沉默微小RNA-218表达保护STZ诱导的糖尿病大鼠肾组织

目的:探讨沉默微小RNA-218(microRNA-218,miR-218)表达对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏组织的保护作用及其可能机制。方法:采用单次腹腔注射STZ(50 mg/kg)方法制备糖尿病大鼠模型并构建miR-218短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。SD大鼠被随机分为健康对照组、糖尿病模型组、空载慢病毒组及miR-218-shRNA组。于自动生化仪上检测不同时点(4、8和12周)大鼠血糖、24h尿蛋白量、血清肌酐(serum creatinine,SCr)及血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量。实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测肾脏组织miR-218的表达。RT-qPCR和Western blot检测血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、肾病蛋白(nephrin)和p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的mRNA及蛋白表达水平。Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测肾脏组织细胞凋亡。结果:与健康对照组相比,STZ处理后大鼠miR-218表达水平显著升高。同时模型大鼠的血糖、24 h尿蛋白量、SCr及BUN含量显著升高(P<0.05);模型大鼠肾脏组织中HO-1和nephrin的mRNA和蛋白表达水平显著降低,而p38 MAPK蛋白的磷酸化水平显著升高;另外,模型大鼠肾脏组织中的caspase-3活性也显著升高。模型大鼠感染miR-218-shRNA后,miR-218表达水平显著下降并可以显著逆转上述效应。miR-218-shRNA组肾脏组织细胞的凋亡水平显著低于糖尿病模型组及空载慢病毒组。结论:miR-218参与了糖尿病大鼠的肾脏损伤,慢病毒载体沉默其表达能有效抑制肾脏组织细胞的凋亡,提示miR-218可以作为糖尿病肾病的基因治疗靶点。

微小RNA-218-5p靶向三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员基因对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究微小RNA(microRNA,miR)-218-5p靶向调控三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员(ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2)基因对Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)与Western blot检测Tca-8113细胞和NOK细胞中miR-218-5p和ABCG2的表达。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-218-5p和ABCG2靶向关系。用脂质体法将miR-218-5p mimic、ABCG2小干扰RNA(interfering RNA,siRNA)、miR-218-5p mimic+pcDNA-ABCG2分别转染至Tca-8113细胞中,噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)法、Transwell法检测Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭。结果:与NOK细胞比较,Tca-8113细胞miR-218-5p呈显著低表达,ABCG2呈显著高表达(P<0.05)。过表达miR-218-5p、抑制ABCG2均可抑制Tca-8113细胞的增殖和迁移(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-218-5p与ABCG2的靶向结合关系。过表达ABCG2可逆转上调miR-218-5p对Tca-8113细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:上调miR-218-5p的表达可靶向调控ABCG2,抑制Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭,将可为口腔鳞状细胞癌的治疗提供新的靶点。

乳腺癌组织微小RNA-218-5p的表达及其临床意义

目的探讨微小RNA-218-5p(miR-218-5p)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集本院2013年1月至2015年12月女性乳腺癌患者手术切除的92对癌组织和癌旁组织,采用实时定量PCR(QPCR)检测以上组织中miR-218-5p的表达并比较miR-218-5p在癌组织和癌旁组织中的表达差异,进一步分析miR-218-5p表达与乳腺癌临床病理特征(年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、绝经、组织学分级、ER、PR、HER-2和Ki-67表达)的关系,采用门诊或电话随访并比较miR-218-5p低表达组(<均值)和高表达组(≥均值)的预后情况。结果 QPCR检测结果显示,乳腺癌组织的miR-218-5p为0. 315±0. 150,低于癌旁组织的1. 010±0. 298,差异有统计学意义(P<0. 05)。乳腺癌患者miR-218-5p水平与年龄、淋巴结转移、绝经、ER和PR表达均无关,而与肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、HER-2和Ki-67表达有关(P<0. 05)。全组随访14～60个月,中位随访45. 0个月,中位总生存期(OS)为57. 0个月,其中miR-218-5p高表达组的中位OS>60. 0个月,高于低表达组的51. 0个月,差异有统计学意义(P<0. 05)。单因素分析发现,乳腺癌患者预后还与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、组织学分级和HER-2表达有关,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 MiR-218-5p在乳腺癌中低表达且与肿瘤的发生发展和预后有一定关系,miR-218-5p低表达者的预后较差,该指标在乳腺癌筛查及预后预测上有一定潜在价值。

微小RNA-218-5p靶向TLR2基因对LPS所致人牙周膜干细胞炎症反应的影响

目的:研究微小RNA(microRNA,miR)-218-5p对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法:分离培养PDLSCs,用LPS处理PDLSCs细胞建立炎症模型,MTT法和流式细胞术分别检测细胞存活率和凋亡率,qRT-PCR和Western blot分别检测miR-218-5p和Toll样受体2(TLR2)蛋白的表达,检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)的含量,双荧光素酶报告系统检测miR-218-5p和TLR2的靶向关系。结果:LPS处理人PDLSCs 0、12、24和48 h,PDLSCs细胞中miR-218-5p表达下调,TLR2表达上调,细胞存活率下降,凋亡率升高,炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α含量升高,呈时间依赖趋势,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-218-5p靶向调控TLR2表达;过表达miR-218-5p或沉默TLR2均可提高细胞存活率,降低细胞凋亡率和炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量;过表达TLR2可逆转miR-218-5p过表达对LPS诱导的PDLSCs细胞炎症和细胞增殖的作用。结论:miR-218-5p通过靶向TLR2调控LPS诱导的PDLSCs细胞增殖、凋亡和炎症反应。

微小RNA-218-5p靶向Jagged 1调控人牙周膜干细胞的活性和骨向分化

目的研究微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)活性和骨向分化的影响并探讨其机制,为牙周炎的治疗提供研究基础。方法将anti-miR-218-5p组(转染anti-miR-218-5p)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-JAG1组(转染pcDNA-JAG1)、anti-miR-218-5p+si-NC组(共转染anti-miR-218-5p和si-NC)、anti-miR-218-5p+si-JAG1组(共转染anti-miR-218-5p和si-JAG1),用脂质体法转染至hPDLSCs细胞;运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-218-5p、Ⅰ型胶原蛋白(Col-1)、骨钙素、Runt相关转录因子2(Runx2)的表达;蛋白质印迹法(Westrn blotting)检测细胞中Jagged 1(JAG1)的蛋白表达;MTT法检测细胞活性;茜素红染色实验检测细胞的矿化结节;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与anti-miR-NC组相比,anti-miR-218-5p组hPDLSCs细胞培养48、72 h时,细胞活性升高[48 h:(0.44±0.04)比(0.62±0.06);72 h:(0.53±0.05)比(0.83±0.08);P<0.001],细胞的矿化结节明显升高,Col-1[(0.26±0.03)比(0.74±0.07)]、骨钙素[(0.21±0.02)比(0.54±0.05)]、Runx-2[(0.29±0.03)比(0.61±0.06)]蛋白相对表达量均显著升高(均P<0.001)。与pcDNA组相比,pcDNA-JAG1组hPDLSCs细胞培养48、72 h时,细胞活性显著升高[48 h:(0.42±0.04)比(0.59±0.05);72 h:(0.55±0.05)比(0.81±0.08);P<0.001],Col-1[(0.34±0.03)比(0.71±0.07)]、骨钙素[(0.23±0.02)比(0.48±0.04)]、Runx-2[(0.25±0.03)比(0.56±0.05)]蛋白表达量均显著升高(均P<0.001)。miR-218-5p可靶向调控JAG1的表达。抑制JAG1可逆转抑制miR-218-5p对hPDLSCs的活性和骨向分化作用。结论抑制miR-218-5p可促进人牙周膜干细胞活性和骨向分化,其机制与靶向JAG1有关。

miRNA-218、miRNA-21在Hp感染相关胃癌组织中的表达及临床意义

目的探究微小RNA-218(miR-218)、miR-21在幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染相关胃癌组织中的表达及临床意义。方法选取接受手术切除的胃癌患者104例,分析miR-218和miR-21表达与Hp感染胃癌患者临床病理因素及术后复发的关系。结果Hp阳性组患者胃癌组织中miR-218水平低于Hp阴性组,miR-21水平、2年复发率高于Hp阴性组(P均<0.05);Hp感染胃癌患者胃癌组织中miR-218水平低于癌旁组织,miR-21水平高于癌旁组织(P均<0.05);miR-218和miR-21表达与患者分化程度、TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及无疾病进展生存率相关,对术后2年复发情况具有较高的预测价值。结论miR-218和miR-21水平在Hp感染和无Hp感染的胃癌患者中存在差异表达,其异常表达与Hp感染胃癌患者临床病理因素及预后存在关联。

微小RNA-218在胆管癌中的表达及其对胆管癌细胞凋亡的影响

目的检测胆管癌中微小RNA（miRNA，miR）-218的表达水平及观察其对胆管癌细胞凋亡的影响。方法培养两种胆管癌细胞株（CCLP1）和（QBC939）和非肿瘤胆管细胞株（H69），采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测miR-218，分为CCLPl、QBC939、H69组，每组随机取3个结果，比较其在胆管癌细胞株与非肿瘤胆管细胞株中的差异。合成miR-218mimics（miR．218激动剂），将miR-218minics及阴性对照转染CCLPl和QBC939细胞。设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组，分别利用流式细胞术检测细胞凋亡情况，每组随机取3个结果。结果miR-218在胆管癌细胞株CCLPl、QBC939及非肿瘤胆管细胞株中的相对定量分别为：1．000（以CCLP1为对照）、0．602±0．108、25．199±5．128，miR-218在胆管癌细胞株CCLP1、QBC939中的表达显著低于非肿瘤胆管细胞株（H69）（P=0．000）。CCLPI细胞株中miR-218组细胞凋亡率为0．121±0．010，阴性对照组细胞凋亡率为0．048±0．021，空白对照组细胞凋亡率为0．076±0．017；QBC939细胞株中miR-218组细胞凋亡率为0．118±0。039，阴性对照组细胞凋亡率为0．017±0．036，空白对照组细胞凋亡率为0．048±0．161。miR-218组较阴性对照组及空白对照组细胞凋亡率显著增加，miR-218组与空白对照组及阴性对照组之间的差异有统计学意义（CCLP-1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0．005、0．006）。结论miR-218在胆管癌的发生发展发挥了抑癌因子的作用，并且增加了胆管癌细胞的凋亡。

血清miR-218-5p、LncRNA OIP5-AS1在急性呼吸窘迫综合征患儿中表达及临床预后预测效能分析

目的探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清长链非编码RNA OIP5-AS1(LncRNA OIP5-AS1)、微小RNA-218-5p(miR-218-5p)表达情况及二者在临床预后预测中的价值。方法回顾性选择2020年7月至2022年2月秦皇岛市第一医院收治的104例ARDS患儿为ARDS组。根据氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))将ARDS患儿分为重度亚组(PaO_(2)/FiO_(2)≤100 mmHg,n=32)、中度亚组(100 mmHg<PaO_(2)/FiO_(2)≤200 mmHg,n=38)、轻度亚组(200 mmHg<PaO_(2)/FiO_(2)≤300 mmHg,n=34)。根据ARDS患儿28 d院内死亡情况将其分为存活亚组(n=74)和死亡亚组(n=30)。另选择同期于本院进行健康体检的98例儿童作为对照组。比较各组血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p表达水平;收集患儿性别、年龄、气道峰值压、通气时间、入住ICU时间、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、动脉血氧分压(PaO_(2))、入院急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、入院序贯器官功能衰竭评分(SOFA)、平均气道压、潮气量、白蛋白等资料。采用Pearson相关分析ARDS死亡患儿中血清LncRNA OIP5-AS1与miR-218-5p表达水平的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p表达水平对ARDS患儿预后的预测价值;采用Logistic回归分析影响ARDS患儿死亡的因素。结果ARDS组血清LncRNA OIP5-AS1为2.04±0.38,显著高于对照组(1.01±0.21),miR-218-5p为0.45±0.16,显著低于对照组(1.02±0.20),差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、轻度亚组、中度亚组、重度亚组ARDS患儿血清LncRNA OIP5-AS1表达水平依次升高,miR-218-5p表达水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡亚组血清LncRNA OIP5-AS1表达水平及入院APACHEⅡ评分、入院SOFA、平均气道压、潮气量均高于存活亚组,miR-218-5p表达水平及PaO_(2)、白蛋白均低于存活亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ARDS死亡患儿中血清LncRNA OIP5-AS1与miR-218-5p表达水平呈负相关(r=-0.503,P<0.05)。血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p及二者联合预测ARDS患儿死亡的曲线下面积分别为0.852、0.812、0.904。LncRNA OIP5-AS1是ARDS患儿死亡的独立危险因素(P<0.05),miR-218-5p是ARDS患儿死亡的保护因素(P<0.05)。结论ARDS患儿血清LncRNA OIP5-AS1>2.04,miR-218-5p<0.39,均与病情严重程度及预后不良有关。

微小RNA-218通过生存素对胆管癌细胞的作用

目的检测微小RNA（miR）-218对胆管癌细胞的侵袭的影响及miR-218通过凋亡抑制基因生存素（Survivin）对胆管癌细胞的作用。方法培养两种胆管癌细胞株（CCLPl）和（QBC939），将miR-218mimics（miR-218激动剂）及阴性对照转染CCLPl和QBC939细胞，设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组，采用BDMartigel基底膜基质胶侵袭室测定其侵袭性，每组随机抽取3个结果。将CCLPl和QBC939细胞分别共转染miR-218mimics和pMIR-Survivin、miR-218mimics和pMIR-Survivin-mut。分别设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组，每组随机抽取3个结果，酶标仪检测荧光素酶活性，探讨miR-218与Survivin的相关性。结果CCLPl细胞株中miR-218组细胞数为（28．33±4．16）个，阴性对照组细胞数为（72．00±8．72）个，NC组细胞数为（74．33±4．04）个；QBC939细胞株中miR-218组细胞数为（7．33±2．08）个，阴性对照组细胞数为（22．00±4．36）个，NC组细胞数为（22．00±4．00）个；与阴性对照组和NC组比较，转染miR-218mimics处理能显著抑制胆管癌细胞的侵袭能力，差异有统计学意义（CCLPl细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0．000、0．004）。荧光素酶活性检测结果显示，QBC939野生型miR-218组荧光素酶活性为1．489±0．079，阴性对照组为2．825±0．068，NC组为2．747±0．081；QBC939突变型miR-218组荧光素酶活性为3．078±0．138，阴性对照组为2．944±0．144，NC组为2．807±0．090；CCLPl野生型miR-218组荧光素酶活性为1．322±0．039，阴性对照组为2．362±0．129，NC组为2．368±0．154；CCLPl突变型miR一218组荧光素酶活性为2．202±0．073，阴性对照组为2．274±0．250，NC组为2．202±0．073；野生型的3’端非编码区（3’UTR）的报告基因载体的荧光素酶活性与其阴性对照组及空白对照组比较显著下降，差异有统计学意义（CCLPl细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0．000、0．000），突变型无显著变化。结论miR-218抑制胆管癌细胞的侵袭，在胆管癌的发生发展中起负性调节作用。miR-218可直接与Survivin3’UTR相互作用，miR-218对于胆管癌的负性调节作用可能是直接通过Survivin发挥作用。

微小RNA-218调控对大鼠主动脉平滑肌细胞表型转化、增殖及迁移的作用

目的观察微小RNA-218（miR-218）对大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMCs）表型转化、增殖及迁移的作用，探讨miR-218影响VSMCs生物学行为的机制。方法20％胎牛血清（FBS）培养大鼠VSMCs，将miR-218模拟物、miR-218抑制剂及阴性对照转染VSMCs。检测miR-218和表型蛋白α-肌动蛋白（α-actin）、调宁蛋白1（Calponin-1）的含量变化。10％FBS培养条件下，检测miR-218组和miR-nc组的细胞增殖和迁移能力变化，并与miR-218抑制剂组比较。结果20％FBS培养VSMCs3d和7d，miR-218表达量均下调超过90％（P〈0．01），α-actin和Calponin-1表达亦显著下调；与miR-nc组比较，miR-218组α-actin和Calponin-1的表达无明显下调。10％FBS培养VSMCs2-3d，miR-218组VSMCs的增殖力和迁移力均下调28％（P〈0．05）；而miR-218抑制剂组VSMCs的增殖力上调20％（P〈0．05）、迁移力上调53％（P〈0．01）。10％FBS培养VSMCs48～96h，miR-218组中miR-218潜在靶基因周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）的表达明显下调。结论miR-218表达上调可抑制大鼠VSMCs的表型转化、增殖和迁移，其作用可能是通过靶向CDK6来实现的。

微小RNA-218表达在胃癌中的作用机制研究进展

胃癌发生率和死亡率较高,预后较差,是全球癌症的防治重点。早期胃癌检出率低,癌细胞侵袭和转移是影响胃癌预后的重要因素。微小RNA(miRNA,miR)-218是一种肿瘤抑制miRNA,最近研究数据显示,miR-218在胃癌中表达下调,与胃癌发生和发展密切相关。本文重点分析miR-218在胃癌中表达与癌细胞增殖、侵袭和转移的关系,以期为胃癌靶向治疗提供理论依据。

微小218-5p调控Wnt家族成员2B抑制骨肉瘤细胞143B的增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对骨肉瘤细胞增殖,侵袭和迁移能力的影响及其作用机制。方法2016年1月至2019年1月,实时荧光定量PCR检测miR-218-5p在骨肉瘤与正常骨组织及正常成骨细胞株与骨肉瘤细胞株的表达差异。应用CCK-8法检测过表达miR-218-5p对人骨肉瘤细胞株143B增殖的影响;细胞划痕实验检测和Transwell小室实验检测过表达miR-218-5p对骨肉瘤细胞143B迁移能力的影响。同时,应用在线miRNA靶基因预测软件预测miR-218-5p的靶基因,并应用荧光素酶报告实验进行结合位点验证。蛋白质印迹法验证靶基因的蛋白表达水平。结果miR-218-5p在骨肉瘤组织中的表达水平(0.59±0.21)%明显低于正常骨组织,骨肉瘤细胞系中的表达水平(0.712±0.015)%、(0.685±0.016)%、(0.542±0.021)%、(0.524±0.011)%明显低于正常成骨细胞,P<0.05。同时,与对照组相比,过表达miR-218-5p(miR-218-5p mimic)的骨肉瘤细胞143B的细胞活力t6h(0.274±0.011),t24h(0.514±0.04),t48h(0.828±0.16),t72h(1.212±0.013),侵袭(164±12)个和迁移距离(26±2.4)%明显减弱,P<0.05。应用TargetScan网站进行预测,结果显示Wnt家族成员2B(WNT2B)为miR-218-5p的潜在靶基因之一;荧光素酶报告实验结果表明miR-218-5p直接靶向WNT2B;蛋白质印迹法证实miR-218-5p过表达组细胞中WNT2B蛋白的表达水平较对照组明显减少。结论miR-218-5p在人骨肉瘤组织和癌细胞中低表达,其可能通过靶向WNT2B抑制骨肉瘤细胞143B的增殖、迁移和侵袭。

血清微小RNA-128和微小RNA-129水平与乳腺癌患者化学治疗效果及预后的关系

目的探讨微小RNA-218(miR-218)和微小RNA-129(miR-129)水平与乳腺癌患者化学治疗效果及预后的关系。方法选取乳腺癌92例,均给予化学治疗,根据miR-218和miR-129相对表达量检测结果将其分为miR-218高表达组(30例)、miR-218低表达组(62例)和miR-129高表达组(33例)、miR-129低表达组(59例),分析miR-218和miR-129不同表达水平组间化学治疗效果差异及影响乳腺癌化学治疗患者预后因素。结果乳腺癌92例6个疗程化学治疗后疾病控制率为51.09%。miR-218低表达组疾病控制率43.55%明显低于miR-218高表达组疾病控制率66.67%,miR-129低表达组疾病控制率42.37%明显低于miR-129高表达组疾病控制率66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌92例自出院至随访结束中位总生存期为25个月,出院后6个月生存率为92.39%,出院后1年生存率为84.78%,出院后3年生存率为38.04%。非条件单因素分析结果显示,临床分期Ⅲ期、有淋巴结转移及miR-218、miR-129低表达的乳腺癌化学治疗患者中位生存时间显著缩短。多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,临床分期Ⅲ期、有淋巴结转移及miR-218、miR-129低表达均为影响乳腺癌化学治疗患者预后的独立危险因素。结论 miR-218和miR-129在乳腺癌患者血清中以低水平表达,检测乳腺癌化学治疗患者血清中miR-218和miR-129表达可用于预测化学治疗效果及预后。临床分期Ⅲ期、有淋巴结转移及miR-218、miR-129低表达均为影响乳腺癌化学治疗患者预后的独立危险因素。

miRNA-218-5p通过HMGB1信号通路抑制RAW264.7细胞源性泡沫细胞炎症反应

目的:探讨微小RNA-218-5p(miRNA-218-5p)通过调节高迁移率族盒蛋白1(HMGB1)信号通路对RAW264.7细胞源性泡沫细胞炎症反应的影响。方法:将RAW264.7细胞分为对照组、模型组、miRNA mimics组及miRNA NC组。对照组细胞正常培养;模型组细胞采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导24 h建立泡沫细胞模型;miRNA mimics组及miRNA NC组分别转染miRNA-218-5p mimics及miRNA mimics control 24 h后再用80mg/L ox-LDL诱导24 h建立泡沫细胞模型。应用油红O染色检测各组细胞内脂质变化;试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达量;qPCR检测各组细胞中miRNA-218-5p表达量;Western Blot检测各组细胞中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)p65及p-NF-κB p65蛋白水平;通过双萤光素酶报告基因实验检测miRNA-218-5p对HMGB1的靶向作用。结果:与对照组比较,模型组细胞的泡沫化程度增加,细胞中miRNA-218-5p表达量显著下降(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4和p-NF-κB p65水平显著上升(P<0.05);与模型组细胞相比,miRNA mimics组细胞的泡沫化程度降低,细胞中miRNA-218-5p表达量显著上升(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4和p-NF-κB p65水平显著下降(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,miRNA-218-5p能与HMGB1 mRNA的3’端非翻译区(3’UTR)结合,抑制萤光素酶的活性。结论:miRNA-218-5p能抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞泡沫化,还可通过调节HMGB1信号通路抑制RAW264.7细胞源性泡沫细胞的炎症反应。

血清miR-210、miR-218-5p和KIM-1水平对妊娠期高血压疾病患者肾损伤的诊断价值

目的评估血清微小RNA(miR)-210、miR-218-5p和肾损伤分子(KIM)-1水平对妊娠期高血压疾病患者肾损伤的诊断价值。方法选择2019年1月至2020年12月复旦大学附属妇产科医院诊断为妊娠期高血压疾病的患者106例为研究组,选择同期健康产检孕妇75例为对照组。比较研究组与对照组血清miR-210、miR-218-5p、KIM-1和β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)水平;分析血清miR-210、miR-218-5p、KIM-1和β_(2)-MG水平与妊娠期高血压疾病严重程度及肾功能的关系;评估血清miR-21、miR-218-5p、KIM-1和β_(2)-MG水平对妊娠期高血压疾病患者肾损伤的诊断效能;分析妊娠期高血压疾病患者血清miR-210、miR-218-5p和KIM-1水平间的相关性。结果研究组血清miR-210、KIM-1和β_(2)-MG水平明显高于对照组,血清miR-218-5p水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度子痫前期组血清miR-210、KIM-1和β_(2)-MG水平明显高于轻度子痫前期组和妊娠期高血压组,血清miR-218-5p水平明显低于轻度子痫前期组和妊娠期高血压组,差异有统计学意义(P<0.05);轻度子痫前期组血清miR-210、KIM-1和β_(2)-MG水平明显高于妊娠期高血压组,血清miR-218-5p水平明显低于妊娠期高血压组,差异有统计学意义(P<0.05)。肾功能异常组血清miR-210、KIM-1和β_(2)-MG水平明显高于肾功能正常组,血清miR-218-5p水平明显低于肾功能正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-210、KIM-1、miR-218-5p联合检测诊断妊娠期高血压疾病患者肾损伤的灵敏度为84.6%,特异度为95.5%,曲线下面积为0.957,明显优于各指标单独检测(P<0.05)。妊娠期高血压疾病患者血清miR-210和KIM-1水平与miR-218-5p水平均呈负相关(r=-0.555、-0.542,P<0.05),而血清miR-210与KIM-1水平呈正相关(r=0.575,P<0.05)。结论血清miR-210、miR-218-5p和KIM-1水平与妊娠期高血压疾病的发生、发展有关,且对患者肾损伤具有较高的诊断价值,联合检测的诊断价值优于各指标单独检测。

胃癌组织中miR-218和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、xIAP、Survivin mRNA的表达观察

目的观察胃癌组织中微小RNA-218(miR-218)和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、x IAP、Survivin mRNA的表达变化,并探讨其意义。方法胃癌患者80例,手术过程中留取癌组织及癌旁组织,采用实时定量PCR法对胃癌组织及癌旁组织中的miR-218和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、x IAP、Survivin mRNA进行检测,分析其相关性。以胃癌组织中miR-218相对表达强度的平均值为界,将胃癌患者分为miR-218高表达组与miR-218低表达组,对比分析其临床病理参数及预后。结果胃癌组织中miR-218及Bcl-2、Bax、x IAP、Survivin mRNA的相对表达强度分别为0. 3077±0. 118 1、0. 817 7±0. 272 6、0. 248 1±0. 110 8、0. 599 5±0. 261 3、0. 820 9±0. 342 6,癌旁组织中分别为0. 565 9±0. 226 0、0. 277 4±0. 116 7、0. 444 4±0. 201 9、0. 298 7±0. 147 8、0. 247 0±0. 112 2,两种组织各指标相比,P均<0. 01。胃癌组织中miR-218与Bcl-2 mRNA的表达呈负相关(r=-0. 341,P <0. 01),miR-218与Bax mRNA的表达呈正相关(r=0. 522,P <0. 01),Bcl-2 mRNA与Bax mRNA的表达呈负相关(r=-0. 439,P <0. 01),Bcl-2 mRNA与Survivin mRNA的表达呈正相关(r=0. 235,P <0. 01)。80例胃癌患者中,胃癌组织中miR-218高表达组42例、低表达组38例; miR-218高表达组中TNM分期Ⅰ期+Ⅱ期21例、Ⅲ期+Ⅳ期21例,miR-218低表达组中Ⅰ期+Ⅱ期9例、Ⅲ期+Ⅳ期29例,两组相比,P <0. 05; miR-218高表达组中淋巴结转移者29例,miR-218低表达组中淋巴结转移者34例,两组相比,P <0. 05;胃癌组织中miR-218高表达组、低表达组的5年生存率分别为66. 67%、28. 95%,两组相比,χ2=9. 789,P <0. 01。结论胃癌组织中miR-218呈低表达; miR-218可能通过参与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Survivin基因表达的相互调节而参与肿瘤细胞凋亡过程;胃癌组织中miR-218低表达预示肿瘤处于较高临床分期、淋巴结转移可能性较大,患者预后较差。

Hsa-miR-218靶向调控LASP1对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的:探讨人微小RNA-218(Homo sapiens microRNA-218,hsa-miR-218)对宫颈癌HeLa细胞生长的影响及分子机制。方法:构建hsa-miR-218的重组慢病毒表达载体pmiR-218,并将pmiR-218感染至HeLa细胞,台盼蓝拒染法检测细胞数量的变化,WST-8法检测细胞活力,构建萤光素酶报告基因载体验证miR-218与LIM和SH3蛋白1(LASP1)的相互结合作用,real-time PCR检测LASP1的mRNA相对表达水平,Western blot检测LASP1蛋白的表达水平。结果:经DNA测序证实与设计完全一致,测序结果显示成功构建了重组慢病毒表达载体pmiR-218。pmiR-218转染HeLa细胞72 h后HeLa细胞存活数量为176±9,对HeLa细胞活力的抑制率具有时间效应关系,较空白对照组比较,差异显著(P<0.05);萤光素酶活性结果显示,克隆LASP1-3’UTR的质粒与miR-218 mimics共转染293T细胞,引起萤光素酶活性的减低;real-time PCR结果显示转染pmiR-218后,miR-218表达水平增加;过表达miR-128能下调LASP1 mRNA及蛋白的相对表达水平,与空白对照组及阴性对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论:pmiR-218有效抑制HeLa细胞的生长,并具有时间-效应关系,其机制可能是miR-218通过靶向结合LASP1的3’UTR,从而下调其在HeLa细胞的表达有关。

miR-218-5p下调SD大鼠成骨细胞骨硬化蛋白的表达

目的:探讨SD大鼠成骨细胞中微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对骨硬化蛋白(SOST)表达的影响及其作用机制。方法:用生物信息学数据库RNAhybrid和TargetScan预测miR-218-5p靶向SOST基因;构建携带靶基因野生型及突变型3’-非翻译区的双萤光素酶报告基因质粒,采用脂质体Lipofectamine 2000包裹双萤光素酶重组质粒及miR-218-5p模拟物(mimic)或抑制剂(inhibitor),共转染293T细胞,应用双萤光素酶报告基因检测试剂盒测定萤光素酶活性;分离并培养SD大鼠成骨细胞,茜素红染色鉴定,设miR-218-5p mimic组、miR-218-5p inhibitor组及空白和阴性对照组,转染SD大鼠成骨细胞,RT-PCR检测SOST的mRNA表达,Western blot法检测SOST的蛋白表达水平。结果:双萤光素酶报告基因实验验证SOST是miR-218-5p的潜在靶基因;RT-PCR和Western blot实验结果示,SD大鼠成骨细胞转染miR-218-5p mimic后,SOST mRNA及蛋白表达均明显下调,转染miR-218-5p inhibitor后均明显上调,与空白及阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-218-5p靶向SOST基因,从而下调SD大鼠成骨细胞SOST蛋白的表达。

宫颈癌组织miR-218、Stat3表达变化及其临床意义

目的探讨宫颈癌组织微小RNA-218(miR-218)和信号转导及转录活化因子3(Stat3)表达变化及其临床意义。方法选择宫颈癌患者96例(观察组),疑似宫颈癌但组织病理检查宫颈正常者58例(对照组),取两组宫颈组织,采用RT-PCR法检测miR-218、Stat3 mRNA表达。分析宫颈癌组织miR-218、Stat3 mRNA表达与患者临床病理参数的关系。结果观察组、对照组miR-218 mRNA相对表达量分别为0.57±0.12、1.09±0.51,Stat3 mRNA相对表达量分别为0.56±0.15、0.21±0.06,两组比较P均<0.05。宫颈癌组织miR-218 mRNA表达与Stat3mRNA表达呈负相关关系(r=-0.719,P<0.05)。宫颈癌组织miR-218 mRNA表达与临床分期、组织分化程度、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者年龄、病理类型、肿瘤直径、绝经状况及宫旁浸润无关(P均>0.05)。宫颈癌组织Stat3 mRNA表达与组织分化程度、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者年龄、病理类型、临床分期、肿瘤直径、绝经状况及宫旁浸润无关(P均>0.05)。结论宫颈癌组织miR-218 mRNA表达下调,Stat3 mRNA表达上调;二者表达变化与宫颈癌的发生、发展有关。

miR-218-5p靶向B细胞淋巴瘤因子3表达影响白血病K562细胞的增殖和凋亡

目的探讨微小RNA-218-5p(miR-218-5p)靶向B细胞淋巴瘤因子3(BCL3)基因对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法反转录及荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Westernblotting)检测正常人骨髓细胞和白血病骨髓细胞中miR-218-5p和BCL3的表达水平。以白血病细胞K562为研究对象,分别构建过表达miR-218-5p或沉默BCL3的K562细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblotting检测细胞增殖抗原(Ki67)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(CleavedCaspase-3)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Westernblotting验证miR-218-5p和BCL3的靶向调控关系。结果与正常人骨髓细胞相比,白血病骨髓细胞中miR-218-5p的表达水平(1.00±0.13)比(0.44±0.18)显著降低,BCL3的表达水平(1.04±0.32)比(4.76±1.38)、(0.26±0.05)比(0.78±0.13)显著升高。过表达miR-218-5p或沉默BCL3均可显著抑制K562细胞CyclinD1(0.69±0.08)比(0.34±0.05)、(0.65±0.07)比(0.18±0.04)和Ki67表达(0.68±0.07)比(0.23±0.04)、(0.54±0.06)比(0.24±0.04),促进Cleaved-Caspase-3表达(0.38±0.04)比(0.89±0.11)、(0.17±0.04)比(0.56±0.07),抑制细胞增殖[(98.72±12.38)%比(69.79±7.62)%]、[(97.48±11.49)%比(65.73±6.86)%],促进细胞凋亡[(7.26±0.85)%比(24.46±2.67)%]、[(6.63±0.85)%比(26.46±2.81)%]。BCL3是miR-218-5p的靶基因,miR-218-5p可负性调控BCL3的表达。过表达BCL3可部分逆转miR-218-5p对K562细胞增殖和凋亡的影响。结论miR-218-5p通过靶向BCL3抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡。