奥氮平对MK-801处理大鼠自发活动和额叶微小RNA-219表达的影响

目的:探讨非典型抗精神病药奥氮平对N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801处理大鼠自发活动和额叶微小RNA(miRNA)-219表达的影响。方法:将18只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(生理盐水(NS)灌胃+NS腹腔注射)、MK-801组(NS灌胃+MK-8010 1 mg/kg腹腔注射)及奥氮平组(奥氮平2mg/kg灌胃+MK-8010 1 mg/kg腹腔注射):每日给药1次,1周后做开场实验检测大鼠自发活动,用实时荧光定量PCR技术检测各组大鼠额叶miRNA-219的表达。结果:与对照组比,MK-801组大鼠自发活动增加,额叶miRNA-219表达下降,差异均有统计学意义(P<0.01);而与MK-801组比,奥氮平组大鼠自发活动减少,额叶miRNA-219表达增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:奥氮平能抑制大鼠自发活动的增加及额叶miRNA-219的下调。

乙醇、微小RNA-219-5p对肝癌细胞中聚糖蛋白3表达的影响

目的 观察乙醇、微小RNA（miRNA）-219-5p对肝细胞肝癌（HCC）中聚糖蛋白3（GPC3）表达的影响.方法 采用免疫组织化学检测30例正常肝脏组织、120例HCC患者肝癌组织及相应癌旁组织标本中GPC3蛋白的表达水平,分析GPC3与HCC汉族临床资料之间的关系,探讨其与饮酒、miRNA-219-5p相关性.结果 GPC3在HCC组织中的阳性表达率为75％,在癌旁组织中其阳性表达率为30％,正常肝组织中未发现其阳性表达,3组比较差异有统计学意义（x2=74.348,P＜0.01）.在年龄、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性、慢性肝病病史以及肿瘤大小方面,GPC3表达均未受到影响[x2（肝癌组织）=1.800、0.533、1.140、0.568,P＞0.05;x2（癌旁组织）=0.179、0、0、0.714,P＞0.05];在大量饮酒的患者中,GPC3阳性表达率为100％,在非大量饮酒的患者中,其阳性表达率为70％,两组间差异有统计学意义（x2=8.000,P＜0.01）,提示饮酒行为对GPC3的表达明显相关.结论 HCC的发生与miRNA-219-5p表达过低、GPC3蛋白表达过高有关,同时大量饮酒行为可能放大了此种效应.

微小RNA-219-5p在肝细胞肝癌中的表达及其与乙醇的关系

目的 观察微小RNA（miRNA,miR）-219-5p与乙醇、临床病理特征的关系及其在肝细胞肝癌（HCC）发生发展中的作用.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法对120例HCC患者组织中的miR-219-5p的表达进行检测,并比较其与饮酒、临床病理特征之间关系.结果 （1）肿瘤瘤体＞5 cm、组织分化差以及大量饮酒者miR-219-5p的表达显著降低（x2=10.550、3.956、6.061,P＜0.05）;（2）在Logistic回归分析中,大量饮酒史是miR-219-5p表达水平下降的主要危险因素之一[95％可信区间（CI）：1.521 ～ 17.635,P＜0.05];（3）在Cox回归模型中,miR-219-5p表达水平降低的患者具有较高的死亡风险,饮酒、甲胎蛋白（AFP）阳性、慢性肝病以及肿瘤较大者,死亡风险进一步增加（P＜0.05）.结论 miR-219-5p表达水平、血清AFP阳性、肿瘤大小、慢性肝病是HCC患者生存预后的独立危险因素,同时大量饮酒可以进一步放大上述效应.

肝细胞癌中miR-219表达对肝细胞癌干细胞特性的影响及作用机制

目的检测微小RNA(miR)-219在肝细胞癌(HCC)中的表达水平及敲低其表达水平后对干细胞特性的影响。方法20例HCC患者的HCC组织和癌旁组织,采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测HCC组织、癌旁组织、HCC细胞(Huh-7、SMMC-7721和HepG2)及正常人肝细胞(L02)中miR-219表达水平。将si-NC、si-miR-219质粒转染至HepG2细胞中分别设为si-NC组和si-miR-219组,同时设置未转染质粒的Control组,并采用qRT-PCR实验验证miR-219表达水平。流式细胞术检测3组细胞中CD133+、EpCAM+细胞比例,细胞肿瘤球形成实验检测3组细胞中肿瘤球形成的数量,qRT-PCR检测3组细胞中c-Myc、SOX2、OCT4、Bmi-1和Nanog mRNA水平。结果HCC组织中miR-219表达显著高于癌旁组织,Huh-7、SMMC-7721和HepG2细胞中miR-219表达显著高于L02细胞(P<0.05)。si-miR-219组中miR-219相对表达水平、CD133+细胞比例、EpCAM+细胞比例及细胞悬浮肿瘤球形成数量显著低于Control组和si-NC组(均P<0.05)。si-miR-219组c-Myc、SOX2、OCT4、Bmi-1和Nanog mRNA水平显著低于Control组和si-NC组(P<0.05)。结论miR-219在HCC中表达水平增加,敲低其表达水平后可抑制HCC干细胞的干性表达,可能是通过降低c-Myc、SOX2、OCT4、Bmi-1和Nanog水平实现的。

血清miR-219a-5p在孤立性眩晕患者中的表达及临床意义

目的探讨血清miR-219a-5p在孤立性眩晕患者中的表达水平及临床意义。方法将我院2021年4月至2022年8月住院治疗的66例孤立性眩晕患者设为研究组,另选取同期66例健康体检者为对照组;采用qRT-PCR法检测血清miR-219a-5p的相对表达水平,并分析miR-219a-5p表达水平与患者临床病理参数的关系;采用ELISA法测定TNF-α和IL-6表达水平;采用Pearson法分析孤立性眩晕患者血清中miR-219a-5p与TNF-α、IL-6表达的相关性;采用Logistic回归分析发生孤立性眩晕的影响因素;采用ROC曲线分析血清miR-219a-5p对孤立性眩晕患者的诊断价值。结果与对照组相比,孤立性眩晕患者血清中miR-219a-5p表达水平明显降低(P<0.05),TNF-α与IL-6表达水平均明显升高(P<0.05)。miR-219a-5p表达水平与患者空腹血糖、总胆固醇、TNF-α及IL-6水平有关(P<0.05)。Pearson分析结果显示,孤立性眩晕患者血清中miR-219a-5p与TNF-α呈负相关(r=-0.310,P<0.05),孤立性眩晕患者血清中miR-219a-5p与IL-6呈负相关(r=-0.361,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-219a-5p、TNF-α、IL-6均是发生孤立性眩晕的影响因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miR-219a-5p诊断孤立性眩晕的AUC为0.884(95%CI 0.817~0.933),截断值为0.95,灵敏度为96.97%,特异性为74.24%,Youden指数为0.7121。结论miR-219a-5p在孤立性眩晕患者血清中低表达,TNF-α与IL-6在孤立性眩晕患者血清中高表达,血清miR-219a-5p分别与TNF-α、IL-6呈负相关,三者均是发生孤立性眩晕的影响因素,且miR-219a-5p对孤立性眩晕具有良好的诊断效能,检测miR-219a-5p水平有望成为早期预估孤立性眩晕疾病发生的潜在血清学指标。

血清miR-205-5p、miR-219-5p诊断子宫内膜癌及预判淋巴结转移的价值分析

目的:探讨血清微小RNA-205-5p(miR-205-5p)、miR-219-5p诊断子宫内膜癌(Endometrial carcinoma,EC)及预判淋巴结转移的临床价值。方法:选取我院2019年2月到2022年2月收治的120例子宫内膜癌患者为观察组,另选取同期健康体检女性100例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测纳入对象血清miR-205-5p、miR-219-5p水平,比较两组血清miR-205-5p、miR-219-5p水平,同时分析血清miR-205-5p、miR-219-5p水平与EC患者病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-205-5p和miR-219-5p水平对EC淋巴结转移的预测价值,多因素Logistic回归分析探讨子宫内膜癌淋巴结转移的相关因素。结果:观察组血清miR-205-5p水平高于对照组,miR-219-5p低于对照组(P<0.05);子宫内膜癌患者血清miR-205-5p、miR-219-5p水平与病理类型、FIGO分期、组织学分级、肌层浸润、淋巴结转移有关(P<0.05)。血清miR-205-5p、miR-219-5p诊断子宫内膜癌的AUC为0.732、0.746,预判淋巴结转移的AUC为0.753、0.787。多因素Logistics回归分析显示,血清miR-205-5p高表达(OR=2.44,95%CI:1.62~3.67)、miR-219-5p低表达(OR=4.89,95%CI:2.55~9.39)均为子宫内膜癌淋巴结转移的危险因素(P<0.05)。结论:血清miR-205-5p在子宫内膜癌患者血清中呈高表达,miR-219-5p呈低表达,二者均与患者肌层浸润、淋巴结转移有关。

miR-219与TGFBR2的调控关系在肾脏纤维化中的作用

目的:研究微小RNA-219(miR-219)通过靶向调控转化生长因子βⅡ型受体(TGFBR2)在肾脏纤维化中发挥的作用。方法:收集2017年9月～2018年3月于我院就诊的70例肾脏纤维化患者,选取同期来本院体检的20例健康人设为对照组,RT-qPCR检测肾脏纤维化患者及对照组血清中miR-219的表达水平,并检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠肾成纤维细胞NRK49F后miR-219的表达水平。Western blot检测转染miR-219模拟物(miR-219 mimics)的NRK49F细胞在AngⅡ刺激后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达情况。筛选出miR-219的潜在靶基因TGFBR2,并通过萤光素酶报告基因法进行验证。RT-qPCR和Western blot检测miR-219 mimics对TGFBR2的mRNA及蛋白表达的影响。RT-qPCR检测miR-219 mimics对α-SMA、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和COL3A1的mRNA表达水平的影响。构建单侧输尿管闭塞(UUO)小鼠模型并检测其肾脏组织中miR-219的表达水平,对UUO小鼠注射miR-219后观察肾脏纤维化的变化情况,并检测COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平。结果:肾脏纤维化患者血清中miR-219的表达水平明显低于对照组,UUO小鼠肾脏组织中miR-219的表达显著下降(P<0.01);AngⅡ刺激NRK49F细胞后miR-219的表达水平明显降低,且miR-219 mimics可抑制α-SMA蛋白的表达(P<0.01);miR-219 mimics对TGFBR2具有靶向调控作用,可抑制TGFBR2的mRNA及蛋白表达;miR-219 mimics可抑制α-SMA、CTGF、COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平;miR-219可下调UUO小鼠中COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平并抑制其肾脏纤维化进程。结论:miR-219可通过抑制TGFBR2的表达从而抑制肾脏纤维化的发展,可能成为肾脏纤维化诊断及治疗的新靶点。

宫颈癌组织miR-219a表达水平与患者肿瘤侵袭转移及预后的相关性

目的研究宫颈癌组织微小RNA-219a(miR-219a)的表达水平与患者肿瘤侵袭转移及预后之间的关系。方法选取2014年9月—2015年9月收治的86例宫颈癌肿瘤组织和25例正常对照的宫颈组织样本,用qRT-PCR检测组织中miR-219a的表达水平。结合宫颈癌患者临床资料,分析miR-219a与患者的临床病理特征及3年生存率之间的关系。结果宫颈癌肿瘤组织miR-219a相对表达量低于正常宫颈组织,miR-219a低表达率显著高于正常宫颈组织(P<0.01)。miR-219a表达水平与宫颈癌分化程度、国际妇产科联合会(FIGO)分期、淋巴转移、间质浸润深度、阴道壁累及有相关性(P<0.05),与年龄、病理分型、肿瘤大小及宫旁组织累及无关(P>0.05)。miR-219a低表达患者的3年总生存率和3年无病生存率均显著低于miR-219a高表达患者(P<0.01)。结论宫颈癌肿瘤组织中miR-219a表达下调,并且可能与宫颈癌患者的分化程度、FIGO分期、淋巴转移、间质浸润深度、阴道壁累及相关,同时miR-219a低表达可能提示患者3年生存率降低。

miR-219-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-219-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR技术(q PCR)检测miR-219-5p在胰腺癌细胞系Panc-1、As PC-1及Bxpc-3和正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7中的表达。选取Panc-1细胞系,分成两组,对照组(NC组)转染阴性对照序列scramble,miR-219-5p组转染miR-219-5p mimics,MTT实验和流式细胞仪分析两组细胞增殖和凋亡情况,采用Transwell实验测定两组细胞侵袭能力,Western blotting法检测表皮生长因子受体(EGFR)和裂解型Caspase 3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 miR-219-5p在胰腺癌细胞系Panc-1、As PC-1及Bxpc-3中的相对表达量低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(P均<0.01);miR-219-5p组在72、96及120 h 490 nm处的OD值低于NC组(P均<0.01),细胞凋亡率高于NC组(P均<0.01);miR-219-5p组、NC组细胞侵袭数分别为(75.3±6.9)、(172.5±10.5)个/视野,两组细胞侵袭数比较,P<0.01;miR-219-5p组、NC组EGFR相对表达量分别为0.31±0.09、1.0,两组比较,P<0.01;miR-219-5p组、NC组Cleaved Caspase 3蛋白相对表达量分别为2.7±0.15、1.0,两组比较,P<0.01。结论 miR-219-5p在胰腺癌细胞系中呈低表达,miR-219-5p过表达可抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭,并诱导细胞凋亡;其机制可能与miR-219-5p下调EGFR蛋白和上调Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。

右美托咪定调控miR-219a-5p/CACUL1通路抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨右美托咪定对子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响和机制。方法:采用不同浓度(5,10,20,40μmol·L^(-1))的右美托咪定处理子宫内膜癌细胞Ishikawa,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,并确定用药浓度。实时定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测右美托咪定对Ishikawa细胞miR-219a-5p和细胞周期素依赖激酶2相关性Culin结构域1(CACUL1)表达的影响。采用上述方法检测抑制miR-219a-5p表达或过表达CACUL1对右美托咪定处理的Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-219a-5p和CACUL1的靶向调控关系。结果:右美托咪定可抑制Ishikawa细胞增殖活力和迁移侵袭能力(P<0.05),且呈剂量依赖性。右美托咪定处理可促进miR-219a-5p表达,抑制CACUL1表达(P<0.05)。抑制miR-219a-5p表达或过表达CACUL1可逆转右美托咪定对Ishikawa细胞的增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。CACUL1是miR-219a-5p的靶基因,miR-219a-5p负性调控CACUL1表达。结论:右美托咪定通过调节miR-219a-5p/CACUL1轴抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

二氢青蒿素对肺癌H460细胞放疗敏感性及miR-219a-5p、CD164表达的影响

目的:探讨二氢青蒿素对肺癌H460细胞放疗敏感性及微小RNA-219a-5p(miR-219a-5p)、钙黏蛋白164(CD164)表达的影响。方法:CCK-8法检测不同浓度(0.01,0.1,1,10,100μmol·L^(-1))二氢青蒿素处理的肺癌H460细胞的增殖抑制率,将肺癌H460细胞设为4组:空白对照组、单纯放疗组、二氢青蒿素组和二氢青蒿素+放疗组,其中空白对照组不进行处理;单纯放疗组采用X射线照射源进行一次性照射,照射剂量为5 Gy,剂量率为1 Gy·min^(-1);二氢青蒿素组加入23.74μmol·L^(-1)二氢青蒿素的培养基;二氢青蒿素+放疗组加入23.74μmol·L^(-1)二氢青蒿素的培养基并采用照射剂量为5 Gy,剂量率为1 Gy·min^(-1)的X射线照射;CCK-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布情况,实时荧光定量PCR法检测细胞miR-219a-5p、CD164 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测细胞CD164蛋白表达水平。结果:随着二氢青蒿素浓度的升高,肺癌H460细胞增殖抑制率逐渐升高(P<0.05);与空白对照组比较,单纯放疗组、二氢青蒿素组、二氢青蒿素+放疗组肺癌H460细胞吸光度(A)值、细胞增殖率、S期比例、CD164 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率、G0/G1期比例、G2/M期比例、miR-219a-5p表达水平升高(P<0.05);与单纯放疗组和二氢青蒿素组比较,二氢青蒿素+放疗组肺癌H460细胞A值、胞增殖率、S期比例、CD164 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率、G0/G1期比例、G2/M期比例、miR-219a-5p表达水平升高(P<0.05)。结论:二氢青蒿素能够增强肺癌细胞系H460的放疗敏感性,这可能与其通过促进miR-219a-5p的表达来抑制CD164的活性有关。

miR-219a-5p在癫痫患儿血清中的表达及临床意义

目的 探讨癫痫患儿血清中微小RNA-219a-5p(miR-219a-5p)及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK2G)表达水平、相关性及临床意义。方法 选取2017年6月至2019年6月本院收治的46例癫痫患儿(研究组)和同期50例健康儿童(对照组)为研究对象。采用荧光定量PCR技术检测其血清miR-219a-5p、CaMK2G水平;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-219a-5p、CaMK2G对癫痫患儿的诊断价值;Pearson相关法分析癫痫患儿血清miR-219a-5p、CaMK2G表达水平的相关性。结果 与对照组相比,研究组患儿血清miR-219a-5p表达水平明显较高,CaMK2G表达水平明显较低(t值分别是5.314、3.855,P<0.05);ROC分析结果显示,血清miR-219a-5p、CaMK2G诊断癫痫患儿的曲线下面积(AUC)分别为0.807(95%CI:0.714~0.881)、0.752(95%CI:0.653~0.834),其灵敏度分别是69.57%、78.26%,特异度分别是80.00%、62.00%;血清miR-219a-5p与CaMK2G联合预测癫痫患儿的AUC为0.860(95%CI:0.774~0.922),灵敏度和特异度分别为97.83%和60.00%;Pearson相关分析显示,癫痫患儿血清miR-219a-5p、CaMK2G水平呈负相关关系(r=-0.424,P<0.05)。结论 癫痫患儿血清miR-219a-5p表达上调,CaMK2G表达下调,miR-219a-5p可能靶向负调控CaMK2G表达,参与癫痫的发生发展。

miR-219a-5p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及与PI3K信号通路的关系

目的探讨miR-219a-5p对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法对人EC细胞AN3CA进行培养和质粒转染,分为对照组(正常培养)、NC组(转染NC质粒)、miR-219a-5p组(转染miR-219a-5p质粒)、miR-219a-5p组+激活剂组(转染miR-219a-5p质粒+含PI3K激活剂740 Y-P的培养基培养)。MTT、流式细胞术、划痕实验、Transwell实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、迁移能力和侵袭能力;Western Blot检测各组细胞磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达水平。对来自患者的EC和癌旁组织进行miR-219a-5p及PI3K信号通路mRNA表达的检测和验证。结果在四组细胞培养24、48、72 h时miR-219a-5p组细胞增殖活力均最低(F=18.25,16.39,18.96,P<0.01);与对照组相比,miR-219a-5p组细胞凋亡率显著增加、细胞迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01),PI3K、AKT和mTOR表达水平显著下调(P<0.01);与miR-219a-5p组相比,miR-219a-5p+激活剂组细胞上述指标均呈反向变化(P<0.05);而NC组与对照组上述指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与癌旁组织相比,癌组织miR-219a-5p表达水平显著降低,PI3K、AKT和mTOR的mRNA表达显著上调(P<0.05)。结论miR-219a-5p可以抑制EC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,其机制可能与PI3K信号通路活性的抑制相关。

二氢青蒿素调控miR-219a/MDM2信号通路介导胶质瘤细胞的增殖和凋亡

目的:探讨二氢青蒿素对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,及对微小RNA-219a(miR-219a)/鼠双微体基因2(murine doubleminute2,MDM2)信号轴的调节作用。方法:qRT-PCR法检测人正常星形胶质细胞系HA1800和不同胶质瘤细胞系U251、U87和SHG44中miR-219a相对表达;不同浓度二氢青蒿素处理U251细胞,MTT法检测细胞存活率。U251细胞分为空白对照组、miR-219a阴性对照组(转染miR-219a抑制物阴性对照质粒)、miR-219a抑制剂组(转染miR-219a抑制物)、二氢青蒿素+miR-219a抑制剂组(转染miR-219a抑制物24 h后,80μmol/L二氢青蒿素处理),qRT-PCR检测miR-219a和Mdm2 mRNA相对表达;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印迹法检测MDM2、P53、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)和Bcl-2相关X蛋白(BAX)相对表达。结果:U251、U87和SHG44细胞中miR-219a相对表达低于HA1800细胞(P<0.05);U251细胞存活率随二氢青蒿素浓度的升高明显降低(P<0.05);与空白对照组和miR-219a阴性对照组比较,miR-219a抑制剂组miR-219a相对表达、细胞凋亡率以及BAX和P53蛋白相对表达降低,Mdm2 mRNA相对表达以及MDM2和BCL-2蛋白相对表达上调(P<0.05);与miR-219a抑制剂组比较,二氢青蒿素+miR-219a抑制剂组miR-219a相对表达、细胞凋亡率以及BAX和P53蛋白相对表达升高,细胞存活率明显降低、Mdm2 mRNA相对表达以及MDM2和BCL-2蛋白相对表达明显下调(P<0.05)。结论:二氢青蒿素可抑制胶质瘤U251细胞增殖,诱导凋亡,其可能是通过调节miR-219a靶向抑制MDM2表达发挥作用。