微小RNA-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1在下肢深静脉血栓中的表达及作用机制

目的探讨微小RNA(miRNA)-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1(SRCIN1)在下肢深静脉血栓(LEDVT)中的表达及作用机制。方法收集2022年1月至2023年1月柳州市人民医院收治的60例LEDVT患者的临床资料作为LEDVT组,另纳入同期进行体检的60例健康者作为对照组。采集两组受试者的外周静脉血,并分离内皮祖细胞。通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-150的表达水平,利用生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-150的靶基因,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测SRCIN1蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测内皮祖细胞增殖情况。结果与对照组相比,LEDVT组内皮祖细胞中miRNA-150的相对表达量明显降低(P﹤0.01)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验证实SRCIN1是miRNA-150的靶基因;在野生型SRCIN1中,与转染miRNA-NC的细胞相比,转染miRNA-150 agomir细胞的荧光素酶活性明显降低(P﹤0.01)。在突变型SRCIN1中,miRNA-150对SRCIN1的负向调控作用消失。Western blot检测结果显示,与miRNA-150antagomir组内皮祖细胞相比,miRNA-150 agomir组内皮祖细胞中SRCIN1蛋白的表达水平降低(P﹤0.05);与对照组相比,LDVT组内皮祖细胞中SRCIN1蛋白的表达水平升高(P﹤0.05)。MTT实验检测结果显示,与miRNA-150antagomir组相比,miRNA-150 agomir组的吸光度(OD)值在48、72 h时均明显升高(P﹤0.01)。结论miRNA-150在内皮祖细胞中的表达水平降低可能与LEDVT的发生、发展有关。高表达的miRNA-150可能通过靶向SRCIN1促进内皮祖细胞的增殖,从而达到治疗LEDVT的目的。

房颤患者射频消融术后血浆微小RNA-21、微小RNA-150水平变化及其检测价值分析

目的:探讨房颤(AF)患者射频消融术(RFA)后血浆微小RNA-21(miR-21)、微小RNA-150(miR-150)水平变化及其检测价值。方法:选取86例AF患者为观察对象,按RFA术后AF是否复发分为复发组(n=22)、非复发组(n=64)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法测定血浆miR-21、miR-150水平,对比受试者手术前后以及复发组、未复发组血浆miR-21、miR-150表达差异,采用Spearman相关性分析RFA术后血浆miR-21、miR-150水平与AF复发的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析RFA术后血浆miR-21、miR-150水平对AF复发的预测价值。结果:RFA术后血浆miR-21水平低于术前(P<0.05),miR-150水平高于术前(P<0.05)。复发组RFA术后血浆miR-21水平高于未复发组(P<0.05),miR-150水平低于未复发组(P<0.05)。Spearman相关分析发现,RFA术后血浆miR-21水平与复发情况呈正相关(P<0.05),miR-150水平与复发情况呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,RFA术后血浆miR-21、miR-150水平及联合检测对AF复发均有预测效能(均P<0.05),曲线下面积(AUC)分别为0.783、0.675、0.812,其中联合检验预测效能最高,敏感度、特异性分别为86.36%、67.19%。结论:AF患者RFA术后血浆miR-21水平降低,miR-150水平升高,且其术后miR-21、miR-150水平与AF复发存在相关性,可通过联合检测患者RFA术后血浆miR-21、miR-150水平预测AF复律后复发情况。

miR-150-5p靶向ZEB1调控EMT对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)是否可靶向锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)调控子宫内膜癌(EC)细胞上皮间质转化(EMT)进而影响癌细胞的恶性生物学行为。方法RT-qPCR技术检测正常子宫内膜和EC组织中、子宫内膜上皮细胞系hEEC及EC细胞系Ishikawa和HEC-1-A中miR-150-5p相对表达量。过表达miR-150-5p,MTT法、菌落形成实验、伤口愈合实验和Transwell实验分别评估Ishikawa细胞活力、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与ZEB1的靶向关系;RT-qPCR检测miR-150-5p及ZEB1 mRNA相对表达量;Western blot技术检测ZEB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达量。结果与正常子宫内膜组织比较,EC组织中miR-150-5p相对表达量降低(P<0.05);与hEEC细胞比较,HEC-1-A细胞和Ishikawa细胞中miR-150-5p相对表达量降低(P<0.05),Ishikawa细胞中最低(P<0.05)。与空白组比较,miR-150-5p mimics组细胞490 nm处吸光度值、细胞菌落数、迁移数和侵袭数、ZEB1 mRNA和蛋白相对表达量及N-cadherin、Vimentin和MMP-9蛋白相对表达量显著降低,miR-150-5p相对表达量、E-cadherin蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。经生物信息学分析,ZEB1被预测为miR-150-5p的潜在靶基因。结论miR-150-5p可靶向ZEB1抑制癌细胞的恶性生物学行为,其作用机制可能与调控EC细胞EMT进展有关。

微小RNA-150在脓毒症患者外周血白细胞的表达及其临床意义

目的观察脓毒症患者外周血白细胞中微小RNA-150（miR-150）的表达变化,探讨其与脓毒症免疫细胞因子水平及严重程度的关系。方法采用实时定量PCR（qRT-PCR）检测40例脓毒症患者、20例全身性炎症反应综合征（SIRS）患者和20例正常对照外周血白细胞中miR-150表达量,并评价miRNA检测的稳定性和线性。酶联免疫吸附法测定TNF-α和IL-10浓度,序贯器官衰竭估计（SOFA）评分系统评价脓毒症患者的严重程度。对miR-150与白细胞总数、TNF-α、IL-10和SOFA评分之间进行相关分析。结果外周血标本在4℃保存5 d,白细胞中miR-150表达量无明显变化;最低检出限为6.97 pg/μL RNA,在6.97~6.97×104pg/μL RNA之间有良好的线性关系（r=0.999）。脓毒症组miR-150表达量较正常对照组显著降低（P〈0.01）,白细胞总数、IL-10水平和IL-10/TNF-α比值显著升高（P〈0.05）;而脓毒症组与SIRS组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。血清TNF-α水平在三组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。脓毒症患者中,死亡组miR-150表达量较存活组显著降低（P〈0.05）,而IL-10水平和IL-10/TNF-α比值显著升高（P〈0.01）,TNF-α水平差异无统计学意义（P〉0.05）。脓毒症患者miR-150表达量与SOFA评分、血清TNF-α和IL-10呈显著负相关（r值分别为-0.619、-0.457和-0.431,P〈0.05）;与WBC无显著相关性（P〉0.05）。血清TNF-α、IL-10和IL-10/TNF-α比值与SOFA评分无显著相关性（P〉0.05）。结论脓毒症患者外周血miR-150表达量显著降低,其水平不但能反映机体炎症反应状态,而且在一定程度上能作为判断疾病严重程度及预后的指标。

LncRNA ZFAS1靶向微小RNA-150-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA ZNFX1反义RNA 1(ZFAS1)靶向调控微小RNA-150-5p(miR-150-5p)表达及对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1及不同胃癌细胞(SGC-7901、HGC-27、MGC-803和BGC-823)的ZFAS1水平。脂质体法向BGC-823细胞转染针对ZFAS1的小干扰RNA片段si-ZFAS1(干扰组)或无关序列si-NC(NC组)并设未转染的细胞为对照组。QPCR、MTT法、Transwell小室实验和划痕实验测定BGC-823细胞的ZFAS1水平、增殖、侵袭和迁移能力的变化,QPCR和Western blotting检测Bcl-2和基质金属蛋白酶(MMP)-9的水平;双荧光素酶报告基因实验验证ZFAS1对miR-150-5p的靶向调控作用。结果胃癌细胞的ZFAS1水平均高于GES-1细胞(P<0.05),后续干扰实验选取ZFAS1水平最高的BGC-823细胞。干扰组的ZFAS1水平为0.269±0.074,低于对照组的1.171±0.263和NC组的1.088±0.142(P<0.05)。与NC组和对照组相比,干扰组BGC-823细胞的增殖活力下降(P<0.05);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(51.509±5.348)%和(145.662±12.328)个,低于NC组的(82.317±7.459)%和(341.342±21.814)个及对照组的(80.770±6.163)%和(339.234±17.255)个(P<0.05);干扰组的Bcl-2和MMP-9水平均低于其余两组(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。miR-150-5p模拟物能够抑制含有其结合位点的ZFAS1野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05),不影响ZFAS1突变型质粒的荧光素酶活性(P>0.05)。结论ZFAS1在胃癌细胞中高表达,下调其水平可抑制BGC-823细胞的增殖和迁移侵袭能力并发挥类似癌基因的作用,可能与靶向调控miR-150-5p有关,在胃癌靶向治疗中有一定应用前景。

自身免疫性甲状腺炎甲状腺组织和外周血单个核细胞中微小RNA-142-3p、微小RNA-150表达及临床意义

目的探讨甲状腺组织和外周血单个核细胞中微小RNA-142-3p(miR-142-3p)、微小RNA-150(miR-150)在桥本甲状腺炎(HT)中的表达水平及临床意义。方法选取2017年3月至2019年6月南阳市中心医院行甲状腺手术切除并经病理确诊为HT病人87例为HT组;同期选取南阳市中心医院行甲状腺腺瘤切除术的非癌病人73例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组甲状腺组织和外周血单个核细胞中miR-142-3p、miR-150表达水平;分析HF病人miR-142-3p、miR-150水平与甲状腺功能参数及相关细胞因子相关性。结果HT组甲状腺组织和外周血单个核细胞中miR-142-3p[(1.54±0.32)、(2.25±0.54)]比[(1.00±0.23)、(1.00±0.24)]、miR-150[(2.21±0.43)、(3.78±1.14)]比[(1.00±0.16)、(1.00±0.19)]表达水平均显著高于对照组(P<0.05);两组甲状腺功能参数及相关细胞因子水平比较,均差异有统计学意义,HT组促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平显著高于对照组(P<0.05),游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平显著低于对照组(P<0.05);HT病人甲状腺组织和外周血单个核细胞中miR-142-3p、miR-150水平呈正相关,且与TSH、TPOAb、IL-17、IL-6、IFN-γ、TGF-β1呈正相关,与FT3、FT4呈负相关(P<0.05)。结论甲状腺组织和外周血单个核细胞中miR-142-3p、miR-150水平的变化与HT有关。miR-142-3p、miR-150对评价HT的早期危险性、降低患病率有重要意义。

微小RNA-150在非小细胞肺癌外周血中的表达及其临床意义

目的:探讨微小RNA-150(miR-150)在非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)患者外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMC)中的表达及其临床意义。方法:采用实时定量PCR(quantitative reverse-transcriptase PCR,RT-qPCR)检测64例NSCLC患者、26例正常对照患者PBMC中miR-150表达量,并且分析其对NSCLC的诊断价值及与NSCLC临床病理参数间的关系。结果:miR-150水平在NSCLC组和对照组间差异无统计学意义(P=0.260),但是肺腺癌组miR-150水平显著高于对照组(P=0.001)、肺鳞癌组(P<0.001)。ROC曲线分析miR-150对NSCLC诊断的AUC为0.610(95%CI:0.493～0.728,P=0.060),miR-150对肺腺癌诊断的AUC为0.834(95%CI:0.734～0.934,P<0.01),而miR-150对肺腺癌和肺鳞癌鉴别诊断的AUC为0.951(95%CI:0.903～0.999,P<0.01)。NSCLC患者miR-150水平与肿瘤远处转移密切相关(P=0.014),与临床分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:肺腺癌患者PBMC中miR-150表达明显升高,并且可能成为鉴别诊断肺腺癌和肺鳞癌的新标志物。

非小细胞肺癌组织微小RNA-150的水平及其临床意义

目的探讨微小RNA-150(miR-150)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及其临床意义。方法收集本院2014年9月至2017年6月手术切除的NSCLC患者癌组织及配对癌旁组织73对,采用实时定量PCR(QPCR)检测NSCLC组织的miR-150水平,分析其与NSCLC临床病理特征(性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期和病理类型)的关系,根据随访资料分析不同miR-150水平NSCLC患者的预后情况。结果 QPCR结果显示NSCLC组织中的miR-150水平为2. 014±0. 227,高于癌旁组织的1. 023±0. 154,差异有统计学意义(P<0. 05); NSCLC患者的miR-150表达与性别、年龄、吸烟史和病理类型均无关,而与淋巴结转移、肿瘤大小和TNM分期有关(P<0. 05),且淋巴结转移阳性、肿瘤较大及临床分期较晚患者的miR-150水平较高。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,miR-150高表达者的中位生存期为27. 0个月,少于低表达者的34. 0个月(P<0. 05)。结论 MiR-150在NSCLC组织中高表达并参与了NSCLC的发生发展,该miRNA水平较高者的预后较差,可作为NSCLC潜在的分子诊断及预后监测标志物。

微小RNA-150对鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响研究

目的探讨微小RNA（miR）-150对于鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响,并分析其机制。方法 2014年1月—2015年6月,建立放疗抵抗的鼻咽癌细胞株CNE-2R。取CNE-2和CNE-2R,通过克隆形成实验计算不同放疗剂量下（0、3、6 Gy）的克隆形成率（PE）、细胞存活率,采用MTS法检测照射1、2、3、4、5 d时的细胞增殖活性,实时定量荧光聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测miR-150、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）mRNA水平,Western blotting法检测GSK3β水平。将CNE-2随机分为miR-150模拟物组（转染miR-150模拟物）、微小RNAs（miRs）无关序列组（转染miRs无关序列）,通过荧光素酶报告载体实验检测荧光素酶活性。结果 0 Gy放疗剂量时,CNE-2与CNE-2R的PE、细胞存活率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;3 Gy、6 Gy放疗剂量时,CNE-2R的PE、细胞存活率高于CNE-2（P〈0.05）。照射1-5 d时,CNE-2R的细胞增殖活性高于CNE-2（P〈0.05）。CNE-2R中miR-150水平高于CNE-2,GSK3βmRNA水平低于CNE-2（P〈0.05）。CNE-2R中GSK3β水平低于CNE-2（P〈0.05）。转染GSK3β野生型质粒后,miR-150模拟物组荧光素酶活性低于miRs无关序列组（P〈0.05）;转染GSK3β突变型质粒后,miRs无关序列组与miR-150模拟物组荧光素酶活性比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论miR-150参与了鼻咽癌细胞的放疗抵抗,GSK3β是miR-150的直接靶基因,miR-150-GSK3β轴可能成为一种新的用于合理治疗鼻咽癌的策略。

微小RNA-150靶向c-Myb表达对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响

目的探讨微小RNA-150(miR-150)靶向c-Myb表达对人T淋巴细胞白血病(T-LL)Jurkat细胞增殖的影响。方法体外培养人Jurkat细胞,分为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染negative control-miR-150)和miR-150过表达组(转染hsamiR-150 mimic)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Jurkat细胞中miR-150及c-Myb表达;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测Jurkat细胞增殖;流式细胞仪检测各组Jurkat细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-150和c-Myb的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组Jurkat细胞中c-Myb、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果空白对照组与阴性对照组Jurkat细胞中miR-150表达水平、c-Myb mRNA及蛋白表达水平、OD值、细胞凋亡率、及PCNA、Bax蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,miR-150过表达组Jurkat细胞中miR-150表达水平[(1.42±0.14)比(1.03±0.09)]、凋亡率[(20.79±1.15)%比(8.76±0.74)%]、Bax蛋白表达水平[(0.65±0.18)比(0.42±0.13)]显著升高(P<0.05),c-Myb mRNA[(0.66±0.14)比(0.98±0.09)]及蛋白表达水平[(0.37±0.06)比(0.64±0.12)]、OD值[(0.25±0.06)比(0.46±0.09)]、PCNA蛋白表达水平[(0.33±0.07)比(0.56±0.11)]显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,c-Myb是miR-150的靶基因。结论miR-150靶向c-Myb表达抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡。

血清miR-150-5p、miR-196a、miR-21-5p水平与宫颈癌患者病理参数的相关性

目的:探讨血清微小RNA-150-5p(miR-150-5p)、微小RNA-196a(miR-196a)、微小RNA-21-5p(miR-21-5p)水平与宫颈癌患者病理参数的相关性。方法:选取2020年1月至2023年1月该院收治的130例宫颈癌患者设为宫颈癌组,82例癌前病变患者设为癌前病变组,同期130名健康体检者设为对照组。比较三组血清miR-150-5p、miR-196a、miR-21-5p水平,并分析其与宫颈癌患者病理参数的相关性。结果:宫颈癌组、癌前病变组血清miR-150-5p、miR-196a、miR-21-5p水平均高于对照组,且宫颈癌组高于癌前病变组,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、肿瘤直径、病理类型宫颈癌患者血清miR-150-5p、miR-196a、miR-21-5p水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);低分化、国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润深度>1/2宫颈癌患者血清miR-150-5p、miR-196a、miR-21-5p水平均高于中高分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度≤1/2宫颈癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,血清miR-150-5p、miR-196a、miR-21-5p水平与宫颈癌患者FIGO分期、淋巴结转移、浸润深度均呈正相关(r>0,P<0.05),与分化程度呈负相关(r<0,P<0.05)。结论:血清miR-150-5p、miR-196a、miR-21-5p水平与宫颈癌患者FIGO分期、淋巴结转移、浸润深度均呈正相关,与分化程度呈负相关。

微小RNA-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨微小RNA(mi R)-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测肝癌及配对癌旁组织中mi R-150表达。原位杂交技术(ISH)进一步验证肝癌和配对癌旁组织mi R-150表达差异。将肝癌组织中mi R-150表达与临床病理特征进行关联分析。Kaplan-Meier法检测mi R-150阴性组和阳性组生存曲线。Cox单因素回归模型分析mi R-150表达与患者术后总生存的相关性。结果 q RT-PCR结果显示:与癌旁组织相比,12例中有8例肝癌组织低表达mi R-150,肝癌组织中mi R-150表达明显降低(P=0.034)。ISH结果与q RT-PCR结果相一致,即肝癌组织大部分为阴性或弱阳性表达,62%癌旁组织ISH染色强度高于配对的肝癌组织(P<0.001)。关联分析提示mi R-150表达与AFP、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、脉管癌栓存在明显负相关(P<0.05)。mi R-150阳性组患者术后总生存明显高于mi R-150阴性组(P=0.004,Kaplan-Meier法)。Cox单因素回归分析提示肝癌组织低表达mi R-150是患者不良预后指标(P=0.005)。结论肝癌组织低表达mi R-150与肿瘤侵袭表型相关,提示不良预后。

微小RNA-150对食管癌细胞增殖、凋亡和PI3K/Akt通路的影响

目的探讨微小RNA-150(miR-150)通过PI3K/Akt信号通路对食管癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将miR-150抑制剂和阴性对照转染至人食管癌Eca9706细胞株,以空脂质体作为空白对照。QPCR检测转染结果,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测cleaved caspase-3、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。在Eca9706细胞株中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002 15μmol/L,检测其对细胞增殖、凋亡以及cleaved caspase-3、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达的影响。结果空白对照组和阴性对照组中miR-150表达的差异无统计学意义(P>0. 05),抑制剂组中miR-150的相对表达量为0. 11±0. 05,低于空白对照组和阴性对照组(P<0. 01)。空白对照组和阴性对照组24、48和72h细胞增殖率的差异无统计学意义(P>0. 05),而抑制剂组24、48和72 h细胞增殖率的差异分别为(8. 56±2. 67)%、(25. 43±4. 89)%和(32. 71±5. 42)%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0. 05)。空白对照组和阴性对照组48 h细胞凋亡率的差异无统计学意义(P>0. 05),而抑制剂组的细胞凋亡率为(16. 32±3. 19)%,高于空白对照组和阴性对照组(P<0. 01)。空白对照组和阴性对照组间PI3K、p-Akt和cleaved caspase-3蛋白表达的差异无统计学意义(P>0. 05),抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组(P<0. 01),cleaved caspase-3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组(P<0. 01)。3组间Akt蛋白表达的差异无统计学意义(P>0. 05)。LY294002处理组细胞增殖率和PI3K、p-Akt表达均明显低于未处理组(P<0. 01),细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白表达显著高于未处理组(P<0. 01),而两组间Akt表达的差异无统计学意义(P>0. 05)。结论干扰miR-150表达能够抑制食管癌Eca9706细胞株的增殖,并通过上调cleaved caspase-3促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。

微小RNA-150-3p靶向调控IGF1表达及对胃癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨微小RNA-150-3p(miR-150-3p)对胰岛素样生长因子1(IGF1)表达的靶向调控及胃癌细胞侵袭迁移的影响。方法采用荧光定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜细胞GES1和胃癌细胞系(AGS和MGC803)的miR-150-3p水平;脂质体法向MGC803细胞转染miR-150-3p模拟物(过表达组)或抑制物(抑制组)并以转染阴性对照序列的细胞为对照组,采用QPCR检测转染24 h后的miR-150-3p和IGF1水平以评估转染效果,划痕实验和Transwell实验分别检测划痕愈合率和穿膜细胞数目,Western blotting检测IGF1、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-150-3p与IGF1的靶向关系。结果AGS和MGC803细胞的miR-150-3p水平为3.711±0.726和4.861±0.854,均高于GES1细胞的1.025±0.265(P<0.05)。对照组转染24 h后的miR-150-3p水平为1.045±0.574,过表达组的升高至4.168±0.897,而抑制组的降低为0.247±0.097(P<0.05)。对照组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(54.5±3.2)%和(195.2±12.8)个,过表达组的分别升高至(75.2±4.1)%和(274.6±15.9)个,而抑制组降低至(21.5±2.1)%和(124.7±10.6)个(P<0.05)。与对照组比较,过表达组的p-PI3K和p-Akt水平升高,而抑制组的两蛋白水平降低(P<0.05)。miR-150-3p模拟物可抑制IGF1野生型3’端非翻译区的相对荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型的无影响(P>0.05)。对照组IGF1的mRNA和蛋白水平分别为1.025±0.086和0.458±0.073,而过表达组分别降低至0.341±0.059和0.147±0.081(P<0.05)。结论miR-150-3p在胃癌细胞中高表达,下调该miRNA水平可抑制迁移侵袭及PI3K/Akt通路激活,可能通过靶向IGF1来发挥促癌作用,该miRNA有望成为胃癌的潜在诊疗靶点。

结直肠癌患者血清miR-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义

目的结直肠癌患者血清微小RNA(miR)-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义。方法回顾性选择2020年6月至2022年11月在沧州市人民医院就诊的结直肠癌患者116例为结直肠癌组,同时选取同期在本院治疗的结肠息肉患者60例作为结直肠良性肿瘤组,选择同期在本院行健康体检者60名为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平;采用Pearson相关性分析对结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平的相关性进行分析;分析结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与病理特征的关系;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-150-5p、miR-200b-3p表达水平对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组、结直肠良性肿瘤组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于对照组,且结直肠癌组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于结直肠良性肿瘤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平呈正相关(r=0.562,P<0.05)。结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P<0.05),其中低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度T 3~T 4的结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平显著低于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度T_(1)~T_(2)的患者(P<0.05)。血清miR-150-5p、miR-200b-3p单独及联合诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.828、0.893,联合诊断AUC显著高于单独预测AUC(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平降低,二者可作为诊断结直肠癌发生的辅助指标。

脓毒症患者外周血miR-125b、miR-150表达及其临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血微小核糖核酸-125b(miR-125b)、微小核糖核酸-150(miR-150)表达及其临床意义。方法 选取邢台市中心医院收治的103例脓毒症患者为研究组,另选取体检健康者82例为健康组,均测定外周血miR-125b、miR-150表达及血清白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平。对比研究组、健康组各指标水平,采用Pearson相关性分析法分析脓毒症患者miR-125b、miR-150表达与IL-6、CRP、PCT水平的关系;比较不同严重程度脓毒症患者及不同预后患者的miR-125b、miR-150表达;采用多因素Logistic回归分析法分析miR-125b、miR-150表达与预后的关系;通过受试者工作特征曲线分析miR-125b、miR-150表达对脓毒症预后的预测价值。结果 研究组外周血miR-125b表达与IL-6、CRP、PCT水平分别为(2.43±0.35)、(159.42±26.81)pg/mL、(115.47±20.38)mg/L、(10.57±2.03)ng/mL,均高于健康组(t=31.012、52.149、48.978、46.945,均P=0.000),miR-150表达(0.21±0.04)低于健康组(t=52.008,P=0.000);经Pearson相关性分析,脓毒症患者外周血miR-125b表达与IL-6(r=0.706,P=0.016)、CRP(r=0.711,P=0.013)、PCT(r=0.759,P=0.001)水平均呈正相关,miR-150与IL-6(r=-0.702,P=0.018)、CRP(r=-0.709,P=0.015)、PCT(r=-0.728,P=0.006)水平均呈负相关;脓毒症者外周血miR-125b表达(2.16±0.43)低于严重脓毒症者(2.82±0.27)(t=8.815,P=0.000),脓毒症者外周血miR-150表达(0.24±0.02)高于严重脓毒症者(0.16±0.03)(t=16.248,P=0.000);入院28 d生存者外周血miR-125b表达(2.25±0.41)低于死亡者(3.13±0.36)(t=8.982,P=0.000),生存者外周血miR-150表达(0.23±0.04)高于死亡者(0.13±0.02)(t=11.078,P=0.000);年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、疾病严重程度及外周血miR-125b表达均是脓毒症患者预后的危险因素(OR=2.438、2.689、2.866、2.824,P=0.036、0.012、0.000、0.005),miR-150表达是其保护因素(OR=0.390,P=0.003);外周血miR-125b、miR-150表达预测脓毒症预后的最佳截断点分别为2.854、0.179,灵敏度分别为76.19%、80.95%,特异度分别为79.27%、75.61%,曲线下面积分别为0.861、0.843。结论 与健康人群比较,脓毒症患者外周血miR-125b表达升高,而miR-150表达降低,且miR-125b、miR-150表达均与炎症因子水平、疾病严重程度及预后相关,并对预后具有一定的预测价值,可作为临床判断病情严重程度及预后的指标。

血清微小RNA-150表达水平与晚期非小细胞肺癌患者行表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂治疗效果及预后的关系

目的探讨血清微小RNA-150(miRNA-150)表达水平与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者行表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗效果及预后的关系。方法选取172例晚期NSCLC患者为研究对象,均采用EGFR-TKI吉非替尼进行治疗。2个疗程后评估所有NSCLC患者的疗效,依据疗效将患者分为有效组(n=46)和无效组(n=126)。采用实时荧光定量PCR法检测两组患者治疗前后血清miRNA-150相对表达水平。比较不同临床特征NSCLC患者的EGFR-TKI疗效,以及不同治疗前血清miRNA-150相对表达水平患者的生存率。采用多因素Cox回归模型分析NSCLC患者行EGFR-TKI治疗后生存情况的影响因素。结果治疗后,有效组患者血清miRNA-150相对表达水平低于治疗前及无效组,无效组患者血清miRNA-150相对表达水平高于治疗前(均P<0.05)。无吸烟史、治疗前miRNA-150相对表达水平<1.76的NSCLC患者EGFR-TKI疗效分别优于有吸烟史、治疗前miRNA-150相对表达水平≥1.76者(均P<0.05)。治疗前血清miRNA-150相对表达水平<1.76者的2年生存率高于治疗前miRNA-150相对表达水平≥1.76者(均P<0.05)。组织学类型、治疗前miRNA-150相对表达水平是NSCLC患者行EGFR-TKI治疗后生存情况的独立影响因素(均P<0.05)。结论治疗前血清miRNA-150表达水平低与晚期NSCLC患者行EGFR-TKI治疗的效果及预后较好密切相关,监测血清miRNA-150水平或有助于评估NSCLC患者预后。

微小RNA-150对急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后6月内主要不良心血管事件的预测价值

目的探究微小RNA-150(miR-150)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者行经皮冠状动脉介入术(PCI)后主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取我院2016年1月至2019年1月收治的130例确诊为STEMI并行急诊PCI治疗患者,依照患者PCI术后6月是否发生MACE分为MACE组(n=36)和非MACE组(n=94)。比较2组患者miR-150表达水平及临床一般资料。Logistic回归分析急性STEMI患者PCI术后6月发生MACE的危险因素。Spearman相关性分析miR-150与各危险因素的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-150对急性STEMI患者PCI术后6月内MACE的预测价值。结果 2组患者在性别、年龄、合并症(糖尿病、高血压、冠心病、高脂血症)、梗死部位、术后用药、急诊PCI时间、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三酯、血红蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05)。MACE组心率(HR)、收缩压、舒张压、血小板、C反应蛋白(CRP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)显著高于非MACE组,左心室射血分数(LVEF)、miR-150水平显著低于非MACE组,差异具有统计学意义(P=0.000)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、高血压史、HR、LVEF、CRP、CK-MB、NLR、miR-150均为急性STEMI患者PCI术后6月发生MACE的独立危险因素。相关性分析结果显示,miR-150与高血压史、HR、CRP、CK-MB、NLR水平呈明显负相关性,与年龄、LVEF呈明显正相关性(P=0.000)。ROC曲线表明,miR-150诊断急性STEMI患者PCI术后6月内发生MACE的切点为0.23,曲线下面积为0.905(95%CI 0.871~0.939)。结论低水平miR-150为急性STEMI患者PCI术后6月内发生MACE的独立危险因素,检测miR-150水平可帮助评估急性STEMI患者预后。

血清长链非编码RNA XIST联合miR-150-5p早期预测脓毒症并发急性肺损伤的价值

目的探讨血清长链非编码RNA XIST(lncRNA XIST)联合微小RNA(miR)-150-5 p对脓毒症患者并发急性肺损伤(ALI)的早期预测价值。方法收集2022年9月—2024年1月福建医科大学孟超肝胆医院收治的102例脓毒症患者作为研究对象,根据入院48 h氧合指数将其分为观察组32例(脓毒症并发ALI)和70例脓毒症对照组(脓毒症未并发ALI);选取30例同期健康体检者作为健康对照组。收集患者的基本临床资料,记录急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分。采用qRT-PCR检测血清lncRNA XIST和miR-150-5 p表达水平。比较组间差别,分析主要指标的相关性,采用二元logistic回归分析脓毒症患者并发ALI的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分别评估lncRNA XIST、miR-150-5 p及两者联合对脓毒症患者并发ALI的早期预测价值。结果与健康对照组比较,观察组和脓毒症对照组血清lncRNA XIST相对表达量均升高,miR-150-5 p相对表达量均降低,且观察组变化更明显,差别均有统计学意义(P<0.01)。血清lncRNA XIST、miR-150-5 p与APACHEⅡ评分的相关性均有统计学意义(r=0.518,r=-0.492,均为P<0.01)。二元logistic回归分析显示,高APACHEⅡ评分、lncRNA XIST高表达、miR-150-5 p低表达是脓毒症患者并发ALI的独立危险因素(P<0.05)。lncRNA XIST、miR-150-5 p单独预测脓毒症患者并发ALI的曲线下面积(AUC)分别为0.725(95%CI:0.628~0.809)和0.706(95%CI:0.608~0.792),联合预测的AUC为0.916(95%CI:0.844~0.962),优于各自单一预测效能,且具有较高的灵敏度(96.9%)和特异度(81.4%)。结论血清lncRNA XIST联合miR-150-5 p在预测脓毒症患者并发ALI方面具有一定的临床价值,可作为早期预警指标。

微小RNA-150-5p抑制鼻咽癌细胞恶性增殖及增强放疗敏感性的作用研究

目的 探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在鼻咽癌组织中的表达水平及其对癌细胞增殖和放疗敏感性的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-150-5p的表达水平。常规培养鼻咽癌细胞CNE2进行miR-150-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-150-5p过表达组(miR-150-5p mimic组)。采用MTT实验检测各组CNE2细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测各组CNE2细胞的凋亡情况;采用Western blot检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)的表达。结果 miR-150-5p在鼻咽癌组织中的表达水平为(0.74±0.39),低于癌旁组织中的(1.44±0.54),差异有统计学意义(t=8.140,P<0.001)。转染48 h后,miR-150-5p mimic组CNE2细胞中miR-150-5p的表达水平为(6.31±1.20),高于NC组中的(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=7.647,P<0.001)。MTT实验结果显示,在24、48、72 h时,miR-150-5p mimic组CNE2细胞增殖能力均低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。经0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 Gy放射线辐射后,miR-150-5p mimic组细胞增殖率低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。采用2 Gy射线剂量照射CNE2细胞后,与NC组相比,miR-150-5p mimic组细胞凋亡率增加,CNE2细胞中pPI3K、pAKT和pmTOR蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 鼻咽癌细胞中miR-150-5p表达下调。过表达miR-150-5p抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡,同时可有效增强鼻咽癌细胞的放疗敏感性;其可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路发挥作用,miR-150-5p可能是增强鼻咽癌放疗敏感性药物的作用靶点。