早期食管癌患者外周血微小RNA-15b和微小RNA-34c的表达水平及其临床意义

目的探讨早期食管癌患者外周血中微小RNA(miRNA)-15b和miRNA-34c表达水平及其临床意义。方法纳入113例早期食管癌患者(食管癌组)及113例健康者(对照组)。检测两组血清miRNA-15b、miRNA-34c表达水平。分析miRAN-15b和miRAN-34c与早期食管癌发生及临床病理特征关系,并评估两者对早期食管癌诊断价值。结果食管癌组血清miRNA-15b、miRNA-34c表达水平均低于对照组(均P<0.05)。低分化早期食管癌患者血清miRNA-15b、miRNA-34c水平低于高、中分化患者(均P<0.05),TNM分期Ⅱ期患者血清miRNA-15b、miRNA-34c水平低于TNM分期Ⅰ期患者(均P<0.05)。miRNA-15b相对表达水平≤0.78、miRNA-34c相对表达水平≤0.69是早期食管癌发生的危险因素(均P<0.05)。外周血血清miRNA-15b相对表达水平与miRNA-34c相对表达水平联合预测早期食管癌的曲线下面积为0.949(P<0.001),敏感度为93.00%,特异度为81.80%,均高于单一指标。结论早期食管癌患者血清中miRNA-15b与miRNA-34c均低表达,这可能与食管癌发生与发展有关。两者联合诊断早期食管癌价值较高。

长链非编码RNA DLX6-AS1调控微小RNA-15b和磷脂酶D1影响口腔鳞状细胞癌侵袭转移的分子机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)生长停滞特异性蛋白6-反义RNA1(growth arrest specific protein 6-antisense RNA1,DLX6-AS1)对口腔鳞状细胞癌(口腔鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测口腔鳞癌组织及癌旁组织中DLX6-AS1、微小RNA-15b(microRNA-15b,miR-15b)和磷脂酶D1(phospholipase D1,PLD1)mRNA的表达水平。转染DLX6-AS1小干扰RNA至口腔鳞癌细胞HSC3,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、Transwell小室和Western印迹法(Western blot)检测抑制DLX6-AS1表达对HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,以及对p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和E-钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达的影响。分别共转染miR-15b抑制剂或PLD1过表达载体与DLX6-AS1小干扰RNA至HSC3细胞,用上述相同方法观察抑制miR-15b或过表达PLD1对DLX6-AS1表达抑制的HSC3细胞增殖、迁移和侵袭能力,以及对p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证DLX6-AS1与miR-15b及miR-15b与PLD1的调控关系。结果:与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织中DLX6-AS1和PLD1 mRNA表达水平升高(P<0.001),miR-15b表达水平降低(P<0.001)。抑制DLX6-AS1表达可降低HSC3细胞存活率、迁移和侵袭,以及MMP-2的蛋白表达水平(P<0.001),提高p21和E-cadherin蛋白表达水平(P<0.001)。抑制miR-15b表达或过表达PLD1均可降低抑制DLX6-AS1表达对HSC3细胞的存活率、迁移和侵袭及P21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达的影响。DLX6-AS1在HSC3细胞中靶向负调控miR-15b,miR-15b靶向负调控PLD1。结论:抑制DLX6-AS1表达可能通过靶向调控miR-15b和PLD1轴抑制口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

微小RNA-15b对结直肠癌细胞增殖的影响及其作用机制

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-15b对结直肠癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法利用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测结直肠癌细胞株和正常结直肠细胞中mRNA的表达水平；构建pMIR-Report-转移抑制因子（MTSS1）及pMIR-Report-MTSS1 mut重组质粒，利用双荧光素酶报告系统验证miR-15b与MTSS1之间的靶向关系；在结直肠癌细胞HCT116中转染miR-15b抑制剂和miR-15b mimics，噻唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖，流式细胞术检测周期，PT-PCR和Western blot分别检测MTSS1 mRNA及其蛋白的表达。结果miR-15b在结直肠细胞中表达上调，MTSS1 mRNA表达下调；miR-15b能靶向抑制MTSS1的表达；miR-15b可促进HCT116细胞增殖，抑制miR-15b能抑制HCT116细胞增殖。转染miR-15b抑制剂后，MTSS1 mRNA的表达水平（2.532±0.190）明显升高，转染miR-15b mimics后MTSS1 mRNA表达水平（0.447±0.065）明显降低，与阴性对照组（1.107±0.084）比较差异均有统计学意义（P＝0.004、0.001），同时抑制miR-15b能够上调MTSS1水平。结论miR-15b通过靶向下调MTSS1促进结直肠癌细胞增殖，抑制miR-15b可上调MTSS1的表达，从而抑制癌细胞的增殖。

绝经前子宫内膜癌组织微小RNA-15b的表达水平及临床意义

目的明确绝经前子宫内膜癌组织中微小RNA(MicroRNA)-15b表达水平,并分析其与临床病理参数的关系。方法收集2016年3月至2018年6月陕西省人民医院妇科经手术切除送检的64例绝经前子宫内膜癌组织及28例绝经前正常子宫内膜组织,应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测MicroRNA-15b的表达情况,并分析MicroRNA-15b表达水平与绝经前子宫内膜癌病理参数的关系。结果绝经前子宫内膜癌中MicroRNA-15b的相对表达量低于正常子宫内膜组织(1.38±0.28比2.55±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期、浸润深度≥1/2肌层、发生淋巴结转移、雌激素受体(ER)阴性、孕激素受体(PR)阴性的绝经前子宫内膜癌组织中MicroRNA-15b表达水平显著低于Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度<1/2肌层、无淋巴结转移、ER阳性、PR阳性的癌组织(P<0.05);而不同年龄、不同病理类型、不同病理分级的绝经前子宫内膜癌组织中MicroRNA-15b表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝经前子宫内膜癌组织中MicroRNA-15b表达水平低,且与病理分期、浸润深度、淋巴结转移及激素受体密切相关,上调MicroRNA-15b表达或可成为治疗绝经前子宫内膜癌新的方向。

微小RNA-15b在结直肠癌中的表达及其细胞生物学功能

目的 观察微小RNA（miR）-15b在结直肠癌中的表达及其对直肠癌SW480细胞株生物学功能的影响.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测40例结直肠癌组织及40例相应正常结直肠组织中miR-15b的表达,同时采用瞬时转染技术对SW480细胞株中miR-15b表达进行下调,通过Transwell、噻唑蓝（MTT）及锥虫蓝染色分别检测细胞的迁移、增殖及存活.结果 miR-15b在结直肠癌组织中的表达水平为8.397±1.245,明显高于正常组织的3.201±1.122,差异有统计学意义（P＜0.01）.miR-15b在结直肠癌组织中的表达与TMN分期和淋巴结转移有关（P＜0.05）.miR-15b表达下调后,细胞的增殖、迁移及生存能力能力明显下降.结论 miR-15b表达与结直肠癌的发生及发展相关,高miR-15b有助于直肠癌细胞的迁移、增殖及存活.

微小RNA-15b在胰腺癌中的表达及增殖、迁移、凋亡功能研究

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-15b在胰腺癌(PC)的表达及其对胰腺癌细胞株增殖、迁移、凋亡的影响。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-15b在4种购自中国科学院细胞库的胰腺癌细胞株[SW1990、人胰腺癌细胞株(CFPAC-1)、PANC-1、BxPC-3]和购自美国ATCC细胞库的人正常胰腺导管上皮细胞细胞株(HPDE6c7)的表达量。将稳定转染miR-15b短发卡RNA(shRNA)的CFPAC-1、PANC-1作为实验组,以转染阴性对照(NC)正常表达miR-15b的CFPAC-1、PANC-1作为对照组。转染后细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测CFPAC-1、PANC-1的增殖能力;Transwell迁移实验检测CFPAC-1、PANC-1的迁移能力;流式细胞术检测CFPAC-1、PANC-1的凋亡率。应用SPSS 19.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,多组资料间比较使用单因素方差分析和LSD-t检验,计数资料采用率值表示,组间比较采用χ^2检验。结果miR-15b在4株胰腺癌细胞株(SW1990、CFPAC-1、PANC-1、BxPC-3)的表达量(3.63±1.02、5.28±0.76、6.72±1.39、4.68±1.56)较HPDE6c7的表达量(1.08±0.23)明显增高,差异有统计学意义(t=9.944、10.326、12.013、15.877,P<0.01)。低表达miR-15b组的CFPAC-1在2、3、4 d细胞增殖能力shRNA(0.51±0.04、0.94±0.06、1.25±0.15)比对照组的CFPAC-1(0.68±0.06、1.21±0.09、1.95±0.12)显著下降,差异有统计学意义(t=8.256、6.350、7.002,P<0.05);低表达miR-15b组的PANC-1在2、3、4 d细胞增殖能力shRNA(0.48±0.05、0.76±0.13、1.44±0.25)比对照组的PANC-1(0.58±0.07、0.98±0.13、1.86±0.14)显著下降,差异有统计学意义(t=9.988、10.022、13.050,P<0.01)。低表达miR-15b组的CFPAC-1、PANC-1穿过Transwell小室的细胞数量[(38.47±4.69)个、(47.83±12.47)个]比对照组细胞数[(62.39±7.39)个、(68.97±8.44)个]明显减少,差异有统计学意义(t=5.798、8.465,P<0.05)。低表达miR-15b组CFPAC-1、PANC-1细胞凋亡率[(14.68±3.21)%、(11.57±2.52)%]较对照组细胞凋亡率[(4.29±1.42)%、(4.73±0.38)%]明显增高,差异有统计学意义(t=6.350、8.669,P<0.05)。结论miR-15b在PC细胞中高表达,低表达miR-15b会降低PC细胞的增殖和迁移能力,促进PC细胞凋亡。

长链非编码RNA核富集转录体1通过微小RNA-15b促进胰腺癌侵袭和转移

目的探讨长链非编码RNA核富集转录体1(LncNEAT1)胰腺癌中的表达水平及其影响胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,分析胰腺癌转移与LncNEAT1、微小RNA-15b(miR-15b)之间的相关性,探讨LncNEAT1影响胰腺癌细胞生物学表型的机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺癌组织及胰腺癌细胞中LncNEAT1、微小RNA-15b(miR-15b)的表达水平,小干扰RNA转染至胰腺癌细胞SW1990中,Transwell实验检测转染后胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力;过表达NEAT1后观察miR-15b的表达水平;双荧光素酶报告实验验证LncNEAT1与miR-15b的调控关系。结果胰腺癌组织中LncNEAT1表达水平(4.29±0.56)高于癌旁组织(2.21±0.30,t=19.21,P<0.001);miR-15b在胰腺癌组织中的表达水平(3.10±0.12)高于癌旁组织(2.01±0.35,t=6.45,P<0.01);LncNEAT1小干扰RNA转染至胰腺癌细胞SW1990后,胰腺癌细胞的迁移能力[(68.19±2.33)、(58.07±3.73)个/视野]显著低于对照组[(180.39±10.87)个/视野,t=6.02、8.43,P<0.01,P<0.01],转染后SW1990细胞侵袭能力[(50.01±5.73)、(49.68±8.86)个/视野]明显低于对照组[(112.20±10.93)个/视野,t=5.38、6.95,P<0.05,P<0.01]。NEAT1的表达与胰腺癌患者TNM分期、有无淋巴结转移密切相关(χ^(2)=3.92、5.74,P<0.05,P<0.05);miR-15b的表达与胰腺癌患者TNM分期、有无淋巴结转移密切相关(χ^(2)=4.315、4.642,P<0.05,P<0.05);双荧光素酶报告实验表明miR-15b可明显降低MUT-NEAT1-AS1荧光素酶活性(t=11.53,P<0.01),LncNEAT1可负向调控miR-15b。结论抑制LncNEAT1表达可能通过调控miR-15b抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

MicroRNA-15b下调Bcl-2促进耐药肺癌细胞凋亡

目的探讨微小RNA-15b(microRNA-15b,miR-15b)对人肺癌耐药细胞A549/DDP凋亡的影响。方法采用体外转染法将MicroRNA-15b瞬时转染到A549/DDP细胞后,应用Real-time PCR检测A549/DDP细胞中MicroRNA-15b的表达情况;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡变化;并用Western印迹法(Western blot)检测细胞中Bcl-2表达。结果转染后miR-15b组的miR-15b表达水平显著增加(P<0.05);miR-15b组细胞凋亡率为:32.4%±5.1%,与Mock组(5.73%±1.2%)和miR-15b-Cont(6.24%±2.4%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-15b组的Bcl-2表达量较对照组明显增加。结论 miR-15b可能通过下调Bcl-2的表达从而诱导A549/DDP细胞的凋亡,这可能为肺癌耐药的治疗提供新靶点。

抑郁症患者外周血中miR-15b、miR-503表达水平及其与认知功能的关系

目的探讨抑郁症患者外周血中微小RNA(microRNA,miR)-15b、miR-503表达水平及其与认知功能的关系。方法选取2023年1月至2024年6月绍兴市第七人民医院收治并确诊的103例抑郁症患者作为研究组,另选取同期94名健康体检者作为对照组。采用蒙特利尔认知评估量表(Montreal cognitive assessment,Mo CA)评估抑郁症患者的认知功能,并分为认知功能正常组(n=68)和认知功能障碍组(n=35)。采用Pearson法分析miR-15b、miR-503表达水平与认知功能的相关性;受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析miR-15b、miR-503水平对抑郁症患者认知功能障碍的诊断价值。结果研究组患者外周血中miR-15b、miR-503水平均低于对照组(P<0.05);认知功能障碍组患者外周血中miR-15b、miR-503水平均低于认知功能正常组(P<0.05);认知功能正常组患者的MoCA、简易精神状态检查量表评分高于认知功能障碍组(P<0.05);Pearson分析结果显示,抑郁症患者外周血中miR-15b、miR-503水平与Mo CA评分呈显著正相关(r=0.635、0.668,P<0.05);miR-15b单独诊断抑郁症患者认知功能障碍的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.836(95%CI:0.750~0.902),敏感度、特异性分别为77.14%、89.71%;miR-503单独诊断抑郁症患者认知功能障碍的AUC为0.892(95%CI:0.816~0.945),敏感度、特异性分别为80.00%、88.24%;miR-15b和miR-503联合诊断的AUC显著大于miR-15b、miR-503单独诊断。结论miR-15b、miR-503在抑郁症患者中表达降低,二者对抑郁症患者认知功能障碍的诊断价值较高。

血清miR-15b、DCLK1水平与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨宫颈癌患者血清miR-15b、双皮质素样激酶1(DCLK1)水平与临床病理特征及预后的关系。方法选取155例宫颈癌患者(研究组),同时选取150例健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR技术测定宫颈癌患者血清miR-15b,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清DCLK1,并分析两指标与宫颈癌患者临床病理特征和预后的关系。结果研究组血清miR-15b水平较对照组降低,而血清DCLK1水平较对照组升高(P均<0.05)。血清miR-15b、DCLK1水平均与宫颈癌患者FIGO分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)。血清miR-15b低水平者3年总生存率较高水平者降低,而DCLK1高水平者3年总生存率较低水平者降低(P均<0.05)。Cox回归分析显示,FIGO分期ⅢA+ⅢB期、低水平miR-15b及高水平DCLK1是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论宫颈癌患者血清DCLK1水平升高,而血清miR-15b水平降低,且二者均与FIGO分期、淋巴结转移有关,对评估预后具有重要的临床价值。

血清miR-15b、miR-29a和CysC在妊娠高血压疾病肾脏损害中的临床诊断价值

目的观察血清miR-15b、miR-29a和胱抑素C(CysC)在妊娠高血压疾病(HDCP)肾脏损害中的临床诊断价值。方法选择2017年1月-2018年12月在上海中医药大学附属第七人民医院妇产科诊治的HDCP患者108例作为HDCP组。根据病情的严重程度分为妊娠高血压组39例、子痫前期轻度组35例和子痫前期重度组34例。选择同期正常妊娠在医院行体检孕妇和健康体检女性分别作为正常妊娠组和健康对照组,每组各30例。采用qRTPCR法检测各组血清miR-15b和miR-29a表达,并分析miR-15b、miR-29a、CysC与HDCP严重程度、肾功能异常、肾功能损害严重程度的关系,分析其诊断肾功能损伤的敏感度和特异度。结果 HDCP组血清miR-15b、CysC和β2-MG表达水平明显高于正常妊娠组、健康对照组(P <0.01),而血清miR-29a表达水平明显低于正常妊娠组、健康对照组(P<0.01)。HDCP患者肾功能异常亚组血清miR-15b、CysC和β2-MG水平明显高于肾功能正常亚组(P<0.01),血清miR-29a水平明显低于肾功能正常亚组(P <0.01)。血清miR-15b、CysC和β2-MG水平随HDCP严重程度、肾功能分期升高而升高,而血清miR-29a水平随HDCP严重程度、肾功能分期升高而降低(P <0.01)。HDCP患者血清miR-15b、miR-29a和CysC表达水平诊断HDCP肾功能损害的效能明显高于β2-MG(P <0.05),而各指标之间差异无统计学意义(P>0.05),三者联合检测HDCP患者肾功能损害的AUC为0.993,敏感度为95.1%,特异度为100%,明显优于单项指标(P <0.01)。结论 miR-15b、miR-29a和CysC参与了妊娠高血压疾病肾脏损害的发生发展过程,联合miR-15b、miR-29a和CysC指标诊断HDCP肾损害具有较高的敏感度和特异度。

miR-15b通过下调细胞因子诱导的杀伤细胞PD-1表达抑制宫颈癌细胞增殖

目的:探讨微小RNA-15b(miR-15b)与程序性死亡蛋白-1(PD-1)在细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)抑制宫颈癌细胞增殖过程中的调控作用,并初步分析其中miR-15b与PD-1的可能作用机制。方法:采用传统方法培养CIK细胞,采用流式细胞仪检测CIK细胞免疫表型,CCK-8法检测CIK细胞对宫颈癌细胞(Si Ha)增殖的影响。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白印迹(WB)法检测CIK细胞共培养前后Si Ha细胞中miR-15b及PD-1表达水平。实验将CIK细胞共培养Si Ha细胞分为3组:空白对照组(未进行任何处理),NC组(加入miR-15b阴性对照质粒),si-miR-15b组(加入miR-15b siRNA)。采用qRTPCR与WB分别检测各组miR-15b及PD-1表达水平;CCK-8法检测各组Si Ha细胞增殖情况。采用WB法检测细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki67表达。结果:CIK细胞共培养组Si Ha细胞增殖抑制率显著高于单纯培养Si Ha细胞组(P <0. 05);CIK细胞共培养后Si Ha细胞中miR-15b表达水平显著高于单纯培养Si Ha细胞组(P <0. 05),而PD-1蛋白表达水平显著降低(P <0. 05);si-miR-15b组miR-15b表达水平、Si Ha细胞增殖抑制率均显著低于空白对照组、NC组(P <0. 05),而PD-1、PCNA、Ki67蛋白表达均显著升高(P <0. 05)。结论:miR-15b可能通过下调CIK细胞上PD-1表达进而抑制宫颈癌细胞增殖。

老年骨质疏松性椎体骨折患者血清miR-15b和miR-122表达变化及其意义

目的探讨老年骨质疏松性椎体骨折(OVF)患者血清微小RNA-15b(miR-15b)、微小RNA-122(miR-122)表达变化及其意义。方法选择老年OVF患者93例(观察组),同期体检健康的志愿者93例(对照组),采集所有研究对象入组后清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-15b、miR-122表达。采用Pearson相关分析法分析老年OVF患者血清miR-15b表达与血清miR-122表达的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-15b、miR-122表达对老年OVF的诊断效能。结果除骨密度外,两组性别、年龄、BMI以及合并高血压和吸烟史例数比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。观察组血清miR-15b相对表达量低于对照组,血清miR-122相对表达量高于对照组(P均<0.05)。老年OVF患者血清miR-15b相对表达量与骨密度呈正相关关系(r=0.776,P<0.05),血清miR-122相对表达量与骨密度呈负相关关系(r=-0.745,P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-15b、miR-122表达单独和联合诊断老年OVF的曲线下面积(AUC)分别为0.760、0.810、0.922,血清miR-15b、miR-122表达联合诊断老年OVF的AUC高于二者单独(Z分别为2.217、2.033,P均<0.05)。结论老年OVF患者血清miR-15b低表达、血清miR-122高表达,二者表达变化可能共同促进老年OVF的发生、发展;血清miR-15b、miR-122表达对老年OVF均具有一定诊断价值,二者联合时诊断价值更高。

基于MAPK通路探究下调miR-15b对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨MAPK通路下调微小RNA-15b(miR-15b)对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法 购买48只大鼠随机分为4组各12只,其中空白组不做处理,模型组、上调组、下调组构建心肌细胞缺血再灌注损伤大鼠模型,做miR-15b慢病毒滴定,采用实时荧光定量聚合酶联反应检测miR-15b基因表达量,采用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用超声心动图监测左心室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP);采用Western印迹检测心肌细胞缺血再灌注损伤大鼠丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路表达量。结果 与上调组相比,下调组miR-15b表达量、IL-6、TNF-α、MDA、SOD、LVEDP水平、MAPK信号通路蛋白表达量明显降低,LVSP水平显著升高(均P<0.05)。结论 通过下调miR-15b可能经作用于MAPK信号通路,能够抑制体内炎症反应,对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤症状进行减轻,从而发挥其保护作用。

TLR-7对阿尔茨海默病细胞模型β淀粉样蛋白表达及炎症反应的调控作用及机制

目的探究Toll样受体7(TLR-7)在阿尔茨海默病人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)模型中对β淀粉样蛋白表达及神经炎症反应的调控作用及机制。方法构建稳定表达β淀粉样前体蛋白瑞典型突变(APPswe)的阿尔茨海默病模型细胞SH-SY5Y/APPswe,将细胞分为SH-SY5Y组、SH-SY5Y/APPswe组、TLR-7敲低SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7)组、敲低对照SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-NC)组、TLR-7敲低+miR-15b抑制SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+miR-15b inhibitor)组和TLR-7敲低+微小RNA-15b(miR-15b)抑制对照SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+inhibitor NC)组。蛋白质印迹法检测β淀粉样前体蛋白(APP)的表达;实时荧光定量PCR实验检测TLR-7、miR-15b、β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;酶联免疫吸附实验检测β淀粉样蛋白42(Aβ42)以及IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌;荧光素酶报告基因实验检测核因子κB(NF-κB)活性。结果与SH-SY5Y组比较,SH-SY5Y/APPswe组细胞APP表达水平上调,Aβ42分泌水平增加[(11.24±0.76)ng/mL比(2.09±0.17)ng/mL,P<0.01)];与SH-SY5Y/APPswe+sh-NC组比较,SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7组miR-15b表达水平上调[(2.98±0.21)比(1.10±0.05),P<0.01],BACE1 mRNA表达水平下降[(0.72±0.06)比(1.02±0.03),P<0.01],Aβ42分泌水平下降[(6.09±0.42)ng/mL比(10.52±0.67)ng/mL,P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平下降[IL-1β:(3.34±0.25)比(4.62±0.41),P<0.01;IL-6:(3.75±0.34)比(5.43±0.31),P<0.01;TNF-α:(1.25±0.11)比(2.07±0.18),P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-α分泌水平下降[IL-1β:(61.40±7.76)pg/mL比(101.76±7.95)pg/mL,P<0.01;IL-6:(547.29±39.11)pg/mL比(893.35±101.43)pg/mL,P<0.01;TNF-α:(256.17±24.32)pg/mL比(375.28±33.99)pg/mL,P<0.01],NF-κB活性下降[(3.25±0.31)比(5.01±0.52),P<0.01]。与SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+inhibitor NC组比较,SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+miR-15b inhibitor组miR-15b表达水平下降[(0.67±0.13)比(2.96±0.35),P<0.01],BACE1 mRNA表达水平升高[(1.39±0.42)比(0.71±0.05),P<0.05],Aβ42分泌水平升高[(19.54±3.01)ng/mL比(7.47±1.58)ng/mL,P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高[IL-1β:(6.07±0.43)比(3.55±0.33),P<0.01;IL-6:(5.98±0.28)比(4.02±0.22),P<0.01;TNF-α:(1.88±0.21)比(1.36±0.20),P<0.01],IL-1β、IL-6、TNF-α分泌水平升高[IL-1β:(155.32±13.67)pg/mL比(68.62±5.41)pg/mL,P<0.05;IL-6:(1255.49±119.79)pg/mL比(439.73±60.01)pg/mL,P<0.05;TNF-α:(423.66±34.32)pg/mL比(227.82±26.53)pg/mL,P<0.05],NF-κB活性升高[(5.91±0.66)比(3.58±0.27),P<0.01]。结论TLR-7可能通过miR-15b调控NF-κB信号通路,并影响阿尔茨海默病模型细胞β淀粉样蛋白的分泌及神经炎症反应。

血清miRNA-15b、IGF-1在2型糖尿病患者中变化及与糖尿病视网膜病变的相关性

目的 探讨血清微小RNA-15b(miRNA-15b)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在2型糖尿病(T2DM)患者中的变化及与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法 选取2020年2月—2021年5月郑州人民医院收治的328例T2DM患者作为研究对象,根据治疗后3个月是否发生DR分为DR组和无DR(NDR)组。统计两组临床资料,比较两组血清miRNA-15b、IGF-1水平及其他可导致DR发生的影响因素差异,采用logistic回归分析分析T2DM患者发生DR的危险因素,采用pareson相关系数模型分析血清miRNA-15b、IGF-1水平与DR发生的相关性。结果 328例T2DM患者,经常规治疗后3个月DR发生率为24.09%(79/328);单因素分析显示,DR组糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FBG)、miRNA-15b、IGF-1水平均高于NDR组(P<0.05);经多因素logistic回归分析结果显示,FBG、miRNA-15b、IGF-1水平升高为T2DM患者发生DR的独立危险因素(P<0.05);经pareson分析显示,血清miRNA-15b、IGF-1水平与DR发生率均呈正相关关系。结论 血清中miRNA-15b、IGF-1水平升高与T2DM及DR的发生和发展有关,且与DR发生率呈正相关。

血浆miR-15b miR-22表达与卵巢储备功能相关性研究

目的 检测卵巢储备功能下降和卵巢早衰(POF)患者血浆中微小RNA-15b(miR-15b)、微小RNA-22(miR-22)水平,并探讨血浆中miR-15b、miR-22表达水平与卵巢储备功能的关系。方法 选取2017年8月—2019年12月于丽水市妇幼保健院就诊的125例卵巢储备功能异常患者为研究对象,其中卵巢储备功能下降患者68例(DOR组),卵巢早衰患者57例(POF组);同期选取72例卵巢储备功能正常者作为对照(NOR组)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组受试者血浆中miR-15b、miR-22表达水平;分析卵巢储备功能异常患者血浆中miR-15b、miR-22水平与卵巢储备功能指标的相关性;分析血浆中miR-15b、miR-22水平对DOR和POF的诊断价值。结果 POF组miR-15b、miR-22、子宫体积、子宫内膜厚度、卵巢平均容积及雌二醇(E2)水平显著低于DOR组和NOR组(P<0.05),卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平显著高于DOR组和NOR组(P<0.05);DOR和POF患者血浆中miR-15b、miR-22水平与子宫体积、子宫内膜厚度、卵巢平均容积及E2水平均呈正相关(P<0.05),与FSH、LH水平呈负相关(P<0.05);血浆miR-15b、miR-22诊断DOR的曲线下面积(AUC)分别为0.840、0.675,截断值分别为0.711、0.709,特异度分别为93.1%、93.1%,灵敏度分别为60.3%、46.8%;二者联合诊断DOR的AUC为0.874,特异度为75.0%,灵敏度为83.8%。血浆miR-15b、miR-22诊断POF的AUC分别为0.882、0.892,截断值分别为0.889、0.793,特异度分别为75.0%、80.6%,灵敏度分别为91.2%、80.7%;二者联合诊断POF的AUC为0.942,特异度为97.2%,灵敏度为78.9%。结论 miR-15b、miR-22水平在卵巢储备功能异常患者血浆中明显降低,且与各卵巢储备功能指标有一定的相关性。血浆miR-15b、miR-22水平可能对诊断卵巢储备功能异常有重要参考价值。

血清miR-145、miR-15b水平与脑梗死患者神经功能的相关性

目的观察血清微小RNA-145(miR-145)、微小RNA-15b(miR-15b)水平与脑梗死患者神经功能的相关性,指导未来对脑梗死患者神经功能进行有效保护。方法抽取2017年1月至2021年1月郑州颐和医院收治的231例脑梗死患者作为研究对象,均于入院时检测患者血清miR-145及miR-15b水平,并评估其神经功能,分析血清miR-145及miR-15b水平表达与脑梗死患者神经功能的关系。结果 231例脑梗死患者中,轻度神经功能缺损94例,中度神经功能缺损106例,重度神经功能缺损31例。重度神经功能缺损组入院时血清miR-145相对表达量低于轻-中度神经功能缺损组,miR-15b相对表达量高于轻-中度神经功能缺损组(P<0.05);两组其他相关资料比较差异未见统计学意义(P>0.05)。绘制受试者工作特征曲线发现,入院时血清miR-145及miR-15b水平用于预测重度神经功能缺损的曲线下面积均>0.80,有一定预测性能。结论脑梗死患者入院时血清miR-145、miR-15b水平表达与患者神经功能密切相关,早期检测两指标可预测患者重度神经功能缺损风险,并指导治疗方案的拟定。

构建psiCHECK-2-解耦联蛋白2双荧光素酶报告基因及其荧光素酶活性的分析

目的:构建含解耦联蛋白2(UCP2)-3’非翻译区(UTR)序列的野生型和突变型质粒的双荧光素酶报告基因载体,探讨微小RNA(miR)-15b对UCP2基因表达的调控作用。方法:应用生物信息软件预测miR-15b的靶基因,分别将预测靶基因UCP2的3’UTR及其突变体克隆到荧光素酶载体psiCHECK-2骨架中,构建UCP2野生型和突变型质粒。并采用测序方法鉴定psiCHECK-2-UCP2载体是否构建成功。将UCP2野生型和突变型质粒分别与miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照在293T细胞中共转染。通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-15b对UCP2基因表达的调控作用。结果:测序鉴定证实psiCHECK-2-UCP2双荧光素酶报告基因载体构建成功。双荧光素酶报告基因检测显示转染UCP2野生型和UCP2突变型报告基因的293T细胞过表达miR-15b后,UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显下降,下调31%(P=0.003),过表达miR-15b抑制剂后,UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显增加,上调46%(P=0.01)。而miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照对UCP2突变型的表达均无明显影响(P>0.05)。结论:UCP2是miR-15b直接作用的靶基因,且miR-15b结合于UCP2基因3’UTR区域,转录后水平对UCP2有直接的抑制作用。