微小RNA-204在非小细胞肺癌中的表达及对H252癌细胞增殖及凋亡的影响

目的分析微小RNA-204在非小细胞肺癌中的表达及对H252癌细胞增殖及凋亡的影响。方法收集72例非小细胞患者癌组织与癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-204相对表达水平;采用miR-204模拟物与抑制物转染人非小细胞肺癌H252细胞株,检测H252细胞增殖及凋亡情况。结果肺癌组织miR-204的mRNA相对表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、肿瘤直径≥3cm、淋巴结发生转移肺癌患者miR-204相对表达明显低于Ⅰ-Ⅱ期、肿瘤直径<3cm、淋巴结未发生转移者(P<0.05,P<0.01);培养48h、72h、96h,模拟物组H252细胞增殖水平明显低于阴性对照组、抑制物组(P<0.05,P<0.01);模拟物组H252细胞凋亡率明显高于阴性对照组、抑制物组(P<0.05,P<0.01)。结论微小RNA-204在非小细胞肺癌中呈明显低表达状态,且与TNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移等恶性病理行为明显相关。miR-204能抑制H252癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

微小RNA-204-5p靶向蛋白质酪氨酸磷酸酶1B基因对缺氧复氧诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响

目的探讨miR-204-5p对缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞H9C2氧化应激的调控作用机制。方法体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建心肌细胞缺氧/复氧模型。实验分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧+miR-con组、缺氧复氧+miR-204-5p组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA-蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Westernblotting)检测miR-204-5p和PTP1B的表达。双荧光素酶报告基因实验和Westernblotting验证miR-204-5p和PTP1B的靶向调控关系。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测心肌细胞存活率。试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnT)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)水平变化。流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况。结果缺氧复氧处理可显著抑制心肌细胞miR-204-5p表达,促进PTP1B表达。PTP1B是miR-204-5p的靶基因,miR-204-5p可负性调控PTP1B的表达。缺氧复氧处理显著抑制细胞存活,降低SOD水平,提高LDH、ROS和MDA水平,促进细胞凋亡。过表达miR-204-5p可降低LDH、ROS和MDA水平,促进细胞存活,降低细胞凋亡;过表达PTP1B可部分削弱miR-204-5p过表达对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。结论miR-204-5p通过靶向下调PTP1B抑制心肌细胞氧化应激,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,对心肌细胞发挥保护作用。

粗糠柴毒素上调微小RNA-204-5p对脂多糖所致心肌损伤的保护机制研究

目的探讨粗糠柴毒素对脂多糖(LPS)所致心肌损伤的影响及其保护机制。方法该研究自2018年9月至2019年4月,用终浓度为10 mg/L的LPS刺激HCM、AC16心肌细胞6 h,分别加入终浓度为0.5μmol/L、1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L粗糠柴毒素(Rottlerin)再处理12 h后分别记为LPS+0.5μmol/LRottlerin组、LPS+1.0μmol/LRottlerin组、LPS+1.5μmol/LRottler⁃in组、LPS+2.0μmol/LRottlerin组,以单纯10 mg/LLPS处理的为LPS组,以未经粗糠柴毒素和LPS处理的为对照组。将模拟物阴性对照(miR-NC)、微小RNA-204-5p模拟物(miR-204-5p)、抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)、miR-204-5p抑制剂(anti-miR-204-5p)分别转染至未经任何处理的HCM细胞中,记为miR-NC组、miR-204-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-204-5p组。将miR-NC,miR-204-5p转染至单纯10 mg/LLPS处理的HCM细胞中,记为LPS+miR-NC组,LPS+miR-204-5p组。将anti-miR-NC、anti-miR-204-5p、过表达空载体(pcDNA3.1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)过表达载体(pcDNA3.1-HMGB1)转染至2.0μmol/L粗糠柴毒素和10 mg/LLPS处理HCM细胞中,记为LPS+Rottlerin+anti-miR-NC组、LPS+Rottlerin+anti-miR-204-5p组、LPS+Rottlerin+pcD⁃NA3.1组、LPS+Rottlerin+pcDNA3.1-HMGB1组。MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-204-5p和HMGB1 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与对照组相比,LPS组心肌细胞HCM、AC16抑制率显著升高,HCM细胞中miR-204-5p(0.30±0.03比1.99±0.08)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达显著下降,Bax、HMGB1(1.04±0.10比0.26±0.02)表达和凋亡率[(27.79±2.23)%比(5.61±0.05)%]显著升高;相较于LPS组,LPS+0.5、1.0、1.5、2.0μmol/LRottlerin组HCM、AC16细胞抑制率显著降低,HCM细胞中miR-204-5p(0.46±0.04、0.54±0.05、0.76±0.04、0.88±0.07比0.30±0.03)和Bcl-2表达显著升高,Bax、HMGB1(0.93±0.09、0.80±0.08、0.62±0.06、0.53±0.05比1.04±0.10)表达和凋亡率[(22.61±2.14)%、(20.06±1.94)%、(11.71±1.01)%、(9.16±1.00)%比(27.79±2.23)%]显著降低,呈浓度依赖型。与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-204-5p组HCM细胞中miR-204-5p(0.86±0.07比0.42±0.03)和Bcl-2表达升高,Bax表达及细胞抑制率和凋亡率[(15.76±1.32)%比(27.26±2.25)%]降低。miR-204-5p可靶向调控HMGB1;抑制miR-204-5p表达、过表达HMGB1均能逆转Rottlerin对LPS作用的心肌细胞HCM的保护作用。结论粗糠柴毒素对LPS所致的心肌细胞损伤有保护作用,其机制主要是通过上调miR-204-5p表达,进而抑制HMGB1的表达发挥作用。

循环微小RNA-204水平与糖尿病人群冠状动脉钙化相关性分析

目的探讨糖尿病患者血浆循环微小RNA-204(microRNA-204)水平与冠状动脉CT血管成像(CCTA)钙化积分(CACS)的相关性。方法横断面分析2017年1月至2018年12月在首都医科大学附属北京安贞医院确诊并行冠状动脉CTA的糖尿病患者179例,经CACS评估冠状动脉钙化(CAC)的严重程度,将患者分为冠状动脉钙化组(CACS>10,99例)及非钙化组(CACS≤10,80例)。从中选取匹配的5例钙化组(CACS>10)和5例非钙化组(CACS≤10)的患者,使用microRNA微阵列分析其血浆microRNA水平。为了验证微阵列分析的结果,使用qRT-PCR对两组microRNA-204定量检测,进行单变量线性回归评估microRNA-204水平与CACS之间的潜在相关性。通过ROC曲线分析,评估microRNA-204的潜在诊断能力。结果两组患者在空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。microRNA微阵列分析得到钙化组较非钙化组microRNA-204表达水平显著下降。经qRT-PCR进一步印证了钙化组血浆中microRNA-204显著下调(P<0.05)。通过单变量线性回归分析显示,钙化组血浆循环microRNA-204水平与反应冠状动脉钙化严重程度的CACS呈负相关。ROC曲线显示,microRNA-204预测糖尿病患者发生冠状动脉钙化的曲线下面积为0.9487(0.9191~0.9782,P<0.0001),诊断临界值为21.3,敏感度为96.3%,特异度为79.6%。结论钙化组患者血浆中microRNA-204表达水平显著下降,而反映冠状动脉钙化严重程度的CACS与microRNA-204之间存在负相关,可能对进一步验证人血浆microRNA-204水平宏观反映糖尿病患者是否存在冠状动脉钙化有重要意义。microRNA-204可能是诊断冠状动脉钙化的新型生物标志物。

人脐带间充质干细胞外泌体携带微小RNA-204对心肌缺血再灌注小鼠模型巨噬细胞极化的影响及机制探究

目的探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)外泌体携带微小RNA-204(miR-204)对心肌缺血再灌注(I/R)小鼠模型巨噬细胞极化的影响及作用机制。方法hUC-MSC分离、培养并鉴定,检测成脂、成骨分化能力;超速离心法分离hUC-MSC外泌体,纳米颗粒跟踪分析软件、透射电镜、Western blot实验鉴定外泌体中CD81、CD63、肿瘤易感基因101(Tsg101)及钙联蛋白(Calnexin)的表达;将hUC-MSC分为hUC-MSC组、miR-204模拟物组及阴性对照组,qRT-PCR法检测各组细胞及其外泌体中miR-204的表达;将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、I/R组、hUC-MSC外泌体组、阴性对照组和miR-204模拟物组,除假手术组外均通过结扎左前降支动脉构建I/R模型,超声心电图检测小鼠心功能,HE染色观察小鼠心肌组织病理学情况,ELISA检测心肌组织中白细胞介素(IL)1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg-1)及IL-10水平;分离小鼠心肌组织巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞CD11c和CD206蛋白表达情况,ELISA检测巨噬细胞IL-1β、TNF-α、Arg-1及IL-10水平。结果hUC-MSC具有成脂、成骨分化能力,外泌体鉴定成功;与阴性对照组比较,miR-204模拟物组hUC-MSC及其外泌体中miR-204表达水平显著增加(P<0.001,P<0.001);与假手术组比较,I/R组小鼠左心室舒张末期直径(LVEDD)(P<0.001)、左心室收缩末期直径(LVESD)(P<0.001)、心肌损伤评分(P<0.001)、IL-1β(P<0.001)、TNF-α(P<0.001)、CD11c(P<0.001)水平显著增加,左心室射血分数(LVEF)(P<0.001)、左心室缩短分数(LVFS)(P<0.001)、Arg-1(P<0.001)、IL-10(P<0.001)、CD206(P<0.001)水平显著降低;与I/R组比较,hUC-MSC外泌体组LVEDD(P<0.001)、LVESD(P<0.001)、心肌损伤评分(P<0.001)、IL-1β(P<0.001)、TNF-α(P=0.010)、CD11c(P<0.001)水平显著降低,LVEF(P<0.001)、LVFS(P<0.001)、Arg-1(P<0.001)、IL-10(P=0.028)、CD206(P=0.022)水平显著性增加;与阴性对照组比较,miR-204模拟物组LVEDD(P<0.001)、LVESD(P<0.001)、心肌损伤评分(P=0.001)、IL-1β(P=0.048)、TNF-α(P<0.001)、CD11c(P=0.007)水平显著降低,LVEF(P<0.001)、LVFS(P<0.001)、Arg-1(P<0.001)、IL-10(P=0.001)、CD206(P=0.001)水平显著增加。结论miR-204过表达的hUC-MSC外泌体可抑制I/R小鼠模型巨噬细胞向M1型极化,促进其向M2型极化。

微小RNA-204对糖尿病视网膜病变大鼠模型的保护作用及其机制

目的探讨微小RNA(miR)-204对糖尿病视网膜病变大鼠模型的保护作用及其机制。方法30只SD大鼠随机数字表格法分为对照组、模型组和miR-204组,每组10只,其中miR-204组大鼠经尾静脉注射过表达miR-204的腺相关病毒;对照组和模型组大鼠注射等体积对照腺相关病毒。注射30d后,模型组和miR-204组大鼠通过高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病视网膜病变模型。治疗4周后,分析3组大鼠视网膜血管通透性和视网膜厚度;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组大鼠外周血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析3组大鼠视网膜细胞凋亡;蛋白质印迹法(Westernblot)分析3组大鼠视网膜组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果miR-204组大鼠视网膜组织miR-204表达水平(2.12±0.17)明显高于对照组和模型组miR-204表达水平(1.05±0.11、0.93±0.05),差异有统计学意义(t=16.480、21.130,P<0.05)。miR-204组大鼠视网膜厚度[(147.99±9.09)μm]明显高于模型组[(126.63±9.15)μm],差异有统计学意义(t=5.236,P<0.05)。miR-204组大鼠视网膜厚度[(15.41±2.39)μg/g]明显低于对照组[(27.61±1.87)μg/g],差异有统计学意义(t=12.770,P<0.05)。miR-204组大鼠血清炎性因子TNF-α和IL-6表达水平[(40.51±4.04)、(39.47±4.70)ng/ml]明显低于模型组[(77.54±7.55)、(54.63±4.27)ng/ml],差异有统计学意义(t=13.670、7.907,P<0.05)。miR-204组大鼠视网膜细胞凋亡率[(8.78±0.81)%]明显低于模型组[(19.94±2.34)%],差异有统计学意义(t=14.222,P<0.05)。miR-204组大鼠视网膜组织Caspase-3和HMGB1蛋白表达水平(1.64±0.12、1.83±0.19)明显低于模型组(1.64±0.12、1.83±0.19),差异有统计学意义(t=6.719、8.409,P<0.05)。结论miR-204可显著抑制视网膜血管通透性,抑制炎症和细胞凋亡,可能与抑制HMGB1和细胞凋亡通路有关。

微小RNA-204靶向抑制B淋巴细胞瘤-2影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡和迁移能力

目的探讨微小RNA-204（miR-204）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响和对B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）的靶向作用机制。方法以45例非小细胞肺癌组织、A549细胞株为研究对象，通过实时定量聚合酶链反应检测miR-204在NSCLC中的表达；转染miR-204模拟物和抑制剂，用细胞计数试剂盒（CCK-8）、Transwell、划痕实验、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3活性检测细胞增殖、迁移、凋亡能力变化；构建含有bcl-23’-非编码区野生型和突变型的双荧光素酶报告载体，并通过功能恢复实验，验证miR-204与bcl-2的靶向天系，结果miR-204在非小细胞肺癌组织中的表达（1．28±0．31）较对照正常组织（3．75±0．27）明显降低（P=0．000），bcl-2在癌组织中表达明显增高（3．46±0．40比0．78±0．48，P=0．000），与TNM分期呈显著负相关，与年龄、性别关系差异无统计学意义；miR-204能明显抑制A549细胞的增殖、迁移，并促进细胞凋亡能力（P=0．000）。共转染miR-204和bcl-2野生型3’非编码区双荧比素酶表达载体的A549细胞荧光活性为0．12±0．02，较对照组（0．29±0．03）显著下降（P=0．000），miR-204对细胞的增殖、凋亡、迁移能力的影响可以被过表达bcl-2所恢复。结论miR-204存非小细胞肺癌中表达下调，可能通过靶向调控bel-2的表达影响非小细胞肺癌的增殖、迁移、凋亡能力。

口腔黏膜下纤维化患者血清miR-204和miR-200b水平与临床疗效的关系研究

目的分析口腔黏膜下纤维化(OSF)患者血清微小RNA(miR)-204和miR-200b水平与临床疗效的关系。方法选取2021年12月至2022年12月在河北工程大学附属医院就诊的110例OSF患者作为研究组,另选取50例同期体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测研究组及对照组血清miR-204和miR-200b水平并进行比较。将研究组分为miR-204高表达组、低表达组和miR-200b高表达组、低表达组;比较血清miR-204和miR-200b不同水平患者的临床疗效、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、临床病理特征、视觉模拟评分(VAS),采用Spearman法和Pearson法分析血清miR-204和miR-200b水平与研究组各指标的相关性。结果研究组血清miR-204和miR-200b水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-204、miR-200b高表达组患者临床疗效总有效率均为100.00%,分别高于miR-204、miR-200b低表达组临床疗效总有效率(86.79%、88.89%),差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果表明,嚼槟榔、张口度≤28 mm、口腔黏膜病损面积>4 cm^(2)、VAS评分>3分的OSF患者血清miR-204和miR-200b水平显著低于不嚼槟榔、张口度>28 mm、口腔黏膜病损面积≤4 cm^(2)、VAS评分≤3分的患者,差异有统计学意义(P<0.05);miR-204、miR-200b高表达组TGF-β1和IL-6水平显著低于miR-204、miR-200b低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析结果表明,OSF患者血清miR-204和miR-200b水平与口腔黏膜病损面积、VAS评分、TGF-β1、IL-6呈负相关(P<0.05),与张口度呈正相关(P<0.05)。结论OSF患者血清miR-204和miR-200b水平与临床疗效关系密切,血清miR-204和miR-200b水平升高,OSF患者临床疗效较好。

MicroRNA-204在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞系BxPC3上皮向间质转化的影响

目的探讨microRNA-204（1niR-204）在人胰腺癌中的表达，研究miR-204对胰腺癌细胞系BxPC3上皮向间质转化（EMT）的作用。方法：利用qRT—PCR检测48例胰腺癌手术切除标本与其相对应的癌旁胰腺组织中miR-204的相对表达量；构建胰腺癌细胞系BxPC3的EMT模型，瞬时转染miR-204mimics上调其表达，观察高表达miR-204能否逆转BxPC3细胞系的EMT。结果：胰腺癌组织中miR-204表达水平（3．23±0．88）明显低于癌旁组织（6．02±L24）（P〈0．01）；与阴性对照组miR-204negative control相比，miR-204mimics转染已经构建EMT模型后的BxPC3细胞系后Tran—swell侵袭实验结果显示侵袭细胞数明显减少（60．0±11．7vs92．5±11．2，P〈0．01），Western blot结果显示Snail的表达明显降低（P〈0．05）而E-cadherin的表达明显升高（P〈0．01），出现典型的间质向上皮转化的特征。结论：miR-204在胰腺癌组织中的低表达，同时这种低表达很可能是通过miR-204特异性的靶向抑制Snail的表达从而逆转胰腺癌的EMT来实现的。

MieroRNA-204对胶质瘤细胞U251自噬的影响

目的探讨microRNA-204（miR-204）对胶质瘤细胞U251自噬的影响。方法采用体外瞬时转染的方法抑制U251细胞中miR-204，MTY方法检测细胞的增殖情况，免疫荧光检测细胞自噬，Westernblot检测自噬相关蛋白LC3、Beclinl和Bcl-2的表达情况。结果MTr结果显示抑制miR-204明显增加U251细胞的增殖，免疫荧光结果显示抑制miR-204能够减少U251细胞的自噬，Westernblot结果显示抑制miR-204能够减少U251细胞内LC3-Ⅱ和Beclinl的表达量，然而Bcl-2的表达却明显增加。结论miR-204可能通过上调Bcl-2的表达抑制自噬促进胶质瘤生长，提示miR-204可能成为脑胶质瘤潜在治疗靶点。

卵巢癌组织中miRNA-204表达变化及其对细胞株SKOV3凋亡的影响

目的观察卵巢癌组织中微小RNA-204(miR-204)表达变化,以及miR-204对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法选择卵巢癌患者50例,分别取其卵巢癌及相应癌旁组织;体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分为1、2、3组,分别加入转染试剂、阴性对照载体、化学合成的双链miRNA-204表达载体;采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)法检测组织及细胞中miRNA-204相对表达量;观察miRNA表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系;采用流式细胞仪检测卵巢癌SKOV3细胞凋亡情况。结果卵巢癌组织中miR-204 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.01);miR-204 mRNA表达与FIGO分期、淋巴结转移、CA125水平相关(P均<0.05)。1、2、3组miRNA-204 mRNA相对表达量分别为2.35±0.67、2.01±0.45、5.32±0.88,3组较1、2组增加(P均<0.05);细胞凋亡率分别为7.32%±1.40%、5.14%±1.90%、52.4%±9.10%,3组较1、2组增加(P均<0.05)。结论卵巢癌组织中miRNA-204表达下调,且与病情进展相关;miRNA-204促进卵巢癌细胞凋亡,这可能是其发挥抑癌作用的机制之一。

miRNA-204靶向Bcl-2诱导胰岛β细胞凋亡

目的探讨过表达微小RNA-204(miR-204)靶向Bcl-2诱导胰岛β细胞凋亡的作用机制。方法小鼠胰岛瘤细胞MIN6用含β-巯基乙醇的DMEM高糖培养基培养,采用脂质体Lipofectamine 2000转染miR-204化学合成过表达物和(或)Bcl-2过表达质粒,制备成miR-204(+)组和miR-204(+)+Bcl-2(+)组。转染48 h后,MTT法检测细胞存活;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;ELISA法测定胰岛素分泌;实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)检测miR-204含量及Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3 m RNA表达水平;Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和活化的胱天蛋白酶3表达水平。结果 MTT结果显示,miR-204(+)组细胞存活率显著低于正常对照组(P<0.01),而miR-204(+)+Bcl-2(+)组相较于miR-204(+)组细胞存活率显著升高(P<0.05);Hoechst33258染色结果显示,miR-204(+)组出现大量细胞凋亡,miR-204(+)+Bcl-2(+)组细胞凋亡率有所下降;胰岛素分泌结果显示,高糖(葡萄糖30 mmol·L-1)刺激下的miR-204(+)组细胞胰岛素分泌显著低于高糖刺激下的正常对照组(P<0.01)和miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.01);q PCR结果显示,miR-204(+)组miR-204水平显著高于正常对照组(P<0.01),而Bcl-2 m RNA表达水平显著低于正常对照组(P<0.01)和miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.01),各组Bax和胱天蛋白酶3 m RNA水平无显著变化;Western蛋白质印迹检测结果显示,miR-204(+)组Bcl-2蛋白表达水平显著低于miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.05)和正常对照组(P<0.01),而Bax和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平显著高于其他两组(P<0.01)。结论过表达miR-204可能通过靶向Bcl-2促进胰岛β细胞凋亡。

miR-204-5p靶向调控BCL2L2促进急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的研究

目的探讨miR-204-5p在急性肝衰竭大鼠肝组织中的表达情况及其促进肝细胞凋亡的的作用及潜在机制。方法根据随机数字表法将32只SD大鼠分为4组,即对照组(0h)、模型组(24、48、72h),每组8只。模型组腹腔注射D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导急性肝衰竭,对照组为腹腔内注射等量的0.9%氯化钠溶液。分别取对照组及模型组造模完成后24、48、72h大鼠静脉血及肝组织,ELISA检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)的水平,通过HE、TUNEL染色法行肝组织病理学检查和肝细胞凋亡观察。生物信息学工具预测miR-204-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系。RT-PCR和Western blot法检测肝组织中miR-204-5p、BCL2L2的表达情况。结果与对照组比较,模型组随着造模时间的延长,ALT、AST、TBIL值逐渐升高,肝组织坏死程度、炎性细胞浸润逐渐加重,肝细胞凋亡指数逐渐升高。RT-PCR结果显示,随着造模时间的延长,miR-204-5p基因的相对表达水平逐渐升高,而BCL2L2基因的相对表达水平逐渐降低;Western blot法检测结果亦显示,BCL2L2蛋白表达水平逐渐降低(P均<0.05)。miR-204-5p和BCL2L2之间存在靶向关系,miR-204-5p能够靶向调控BCL2L2表达。结论miR-204-5p可能通过靶向调控BCL2L2促进肝细胞凋亡,进而促进急性肝衰竭疾病的发生、发展。

环状RNA KMT2E靶向miR-204-5p/MMP9轴对高糖条件下人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的探究环状RNA KMT2E(circ KMT2E)对高糖(HG)诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的影响及调控机制。方法收集自2018年12月至2020年11月在海南医学院第二附属医院眼科中心进行白内障手术的33例非糖尿病性白内障(DC)患者和33例DC患者的晶状体前囊膜,TUNEL法检测晶状体前囊膜上LEC凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测晶状体前囊膜中circ KMT2E、miR-204-5p和基质金属蛋白酶(MMP)9 mRNA表达水平,采用Pearson法分析circ KMT2E、miR-204-5p和MMP9 mRNA表达水平的相关性。取人晶状体上皮细胞系(HLE-B3),CCK-8法筛选最佳HG浓度及作用时间;将HLE-B3细胞分为对照组、HG组、沉默对照组、KMT2E沉默组、过表达对照组、KMT2E过表达组、KMT2E过表达+miR-NC组、KMT2E过表达+miR-204-5p模拟物组,转染后将HLE-B3细胞用HG处理24 h。RT-qPCR检测各组细胞中circ KMT2E、miR-204-5p和MMP9 mRNA表达水平,验证转染效果;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测细胞中MMP9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测circ KMT2E与miR-204-5p的靶向关系。结果与非DC患者相比,DC患者晶状体前囊膜中LEC凋亡、circ KMT2E、MMP9 mRNA表达水平显著升高,miR-204-5p水平显著降低(P<0.05);Pearson相关分析显示,DC患者晶状体前囊膜中circ KMT2E与miR-204-5p呈负相关,MMP9与miR-204-5p呈负相关,MMP9与circ KMT2E呈正相关。200 mmol/L葡萄糖作用24 h时可显著抑制HLE-B3细胞活力(P<0.05)。转染后,与对照组相比,HG组细胞中circ KMT2E、MMP9 mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著升高,miR-204-5p水平、细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);与HG组相比,KMT2E沉默组细胞中circ KMT2E、MMP9 mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低,miR-204-5p水平、细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),KMT2E过表达组上述指标变化则表现出相反的作用(P<0.05);在过表达KMT2E的基础上,上调miR-204-5p,可降低MMP-9表达,明显逆转circ KMT2E过表达对HLE-B3细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-204-5p mimic后,KMT2E-WT细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。结论沉默circ KMT2E可能通过靶向上调miR-204-5p,进而抑制MMP9的表达,减少HG诱导的人LEC凋亡。

胃癌患者血清miR-7、miR-204表达及其与临床病理特征、预后的关系

目的观察胃癌患者血清miR-7、miR-204表达变化,并探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法选择95例胃癌患者(病例组)及95例体检健康者(对照组),采用实时定量PCR检测两组血清miR-7、miR-204,分析胃癌患者血清miR-7、miR-204表达与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线评估血清miR-7、miR-204表达与患者术后5年总生存率的关系,Cox回归模型分析胃癌患者预后的影响因素。结果病例组血清miR-7、miR-204相对表达量均较对照组低(P均<0.05)。胃癌患者血清miR-7表达与淋巴结转移有关(P均<0.05),血清miR-204表达与淋巴结转移、肿瘤分化程度及TNM分期有关(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,miR-7低表达、miR-204低表达者术后5年总生存率均分别低于miR-7高表达、miR-204高表达者(P均<0.05)。Cox回归模型多因素分析结果表明,淋巴结转移、较高的TNM分期、血清miR-7低表达、血清miR-204低表达是影响胃癌患者预后的危险因素(P均<0.05)。结论胃癌患者血清miR-7、miR-204表达降低,与患者的部分临床病理参数和预后有关,监测患者血清miR-7、miR-204表达可能有利于患者的预后判断。

miR-204通过靶向Sirt1/p53信号通路抑制霍奇金淋巴瘤细胞增殖

目的:探讨微小RNA-204(miR-204)对霍奇金淋巴瘤细胞增殖的作用,并研究其初步机制。方法:采用RT-qPCR检测霍奇金淋巴瘤组织中miR-204和Sirt1 mRNA的表达水平。在L428细胞中分别转染miR-204模拟物(miR-204 mimic)、 Sirt1 小干扰RNA( Sirt1 siRNA)和miR-204 mimic+pcDNA3.1-Sirt1后,CCK-8法与BrdU实验分别检测细胞活力和BrdU掺入量;Western blot检测Sirt1和乙酰化p53(acetylated p53, ac-p53)的表达水平。双萤光素酶报告基因法验证miR-204与Sirt1的靶向关系。结果:霍奇金淋巴瘤组织中miR-204低表达,Sirt1 mRNA高表达。与对照组相比,L428细胞转染miR-204 mimic或 Sirt1 siRNA后,细胞活力、BrdU掺入量及Sirt1和ac-p53表达水平均显著降低( P <0.05)。与单纯miR-204 mimic转染组相比,miR-204 mimic+pcDNA3.1-Sirt1共转染组L428细胞活力、BrdU掺入量Sirt1和ac-p53蛋白表达水平均显著升高( P <0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,Sirt1 是miR-204的靶基因。结论: miR-204对L428细胞增殖的抑制作用可能是通过抑制Sirt1表达和促进ac-p53上调来实现的。

miR-204在胃癌生长中的作用及机制

目的:探讨microRNA-204(miR-204)在胃癌中的表达,研究miR-204在胃癌细胞增殖中的作用和机制。方法:采用RT-PCR方法检测胃癌组织、胃癌细胞中的miR-204相对表达量;分析miR-204的表达与临床病理参数的关系;瞬时转染上调胃癌SGC7901细胞中miR-204的表达量,CCK8检测转染前后细胞增殖能力的变化;Western blot检测转染前后SGC7901细胞中Bcl-2表达的变化。结果:胃癌组织中miR-204相对表达量(1.94±0.78)明显低于正常胃组织(4.01±1.47)(P<0.01);同样,人胃癌细胞株中miR-204表达水平明显低于正常胃上皮细胞(P<0.01)。胃癌组织中miR-204的表达水平与肿瘤的大小、远处转移和TNM分期明显相关(P<0.05)。CCK8结果显示,miR-204 mimics转染后SCG7901细胞的增殖率较转染前明显下降(P<0.05),Western blot结果显示胃癌细胞中Bcl-2的表达水平较转染前明显下调(P<0.05)。结论:miR-204在胃癌组织中低表达且与其恶性生物学行为相关,上调miR-204可通过下调Bcl-2的表达抑制胃癌细胞的增殖。

黄精多糖联合miR-204调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

目的:探讨黄精多糖(PSP)联合微小RNA(miR)-204对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:分离培养大鼠关节软骨细胞,利用白细胞介素1β(IL-1β)诱导软骨细胞构建骨关节炎软骨细胞模型,用不同浓度(30,120,480 mg·L-1)的PSP干预IL-1β诱导的软骨细胞,分别将miR-204 mimics转染至IL-1β诱导的软骨细胞中,再用PSP处理细胞。采用MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率;ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的表达水平;Western blot检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,IL-1β组软骨细胞存活率与Cyclin D1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率与TNF-α、IL-6的水平及cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与IL-1β组比较,IL-1β+PSP 30 mg·L-1组、IL-1β+PSP 120 mg·L-1组、IL-1β+PSP 480 mg·L-1组存活率升高(P<0.05),凋亡率及TNF-α、IL-6的水平降低(P<0.05);与IL-1β+miR-con组比较,IL-1β+miR-204组存活率升高(P<0.05),凋亡率及TNF-α、IL-6的水平降低(P<0.05);与IL-1β+PSP 120 mg·L-1组比较,IL-1β+PSP+miR-204组存活率与Cyclin D1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白水平升高(P<0.05),凋亡率、TNF-α、IL-6水平及cleaved caspase-3、Bax蛋白水平降低(P<0.05)。结论:黄精多糖联合miR-204可促进骨关节炎软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

miR-204过表达对喉鳞癌细胞增殖、周期、凋亡及侵袭的影响及机制

目的探讨微小RNA-204(miR-204)过表达对喉鳞状细胞癌(鳞癌)细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制。方法取人喉鳞癌细胞株Hep-2,分为miR-204模拟物组、阴性对照组、空白对照组,分别将miR-204 mimics、NCmimics转染至miR-204模拟物组、阴性对照组,空白对照组未转染。用qRT-PCR法检测各组miR-204相对表达量,分别采用CCK8实验、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测miR-204过表达对Hep-2细胞增殖、细胞周期、凋亡及侵袭的影响,采用Western blotting法检测各组高迁移率组蛋白A2(HMGA2)相对表达量。结果转染后,与空白对照组、阴性对照组比较,miR-204模拟物组miR-204相对表达量高,细胞增殖能力、细胞克隆数低,G0/G1期细胞比例高,S期、G2/M期细胞低,细胞凋亡率高,侵袭细胞数低,HMGA2蛋白相对表达量低(P均<0.05)。空白对照组与阴性对照组以上各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论miR-204过表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖、侵袭,促进其凋亡,其作用机制可能与调控HMGA2表达有关。

卵巢癌组织miR-204、BDNF表达变化及其临床意义

目的观察卵巢癌组织微小RNA-204(miR-204)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达变化,并探讨其临床意义。方法选择卵巢癌患者89例、因子宫良性病变行子宫及附件切除手术且经术后组织病理检查证实卵巢正常患者20例,取手术切除的卵巢癌组织和正常卵巢组织,采用RT-qPCR法检测miR-204、BDNF表达,比较卵巢癌组织与正常卵巢组织miR-204、BDNF表达差异。分析卵巢癌组织miR-204、BDNF表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果卵巢癌组织miR-204相对表达量低于正常卵巢组织,BDNF相对表达量高于正常卵巢组织(t分别为38.904、11.799,P均<0.01)。Pearson线性相关分析显示,卵巢癌组织miR-204相对表达量与BDNF相对表达量呈负相关关系(r=-0.603,P<0.01)。卵巢癌组织miR-204、BDNF相对表达量均与组织分化程度、临床分期有关(P均<0.05),与年龄、病理类型、淋巴结或腹膜转移、血清CA125水平及腹水量无关(P均>0.05)。以卵巢癌组织miR-204、BDNF相对表达量的均数为临界值,将患者分为miR-204高表达者44例与低表达者45例、BDNF高表达者43例与低表达者46例。miR-204低表达者3年总体生存率低于miR-204高表达者(χ^2=3.901,P<0.05),BDNF高表达者3年总体生存率低于BDNF低表达者(χ^2=4.690,P<0.05)。结论卵巢癌组织miR-204低表达、BDNF高表达,二者表达变化与临床分期、组织分化程度和患者预后有关。miR-204、BDNF有可能成为卵巢癌分子诊断、靶向治疗和预后评估的生物标志物。