ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA-20b对头晕患者发生缺血性卒中有预测价值

目的:探讨年龄、血压、单侧肢体无力和言语障碍、持续时间、糖尿病(ABCD2)评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA(miRNA)-20b对头晕患者发生缺血性卒中(IS)的预测价值。方法:收集148例头晕患者,根据是否发生IS分为IS组(109例)和非IS组(39例)。比较分析2组患者一般资料、ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平。多因素Logistic回归分析头晕患者发生IS影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、miR-20b水平对评估头晕患者发生IS的预测价值。结果:IS组年龄、高血压史比例、ABCD2评分、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、泛连接蛋白水平明显高于非IS组,miR-20b水平明显低于非IS组(P均<0.05)。LDL-C升高(OR=2.575,95%CI:1.497~3.353)、ABCD2评分>3分(OR=3.069,95%CI:2.242~5.408)、泛连接蛋白升高(OR=1.089,95%CI:1.018~1.187)为头晕患者发生IS独立影响因素(P均<0.05),miR-20b为独立保护因素(OR=0.351,95%CI:0.220~0.559,P<0.05)。3个指标联合预测头晕患者发生IS的曲线下面积(AUC=0.859,95%CI:0.791~0.926)明显大于ABCD2评分(AUC=0.759,95%CI:0.669~0.849)、泛连接蛋白(AUC=0.656,95%CI:0.554~0.759)、miR-20b(AUC=0.821,95%CI:0.750~0.893)单独预测(P均<0.05)。结论:ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平为头晕患者发生IS独立影响因素,3个指标联合对头晕患者IS风险有预测价值。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-20b、微小RNA-199a水平与神经功能缺损程度及侧支循环形成的关系

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA(miRNA)-20b、miRNA-199a水平与神经功能缺损程度及侧支循环形成的关系。方法选择126例AIS患者为观察组,根据脑侧支循环形成情况进一步分为一级侧支循环组(45例)、二级侧支循环组(41例)、三级侧支循环组(40例),另选取126例健康体检者为对照组。采用实时定量PCR法检测两组研究对象血清miRNA-20b、miRNA-199a的相对表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测3组AIS患者血清缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,采用中国卒中量表(CSS)评估患者入院时神经功能缺损程度。比较观察组和对照组的血清miRNA-20b、miRNA-199a水平,3组AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a、HIF-1α、VEGF水平及CSS评分,分析AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a水平与CSS评分、HIF-1α、VEGF水平的相关性。结果观察组血清miRNA-20b、miRNA-199a的相对表达水平均高于对照组(均P<0.05)。随着侧支循环级数增加,AIS患者的CSS评分、血清miRNA-20b、miRNA-199a水平降低,血清HIF-1α、VEGF水平升高(P<0.05)。AIS患者的血清miRNA-20b水平与miRNA-199a水平呈正相关,且血清miRNA-20b水平、miRNA-199a水平均分别与CSS评分呈正相关,与血清HIF-1α、VEGF水平呈负相关(均P<0.05)。结论AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a水平呈高表达,两者与AIS患者神经功能缺损程度呈正相关,并可能通过降低HIF-1α、VEGF表达水平,减少侧支循环的形成。

微小RNA-20b对胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨微小RNA-20b(miR-20b)对胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移的影响。方法采用脂质体Lipo-fectamine 2000法向MGC-803细胞分别转染miR-20b抑制剂(inhibitor转染组)和miR-20b抑制剂阴性对照(NC组),设不行转染的细胞为未转染组;采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组转染48 h后的miR-20b水平以评估转染效率,分别采用Tran-swell实验和划痕实验比较各组细胞的侵袭和迁移情况,Western blotting检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、磷酸化信号转导激活转录因子-3(p-STAT3)和磷酸化酪氨酸蛋白激酶-1(p-JAK1)的表达情况。结果 QPCR结果显示,未转染组、NC组和inhib-itor转染组的miR-20b水平分别为1. 054±0. 123、0. 987±0. 085和0. 506±0. 092,与未转染组和NC组相比,inhibitor转染组的miR-20b水平降低(P <0. 05);未转染组、NC组和inhibitor转染组的划痕愈合率分别为(60. 21±1. 16)%、(62. 57±2. 06)%和(25. 17±2. 69)%,穿膜细胞数目分别为(448±39)个、(415±33)个和(196±29)个,与未转染组和NC组相比,inhibitor转染组的划痕愈合率和穿膜细胞数目均降低(P <0. 05)。转染miR-20b抑制剂可降低MMP-9、p-JAK1和p-STAT3的表达水平(P<0. 05)。结论下调miR-20b水平可抑制胃癌细胞侵袭和迁移能力,可能与降低MMP-9表达及抑制JAK/STAT信号通路活性有关,在胃癌靶向治疗中有一定应用前景。

miR-20b对自身免疫性肝炎小鼠肝脏的保护作用及机制

目的观察miR-20b对自身免疫性肝炎小鼠肝脏的保护作用,并探讨其作用机制。方法将52只小鼠随机分成模型组16只、对照慢病毒组18只、miR-20b慢病毒组18只。模型组正常饲养,对照慢病毒组注射点突变miR-20b与靶基因结合的种子序列而构建得到对照载体,miR-20b慢病毒组注射miR-20b慢病毒表达载体。7 d后三组均注射刀豆蛋白A(Con A)诱导自身免疫性肝炎。造模后6、12、18、24、36、48 h眼静脉采血,采用赖氏法检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平;造模后2 h采用ELISA法检测血清炎症因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4水平;处死小鼠,取肝组织进行病理切片及HE染色,观察肝组织损伤情况;应用实时荧光定量PCR法检测肝组织中IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4 mRNA表达。结果模型组血清ALT水平于造模后6 h开始升高,18 h左右达峰值,48 h左右基本恢复。与对照慢病毒组相比,miR-20b慢病毒组血清ALT水平降低(P <0. 05);模型组与对照慢病毒组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。对照慢病毒组肝组织有一定面积的坏死区域,同时伴有炎症细胞浸润和肝实质细胞坏死;miR-20b慢病毒组仅有炎症细胞浸润,未见明显坏死区域。与对照慢病毒组相比,miR-20b慢病毒组血清IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4水平和肝组织中IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4 mRNA表达水平均降低(P均<0. 05),模型组与对照慢病毒组比较差异无统计学意义(P均> 0. 05)。结论 miR-20b在小鼠自身免疫性肝炎的病程中发挥一定的保护作用,其机制可能是通过抑制肝脏炎症反应从而减轻肝损伤。

miR-20b在人骨肉瘤细胞中的表达及对Saos-2细胞增殖、侵袭能力的影响观察

目的观察miR-20b在人骨肉瘤细胞系中的表达及对Saos-2细胞增殖、侵袭能力的影响,探讨其机制。方法采用qRT-PCR法检测人骨肉瘤细胞系Saos-2、U20S、143B及人正常成骨细胞系hFOB1.19中miR-20b。将Saos-2细胞分成miR-20b沉默组和阴性对照组,利用Lipofectamine^(TM)2000分别转染miR-20b干扰序列miR-20b inhibitor和阴性对照序列scramble,采用qRT-PCR法检测转染后两组细胞中miR-20b,采用MTT法检测转染后两组细胞培养0、24、48、72、96、120 h时的光密度值(OD值,以OD值表示细胞增殖能力),采用Transwell实验观察转染后两组细胞穿膜细胞数(以穿膜细胞数表示细胞侵袭能力),采用Western blotting法检测转染后两组细胞PTEN蛋白。结果人骨肉瘤细胞系Saos-2、U20S、143B及人正常成骨细胞系hFOB1.19中miR-20b的相对表达量分别为3.31±0.26、2.57±0.23、2.03±0.21和1.00±0.02,人骨肉瘤细胞系Saos-2、U20S、143B中miR-20b的相对表达量与正常成骨细胞系hFOB1.19相比,P均<0.01。miR-20b沉默组Saos-2细胞中miR-20b相对表达量为0.12±0.01,阴性对照组为1.00±0.03,两组相比,P<0.01。miR-20b沉默组培养0、24、48、72、96、120 h时的OD值分别为0.29±0.02、0.39±0.03、0.62±0.06、0.89±0.07、1.34±0.11、2.02±0.17,阴性对照组培养0、24、48、72、96、120 h时的OD值分别为0.28±0.02、0.49±0.05、1.05±0.08、1.63±0.12、2.57±0.19、3.69±0.25,两组细胞培养48、72、96、120 h时的OD值相比,P均<0.05。miR-20b沉默组穿膜细胞数为(32.5±3.7)个,阴性对照组穿膜细胞数为(73.6±6.8)个,两组相比,P<0.01。miR-20b沉默组细胞PTEN蛋白相对表达量为2.37±0.15,阴性对照组细胞PTEN蛋白相对表达量为1.00±0.02,两组相比,P<0.01。结论miR-20b在人骨肉瘤细胞系中高表达;沉默miR-20b可抑制人骨肉瘤细胞系Saos-2的增殖和侵袭能力,其机制可能与上调PTEN蛋白表达有关。

miR-20b介导的Notch信号通路对自身免疫性肝炎模型小鼠巨噬细胞的免疫调节及机制的研究

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-20b介导的Notch信号通路对自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)模型小鼠巨噬细胞的免疫调节及机制。方法通过肝S100抗原诱导AIH模型,将AIH小鼠分为AIH组和AIH+miR-20b组,另将10只正常小鼠作为对照组,AIH+miR-20b组小鼠注射miR-20b agomir。检测肝组织中miR-20b、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和炎性细胞因子水平以及肝组织损伤和纤维化水平。通过免疫组化染色检测巨噬细胞标志蛋白F4/80分析肝组织中巨噬细胞浸润情况。检测Notch1和NICD蛋白,通过双荧光素酶报告验证miR-20b和Notch1的靶向关系。将小鼠巨噬细胞分为NC组和mimic组,通过转染miR-20b mimic过表达miR-20b,用RT-qPCR和Western blot检测各组Notch1 mRNA和蛋白水平。结果3组小鼠的各指标比较差异显著(P<0.05)。AIH组的miR-20b水平显著低于对照组,ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNF-α、CVF、F4/80染色水平、Notch1和NICD蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。AIH+miR-20b组的miR-20b水平显著高于AIH组,ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNF-α、CVF水平、F4/80蛋白染色情况、Notch1和NICD蛋白表达水平显著低于AIH组(P<0.05)。miR-20b和Notch1 mRNA 3’端非翻译区域(untranslated region,UTR)存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,同时转染wt-Notch1和mimic后相对荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。mimic的miR-20b水平显著高于NC组(P<0.05),Notch1 mRNA和蛋白水平显著低于NC组(P<0.05)。结论miR-20b可能通过抑制Notch通路抑制巨噬细胞活化,从而缓解AIH模型小鼠肝组织的炎性反应和纤维化。

2型糖尿病患者miR-15a、miR-16、miR-20b变化及与糖尿病视网膜病变的相关性

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者微小RNA-15a(miR-15a)、微小RNA-16(miR-16)、微小RNA-20b(miR-20b)变化及其与糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)关系。方法选取2017年5月-2019年5月丽水市人民医院收治的105例T2DM患者,均接受白内障超声乳化手术,根据术后结果将其分为无DR组32例、非增生性糖尿病视网膜病变(non-proliferative diabetic retinopathy,NPDR)组39例、增生性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)组34例,另选取同期单纯白内障患者40例作为对照组。采用miRNA衍生片段长度多态性(miRFLP)直接测定法检测房水miR-15a、miR-16、miR-20b水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定血清miR-15a、miR-16、miR-20b水平,用ROC曲线分析房水和血清中miR-15a、miR-16、miR-20b水平对PDR的预测价值。结果房水和血清中miR-15a、miR-16、miR-20b水平由高到低依次为PDR组、NPDR组、无DR组、对照组,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。DR患者房水与血清中miR-15a、miR-16、miR-20b水平均呈正相关(均P<0.05)。房水中miR-15a、miR-16、miR-20b水平联合预测PDR的曲线下面积为0.912,敏感度高达91.20%;血清中三者联合预测PDR的曲线下面积为0.931,特异性高达92.30%,预测价值均优于三者单一应用。结论 T2DM患者房水和血清中miR-15a、miR-16、miR-20b水平升高与DR发生有关。