脓毒症并发急性肾损伤患者外周血单个核细胞中微小RNA-16-5p、干扰素诱导跨膜蛋白3表达及临床意义

目的检测脓毒症及脓毒症并发急性肾损伤(sepsis-associated acute kidney injury,S-AKI)患者外周血单个核细胞中微小RNA-16-5p(microRNA-16-5p,miR-16-5p)、干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein,IFITM3)表达情况,分析两者对S-AKI患者的临床意义。方法本研究以2019年2月至2021年2月武汉市蔡甸区人民医院确诊的脓毒症患者为研究对象,共纳入106例,将合并急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的脓毒症患者作为AKI组(52例),未合并AKI的患者为非AKI组(54例)。收集所有患者的血液样本3 mL并分离单核细胞,利用实时荧光定量技术检测外周血单个核细胞中miR-16-5p、IFITM3 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附法测定外周血中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,全自动生化分析仪检测外周血中胱抑素(cysteine,Cys)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;比较两组间的临床指标及miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平,Pearson法分析miR-16-5p、IFITM3 mRNA分别与BUN、Cys水平的相关性,以及miR-16-5p与IFITM3 mRNA表达水平的相关性,采用多元线性回归分析S-AKI患者miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平的影响因素,受试者工作特性曲线(receiver operator characteristic curves,ROC)评估miR-16-5p和IFITM3 mRNA对脓毒症患者发生S-AKI的诊断价值。结果AKI组患者急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分(15.67±4.39比13.31±3.56)、序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment,SOFA)评分(5.62±1.28比4.89±1.41)、IL-1β[(22.03±5.78)mg/L比(10.44±3.05)mg/L]、Cys[(2.72±0.45)mg/L比(1.98±0.31)mg/L]和BUN[(7.93±2.24)μmol/L比(4.49±2.07)μmol/L]水平均高于非AKI组患者(P<0.05),AKI组患者的miR-16-5p(1.64±0.30比1.17±0.28)表达水平显著上调,IFITM3 mRNA(2.87±0.62比4.06±0.92)及蛋白(1.63±0.41比3.15±0.85)(r=0.560,P<0.05)水平呈正相关,IFITM3 mRNA表达水平与IL-1β(r=-0.754,P<0.05)、Cys(r=-0.554,P<0.05)、BUN(r=-0.695,P<0.05)水平呈负相关,miR-16-5p与IFITM3 mRNA的表达水平呈负相关(r=-0.496,P<0.05);多元线性回归分析结果显示,IL-1β升高、Cys升高是miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05);miR-16-5p、IFITM3 mRNA单一检测诊断脓毒症患者发生S-AKI的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.876(95%CI:0.809~0.944)、0.874(95%CI:0.811~0.938),miR-16-5p和IFITM3 mRNA联合检测的AUC为0.956(95%CI:0.929~0.992)。结论S-AKI患者中miR-16-5p表达上调,IFITM3表达下调,与S-AKI的病理过程密切相关,可能通过促进炎症反应加重肾损伤,有助于早期诊断S-AKI,为临床治疗S-AKI提供了有希望的靶点。

长链非编码RNA LINC00662/微小RNA-16-5p/wee1信号通路对肝细胞癌细胞增殖及凋亡的作用研究

目的探讨长链非编码RNA linc00662(LncRNA linc00662)通过微小RNA-16-5p(miR-16-5p)[/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(wee1)]信号轴在肝细胞癌(HCC)细胞增殖及凋亡中的作用。方法该研究时间为2019年8月至2020年10月,体外培养正常肝细胞株LO2和肝癌细胞株SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中linc00662、miR-16-5p和wee1的表达。以HepG2细胞作为研究对象,设置shRNA阴性对照(sh-NC)组、linc00662-shRNA干扰(sh-linc00662)组、抑制剂阴性对照(inhibitor-NC)组、miR-16-5p抑制剂(miR-16-5p inhibitor)组、siRNA阴性对照(si-NC)组、wee1-siRNA干扰(siwee1)组、linc00662-shRNA干扰联合miR-16-5p抑制剂(sh-linc00662+miR-16-5p inhibitor)组和miR-16-5p抑制剂联合wee1-siRNA干扰(miR-16-5p inhibitor+si-wee1)组。CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)]表达。双萤光素酶报告基因实验检测linc00662、miR-16-5p和wee1之间的相关性。结果PCR结果显示相比较LO2细胞,linc00662在SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7细胞中普遍高表达[0.95±0.14比2.12±0.17、3.86±0.15、2.31±0.14、1.82±0.18,P<0.001]。与sh-NC组相比,敲低linc00662能抑制肝癌细胞增殖(P<0.001)并诱导细胞凋亡(P<0.001)。双萤光素酶报告结果显示linc00662直接靶向结合miR-16-5p并负调控miR-16-5p的表达。同时,miR-16-5p直接靶向结合wee1并负调控wee1的表达。下调miR-16-5p表达可以减轻敲低linc00662对肝癌细胞生长的抑制作用。此外,linc00662可能通过miR-16-5p/wee1通路发挥促癌作用。结论Linc00662是一种在肝癌细胞中上调的LncRNA,可以通过miR-16-5p/wee1轴促进肝癌细胞增殖并抑制细胞凋亡。

微小RNA-16对K562细胞向巨核细胞系分化的影响

目的:观察微小RNA-16(microRNA-16,miR-16)对人白血病细胞K562向巨核细胞系分化的影响,并初步探索其中可能的机制。方法:在K562细胞中通过转染miR-16模拟物(mimics)或miR-16抑制物(inhibitor),实时荧光定量PCR检测miR-16的水平变化,通过流式细胞术检测巨核细胞系分化指标CD41、CD42b及CD61的表达。用Western blotting检测miR-16对下游白血病癌基因(myeloblastosis oncogene,MYB)蛋白水平的影响,进而利用流式细胞术检测miR-16是否通过影响MYB调控CD41、CD42b及CD61的表达。结果:转染miR-16-mimics可显著升高K562细胞中的miR-16水平并促进CD41、CD42b及CD61的表达(P<0.05),而转染miR-16-inhibitor可明显抑制K562细胞中的miR-16水平同时降低CD41、CD42b及CD61的表达(P<0.05);Western blotting证实miR-16可调控MYB蛋白水平,而沉默MYB可逆转miR-16对CD41、CD42b及CD61表达的调控作用。结论:miR-16可通过调控MYB的表达,调节人白血病细胞K562向巨核细胞系分化的能力。

微小RNA-16对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制研究

目的:探讨微小RNA(miR)-16对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡和炎症反应的影响,并分析其作用机制。方法:选取SPF级雄性SD大鼠80只,采用左前降支(LAD)永久结扎法建立AMI模型。实验分为假手术组(sham组)、急性心肌梗死组(AMI组)、重组腺相关病毒血清型9(rAAV9)-miR-16抑制剂阴性对照组(rAAV9-anti-NC组)、rAAV9-miR-16抑制剂组(rAAV9-anti-miR-16组)、rAAV9-miR-16抑制剂+维甲酸受体相关孤核受体A(RORA)短发夹RNA的阴性对照组(rAAV9-anti-miR-16+sh-NC组)、rAAV9-miR-16抑制剂+RORA沉默的短发夹RNA组(rAAV9-antimiR-16+sh-RORA组),每组12只。尾静脉注射含miR-16抑制剂、RORA短发夹RNA(sh-RORA)及其阴性对照的腺病毒进行干预,sham组和AMI组经尾静脉注射等体积的生理盐水,注射2周后,超声心动图检测大鼠左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短分数(LVFS),评估心功能;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积;苏木素-伊红(HE)染色检测心肌组织病理学变化;TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡率;逆转录定量PCR(RT-qPCR)检测心肌组织miR-16、RORA信使RNA(mRNA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA、白细胞介素(IL)-6 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(Western blot)法检测心肌组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和RORA、TNF-α、核因子(NF)-κB p65蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-16和RORA之间的靶向关系。结果:敲低miR-16可显著上调AMI大鼠RORA的mRNA和蛋白水平,降低LVEDD、LVESD、血清NT-proBNP水平、CK-MB和LDH活性,升高LVEF、LVFS,改善大鼠心脏功能,并显著减少心肌梗死面积,降低细胞凋亡率、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA水平和cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值以及Bax、TNF-α、NF-κB p65蛋白水平,升高Bcl-2蛋白水平(P均<0.05),即敲低miR-16可抑制心肌细胞凋亡和炎症反应。在敲低miR-16的基础上,下调RORA可部分阻断miR-16敲低对AMI大鼠心肌损伤的保护作用。双荧光素酶报告基因分析表明,RORA是miR-16的直接靶标。结论:敲低miR-16可能通过上调RORA表达、抑制TNF-α表达及NF-κB p65核转位,进而抑制AMI大鼠的心肌细胞凋亡和炎症反应,改善心脏功能。

联合检测血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16和微小RNA-16-5p对胃癌的诊断价值

目的探讨血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16(lncRNA SNHG16)联合微小RNA(miR)-16-5p检测对胃癌的诊断价值。方法选取武汉市第三医院2018年1月至2020年1月收治的102例胃癌患者作为胃癌组,另选取同期102名体检健康者为对照组。对比2组血清lncRNA SNHG16、miR-16-5p水平,分析血清lncRNA SNHG16、miR-16-5p水平与胃癌患者临床及病理参数的关系,Pearson相关性方法分析血清lncRNA SNHG16与miR-16-5p水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA SNHG16、miR-16-5p水平对胃癌的诊断价值。结果胃癌组血清lncRNA SNHG16水平明显高于对照组,miR-16-5p水平明显低于对照组[(2.03±0.17)比(1.69±0.34)、(0.56±0.06)比(0.82±0.28)](均P <0.001)。胃癌患者血清lncRNA SNHG16、miR-16-5p水平与TNM分期、侵袭程度、淋巴结转移、远处转移相关(均P <0.05)。Pearson相关性分析结果显示,胃癌患者血清lncRNA SNHG16与miR-16-5p水平呈负相关(r=-0.405,P <0.001)。ROC曲线分析显示,lncRNA SNHG16与miR-16-5p联合[曲线下面积(AUC)=0.903,95%置信区间0.854~0.940]诊断胃癌的AUC大于lncRNA SNHG16(AUC=0.816,95%置信区间0.755~0.866)、miR-16-5p(AUC=0.826,95%置信区间0.766~0.875)单独检测。结论胃癌患者血清lncRNA SNHG16水平显著提升,miR-16-5p水平显著降低,二者呈负相关,联合检测血清lncRNA SNHG16和miR-16-5p水平可提升胃癌诊断价值。

微小RNA-16对高糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡的抑制作用

目的探讨微小RNA-16(miR-16)抑制高糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡的分子机制。方法将人视网膜内皮细胞在正常葡萄糖培养基(5 mmol/L)或高葡萄糖培养基(30 mmol/L)中培养3 d。然后用miR-16模拟物(50 nmol/L)转染细胞48 h。使用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证miRNA表达水平。通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胰岛素受体底物-1丝氨酸307(IRS-1 Ser307)、磷酸化的IRS-1 Ser307、细胞因子信号转导负调控因子(SOCS3)、胰岛素受体Tyr1150(IR Tyr1150)、磷酸化的IR Tyr1150、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的Akt和cleaved caspase 3的蛋白表达水平。结果与正常葡萄糖组相比,高葡萄糖培养的人视网膜内皮细胞中miR-16的表达水平明显降低[对照组(1.07±0.08)比高糖组(0.35±0.03),t=14.43,P=0.011],TNF-α、SOCS3和cleaved caspase的蛋白表达水平及IRS-1 Ser307的磷酸化水平明显升高,而IRTyr1150和Akt的磷酸化水平明显降低。然而,转染miR-16模拟物则可逆转高糖培养基对上述因子的影响。结论miR-16通过抑制TNF-α和SOCS3信号通路来抑制IRS-1 Ser307的磷酸化并促进IRTyr1150和Akt的磷酸化,从而在抑制胰岛素抵抗中发挥作用,并保护视网膜内皮细胞免受高葡萄糖诱导的细胞凋亡。miR-16可能是糖尿病性视网膜病的潜在治疗靶标。

首发抑郁障碍患者治疗前后外周血单核细胞微小RNA-16表达的变化

目的:探讨首发抑郁障碍患者治疗前后外周血单核细胞(PBMC)微小(mi)RNA-16表达。方法:给予126例首发抑郁障碍患者(患者组)帕罗西汀单药治疗8周;分别于治疗前及治疗后1、2、4、8周进行汉密尔顿抑郁量表17项(HAMD-17)评分,以治疗8周后HAMD-17减分率将患者分为4个亚组(≥75%为A组;50%~74%为B组,25%~49%为C组,<25%为D组);同期采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞,用RNA提取试剂盒提取总RNA,荧光定量聚合酶链(PCR)法检测miRNA-16表达量;比较患者组与30健康志愿者(对照组)及患者中不同亚组间PBMC miRNA-16表达水平。结果:治疗前后各时间点患者组PBMC miRNA-16表达明显高于对照组(P<0.05或P<0.01);随着治疗进行患者组PBMC miRNA-16表达逐渐下降(P均<0.01);各亚组间PBMC miRNA-16表达治疗前差异无统计学意义,治疗后呈现D组>C组>B组>A组,差异有统计学意义(P均<0.01);患者组PBMC miRNA-16表达水平与HAMD评分呈正相关(r=0.432,P=0.000)。结论:PBMC miRNA-16表达水平或许可作为诊断首发抑郁障碍及评估患者病情的生物标记物之一。

苍附导痰汤对肥胖型PCOS大鼠内分泌激素及miRNA-16和PDCD-4表达的影响

目的:探讨苍附导痰汤对肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠内分泌激素及微小RNA(miRNA)-16和程序性细胞死亡因子4(PDCD-4)表达的影响。方法:将50只SPF级雌性SD大鼠随机分为5组,每组10只。阳性对照组大鼠灌胃格华止(0.43 g/kg),低剂量组大鼠灌胃低剂量苍附导痰汤(1.42 g/kg),高剂量组大鼠灌胃高剂量苍附导痰汤(5.68 g/kg),模型组和正常组大鼠灌胃等量生理盐水,各组均持续给药14 d。比较各组大鼠体质量,内分泌激素水平,miRNA-16和PDCD-4 mRNA表达,以及PDCD-4蛋白表达。结果:模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠体质量均高于正常组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠体质量均低于模型组(P<0.05),且呈剂量依赖性。模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠血清E_(2)均水平低于正常组,而血清T、FSH和LH水平均高于正常组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠血清E_(2)水平均高于模型组,而血清T、FSH和LH水平均低于模型组(P<0.05),且呈剂量依赖性。模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠卵巢miRNA-16表达均低于正常组,而PDCD-4 mRNA表达高于正常组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠卵巢miRNA-16表达均高于模型组,而PDCD-4 mRNA表达低于模型组(P<0.05),且呈剂量依赖性。模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠卵巢PDCD-4蛋白相对表达量均高于正常组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组和高剂量组大鼠卵巢PDCD-4蛋白相对表达量均低于模型组(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:苍附导痰汤可调节肥胖型PCOS大鼠内分泌激素水平,其机制可能与上调miRNA-16表达及下调PDCD-4表达有关。

结直肠癌组织microRNA-16-5p、microRNA-493-5p表达与PI3K/Akt/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的 探讨结直肠癌组织微小RNA-16-5p(miR-16-5p)、microRNA-493-5p(miR-493-5p)表达与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路和预后的关系。方法 选取2016年1月至2019年1月该院收治的126例接受根治性切除手术的结直肠癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测癌组织及癌旁组织中miR-16-5p、miR-493-5p及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA的表达水平并进行比较,分析癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA及临床病理特征的关系。术后随访3年,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-16-5p、miR-493-5p高表达和低表达患者的预后情况。结果 总RNA A260/A280为1.90,琼脂糖凝胶电泳提示28S与18S rRNA带亮度比值均>1.5,总RNA浓度750 ng/μL,说明RNA纯度高、完整性较好。癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p表达水平均低于癌旁组织,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均高于癌旁组织(P<0.05)。癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均呈负相关(P<0.05)。临床分期为Ⅲ期患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达者占比高于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.05);低分化患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于中分化和高分化,且中分化患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于高分化(P<0.05);有淋巴结转移患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于无淋巴结转移(P<0.05);T4分期患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于T1和T2分期(P<0.05),T3分期患者中miR-493-5p低表达患者占比高于T1分期(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-16-5p高表达和低表达患者3年累积生存率为93.22%、68.33%,生存率比较差异有统计学意义(P=0.017)。miR-493-5p高表达和低表达患者3年累积生存率为94.74%、67.74%,生存率比较差异有统计学意义(P=0.012)。结论 miR-16-5p、miR-493-5p在结直肠癌组织中表达下调,且与PI3K/Akt/mTOR信号通路呈负相关,miR-16-5p、miR-493-5p高表达患者的预后更好。

精神分裂症患者外周血微小RNA-16、微小RNA-124、微小RNA-195表达与认知功能和社会功能的关系

目的:探讨精神分裂症患者外周血微小RNA-16、微小RNA-124和微小RNA-195表达与认知功能和社会功能的相关性。方法:选择台州市第二人民医院2016年1月至2018年12月收治的精神分裂症患者112例为观察组;另选择台州市第二人民医院2016年1月至2018年12月健康体检者93例作为对照组。采用实时定量荧光聚合酶链式反应法检测外周血微小RNA-16、微小RNA-124和微小RNA-195表达;采用中文版蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评价患者认知功能;采用住院精神病人社会功能评定量表(SSPI)评价患者社会功能。结果:观察组外周血微小RNA-16(0.03±0.01)和微小RNA-195(0.08±0.03)表达低于对照组(0.12±0.02)和(0.27±0.06),而微小RNA-124(14.63±3.24)表达高于对照组(7.45±1.39),差异均有统计学意义( t=41.763、19.898、29.389,均 P<0.05)。观察组MoCA量表评分[(22.17±3.45)分]低于对照组[(28.39±1.28)分],差异有统计学意义( t=16.465, P<0.05)。观察组SSPI量表评分[(26.58±5.16)分]低于对照组[(45.37±3.27)分],差异有统计学意义( t=30.405, P<0.05)。微小RNA-16和微小RNA-195与MoCA量表评分和SSPI量表评分呈线性正相关(MoCA量表评分: r=0.641、0.724,SSPI量表评分: r=0.801、0.657,均 P<0.05),微小RNA-124与MoCA量表评分和SSPI量表评分呈线性负相关( r=-0.738、-0.769,均 P<0.05)。 结论:精神分裂症患者外周血微小RNA-16和微小RNA-195表达降低而微小RNA-124表达升高,其中微小RNA-16和微小RNA-195表达与认知功能和社会功能呈正相关,而微小RNA-124与认知功能和社会功能呈负相关。

复发性流产绒毛组织微小RNA-16表达及其与血管新生因子关系探讨

目的探讨不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织中微小RNA-16(miR-16)表达及其与血管新生因子的关系。方法选取2018-01-01-2020-06-01郑州人民医院收治的62例行清宫术URSA患者(URSA组)和50例同期正常早孕人工终止妊娠者(对照组)为研究对象。手术获取绒毛组织后,采用实时荧光定量PCR检测其miR-16表达水平,蛋白质印迹法检测其缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。采用双变量Pearson相关性检验分析miR-16与HIF-1α及VEGF表达水平的相关性。结果URSA组miR-16表达水平为3.89±1.04,高于对照组的1.97±0.48,t=12.052,P<0.001。URSA组HIF-1α和VEGF蛋白表达水平分别为0.61±0.12和0.30±0.10,均低于对照组的0.82±0.11和0.42±0.10,t值分别为9.553和6.313,均P<0.001。Pearson相关性分析结果显示,URSA组miR-16与HIF-1α、VEGF表达水平均呈负相关,r值分别为-0.379和-0.422,均P<0.05。结论miR-16在URSA患者绒毛组织中呈异常高表达,且可能通过调节血管新生相关蛋白的表达参与URSA的发生、发展。

沉默微小RNA-16通过激活核因子-κB通路介导肝癌细胞化疗耐药

目的探讨沉默SMMC-7721中微小RNA（miRNA，miR）-16的表达对化疗耐药的影响及机制。方法采用慢病毒载体构建稳定细胞株，应用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-16的表达及Westernblot检测靶基因KB激酶抑制剂B（IKBKB）的表达确定构建结果。采用Westernblot及噻唑蓝（MTF）比色法检测各细胞株对紫杉醇的敏感性及耐药机制。结果7721-miRl6组的miR-16表达量显著高于SMMC-7721组及7721．mock组（6．06±0．18比1．00±O．13比0．87±0．03，P=0．000）。7721-shmiR组靶基因IKBKB蛋白表达量是7721-shmock组的25．73倍（P=0．000）。7721-shmiRl6细胞株中多药耐药蛋白1（MDRl）表达显著增加，对紫杉醇的半数抑制浓度（IC50）为4．903txmol／L，是对照组（0．461μmol／L）的10．64倍（P=0．000）。Westernblot结果显示沉默miR-16主要通过激活细胞核因子-κB（NF．KB）通路导致MDRl表达增加。结论沉默SMMC-7721中miR-16的表达，能显著增加IKBKB的表达，从而导致SMMC-7721细胞对紫杉醇耐药。

微小RNA-16对人肺泡上皮A549细胞肺表面活性物质相关蛋白的调控作用

目的探讨微小RNA-16(microRNA-16,miR-16)对肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)表达的调控作用。方法体外培养人肺泡上皮A549细胞,应用miR-16模拟物、模拟物阴性对照、抑制剂、抑制剂阴性对照转染A549细胞,并同时设立空白对照组;采用细胞增殖-毒性检测实验测定各组细胞增殖能力;实时定量逆转录聚合酶链反应检测miR-16、SP-A、SP-B和SP-C mRNA表达;免疫印迹法检测SP-A、SP-B和SP-C蛋白水平。结果模拟物组miR-16表达(34.11±1.79)明显高于模拟物阴性对照组(1.65±1.07)及空白对照组(1.07±0.50),抑制剂组miR-16表达(0.36±0.05)明显低于抑制剂阴性对照组(0.96±0.13)及空白对照组(1.05±0.20),差异均有统计学意义(P<0.05)。模拟物组和抑制剂组与空白对照组、模拟物阴性对照组及抑制剂阴性对照组比较,各时间点A549细胞增殖情况差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组(1.02±0.19、1.01±0.09、1.01±0.12)及模拟物阴性对照组(1.08±0.24、1.00±0.14、1.00±0.05)比较,模拟物组SP-A、SP-B和SP-C mRNA表达(0.58±0.16、0.67±0.05、0.61±0.12)降低;与空白对照组(1.02±0.19、1.01±0.09、1.01±0.12)及抑制剂阴性对照组(1.05±0.22、0.99±0.13、0.98±0.10)比较,抑制剂组SP-A、SP-B和SP-C mRNA表达(1.66±0.33、1.29±0.11、1.23±0.12)升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组细胞SP-A、SP-B和SP-C蛋白表达水平与mRNA表达趋势一致。结论 miR-16可抑制A549细胞肺表面活性物质相关蛋白的合成。

微小RNA-16在肝细胞肝癌生长侵袭中的作用

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-16在肝细胞肝癌生长侵袭中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测不同肝癌细胞株及人正常肝细胞(购自中国科学院上海细胞库)中miR-16表达,应用Lipofectamine™3000将miR-16 mimics、miR-16 NC转染到肝癌细胞,分别记为miR-16 mimics组和miR-16 NC组,并测定miR-16表达量,细胞活力、细胞凋亡、细胞周期、细胞侵袭能力及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、髓细胞白血病-1(Mcl-1)、细胞周期素D1(CCND1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Wnt3a及β-连环蛋白(β-catenin)表达。计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验。结果SMMC-7721(0.65±0.03),HepG2(0.44±0.04),Bel-7402(0.28±0.03),Huh 7(0.87±0.06)和MHCC97(0.23±0.02)肝癌细胞中miR-16表达量显著低于L02正常肝细胞(2.16±0.22)(t=11.291,P<0.05),差异有统计学意义。miR-16 mimics组(2.03±0.20)miR-16表达量较miR-16 NC组(0.54±0.05)提高(t=7.311,P<0.01)。miR-16 mimics组(0.36±0.04)细胞活力较miR-16 NC组(0.59±0.06)降低(t=9.436,P<0.05),差异有统计学意义。miR-16 mimics组细胞早期凋亡率(18.54±1.85)%及晚期凋亡率(20.37±2.03)%较miR-16 NC组[(2.35±0.20)%,(3.24±0.32)%]提高(t=6.624,P<0.05),差异有统计学意义,miR-16 mimics组细胞周期G1期(64.17±6.42)%较miR-16 NC组(48.45±4.85)%延长(t=7.612,P<0.05),差异有统计学意义。miR-16 mimics组(42.53±1.36)细胞侵袭能力较miR-16 NC组(134.54±13.45)降低(t=7.311,P<0.05),差异有统计学意义。Western blot结果表明miR-16 mimics组中bcl-2、Mcl-1、CCND1、MMP-2、MMP-9、Wnt3a及β-catenin表达量较miR-16 NC组下调(t=9.154,P<0.05),差异有统计学意义。结论miR-16过表达可能通过阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制HepG2肝癌细胞的生长与侵袭。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1靶向微小RNA-16抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)靶向微小RNA-16(miR-16)对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法将BMSCs(购自上海泽叶生物科技有限公司)进行体外培养,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测BMSCs成骨诱导前后SNHG1和miR-16的表达水平。将BMSCs分为正常组、诱导分化组、si-con组、si-SNHG1组、miR-con组、miR-16组、si-SNHG1+anti-miR-con组和si-SNHG1+anti-miR-16组。蛋白质印记(Western blot)检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证SNHG1和miR-16的靶向调控关系。两组间数据比较采用独立样本t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果与正常组比较,诱导分化组BMSCs细胞SNHG1(0.64±0.12比1.00±0.08,t=1.323,P<0.05)的表达水平显著降低,miR-16(4.54±0.84比1.00±0.11,t=7.238,P<0.01)的表达水平显著升高。与si-con组比较,si-SNHG1组BMSCs中ALP(0.61±0.06比0.41±0.05,t=4.435,P<0.05)、Runx2(1.25±0.13比0.79±0.09,t=5.039,P<0.01)、OPN(0.94±0.08比0.41±0.06,t=9.180,P<0.01)蛋白表达显著升高。与miR-con组比较,miR-16组BMSCs中ALP(0.63±0.06比0.40±0.04,t=5.524,P<0.01)、Runx2(1.04±0.09比0.69±0.07,t=5.317,P<0.01)、OPN(0.98±0.11比0.51±0.08,t=5.985,P<0.01)蛋白表达显著升高。与si-SNHG1+anti-miR-con组比较,si-SNHG1+anti-miR-16组BMSCs中ALP(0.52±0.04比0.66±0.06,t=3.363,P<0.05)、Runx2(0.89±0.07比1.08±0.09,t=2.886,P<0.05)、OPN(0.71±0.08比0.98±0.11,t=3.438,P<0.05)蛋白表达显著降低。miR-16是SNHG1的靶基因,SNHG1可负性调控miR-16表达。结论lncRNA SNHG1通过靶向miR-16可抑制BMSCs成骨分化。

老年痴呆患者外周血单个核细胞miRNA-16和miRNA-192表达及与认知功能的关系

目的 探讨老年痴呆患者外周血单个核细胞微小RNA(miRNA)-16和miRNA-192表达及与认知功能的关系。方法 选择老年痴呆患者64例,根据认知功能障碍情况分为轻度组(n=29)与中度组(n=35)。另选择老年健康体检者60例为对照组。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定miRNA-16和miRNA-192表达;采用简易精神状态检查(MMSE)量表评估认知功能。比较两组miRNA-16和miRNA-192表达,MMSE评分变化;比较不同认知功能障碍组miRNA-16和miRNA-192表达;采用Pearson分析miRNA-16和miRNA-192表达与MMSE评分相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-16和miRNA-192对认知功能的预测价值。结果 痴呆组miRNA-16和miRNA-192相对表达量显著高于对照组,MMSE评分显著低于对照组(P<0.05)。中度组miRNA-16和miRNA-192相对表达量显著高于轻度组(P<0.05)。经Pearson分析显示,miRNA-16和miRNA-192表达与MMSE评分呈线性负相关(P<0.05)。经ROC曲线分析显示,miRNA-16对认知功能预测灵敏度为85.90%,特异度为96.70%;miRNA-192对认知功能预测灵敏度为85.90%,特异度为98.30%。结论 老年痴呆患者外周血单个核细胞miRNA-16和miRNA-192高表达,且与认知功能密切相关。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

新生儿败血症并发心肌损害患儿血清miR16-、CF-6、Copeptin水平变化意义

目的探讨新生儿败血症并发心肌损害患儿血清微小RNA-16(miR-16)、线粒体偶联因子-6(CF-6)、和肽素(Copeptin)水平变化意义。方法将该院2020年1月至2022年9月收治的105例新生儿败血症患儿根据是否并发心肌损害分为心肌损害组(43例)与无心肌损害组(62例),比较两组一般资料、心肌损害标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP),以及血清miR-16、CF-6、Copeptin水平,分析各血清指标与心肌损害标志物相关性及对新生儿败血症并发心肌损害的诊断价值,对比心肌损害组不同病情患儿血清miR-16、CF-6、Copeptin水平,分析各血清指标与新生儿败血症并发心肌损害患儿病情的关系。结果心肌损害组败血症严重程度,以及血清cTnI、H-FABP、miR-16、CF-6、Copeptin水平均高于无心肌损害组(P<0.05),心肌损害组血清miR-16、CF-6、Copeptin与cTnI、H-FABP均呈正相关(P<0.05),血清miR-16、CF-6、Copeptin联合诊断新生儿败血症并发心肌损害的曲线下面积(AUC)为0.913(95%CI:0.842~0.959),优于三者单一诊断(P<0.05)。心肌损害组不同心功能分级患儿血清miR-16、CF-6、Copeptin水平由高到低依次为Ⅲ~Ⅳ级、Ⅱ级、Ⅰ级,差异均有统计学意义(P<0.05);心肌损害组有心脏收缩功能障碍患儿血清miR-16、CF-6、Copeptin水平高于无心脏收缩功能障碍患儿(P<0.05);血清miR-16、CF-6、Copeptin与新生儿败血症并发心肌损害患儿心功能分级、心脏收缩功能障碍均呈正相关(P<0.05)。结论血清miR-16、CF-6、Copeptin联合检测可作为新生儿败血症并发心肌损害的重要辅助诊断途径,且三者水平变化与病情严重程度显著相关。

PPARγ促进miR-16表达抑制脓毒症炎症反应的作用研究

目的探讨PPARγ上调miR-16的机制及其抑制脓毒症炎症反应的作用。方法经Real time RT-PCR检测脓毒症患者和健康者的外周血单核细胞PPARγ和miR-16的表达,分析其相关性;分别用PPARγ激动剂RGZ、PPARγsiRNA或miR-16抑制剂(antagomir-16)处理THP-1和RAW246.7,经real time RT-PCR和Western blot检测miR-16及其靶基因IKKα的表达;细胞转染含miR-16启动子的报告基因质粒,经PPARγ激动剂RGZ或拮抗剂GW9662处理后,检测细胞报告基因活性;细胞经PPARγ激动剂RGZ处理,再经LPS处理,ELISA检测炎症因子TNFα和IL-6的表达;LPS诱导的脓毒症小鼠经PPARγ激动剂RGZ,或经antagomir-16预处理后,再经PPARγ激动剂RGZ处理小鼠,real time RT-PCR检测小鼠外周血单核细胞中miR-16的表达,ELISA检测血清炎症因子TNFα和IL-6的表达。结果脓毒症患者外周血单核细胞中PPARγ与miR-16的表达均降低且二者的表达呈显著负相关(P<0.05);PPARγ通过促进miR-16的启动子活性上调miR-16的表达,进而抑制miR-16靶分子IKKα的表达(P<0.05);PPARγ上调miR-16后显著抑制炎症细胞产生TNFα和IL-6(P<0.05);PPARγ上调miR-16抑制脓毒症小鼠血清TNFα和IL-6的表达(P<0.05)。结论激动剂活化的PPARγ上调miR-16进而抑制细胞炎症因子表达及脓毒症小鼠炎症反应。

降低脑脊液miR-16的水平对大鼠抑郁样行为的影响

目的:探讨降低脑脊液微小RNA-16(miR-16)的水平是否通过影响中缝核miR-16与5-羟色胺转运体(SERT)的表达参与抑郁症的发病。方法:SD大鼠侧脑室分别注入生理盐水、阴性对照液及miR-16拮抗剂5、10和20 nmol,隔天1次,共3次。而后进行蔗糖偏好实验和强迫游泳实验,并取脑脊液与中缝核组织,通过RTqPCR法测定miR-16水平,Western blot法测定SERT蛋白水平。结果:拮抗剂10和20 nmol组蔗糖偏好率[(46.67±9.35)%和(40.28±10.54)%]显著低于空白对照组[(54.72±11.25)%]和阴性对照组[(53.34±13.71)%],不动时间[(30.54±12.78)s和(36.23±8.57)s]则明显长于空白对照组[(16.71±5.58)s]和阴性对照组[(19.15±7.46)s](P<0.05),随着miR-16拮抗剂剂量的增加,抑郁样行为越明显。与空白对照组和阴性对照组相比,中缝核miR-16水平在拮抗剂3组均下降,并与注射剂量呈负相关(r=−0.57,P=0.000),中缝核中SERT蛋白水平则相反。结论:降低脑脊液miR-16水平可影响大鼠中缝核miR-16及SERT的表达,并与抑郁症的发病机制相关。