慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清微小RNA-30a mRNA与微小RNA-196b mRNA相对表达量及临床意义

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-30a mRNA与miR-196b mRNA在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)肝纤维化患者血清中的相对表达量及临床意义。方法选取2016年1月至2018年12月在江苏省张家港市第一人民医院行经皮肝组织活检确诊为CHB肝纤维化的139例患者为CHB肝纤维化组,选取130例同期健康体检者为对照组。对CHB肝纤维化患者进行肝组织病理学检查。采用Au480全自动生化分析仪检测血清天门冬氨酸氨基移酶(aspartate transferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)及白蛋白水平;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中金属蛋白酶-1抑制剂(metalloproteinase tissue inhibitor-1,TIMP-1)浓度;采用荧光定量聚合酶链反应检测miR-30a和miR-196bmRNA相对表达量,计算FIB-4指数。对CHB肝纤维化患者进行肝组织病理学检查确定肝纤维化分期。采用Pearson法分析miR-30a mRNA和miR-196bmRNA相对表达量及其与各临床指标的相关性;采用受试者工作特征(receiver operatorcharacteristic,ROC)曲线评价miR-30a和miR-196b对肝纤维化的诊断价值。结果与对照组相比,CHB肝纤维化患者组血清中ALT [(65.34±13.53)U/L vs(18.28±3.14)U/L]、AST [(52.84±14.02)U/L vs(25.84±1.26)U/L]、TIMP-1 [(183.98±42.07)ng/ml vs(80.59±13.09)ng/ml]和FIB-4指数(1.33±0.09 vs 0.78±0.06)显著升高,miR-30a mRNA相对表达量(0.60±0.08 vs 1.00±0.09)和miR-196b mRNA相对表达量(0.45±0.04 vs 1.00±0.02)显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。139例患者中S0~S1期占32.37%(45/139),S2~S3期占45.32%(63/139),S4期占22.31%(31/139)。S0~S1期患者miR-30a mRNA相对表达量、miR-196b mRNA相对表达量、TIMP-1和FIB-4指数分别为0.83±0.06、0.76±0.05、(142.68±13.21)ng/ml、0.84±0.08,S2~S3期患者上述指标分别为0.69±0.06、0.41±0.08、(257.50±53.05)ng/ml、1.23±0.09,S4期患者上述指标分别0.28±0.02、0.21±0.05、(383.52±62.31)ng/ml、2.48±0.19,血清中miR-30a mRNA相对表达量和miR-196b mRNA相对表达量随纤维化分期的增加而降低,TIMP-1和FIB-4指数随肝纤维化分期的增加而增加(P均<0.05)。CHB肝纤维化患者血清miR-30a和miR-196b与TIMP-1、FIB-4和肝纤维化分期呈负相关(P <0.05),与ALT和AST无相关性(P> 0.05)。miR-30a mRNA相对表达量、miR-196b mRNA相对表达量、TIMP-1和FIB-4指数诊断CHB肝纤维化患者肝纤维化的ROC曲线下面积(area under ROC curve,AUC)分别为0.847(95%CI:0.756~0.928)、0.942(95%CI:0.860~0.983)、0.792(95%CI:0.721~0.855)、0.895(95%CI:0.821~0.967),miR-196b mRNA相对表达量的AUC显著高于其他指标(P均<0.001)。以0.468作为临界值,miR-196b mRNA相对表达量诊断的灵敏度和特异度分别为89.45%和83.60%。结论 CHB肝纤维化患者血清中miR-30a mRNA和miR-196ba mRNA相对表达量降低,检测miR-30a和miR-196ba mRNA相对表达量有助于评估CHB肝纤维化患者的肝纤维化程度。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

环状RNA ACAP2调节微小RNA-421与B细胞易位基因2轴对心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circACAP2组、pcDNA3.1-circACAP2+模拟物(mimic)NC组、pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,每组各10只。将缺氧H9c2细胞置于24孔板中,瞬时转染细胞,分为缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+mimic NC组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,另取正常培养的H9c2细胞作为对照组。检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌梗死情况、心肌组织病理变化、circACAP2、miR-421、BTG2 mRNA表达情况、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、H9c2细胞活力和凋亡、心肌组织BTG2蛋白表达、H9c2细胞BTG2蛋白表达。结果MI组circACAP2、BTG2 mRNA表达高于假手术组(1.84±0.21 vs 1.00±0.10,1.68±0.17 vs 1.00±0.10),miR-421表达低于假手术组(0.49±0.05 vs 1.00±0.11,P<0.05);与假手术组比较,MI组梗死面积、CK-MB、LDH活性升高,LVFS、LVEF降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circACAP2组心肌损伤减轻,LVFS、LVEF升高,梗死面积、CK-MB、LDH活性降低(P<0.05);与缺氧+si-NC组比较,缺氧+si-circACAP2组细胞活力升高,凋亡率、CK-MB和LDH活性降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-circACAP2组心肌损伤加重,LVFS、LVEF降低,梗死面积、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组细胞活力降低,凋亡率、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05)。结论circACAP2在MI大鼠和H9c2细胞中表达上调,沉默circACAP2可能通过调节miR-421/BTG2轴改善心脏功能,减少心肌损伤,提高心肌细胞活力。

ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA-20b对头晕患者发生缺血性卒中有预测价值

目的:探讨年龄、血压、单侧肢体无力和言语障碍、持续时间、糖尿病(ABCD2)评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA(miRNA)-20b对头晕患者发生缺血性卒中(IS)的预测价值。方法:收集148例头晕患者,根据是否发生IS分为IS组(109例)和非IS组(39例)。比较分析2组患者一般资料、ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平。多因素Logistic回归分析头晕患者发生IS影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、miR-20b水平对评估头晕患者发生IS的预测价值。结果:IS组年龄、高血压史比例、ABCD2评分、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、泛连接蛋白水平明显高于非IS组,miR-20b水平明显低于非IS组(P均<0.05)。LDL-C升高(OR=2.575,95%CI:1.497~3.353)、ABCD2评分>3分(OR=3.069,95%CI:2.242~5.408)、泛连接蛋白升高(OR=1.089,95%CI:1.018~1.187)为头晕患者发生IS独立影响因素(P均<0.05),miR-20b为独立保护因素(OR=0.351,95%CI:0.220~0.559,P<0.05)。3个指标联合预测头晕患者发生IS的曲线下面积(AUC=0.859,95%CI:0.791~0.926)明显大于ABCD2评分(AUC=0.759,95%CI:0.669~0.849)、泛连接蛋白(AUC=0.656,95%CI:0.554~0.759)、miR-20b(AUC=0.821,95%CI:0.750~0.893)单独预测(P均<0.05)。结论:ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平为头晕患者发生IS独立影响因素,3个指标联合对头晕患者IS风险有预测价值。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

微小RNA-129-5p和高迁移率族蛋白B1在缺血性脑卒中患者中的表达水平及临床意义

目的探讨微小RNA-129-5p(miR-129-5p)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在缺血性脑卒中(IS)患者中的表达水平及临床意义。方法选取2019年2月至2021年2月河北省第七人民医院收治的94例IS患者为观察组,另选取75例健康体检者为对照组。根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将观察组分为轻度组32例、中度组43例、重度组19例。根据90 d随访的改良Rankin量表评分分为预后良好组65例,预后不良组29例。检测血清miR-129-5p、HMGB1水平,并收集观察组临床资料。采用Pearson相关性分析血清miR-129-5p和HMGB1的关系。多因素Logistic回归分析IS患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-129-5p和HMGB1对IS患者预后的预测价值。结果观察组血清miR-129-5p和HMGB1水平与对照组相比差异有统计学意义(t=3.038、24.863,P<0.05)。观察组血清miR-129-5p水平随神经功能缺损程度的加重而降低,HMGB1水平随之升高(F=83.466、8.423,P<0.05)。Pearson相关性分析显示,观察组血清miR-129-5p和HMGB1水平呈负相关(r=-0.406,P<0.05)。预后良好组和预后不良组的同型半胱氨酸、梗死体积、入院时NIHSS评分、发病到入院时间、miR-129-5p和HMGB1水平间差异具有统计学意义(t=4.636、4.034、11.618、19.522、8.063、6.177,P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-129-5p和HMGB1水平对IS患者预后不良预测价值的曲线下面积分别为0.832、0.859。多因素Logistic回归分析显示,患者入院时NIHSS评分、发病到入院时间、HMGB1、miR-129-5p是IS患者预后不良的影响因素(OR=5.361、4.465、7.245、0.806,P<0.05)。结论IS患者血清miR-129-5p低水平、HMGB1高水平与神经功能缺损程度有关,且对不良预后有一定的预测价值。

晚期结直肠癌患者血清微小RNA-199b和微小RNA-203水平检测及其预后预测价值分析

目的:检测晚期结直肠癌患者血清微小RNA(miR)-199b和miR-203水平,分析其对患者预后的预测价值。方法:选择Ⅳ期结直肠癌患者92例为结直肠癌组,选择结直肠炎患者92例为对照组。采用逆转录聚合酶链式反应检测两组血清miR-199b及miR-203水平并进行比较。根据结直肠癌患者12个月随访结果分为病死组和生存组,分析晚期结直肠癌患者预后的影响因素,评价血清miR-199b及miR-203对晚期结直肠癌患者预后的预测价值,并进行生存分析。结果:结直肠癌组血清miR-199b、miR-203低于对照组(均P<0.05)。92例Ⅳ期结直肠癌患者中病死36例,纳入病死组,其余患者纳入生存组。病死组血清基质金属蛋白酶-14(MMP-14)、趋化因子受体4(CXCR4)水平高于生存组,血清miR-199b、miR-203低于生存组(均P<0.05)。MMP-14和CXCR4是晚期结直肠癌患者病死的风险因素,miR-199b和miR-203是晚期结直肠癌患者病死的保护因素(均P<0.05)。miR-199b与MMP-14、CXCR4呈负相关(r=-0.403、-0.458,均P<0.05),miR-203与MMP-14、CXCR4呈负相关(r=-0.461、-0.479,均P<0.05)。血清miR-199b、miR-203对晚期结直肠癌患者病死均有一定预测价值,且两项联合优于单项(均P<0.05)。血清miR-199b和miR-203高表达组生存率高于低表达组(均P<0.05)。结论:晚期结直肠癌患者血清miR-199b、miR-203水平降低,对患者预后具有良好的预测价值,且两项联合预测价值更高。

环状RNA GRIN2B通过调控微小RNA-135b对食管癌细胞增殖和侵袭的影响实验研究

目的:探讨环状RNA GRIN2B(circ-GRIN2B)对食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用RT-qPCR检测circ-GRIN2B在食管癌细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706和正常食管上皮细胞HET-1A中的表达,筛选circ-GRIN2B表达最低的细胞株进行后续实验。在食管癌细胞中转染circ-GRIN2B过表达质粒(circ-GRIN2B组)和空载对照质粒(NC组)。采用平板克隆实验和Transwell实验检测circ-GRIN2B对食管癌细胞增殖和侵袭的影响。采用circRNADb软件预测circ-GRIN2B与微小RNA-135b(miR-135b)的结合位点并用双荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系。采用RT-qPCR检测两组miR-135b表达。采用Western blot检测细胞增殖相关蛋白[周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)、周期素C(Cyclin C)]和侵袭相关蛋白[纤维结合蛋白(FN)、转录因子8(ZLF8)、叉头盒蛋白C2(FOXC2)]表达。结果:与HET-1A细胞比较,circ-GRIN2B在细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706表达降低,且在EC9706细胞中表达量最低(均P<0.05)。circ-GRIN2B组circ-GR IN2B表达量高于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞集落数量少于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞侵袭数目小于NC组(P<0.01)。miR-135b是circ-GRIN2B的靶基因。circ-GRIN2B组miR-135b表达量低于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞增殖相关蛋白和侵袭相关蛋白表达水平较NC组降低(均P<0.05)。结论:circ-GRIN2B在食管癌细胞中低表达,其可能通过下调miR-135b表达抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。

lncRNA-MIAT通过靶向调控miR-584/EZH2轴促进DLBCL细胞的自噬

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)-MIAT通过调控微小RNA(miR)-584/ZESTE同源物增强子2(EZH2)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞自噬的影响。方法将DLBCL细胞系Raji分为siMIAT组[lncRNA-MIAT的小干扰RNA(siRNA)构建沉默组]、沉默阴性对照组(siNC组)、miR-584的模拟物组(mimic组)、模拟物阴性对照组(mimic-NC组)。将siMIAT组的Raji继续分为miR-584的inhibitor组(inhibitor组)、inhibitor的阴性对照组(inhibitor-NC组)、EZH2过表达组(pcDNA-EZH2组)以及过表达空载体组(pcDNA-null组)。用实时定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA-MIAT和miR-584的表达,用荧光原位杂交(FISH)实验检测lncRNA-MIAT在Raji中的定位。用Western blot法检测EZH2和细胞自噬标志物LC3-I、LC3-II、Atg5、Beclin-1和p62的表达。CCK-8法检测细胞的增殖活性。用双荧光素酶报告基因分析miR-584与EZH2的靶向调控作用以及miR-584与lncRNA-MIAT的靶向调控作用。结果与B淋巴细胞系MAO比,lncRNA-MIAT在Raji中高表达(P<0.05),lncRNA-MIAT的表达主要定位在MAO和Raji的细胞质中。沉默lncRNA-MIAT抑制细胞的增殖活性并抑制细胞的自噬(均P<0.05),沉默lncRNA-MIAT还抑制EZH2的表达并促进miR-584的表达(均P<0.05)。生信分析预测lncRNA-MIAT与miR-584具有多个结合位点,以及EZH2与miR-584也具有多个结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实EZH2是miR-584的靶基因,且miR-584与lncRNA-MIAT也具有靶向调控作用。在沉默lncRNA-MIAT的细胞中,与inhibitor-NC组比,inhibitor组中细胞的增殖活性以及细胞的自噬均增加(P<0.05)。在沉默lncRNA-MIAT的细胞中,与pcDNA-null组比,pcDNA-EZH2组中细胞的增殖活性以及细胞的自噬均增加(P<0.05)。结论lncRNA-MIAT通过靶向调控miR-584/EZH2轴促进DLBCL的增殖,增强DLBCL细胞的自噬。

毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗前后血清白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、微小RNA-302e、核因子-κB mRNA水平变化及意义

目的:探讨毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗前后血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-302e、核因子-κB(NF-κB)mRNA水平变化及意义。方法:选取毛细支气管炎患儿108例为研究对象,均行糖皮质激素治疗。比较糖皮质激素治疗前后患儿血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平变化。采用Pearson法分析IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA间的相关性。根据糖皮质激素治疗效果将患儿分为有效组和无效组,比较不同疗效患儿一般资料及生化指标。分析IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平对糖皮质激素治疗效果的影响,以及它们对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值。结果:糖皮质激素治疗后患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平低于治疗前,miR-302e水平高于治疗前(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患儿血清IL-6与TNF-α、NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.512、0.564,均P<0.05),与miR-302e呈负相关(r=-0.573,P<0.05);患儿血清TNF-α与NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.521,P<0.05),与miR-302e水平呈负相关(r=-0.559,P<0.05);患儿血清miR-302e与NF-κB mRNA水平呈负相关(r=-0.571,P<0.05)。无效组患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平,以及重度病情患儿占比高于有效组,miR-302e水平低于有效组(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA水平异常以及病情严重程度(重度)是毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的危险因素(均P<0.05)。血清IL-6、TNF-α、miR-302e、NF-κB mRNA联合检测对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值高于上述指标单独预测。结论:经糖皮质激素治疗后,毛细支气管炎患儿血清IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA水平降低,miR-302e水平升高,四者水平异常是毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的危险因素,联合检测对毛细支气管炎患儿糖皮质激素治疗无效的预测价值更高。

运动通过微小RNA-181b/磷酸酶和张力蛋白同源物调控平滑肌表型缓解糖尿病大鼠血管损伤的研究

目的:观察有氧运动对2型糖尿病大鼠血管损伤的作用,探讨潜在的分子调控机制。方法:高糖高脂喂养联合链脲佐菌素注射建立大鼠2型糖尿病模型。选模型鼠20只随机分为糖尿病对照组(DC)和糖尿病运动组(DE),同龄正常饮食大鼠为正常对照组(NC),每组10只。DE组进行8周中等强度的跑台运动,其它组不运动。无创血压仪测试大鼠的心率、血压,HE染色观察血管壁病理学变化,电镜观察血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的超微结构,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血管微小RNA-181b(microRNA-181b,miR-181b)的表达,Western Blot检测血管α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、磷酸肌醇3激酶(phospho inositide-3 kinase,PI3K)、磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue,PTEN)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)等蛋白表达。结果:相比NC组,DC组大鼠心率(heart rate,HR)、收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)、平均血压(mean blood pressure,MBP)显著降低(P<0.001);VSMCs失去典型的长梭形特征,表现为菱形,核膨大而不规则,细胞膜边界不清晰,密体、密斑少见;腹主动脉中膜显著增厚(P<0.05);收缩型特异蛋白α-SMA表达降低而合成型特异蛋白Vimentin表达升高(P<0.01);血管miR-181b的表达升高(P<0.001),其靶蛋白PTEN的表达降低(P<0.01),PI3K、AKT表达升高(P<0.01)。相比DC组,8周有氧运动使DE组的SBP、DBP、MBP显著升高(P<0.05或P<0.001);VSMCs呈长方形,核呈长椭圆形,细胞膜清晰完整,可见少许密体和密斑;收缩型特异蛋白α-SMA表达升高而合成型特异蛋白Vimentin表达降低(P<0.05);血管miR-181b的表达显著降低(P<0.001),PTEN蛋白表达升高而AKT表达下降(P<0.01或P<0.05)。结论:有氧运动具有缓解2型糖尿病大鼠血管损伤的作用,且可能机制为运动激活miR-181b/PTEN通路抑制下游AKT信号从而逆转糖尿病大鼠动脉VSMCs向合成表型转化。

结直肠癌患者血清miRNA-21、miRNA-27b表达水平及其与预后的相关性分析

目的研究结直肠癌患者血清微小RNA(miRNA)-21、miRNA-27b表达水平及其与预后的相关性。方法选取2021年1-5月在该院接受治疗的结直肠癌患者60例作为观察组。另选取同期在该院参加体检的健康志愿者60例作为对照组。检测并对比两组血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平,不同病理特征患者的血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平,比较不同血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平患者的生存预后。结果观察组血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平明显高于对照组(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期及有淋巴结转移的患者血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平分别较Ⅰ~Ⅱ期及无淋巴结转移者更低(P<0.05)。随访2年,miRNA-21高表达组平均生存时间(15.36±2.32)个月,miRNA-21低表达组平均生存时间(21.54±2.46)个月;miRNA-27b高表达组平均生存时间(16.11±3.20)个月,miRNA-27b低表达组平均生存时间(21.37±2.55)个月;miRNA-21高表达组及miRNA-27b高表达组的1、2年生存率均分别明显低于miRNA-21低表达组及miRNA-27b低表达组(P<0.05)。血清miRNA-21及miRNA-27b水平与患者的生存预后均呈负相关(P<0.05)。结论结直肠癌患者的血清miRNA-21及miRNA-27b均呈高表达,且二者表达与患者预后均呈负相关,可用于临床监测患者的病情及预后情况,值得重视。

miRNA-29b及膜联蛋白A2在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的 探讨miRNA-29b(miR-29b)及膜联蛋白A2(ANXA2)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及其与预后的关系。方法 收集72例EC(EC组)、40例子宫内膜上皮瘤样病变(EIN组)和30例子宫良性疾病(对照组)患者的子宫内膜组织,检测各组miR-29b和ANXA2的表达水平,采用Pearson相关分析探索二者的相关性。根据miR-29b及ANXA2表达的中位值,将EC患者分为miR-29b低表达组、miR-29b高表达组和ANXA2低表达组、ANXA2高表达组,采用χ^(2)检验分析不同分组间临床病理特征的差别,采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析其与术后总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的关系;双荧光素酶报告基因实验验证miR-29b与ANXA2的靶向关系。结果 与对照组和EIN组比较,EC组子宫内膜组织中miR-29b的表达水平明显降低,ANXA2的表达水平明显升高(P<0.05);miR-29b与ANXA2表达呈负相关(r=-0.321,P<0.05)。高miR-29b组患者的OS和PFS高于低miR-29b组(P<0.05),而高ANXA2组患者的OS和PFS低于低ANXA2组(P<0.05);miR-29b高表达是EC患者OS的保护因素(HR:0.177,95%CI:0.064~0.492,P<0.05),而ANXA2高表达是EC患者PFS的危险因素(HR:2.281,95%CI:1.139~4.567,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实ANXA2是miR-29b的靶基因。结论 miR-29b可能通过靶向负调控ANXA2的表达参与EC的进展,二者均可作为EC患者潜在的预后指标。

维持性血液透析患者血清微小RNA-29b水平与矿物质骨代谢紊乱指标的相关性分析

目的探讨维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者血清微小RNA(microRNA,miR)-29b水平与慢性肾脏病-矿物质骨代谢紊乱(chronic kidney disease-mineral and bone metabolism disorder,CKD-MBD)指标的相关性。方法选取2019年2月至2021年11月鄂州市中心医院血液净化中心进行规律MHD的患者116例作为MHD组,根据血钙、磷、全段甲状旁腺素(intact parathyroid hormone,iPTH)指标范围将其分为达标组(未合并CKD-MBD)与未达标组(合并CKD-MBD)。另选取体检健康者116名为对照组。检测血清miR-29b、钙、磷、iPTH、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、白蛋白(albumin,Alb)、β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、25羟维生素D[25 hydroxyvitamin D,25(OH)D]水平,比较其在各组中的差异。Pearson法分析未达标组miR-29b与各临床指标相关性;logistic回归模型分析miR-29b降低的相关影响因素。结果MHD组患者以下指标水平高于对照组:血磷[(1.50±0.37)mmol/L比(1.12±0.26)mmol/L]、ALP[(96.07±13.54)U/L比(72.39±11.95)U/L]、β2-MG[(1.73±0.51)mg/L比(1.48±0.36)mg/L]、25(OH)D[(21.30±5.47)μg/L比(16.82±3.15)μg/L]、iPTH[(325.08±84.90)ng/L比(50.74±9.36)ng/L];以下指标水平低于对照组:Hb[(114.93±7.26)g/L比(125.74±10.51)g/L]、Alb[(37.25±3.82)g/L比(43.18±4.04)g/L]、miR-29b[(0.72±0.15)比(1.06±0.12)],差异有统计学意义(P<0.05)。116例MHD患者中9例(7.76%)同时达到CKD-MBD指南中规定的钙、磷、iPTH目标值。达标组血清miR-29b表达水平(0.92±0.17)高于未达标组(0.70±0.15),差异有统计学意义(P<0.05)。未达标组血清miR-29b与25(OH)D、磷、iPTH存在负相关(r=−0.592、r=−0.546、r=−0.601,P均<0.05),与年龄、体重指数、透析时间、Hb、ALP、Alb、钙、β2-MG不存在相关性(P均>0.05)。25(OH)D[OR(95%CI):1.627(1.110~2.384)]、磷[OR(95%CI):1.461(1.064~2.007)]、iPTH[OR(95%CI):1.539(1.092~2.169)]是导致miR-29b降低的危险因素(P<0.05)。结论miR-29b在合并矿物质骨代谢紊乱的MHD患者中呈下调表达,且与25(OH)D、磷、iPTH呈负相关。

循环肿瘤细胞、微小RNA-196a、肿瘤特异性生长因子在宫颈癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的分析循环肿瘤细胞(CTC-s)、微小RNA-196a(miR-196a)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)在宫颈癌病人中的表达,并探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法回顾性收集2016年1月至2017年3月北京中医医院顺义医院收治的116例宫颈癌病人作为癌症组,同期收集该院体检中心100例健康女性作为对照组。检测两组研究对象的CTC-s、miR-196a、TSGF水平,并分析其与病人临床病理特征和预后的关系。结果癌症组CTC-s(5.92±1.32)U/mL、miR-196a(5.82±1.44)、TSGF(109.65±27.68)U/mL明显高于对照组的(0.55±0.14)U/mL、1.05±0.23、(30.54±8.11)U/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。根据临床病理特征分组结果显示国际妇产科协会(FIGO)分期≥ⅡB期、低分化、浸润深度>1/2肌层、有淋巴结转移的宫颈癌病人CTC-s分别为(6.83±1.49)U/mL、(6.88±1.60)U/mL、(6.97±1.50)U/mL、(7.06±1.54)U/mL,miR-196a分别为7.01±1.57、6.82±1.48、7.00±1.57、7.11±1.61,TSGF分别为(125.48±30.02)U/mL、(128.03±33.02)U/mL、(127.87±34.01)U/mL、(130.35±34.98)U/mL,CTC-s、miR-196a、TSGF在FIGO分期≥ⅡB期、分化程度为低分化、浸润深度为>1/2肌层、有淋巴结转移的宫颈癌病人中明显升高(P<0.05);Spearman相关性分析可知,CTC-s、miR-196a、TSGF与FIGO分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关。Kaplan-Meier生存曲线显示高水平的CTC-s、miR-196a、SCC-Ag病人中位生存期明显缩短。Cox回归分析结果显示FIGO分期、分化程度、淋巴结转移以及CTC-s、miR-196a、TSGF阳性表达是宫颈癌病人预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论宫颈癌病人CTC-s、miR-196a、TSGF水平明显升高,且与病人临床病理特征和预后密切相关,可作为宫颈癌早期诊断和预后评估的有效指标。

微小RNA-335-5p靶向轴突导向因子3B对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨微小RNA-335-5p(miR-335-5p)靶向轴突导向因子3B(SEMA3B)对子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:细胞转染分为miR-335-5p NC组、miR-335-5p inhibitor组、pcDNA组、pcDNA-SEMA3B组、miR-335-5p NC+si NC组、miR-335-5p inhibitor+si NC组、miR-335-5p NC+si SEMA3B组、miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组,未转染的Ishikawa细胞作为对照组。生物信息学预测和双荧光素酶法验证miR-335-5p和SEMA3B的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-5p和SEMA3B表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹(WB)检测SEMA3B蛋白表达。结果:miR-335-5p和SEMA3B存在靶向关系,并且在子宫内膜癌组织和Ishikawa细胞中检测到miR-335-5p的高表达和SEMA3B的低表达。与miR-335-5p NC组比较,miR-335-5p inhibitor组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-SEMA3B组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。与miR-335-5p NC+si NC组比较,miR-335-5p inhibitor+si NC组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),miR-335-5p NC+si SEMA3B组细胞增殖率显著升高、细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与miR-335-5p NC+si SEMA3B比较,miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组细胞增殖率降低、细胞凋亡率升高(均P<0.05)。与miR-335-5p inhibitor+si NC组比较,miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低(均P<0.05)。结论:抑制miR-335-5p可靶向激活SEMA3B表达,从而促进子宫内膜癌细胞的凋亡、抑制癌细胞增殖。

微小RNA-3651过表达通过介导核因子κB信号通路抑制人舌癌细胞CAL27的生长与侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-3651过表达通过介导核因子(NF)-κB信号通路抑制人舌癌细胞CAL27生长与侵袭的机制。方法将对数生长期CAL27细胞分为miR-3651 mimic组、mimic-NC组和对照组。采用qRT-PCR检测转染后细胞miR-3651水平,CCK-8检测细胞活力,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,光学显微镜下观察细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的形成,Western blot检测E钙粘蛋白、N钙粘蛋白、波形蛋白、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白表达。结果mimic-NC组与对照组细胞miR-3651水平、细胞活力、侵袭细胞数、细胞迁移率和细胞形态均无明显差异(P>0.05),E钙粘蛋白、N钙粘蛋白、波形蛋白和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达均无明显差异(P>0.05);与mimic-NC组相比,miR-3651 mimic组细胞miR-3651水平升高(P<0.05),培养的细胞第2、3、4天的活力降低(P<0.05),侵袭细胞数和细胞迁移率降低(P<0.05),细胞E钙粘蛋白表达升高(P<0.05),N钙粘蛋白、波形蛋白和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达下降(P<0.05),显微镜下观察到EMT形成减少。结论过表达miR-3651可以抑制CAL27细胞的生长和侵袭,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路磷酸化有关。

过敏性紫癜患儿外周血B淋巴细胞中微小RNA-221与磷酸酶和张力蛋白同源物对肾损伤的预测价值

目的研究旨在探讨过敏性紫癜(Henoch-Schönlein purpura,HSP)患儿外周血B淋巴细胞中微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)与磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)对肾损伤的预测价值。方法回顾性选取2021年1—12月于徐州医科大学附属医院就诊的97例HSP患儿作为研究组,并纳入同期在徐州医科大学附属医院进行体检的100例健康儿童作为对照组。同时将97例HSP患儿根据是否有肾损伤分为肾损伤组(39例)和无肾损伤组(58例)。收集所有研究对象性别、年龄、体重指数,评估HSP患儿的症状总积分值。测定所有研究对象的外周血B淋巴细胞miR-221、PTEN mRNA表达水平和血清中的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-17表达水平。结果研究组外周血B淋巴细胞中miR-221的相对表达量显著高于对照组(t=5.214,P<0.001);研究组外周血B淋巴细胞中PTEN mRNA相对表达量显著低于对照组(t=6.352,P<0.001)。HSP患儿外周血B淋巴细胞中miR-221与PTEN相对表达量间呈显著负相关关系(r=-0.718,P<0.001);HSP患儿外周血B淋巴细胞中miR-221水平与症状总积分值、血清TNF-α、IL-6、IL-17表达水平均呈显著正相关关系(P<0.05)。PTEN表达水平与症状总积分值、血清TNF-α、IL-6、IL-17表达水平均呈显著负相关关系。肾损伤组外周血B淋巴细胞中miR-221的表达显著高于无肾损伤组(t=3.814,P<0.001)。肾损伤组外周血B淋巴细胞中PTEN mRNA的相对表达量显著低于无肾损伤组(t=4.256,P<0.001);肾损伤组症状总积分值、TNF-α、IL-6和IL-17水平均显著高于无肾损伤组(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血B淋巴细胞中miR-221和PTEN表达水平对HSP患儿肾损伤预测的曲线下面积分别为0.871(95%CI 0.795~0.947,P<0.001)和0.884(95%CI 0.817~0.951,P<0.001),灵敏度和特异度分别为74.4%和87.9%、84.6%和79.3%。结论HSP患儿外周血B淋巴细胞中miR-221表达水平升高,PTEN表达水平降低,并对HSP患儿的肾损伤有一定预测价值。

微小RNA-29b靶向卷曲蛋白6参与急性髓系白血病细胞柔红霉素耐药的分子机制

目的探究微小RNA-29b(miR-29b)靶向卷曲蛋白6(FZD6)参与急性髓系白血病(AML)细胞柔红霉素(DNR)耐药的分子机制。方法CCK-8检测AML细胞系在不同DNR浓度下的生存能力,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AML细胞系中miR-29b的表达。选取THP-1细胞为研究对象,分为Control组(正常培养)、miR-NC mimics组(转染miR-NC mimics)、miR-29b mimics组(转染miR-29b mimics)、miR-29b mimics+pcDNA组(转染miR-29b mimics和pcDNA)、miR-29b mimics+pcDNA-FZD6组(转染miR-29b mimics和pcDNA-FZD6),转染24 h后使用10 mM DNR处理培养24 h。qRT-PCR和免疫印迹(Western blot)检测各组DNR处理的THP-1细胞中miR-29b和FZD6表达水平。生物信息学和双荧光素酶报告基因预测并检测miR-29b和FZD6靶向关系。CCK-8、Edu法和流式细胞术分别检测DNR处理的各组THP-1细胞增殖和凋亡情况。结果AML细胞系对DNR的耐药性是呈浓度依赖性的,qRT-PCR结果显示,miR-29b在AML细胞系THP-1(1.00±0.05)、KG-1(1.87±0.16)、HL-60(2.96±0.21)及Kasumi-1(3.73±0.29)中的表达逐渐增高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测、qRT-PCR及Western blot证明miR-29b可直接负靶向FZD6(0.32±0.04,0.37±0.05,0.48±0.06,P<0.05)。miR-29b过表达可使AML细胞对DNR的耐药性减弱,抑制细胞增殖,增强细胞凋亡能力(43.59±5.24,21.97±3.13,P<0.05)。上调FZD6可一定程度上逆转上调miR-29b表达对THP-1细胞增殖和凋亡的影响(65.21±6.39,38.26±4.09,P<0.05)。结论miR-29b通过靶向抑制FZD6降低AML细胞对DNR的耐药性。

微小RNA-133b和M2型丙酮酸激酶在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的分析并探讨微小RNA-133b(miR-133b)和M2型丙酮酸激酶(M2 pyruvate kinase,PKM2)在食管鳞癌组织中的表达及临床意义。方法选取2020年1月至2021年12月于西南医科大学附属医院收治的72例食管鳞癌患者手术切除的癌组织作为研究组;配对癌旁正常食管组织作为对照组。采用原位杂交技术检测miR-133b的表达,运用免疫组化法检测PKM2的表达。比较两组miR-133b、PKM2表达差异,分析食管鳞癌组织miR-133b与PKM2表达的相关性及与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征的关系。结果miR-133b在对照组中的表达水平显著高于研究组,差异有显著性(P<0.05)。PKM2在研究组中的表达水平显著高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。miR-133b低表达组PKM2高表达率显著高于miR-133b高表达组,差异有显著性(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,miR-133b和PKM2在食管鳞癌组织中的表达呈显著负相关(r=-0.532,P=0.000)。食管鳞癌组织中miR-133b的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位、病理类型、肿瘤直径、病理分级、浸润深度、脉管转移、神经转移及淋巴结转移均无关(P>0.05)。PKM2在男性、高龄(年龄≥60岁)、发生于食管下段、溃疡型、肿瘤直径≤5cm、高/中分化、发生脉管转移和淋巴结转移的食管鳞癌患者中高表达率更高(P<0.05)。49例食管鳞癌淋巴结转移组织中,PKM2高表达率显著高于miR-133b(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中,miR-133b表达下调,PKM2表达上调。miR-133b可能通过下调PKM2的表达从而抑制食管鳞癌的浸润转移。