微小RNA-200家族在三阴性乳腺癌发生发展中的作用

乳腺癌(BC)是女性人群在临床上最常诊断的癌症疾病,其特征主要体现在高发病率及高死亡率,并时刻威胁着我国女性的健康〔1,2〕。据统计,在欠发达国家BC的发病率较高,相比较发达国家则相对较低〔3〕。

Notch-1和微小RNA-200家族在胰腺癌上皮-间充质转化中的作用

目的观察Noteh-1和微小RNA（miRNA，miR）-200家族在吉西他滨（Gem）诱导的人胰腺癌PANC-1细胞上皮-间充质转化（EMT）中的作用。方法体外培养PANC-1细胞并诱导细胞EMT，Western blot实验和反转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch—1、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、相关转录因子及miR-200家族成员的表达；Transwell小室检测具有EMT改变的PANC-1细胞迁移和侵袭能力。结果Gem诱导PANC-1细胞EMT最适药物浓度为10nmol／L，最适时间为9d。Western blot灰度分析显示未经Gem处理的亲代细胞（parental）组Noteh-1、E—cadherin、Vimentin、slug、snail、twist、E盒结合锌指蛋白1（ZEBl）的表达分别为0．840±0．002、0．995±0．008、1．158±0．001、0．253±0．004、0．528±0．003、0．346±0．002，0．29l±0．006，Gem（＋）组分另0为1．599±0．00l、0．483±0．001、1．821±0．003、0．719±0．004、0．919±0．005、0．762±0．002、0．70l±0．004，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR检测parental组Notch-1、E—cadherin、Vimentin、slug、snail、twist、ZEB1 mRNA的表达分别为（2．200±0．010）×10-3、（1．540±0．002）×10-4、1．003±0．004、（8．580±0．003）×10-4、（5．040±0．007）×10-3、（6．930±0．001）×10-5、（2．010±0．001）×10-4，Gem（＋）组分别为（5．870±0．004）×10-5、（1．430±0．001）×10-5、1．660±0．007、（4．030±0．002）×10-3、（8．980±0．005）×10-3、（3．300±0．020）×10-6、（1．120±0．003）×10-3，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR法检测parental组miR-200a、miR-200b、miR-200e、miR-141和miR-429的表达水平分别为（2．340±0．002）×10-5、（4．280±0．001）×10-6、（3．250±0．003）×10-5、（2．470±0．004）×10-5、（6．230±0．005）×10-4，Cem（＋）组分别为（0．801±0．000）×10-5、（2．030±0．004）×10-6、（5．000±0．050）×10-6、（3．670±0．003）×10-6、（1．310±0．002）×10-4，两组问比较差异有统计学意义（P〈0．05）。PANC-1细胞EMT改变后侵袭能力明显增强，parental组迁移和侵袭实验细胞计数分别为（25．70±3．67）个和（16．30±2．21）个，Gem（＋）组分别为（77．40±3．01）个和（68．00±8．76）个，两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Gem可诱导PANC-1细胞EMT，Noteh-1可能是该过程的重要信号通路，并参与miR-200家族的调控。

老年原发性肝癌病人血清微小RNA-200a、微小RNA-221表达与介入术后感染的相关性分析

目的探究老年原发性肝癌病人血清微小RNA(miR)-200a、miR-221表达与介入术后感染的相关性。方法选取2017年5月至2020年4月武汉市汉口医院45例老年原发性肝癌介入术后感染病人作为观察组,另自同期住院的老年原发性肝癌介入术后未出现感染病人中通过SPSS 21.0统计软件采取随机数字表法抽取45例作为对照组。比较两组临床资料、血清miR-200a、miR-221表达,分析老年原发性肝癌病人介入术后感染影响因素及血清miR-200a、miR-221表达与影响因素的关系,绘制受试者操作曲线(ROC曲线),评价血清miR-200a、miR-221表达对老年原发性肝癌病人介入术后感染的预测价值,并绘制卡普兰-迈耶曲线(KM),对比不同血清miR-200a、miR-221表达病人死亡情况。结果观察组腹水、白蛋白<30 g/L、异位栓塞、部分脾脏栓塞比例高于对照组(P<0.05);术后,观察组血清miR-200a表达(2.84±0.74)低于对照组(4.69±1.14),miR-221表达(12.37±3.02)高于对照组(9.05±2.43)(P<0.05);logistic回归分析,结果显示腹水、白蛋白<30 g/L、异位栓塞、部分脾脏栓塞、术后血清miR-200a、miR-221表达均为老年原发性肝癌病人介入术后感染影响因素(P<0.05);老年原发性肝癌介入术后感染病人术后血清miR-200a表达与腹水、异位栓塞、部分脾脏栓塞呈负相关关系,与白蛋白呈正相关关系(P<0.05);术后血清miR-221表达与腹水、异位栓塞、部分脾脏栓塞呈正相关关系,与白蛋白呈负相关关系(P<0.05);绘制ROC曲线,评价血清miR-200a、miR-221表达对老年原发性肝癌病人介入术后感染的预测价值,发现,二者联合预测AUC最大,预测效能良好;以ROC曲线中截断值为界,将原发性肝癌病人分为血清miR-200a、miR-221高表达与低表达组,miR-200a高表达组术后3个月病死率低于低表达组,miR-221高表达组病死率高于低表达组(P<0.05)。结论老年原发性肝癌介入术后感染病人血清miR-200a表达明显下调,miR-221显著上调,临床检测其水平,可早期诊断感染,合理制定治疗方案,有助于改善预后。

微小RNA-190b-5p靶向调控Smad4及对TGF-β1诱导的直肠癌细胞迁移侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨微小RNA-190b-5p(miR-190b-5p)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的直肠癌细胞迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法给予直肠癌SW1463细胞miR-190b-5p模拟物(mimic)和/或TGF-β1处理,采用实时荧光定量PCR测定miR-190b-5p表达水平;Western blot检测钙黏蛋白E、波形蛋白和SMAD家族蛋白4(Smad4)的蛋白表达水平;Transwell实验检测SW1463细胞的迁移侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-190b-5p与Smad4的靶向关系。结果与正常人结肠上皮细胞CCD841 con相比,SW1463细胞的miR-190b-5p表达降低。TGF-β1处理诱导SW1463细胞的miR-190b-5p表达水平进一步降低,促进EMT且增强细胞迁移侵袭能力和Smad4蛋白表达水平。过表达miR-190b-5p可抑制TGF-β1诱导的EMT及细胞迁移侵袭过程和Smad4表达上调。结论miR-190b-5p可能通过抑制Smad4表达来阻断TGF-β/Smad信号通路诱导的直肠癌细胞EMT和侵袭迁移过程,miR-190b-5p/Smad4有成为直肠癌治疗靶点的潜能。

miRNA-200家族对卵巢癌预后评估价值的Meta分析

目的探讨miRNA-200家族对卵巢癌患者预后评估的价值。方法全面检索PubMed、Embase、Web of science数据库,检索时限为建库至2019年7月。检索词包括:miR/miRNA-200 family、miR/miRNA-141、miR/miRNA-200a、miR/miRNA-200b、miR/miRNA-200c、miR/miRNA-429、ovarian cancer、prognosis、prognostic、mortality、outcome、survival。语种限定为英语。辅以文献溯源、手工检索等方法搜索相关文献。对纳入的文献进行质量评价和资料提取,对符合质量标准的文献采用Stata15.0统计软件进行Meta分析。结果本研究共纳入11篇文献,Meta分析miR-200与卵巢癌患者的总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的合并HR分别为0.66(95%CI:0.51~0.81)和0.62(95%CI:0.53~0.71)。分层研究分析提示miR-200a与卵巢癌患者OS合并HR为0.50(95%CI:0.02~0.98);而miR-200a、miR-200b、miR-200c和miR-141与PFS合并HR分别为0.71(95%CI:0.55~0.87)、1.70(95%CI:1.00~2.41)、0.32(95%CI:0.15~0.49)和0.61(95%CI:0.41~0.81)。结论miR-200家族或是卵巢癌患者可靠的临床预后评估生物标志物。

微小RNA-200c靶向抑制EFNA1基因对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-200c靶向抑制肝配蛋白A1(EFNA1)基因对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法选取胃癌细胞株SGC7901,随机分为miR-200c模拟物组、模拟物对照组、miR-200c抑制物组、抑制物对照组,分别转染miR-200c模拟物、模拟物对照寡核苷酸、miR-200c抑制物、抑制物对照寡核苷酸,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭。采用双荧光素酶实验验证miR-200c对EFNA1基因的靶向抑制作用。取本院手术切除的胃癌和相应癌旁组织标本48例份,通过免疫组化法检测EFNA1蛋白表达,分析胃癌组织中EFNA1蛋白表达与患者性别、年龄、吸烟、饮酒、病理类型、浸润深度、淋巴结及远处转移、肿瘤部位间的关系。结果与模拟物对照组相比,miR-200c模拟物组胃癌细胞SGC7901增殖活性降低(P<0.05),总凋亡率升高(P<0.05),侵袭能力降低(P<0.05)。miR-200c模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(P<0.05),而miR-200c抑制物组的荧光素酶活性高于抑制物对照组(P<0.05)。EFNA1蛋白在胃癌组织中表达高于癌旁组织,其高表达与胃癌淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理特征均不相关(P均>0.05)。结论胃癌组织中EFNA1基因呈高表达,miR-200c可通过靶向EFNA1基因抑制胃癌细胞增殖及侵袭,促进凋亡。

上调微小RNA-200a表达对非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感度的影响及其机制

目的探讨微小RNA-200a(miRNA-200a)对非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感度的影响及其机制。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌A549细胞中miRNA-200a的表达情况;采用脂质体法将miRNA-200a模拟物及miRNA-200a阴性对照转染至非小细胞肺癌A549细胞,采用qRT-PCR检测转染效果;采用噻唑蓝(MTT)法检测上调miRNA-200a表达对紫杉醇处理的非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制情况的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测上调miRNA-200a表达及紫杉醇处理后非小细胞肺癌A549细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关β-catenin蛋白的表达情况。结果非小细胞肺癌A549细胞中miRNA-200a的相对表达量为(0.26±0.08),明显低于正常人肺上皮16HBE细胞的(1.02±0.03)(P﹤0.01)。转染48 h后,空白对照组、mimics NC组、miRNA-200a mimics组细胞中miRNA-200a的相对表达量分别为(1.06±0.12)、(1.18±0.25)和(5.02±0.16),3组细胞中miRNA-200a的相对表达量比较,差异有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-200a mimics组细胞中miRNA-200a的相对表达量明显高于空白对照组(P﹤0.01)。MTT法检测结果显示,随着紫杉醇浓度的增加,A549细胞受到的增殖抑制作用明显增强,且呈一定的浓度依赖性;与紫杉醇组相比,转染miRNA-200a mimics后,随着紫杉醇浓度的增加,A549细胞受到的增殖抑制作用增强(P﹤0.05)。Western blot检测结果显示,空白对照组、紫杉醇组、miRNA-200a mimics组和miRNA-200a+紫杉醇组细胞中β-catenin蛋白的相对表达量分别(0.78±0.03)、(0.62±0.05)、(0.48±0.05)和(0.25±0.04),4组细胞中β-catenin蛋白的相对表达量比较,差异有统计学意义(P﹤0.01)。与空白对照组相比,紫杉醇组、miRNA-200a mimics组和miRNA-200a+紫杉醇组细胞中β-catenin蛋白的相对表达量均明显降低(P﹤0.01);与紫杉醇组相比,miRNA-200a+紫杉醇组细胞中β-catenin蛋白的相对表达量明显降低(P﹤0.01)。结论上调miRNA-200a表达能够增强非小细胞肺癌A549细胞对紫杉醇化疗药物的敏感度,其作用机制与阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。

人微小RNA-200a的生物学功能及其在结肠癌中的意义

目的探讨人微小RNA(miR)-200a的生物学功能及其在结肠癌中的意义。方法采用miRWalk在线工具筛选miR-200a靶基因,使用DAVID、京都基因和基因组百科全书数据库和STRING分别进行靶基因功能分析、信号通路分析和蛋白互作网络分析。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载结肠癌的临床数据和测序数据,包括453个癌组织样本和8个正常肠黏膜组织样本,对比癌组织和正常组织miR-200a表达水平,分析miR-200a与结肠癌患者临床病理参数、生存时间的关系。结果共筛选出200个靶基因,这些靶基因参与的主要生物过程为氧化应激反应,主要参与的细胞成分为细胞外泌体,分子功能为SH2域结合,主要参与的信号通路为miR在肿瘤中的信号通路。蛋白互作网络显示PH区域富含亮氨酸残基的蛋白磷酸酶1(PHLPP1)、富亮氨酸重复激酶2、沉默信息调节因子α相关酶1(SIRT1)、CT10调节酶(CRK)、E2F3为网络中的核心基因。结肠癌组织miR-200a表达水平高于正常组织(P<0.05);结肠癌临床分期Ⅲ+Ⅳ期者、远处转移者的miR-200a表达水平分别高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期者、无远处转移者(P<0.05);miR-200a高表达的患者生存时间较低表达者短(P<0.05)。结论人miR-200a通过靶基因发挥多种生物学作用,其在结肠癌组织中高表达,可能与肿瘤的发生和发展有关,或可用于评估患者预后。

微小RNA-218-5p靶向三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员基因对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究微小RNA(microRNA,miR)-218-5p靶向调控三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员(ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2)基因对Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)与Western blot检测Tca-8113细胞和NOK细胞中miR-218-5p和ABCG2的表达。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-218-5p和ABCG2靶向关系。用脂质体法将miR-218-5p mimic、ABCG2小干扰RNA(interfering RNA,siRNA)、miR-218-5p mimic+pcDNA-ABCG2分别转染至Tca-8113细胞中,噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)法、Transwell法检测Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭。结果:与NOK细胞比较,Tca-8113细胞miR-218-5p呈显著低表达,ABCG2呈显著高表达(P<0.05)。过表达miR-218-5p、抑制ABCG2均可抑制Tca-8113细胞的增殖和迁移(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-218-5p与ABCG2的靶向结合关系。过表达ABCG2可逆转上调miR-218-5p对Tca-8113细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:上调miR-218-5p的表达可靶向调控ABCG2,抑制Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭,将可为口腔鳞状细胞癌的治疗提供新的靶点。

微小RNA-200a在肝癌中的表达及其功能

目的观察miR-200a在肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的表达,以及对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、周期和侵袭能力的影响。方法运用荧光定量PCR检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的miR-200a的表达量。运用MTT法、流式细胞仪和Transwell试验分析miR-200a对细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。结果肝癌细胞HepG2中miR-200a表达水平为正常肝细胞4.79倍,癌细胞中miR-200a表达明显高于正常细胞(P<0.01)。在72 h浓度为150 nmol/L时,miR-200a对肝癌细胞增殖的促进作用最明显,促进率为38.40%。与空对照组和负对照组比较,G0/G1期细胞未见明显增多(57.13±0.02)%,S期无明显减少(26.55±0.8)%,早期凋亡细胞比例未见明显升高(0.5±0.06)%(P>0.05)。Transw ell实验结果显示100 nmol/L miR-200a mimics实验组相对穿出小室膜肿瘤细胞数为(0.348+0.005 657),与空对照组(0.296±0.006 364),负对照组(0.287±0.005 364)差异明显(P<0.05)。结论 miR-200a在肝癌细胞株中异常表达,癌细胞中的表达明显高于正常细胞,miR-200a对肝癌细胞株的增殖和侵袭能力有着明显的促进作用,其在肿瘤发生发展中可能担任着原癌基因的角色。

miRNA-181a、胱天蛋白酶富集域家族成员11、核因子κB在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-181a(miRNA-181a)、胱天蛋白酶富集域家族成员11(CARD11)、核因子κB(NF-κB)在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义。方法选取85例弥漫大B细胞淋巴瘤患者和60例增生性淋巴结炎患者,分别作为观察组和对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量。比较不同临床特征弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 m RNA、NF-κB mRNA相对表达量,比较Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期观察组和对照组患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量,比较不同疗效弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11mRNA、NF-κB mRNA相对表达量。采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析miRNA-181a、CARD11、NF-κB单独及联合检测对弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床分期的诊断价值及对疗效的预测价值。结果Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、国际预后指数(IPI)评分为3~5分弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a相对表达量分别明显高于Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ期、IPI评分为0~2分的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结外累及数目﹥1个、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、IPI评分为3~5分弥漫大B细胞淋巴瘤患者CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均明显高于结外累及数目≤1个、Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ期、IPI评分为0~2分的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均高于对照组,Ⅲ~Ⅳ期弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。疗效为完全缓解(CR)/部分缓解(PR)/疾病稳定(SD)弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均低于疗效为疾病进展(PD)的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-181a、CARD11、NF-κB联合检测诊断弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床分期的AUC为0.968,高于三者单独检测的0.852、0.841、0.830;miRNA-181a、CARD11、NF-κB联合检测预测弥漫大B细胞淋巴瘤患者疗效的AUC为0.953,高于三者单独检测的0.847、0.684、0.816。结论miRNA-181a、CARD11、NF-κB可作为弥漫大B细胞淋巴瘤患者病情监测和预后预测指标,其表达水平升高提示患者病情可能加重,三者联合检测对弥漫大B细胞淋巴瘤的诊断价值较高,且对预后的预测价值较高。

miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

结直肠癌患者血浆微小RNA-200a的表达水平及临床意义

目的探讨结直肠癌患者血浆微小RNA(miRNA)-200a的表达水平及临床意义。方法选取52例结直肠癌患者(结直肠癌组)与52例健康体检者(健康对照组)。比较两组血浆miRNA-200a、癌胚抗原、糖类抗原199水平,分析结直肠癌患者血浆miRNA-200a水平与癌胚抗原、糖类抗原199水平的相关性,评价miRNA-200a单独或联合癌胚抗原或(和)糖类抗原199对结直肠癌的诊断价值,并对比不同临床病理特征的结直肠癌患者血浆miRNA-200a水平。结果结直肠癌组血浆miRNA-200a、癌胚抗原、糖类抗原水平均高于健康对照组(均P<0.05)。结直肠癌患者血浆miRNA-200a水平与癌胚抗原、糖类抗原199水平均无相关性(均P>0.05)。血浆miRNA-200a水平诊断结直肠癌的曲线下面积为0.791,敏感度和特异度分别为81.7%和74.3%,miRNA-200a联合癌胚抗原或(和)糖类抗原199诊断结直肠癌的曲线下面积均大于单独miRNA-200a诊断。M1期、Ⅲ+Ⅳ期结直肠癌患者的血浆miRNA-200a水平分别高于M0期、Ⅰ+Ⅱ期患者(均P<0.05)。结论结直肠癌患者血浆miRNA-200a水平升高,其与肿瘤的远处转移及进展密切相关。血浆miRNA-200a或可作为结直肠癌的辅助诊断标记物,联合传统肿瘤标志物检测可有效地提高诊断效能。

酰基辅酶A合成酶中链家族成员3、微小RNA-653-5p在前列腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征、预后的关系

目的 检测酰基辅酶A合成酶中链家族成员3(ACSM3)、微小RNA-653-5p(miR-653-5p)在前列腺癌组织中的表达,并探讨两者与患者临床病理特征及预后的关系。方法 收集2016年4月至2018年4月成都医学院第一附属医院收治的150例行前列腺癌根治术患者的前列腺癌组织标本、癌旁组织标本作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测前列腺癌组织、癌旁组织中ACSM3 mRNA、miR-653-5p的表达水平;分析前列腺癌组织中ACSM3 mRNA、miR-653-5p水平与患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier生存曲线分析前列腺癌组织中ACSM3、miR-653-5p表达水平与患者预后的关系。结果 与癌旁组织相比,前列腺癌组织中ACSM3 mRNA水平显著降低,miR-653-5p水平显著升高(P<0.05);Gleason评分≥8分、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为未-低分化、有淋巴结转移的前列腺癌患者的前列腺癌组织中ACSM3 mRNA水平均低于Gleason评分<8分、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、分化程度为中-高分化、无淋巴结转移的前列腺癌患者,而miR-653-5p水平均高于Gleason评分<8分、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、分化程度为中-高分化、无淋巴结转移的前列腺癌患者(P<0.05);ACSM3 mRNA低表达患者3年总体生存率(60.49%)低于ACSM3 mRNA高表达患者(85.51%)(χ^(2)=11.564,P<0.05);miR-653-5p低表达患者3年总体生存率(80.56%)高于miR-653-5p高表达患者(64.10%)(χ^(2)=5.027,P<0.05)。结论 前列腺癌组织中ACSM3表达降低,miR-653-5p表达升高,两者表达水平与患者的临床病理特征关系密切,且能预测患者术后3年的生存情况。

微RNA-200家族对程序性死亡配体1的调控及其在非小细胞肺癌中的临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)免疫检查点分子程序性死亡配体1(PD-L1)的表达及其与miRNA-200家族之间的调控关系,阐明PD-L1在NSCLC中的临床意义及调控机制。方法选取138例NSCLC患者癌组织及配对的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色检测PD-L1表达,qRT-PCR检测miRNA-200家族(miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c、miRNA-429、miRNA-141)的表达水平。培养肺癌A549细胞,通过转染miRNA-200家族5个miRNA模拟物使其过表达,采用蛋白质印迹法检测miRNA-200家族过表达对PD-L1表达的影响,CCK-8实验检测miRNA-200家族过表达对A549细胞增殖活性的影响,荧光素酶报告基因实验验证miRNA-200家族对PD-L1的调控作用。结果138例NSCLC患者癌组织PD-L1总阳性率为58.7%(81/138),高于癌旁组织(3.6%,5/138),差异有统计学意义(P<0.05);PD-L1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无关,而与淋巴结转移、脉管侵犯、临床TNM分期有关(P均<0.05)。NSCLC癌组织中miRNA-200家族表达水平均低于癌旁组织(P均<0.01),且PD-L1表达阳性的患者具有更低水平的miRNA-200家族表达水平(P均<0.01)。A549细胞过表达miRNA-200家族能下调PD-L1的表达(P均<0.01),且抑制癌细胞增殖活性(P均<0.01)。荧光素酶报告基因实验证实miRNA-200家族直接负调控PD-L1的表达(P均<0.01)。结论PD-L1高表达预示NSCLC患者预后不良。PD-L1是miRNA-200家族的靶基因,miRNA-200家族表达水平低可能是NSCLC患者高表达PD-L1的重要原因。

微小RNA-203b-3p调控多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的 观察微小RNA-203b-3p(miR-203b-3p)通过调节肿瘤坏死因子超家族成员13b(TNFSF13B)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的影响,探讨miR-203b-3p抑制MM的相关机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹分析(Western blot)检测miR-203b-3p和TNFSF13B在骨髓瘤肿瘤和细胞中的表达情况。miR-203b-3p与TNFSF13B的关系采用双荧光素酶报告实验进行验证。Lipofectamine 2000试剂用于MM细胞转染。miR-203b-3p和TNFSF13B对MM细胞生物功能的影响采用克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验进行分析。结果 与癌旁组织及正常细胞比较,MM组织和细胞中miR-203b-3p的表达量相对较低,而TNFSF13B在MM肿瘤和细胞中的表达量与正常组织和细胞相比升高,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果表明,TNFSF13B是miR-203b-3p的直接靶点。miR-203b-3p在MM细胞中的过量表达能够抑制细胞的增殖和转移,差异有统计学意义(P<0.05),而TNFSF13B的表达上调则促进了MM细胞的增殖、迁移和侵袭,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-203b-3p可能通过下调TNFSF13B抑制MM细胞的增殖、侵袭和转移。

LncRNA FEZF1-AS1靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转染质粒不同将细胞分为Blank组、TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组和TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组。采用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力;采用双萤光素酶实验检测FEZF1-AS1与miR-200c-3p的靶向作用关系。结果与Blank组比较,HLF+TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达及LncRNA FEZF1-AS1表达水平升高,miR-200c-3p表达水平降低(P<0.05);与TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,LncRNA FEZF1-AS1表达及α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达水平降低,miR-200c-3p表达水平升高(P<0.05);FEZF1-AS1与miR-200c-3p基因序列上存在结合位点。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进特发性肺间质纤维化的发生、发展。

miR-200c联合MORC2检测在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值

目的研究微小核糖核酸-200c(miR-200c)联合MORC家族CW型锌指蛋白2(MORC2)检测在卵巢癌病情及预后评估中的临床价值。方法选择2017年1月—2019年12月武汉大学人民医院妇产科诊治的卵巢癌患者103例(卵巢癌组)及卵巢良性疾病患者60例(对照组)为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测miR-200c及MORC2表达并分析其与临床病理因素的关系;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-200c联合MORC2预测卵巢癌2年预后不良的效能;多因素Logistic回归分析卵巢癌患者死亡的危险因素;Kaplan-Meier法分析miR-200c和MORC2表达与生存期的关系。结果卵巢癌组患者肿瘤组织miR-200c、MORC2表达高于癌旁组织和对照组(F=1926.617、1832.415,P均<0.001)。低分化、有恶性腹水、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移、有远处转移及Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌患者miR-200c、MORC2表达高于中-高分化、无恶性腹水、肿瘤最大径<5 cm、无淋巴结转移、无远处转移及Ⅰ~Ⅱ期患者(t=14.067、12.451、12.871、11.523、16.298、18.351,11.745、10.893、10.462、9.893、14.617、13.269,P均<0.001)。miR-200c、MORC2及二者联合预测卵巢癌患者2年预后不良的AUC分别为0.786、0.792、0.901,二者联合优于各自单独预测效能(Z=8.239、8.025,P均<0.001)。miR-200c≥0.78、MORC2≥0.65、低分化、有恶性腹水、肿瘤最大径≥5 cm、有淋巴结转移、有远处转移、FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期为卵巢癌死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=5.323(1.812~8.834)、4.802(1.141~8.463)、2.065(1.068~3.062)、2.252(1.145~3.359)、2.140(1.216~3.064)、2.012(1.005~3.019)、2.522(1.625~3.419)、2.186(1.134~3.238)];卵巢癌组中miR-200c≥0.78且MORC2≥0.65卵巢癌患者中位生存期显著低于其他患者(miR-200c<0.78或MORC2<0.65)(Log-Rankχ^(2)=16.371,P<0.05)。结论卵巢癌患者miR-200c及MORC2表达显著升高,在卵巢癌病情及预后评估中具有重要临床价值,两者联合检测时可显著提高预测卵巢癌预后不良的敏感度及特异度。

口腔黏膜下纤维化患者血清miR-204和miR-200b水平与临床疗效的关系研究

目的分析口腔黏膜下纤维化(OSF)患者血清微小RNA(miR)-204和miR-200b水平与临床疗效的关系。方法选取2021年12月至2022年12月在河北工程大学附属医院就诊的110例OSF患者作为研究组,另选取50例同期体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测研究组及对照组血清miR-204和miR-200b水平并进行比较。将研究组分为miR-204高表达组、低表达组和miR-200b高表达组、低表达组;比较血清miR-204和miR-200b不同水平患者的临床疗效、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、临床病理特征、视觉模拟评分(VAS),采用Spearman法和Pearson法分析血清miR-204和miR-200b水平与研究组各指标的相关性。结果研究组血清miR-204和miR-200b水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-204、miR-200b高表达组患者临床疗效总有效率均为100.00%,分别高于miR-204、miR-200b低表达组临床疗效总有效率(86.79%、88.89%),差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果表明,嚼槟榔、张口度≤28 mm、口腔黏膜病损面积>4 cm^(2)、VAS评分>3分的OSF患者血清miR-204和miR-200b水平显著低于不嚼槟榔、张口度>28 mm、口腔黏膜病损面积≤4 cm^(2)、VAS评分≤3分的患者,差异有统计学意义(P<0.05);miR-204、miR-200b高表达组TGF-β1和IL-6水平显著低于miR-204、miR-200b低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析结果表明,OSF患者血清miR-204和miR-200b水平与口腔黏膜病损面积、VAS评分、TGF-β1、IL-6呈负相关(P<0.05),与张口度呈正相关(P<0.05)。结论OSF患者血清miR-204和miR-200b水平与临床疗效关系密切,血清miR-204和miR-200b水平升高,OSF患者临床疗效较好。

miR-200a通过上调Nrf2对老年糖尿病心肌病大鼠心肌的保护作用

目的:探讨微小RNA-200a(miR-200a)对老年糖尿病大鼠心肌的保护作用及机制。方法:采用高脂饮食+链脲菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病心肌病模型,分为对照组和STZ组。通过注射携带miR-200a腺相关病毒9(AAV9)在心肌内过表达miR-200a,分为对照+AAV9-control组、对照+AAV9-miR-200a组、STZ+AAV9-control组、STZ+AAV9-miR-200a组,每组8只。体外培养大鼠心肌细胞H9c2,分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-control+si RNA组(转染AAV9-control和si RNA 48 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-control+si核因子E2相关因子2(Nrf2)组(转染AAV9-control和si Nrf248 h后使用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-miR-200a+siRNA组(转染AAV9-miR-200a和si RNA 48 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-miR-200a+si Nrf 2组(转染AAV9-miR-200a和si Nrf248 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)。使用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-200a表达水平,蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞活性氧(ROS)水平;免疫荧光检测Nrf2表达。结果:与对照组比较,STZ组心肌组织miR-200a表达下调(P<0.05)。与对照+AAV9-control组比较,STZ+AAV9-control组心肌组织LDH、CK-MB、MDA水平升高,SOD水平、血红素氧化酶1(HO-1)、细胞核Nrf2蛋白、细胞质Nrf2蛋白表达及Nrf2荧光密度降低(P<0.05)。与STZ+AAV9-control组比较,STZ+AAV9-miR-200a组心肌组织LDH、CK-MB、MDA水平及TUNEL阳性细胞率降低,SOD水平、HO-1、细胞核Nrf2蛋白、细胞质Nrf2蛋白表达及Nrf2荧光密度升高(P<0.05)。高糖处理可降低H9c2细胞存活率,提高ROS、MDA、LDH水平(P<0.05);在此基础上转染miR-200a后上述指标被抑制;同时转染miR-200a和si Nrf2后,ROS、MDA、LDH升高,细胞存活率降低(P<0.05)。结论:miR-200a提高Nrf2表达从而减轻高糖诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡,这一效应与Nrf2核易位的促进及下游抗氧化应激信号有关。