宫颈阴道炎症、非避孕套避孕及miR-146a水平高、miR-149-3p水平低、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平高、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平高为HPV感染的高危因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清miR-146a、miR-149-3p水平单独检测对HPV感染的AUC值低于联合检测(P<0.05),且联合检测的敏感度、特异度分别为82.46%、86.05%,诊断价值较高。结论莱芜地区自然就诊妇女HPV感染率较高,以HPV16、HPV18、HPV31为最常见亚型;HPV感染的高危因素较多,且miR-146a、miR-149-3p水平联合诊断HPV感染的预测价值较高。

干扰hsa_circ_0004771对顺铂耐药胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨hsa_circ_0004771对顺铂(DDP)耐药胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外培养胃癌细胞HGC-27和顺铂耐药胃癌细胞HGC-27/DPP,用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测hsa_circ_0004771和miR^(-1)49的表达水平。用双荧光素酶报告基因实验验证HGC-27/DPP细胞中hsa_circ_0004771和miR^(-1)49的调控关系。将HGC-27/DPP细胞分为hsa_circ_0004771小干扰RNA(si-hsa_circ_0004771)组(转染si-hsa_circ_0004771)、小干扰RNA阴性对照(si-NC)组(转染si-NC)、miR^(-1)49组(转染miR^(-1)49模拟物)、模拟对照序列(miR-NC)组(转染miR-NC)、si-hsa_circ_0004771+miR^(-1)49抑制剂(anti-miR^(-1)49)组(共转染si-hsa_circ_0004771和anti-miR^(-1)49)、si-hsa_circ_0004771+抑制剂阴性对照序列(anti-miR-NC)组(共转染si-hsa_circ_0004771和anti-miR-NC),用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用划痕实验检测细胞的迁移情况。结果HGC-27和HGC-27/DPP细胞中hsa_circ_0004771相对表达水平分别为1.00±0.00和3.60±0.20,miR^(-1)49相对表达水平分别为1.00±0.00和0.12±0.01,差异均有统计学意义(均P<0.05)。hsa_circ_0004771在HGC-27/DPP细胞中靶向调控miR^(-1)49。si-hsa_circ_0004771组、si-NC组、miR^(-1)49组、miR-NC组、si-hsa_circ_0004771+anti-miR^(-1)49组和si-hsa_circ_0004771+anti-miR-NC组的细胞抑制率分别为(54.03±2.38)%,0,(47.27±3.18)%,0,(17.65±1.25)%和(54.52±2.20)%,集落形成数分别为(44.67±1.25),(104.00±2.94),(54.33±2.49),(104.00±3.56),(91.33±3.86)和(45.00±1.63)个,凋亡率分别为(22.35±1.56)%,(8.31±0.46)%,(19.52±1.03)%,(8.10±0.44)%,(22.35±1.50)%和(13.48±0.80)%,划痕愈合率分别为(27.14±1.21)%,(64.82±2.41)%,(34.08±1.18)%,(65.02±2.43)%,(50.67±2.92)%和(27.15±1.35)%。si-hsa_circ_0004771组的上述指标与si-NC组比较、miR^(-1)49组的上述指标与miR-NC组比较、si-hsa_circ_0004771+anti-miR^(-1)49组的上述指标与si-hsa_circ_0004771+anti-miR-NC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论hsa_circ_0004771在顺铂耐药胃癌细胞中表达升高,干扰其表达可能通过上调miR^(-1)49的表达,进而抑制顺铂耐药胃癌细胞的增殖和迁移,并诱导细胞凋亡。