微小RNA-221和组织金属蛋白酶抑制物-2在妊娠期高血压患者中表达

探讨微小RNA-221(miR-221)、组织金属蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)在妊娠期高血压(PIH)患者血清、胎盘组织中的表达水平及意义。方法 选取2018年7月~2020年10月于本院分娩的PIH孕产妇65例为PIH组,并纳入同期正常妊娠分娩的孕产妇65例为健康妊娠组。比较两组临床资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定孕产妇产前血清及胎盘组织miR-221、TIMP-2表达水平;Pearson法分析PIH患者血清、胎盘组织中miR-221表达水平与TIMP-2水平的相关性;利用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清、胎盘组织miR-221、TIMP-2表达水平对PIH的诊断价值。结果 PIH组收缩压、舒张压及血清、胎盘组织TIMP-2表达水平均明显高于健康妊娠组(P<0.05),血清及胎盘组织中miR-221表达水平明显低于健康妊娠组(P<0.05);PIH患者血清、胎盘组织中miR-221表达水平与TIMP-2水平均呈负相关(P<0.05);血清、胎盘组织miR-221诊断PIH的曲线下面积(AUC)分别为0.867、0.852,截断值分别为0.81、0.82;血清、胎盘组织TIMP-2诊断PIH的AUC分别为0.894、0.884,截断值分别为1.55、1.52;血清、胎盘组织中miR-221、TIMP-2联合诊断PIH的AUC分别为0.954、0.952,敏感度分别为87.7%、86.2%,对应特异性分别为90.8%、92.3%。结论 PIH患者血清、胎盘组织miR-221表达水平降低,TIMP-2表达水平升高,两者呈负相关,且miR-221、TIMP-2联合可提高对PIH的诊断效能,有利于临床诊断PIH。

血清微小RNA-221联合前列腺特异性抗原检测对前列腺癌的诊断及预后评估价值

目的探讨血清微小RNA-221(miR-221)联合前列腺特异性抗原(PSA)检测对前列腺癌的诊断价值,分析血清miR-221与前列腺癌临床病理特征及预后的关系。方法收集2019年1月至2020年6月在宜春市第三人民医院行前列腺穿刺活检术的患者60例,其中病理结果为前列腺癌(前列腺癌组)患者34例、前列腺增生(前列腺增生组)患者26例,测得2组患者的血清miR-221相对表达量及PSA水平,分析miR-221联合PSA检测对前列腺癌的诊断价值,探讨前列腺癌组血清miR-221与患者年龄、前列腺体积、临床分期、分化程度及Gleason评分等临床病理特征的关系。以前列腺癌患者的内分泌治疗去势抵抗时间为指标,分析血清miR-221与前列腺癌患者预后的关系。结果不同Gleason评分、临床分期及分化程度患者血清miR-221相对表达量比较差异有统计学意义(t=7.387,P<0.001;t=7.897,P<0.001;t=7.212,P<0.001)。血清miR-221相对表达量与患者内分泌治疗后的去势抵抗时间呈负相关(r=0.58,P<0.001)。血清miR-221联合PSA检测对前列腺癌的诊断具有一定价值,曲线下面积为0.835(95%CI:0.725~0.945,P<0.001),敏感性为0.78,特异性为0.85。结论血清miR-221联合PSA检测对前列腺癌具有一定的诊断价值,有助于提高单纯PSA检测的特异性;不同临床分期、Gleason评分及分化程度的前列腺癌患者血清miR-221相对表达量存在显著差异;miR-221高表达的前列腺癌患者内分泌治疗去势抵抗时间缩短,预示患者的预后可能较差。

老年原发性肝癌病人血清微小RNA-200a、微小RNA-221表达与介入术后感染的相关性分析

目的探究老年原发性肝癌病人血清微小RNA(miR)-200a、miR-221表达与介入术后感染的相关性。方法选取2017年5月至2020年4月武汉市汉口医院45例老年原发性肝癌介入术后感染病人作为观察组,另自同期住院的老年原发性肝癌介入术后未出现感染病人中通过SPSS 21.0统计软件采取随机数字表法抽取45例作为对照组。比较两组临床资料、血清miR-200a、miR-221表达,分析老年原发性肝癌病人介入术后感染影响因素及血清miR-200a、miR-221表达与影响因素的关系,绘制受试者操作曲线(ROC曲线),评价血清miR-200a、miR-221表达对老年原发性肝癌病人介入术后感染的预测价值,并绘制卡普兰-迈耶曲线(KM),对比不同血清miR-200a、miR-221表达病人死亡情况。结果观察组腹水、白蛋白<30 g/L、异位栓塞、部分脾脏栓塞比例高于对照组(P<0.05);术后,观察组血清miR-200a表达(2.84±0.74)低于对照组(4.69±1.14),miR-221表达(12.37±3.02)高于对照组(9.05±2.43)(P<0.05);logistic回归分析,结果显示腹水、白蛋白<30 g/L、异位栓塞、部分脾脏栓塞、术后血清miR-200a、miR-221表达均为老年原发性肝癌病人介入术后感染影响因素(P<0.05);老年原发性肝癌介入术后感染病人术后血清miR-200a表达与腹水、异位栓塞、部分脾脏栓塞呈负相关关系,与白蛋白呈正相关关系(P<0.05);术后血清miR-221表达与腹水、异位栓塞、部分脾脏栓塞呈正相关关系,与白蛋白呈负相关关系(P<0.05);绘制ROC曲线,评价血清miR-200a、miR-221表达对老年原发性肝癌病人介入术后感染的预测价值,发现,二者联合预测AUC最大,预测效能良好;以ROC曲线中截断值为界,将原发性肝癌病人分为血清miR-200a、miR-221高表达与低表达组,miR-200a高表达组术后3个月病死率低于低表达组,miR-221高表达组病死率高于低表达组(P<0.05)。结论老年原发性肝癌介入术后感染病人血清miR-200a表达明显下调,miR-221显著上调,临床检测其水平,可早期诊断感染,合理制定治疗方案,有助于改善预后。

过敏性紫癜患儿外周血B淋巴细胞中微小RNA-221与磷酸酶和张力蛋白同源物对肾损伤的预测价值

目的研究旨在探讨过敏性紫癜(Henoch-Schönlein purpura,HSP)患儿外周血B淋巴细胞中微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)与磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)对肾损伤的预测价值。方法回顾性选取2021年1—12月于徐州医科大学附属医院就诊的97例HSP患儿作为研究组,并纳入同期在徐州医科大学附属医院进行体检的100例健康儿童作为对照组。同时将97例HSP患儿根据是否有肾损伤分为肾损伤组(39例)和无肾损伤组(58例)。收集所有研究对象性别、年龄、体重指数,评估HSP患儿的症状总积分值。测定所有研究对象的外周血B淋巴细胞miR-221、PTEN mRNA表达水平和血清中的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-17表达水平。结果研究组外周血B淋巴细胞中miR-221的相对表达量显著高于对照组(t=5.214,P<0.001);研究组外周血B淋巴细胞中PTEN mRNA相对表达量显著低于对照组(t=6.352,P<0.001)。HSP患儿外周血B淋巴细胞中miR-221与PTEN相对表达量间呈显著负相关关系(r=-0.718,P<0.001);HSP患儿外周血B淋巴细胞中miR-221水平与症状总积分值、血清TNF-α、IL-6、IL-17表达水平均呈显著正相关关系(P<0.05)。PTEN表达水平与症状总积分值、血清TNF-α、IL-6、IL-17表达水平均呈显著负相关关系。肾损伤组外周血B淋巴细胞中miR-221的表达显著高于无肾损伤组(t=3.814,P<0.001)。肾损伤组外周血B淋巴细胞中PTEN mRNA的相对表达量显著低于无肾损伤组(t=4.256,P<0.001);肾损伤组症状总积分值、TNF-α、IL-6和IL-17水平均显著高于无肾损伤组(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血B淋巴细胞中miR-221和PTEN表达水平对HSP患儿肾损伤预测的曲线下面积分别为0.871(95%CI 0.795~0.947,P<0.001)和0.884(95%CI 0.817~0.951,P<0.001),灵敏度和特异度分别为74.4%和87.9%、84.6%和79.3%。结论HSP患儿外周血B淋巴细胞中miR-221表达水平升高,PTEN表达水平降低,并对HSP患儿的肾损伤有一定预测价值。

外周血微小RNA-221和D-二聚体对冠心病PCI术后支架内再狭窄的影响

目的探讨外周血微小RNA-221(miRNA-221)和D-二聚体(D-D)对冠心病PCI术后支架内再狭窄(ISR)的影响。方法选取2017年5月至2019年5月在新密市第一人民医院行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术的100例冠心病患者作为研究对象,根据术后1年内有无出现ISR分为ISR组(n=30)和无ISR组(n=70),并选取同期于我院行健康体检的50例正常人群作为对照组。收集各组外周血miRNA-221和D-D结果;绘制受试工作者曲线(ROC)探讨miRNA-221和D-D在冠心病PCI术后ISR发生中的诊断价值;先后通过单因素分析和Logistic多因素回归分析探讨导致冠心病患者PCI术后ISR的影响因素。结果ISR组、无ISR组和对照组外周血miRNA-221和D-D水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中ISR组高于无ISR组(P<0.05),无ISR组高于对照组(P<0.05)。绘制ROC曲线,外周血D-D在冠心病PCI术后ISR发生中具有诊断价值(P=0.043),曲线下面积(AUC)为0.612(95%CI:0.547~0.661),敏感度为68.4%,特异度65.5%;外周血miRNA-221在冠心病PCI术后ISR发生中具有诊断价值(P=0.021),AUC为0.721(95%CI:0.687~0.789),敏感度为72.5%,特异度76.4%;两者联合在冠心病PCI术后ISR发生中具有诊断价值(P=0.009),AUC为0.801(95%CI:0.737~0.835),敏感度和特异度明显提高,分别为83.5%和86.4%。ISR组和无ISR组在性别、年龄、行PCI原因、血管狭窄个数、狭窄部位、支架数量、TC、TG和HDL-C上比较,差异无统计学意义(P>0.05);但ISR组支架长度、LDL-C、HCY和PCI术后未规范用药者高于无ISR组,ISR组支架直径低于无ISR组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。将“miRNA-221和D-D”和“2.3中P<0.05”者纳入Logistic多因素回归分析,发现miRNA-221、HCY、支架直径和PCI术后规范用药情况均是导致冠心病PCI术后ISR发生的重要影响因素(P<0.05)。结论外周血miRNA-221和D-D在冠心病PCI术后支架内ISR患者中明显升高,两者联合可提高ISR的诊断效能,其中miRNA-221也是导致ISR发生的重要危险因素,值得关注。

冠心病患者血浆微小RNA-221和微小RNA-222与侧支循环形成的相关性研究

目的观察冠心病患者血浆中微小RNA-221和微小RNA-222水平与冠状动脉侧支循环形成的关系。方法连续入选在首都医科大学附属北京安贞医院心内科接受选择性冠状动脉造影检查，证实左前降支、左回旋支或右冠状动脉中单支血管狭窄≥95％的冠心病患者120例，根据Rentrop分级将患者分成2组：侧支良好组（Rentropf〉2级）（n=64），侧支不良组（Rentrop≤1级）（n=56）。采用实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血浆微小RNA-221和微小RNA-222的表达水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测札清中c-kit和内皮源性-氧化氮合酶（eNOS）的浓度。采用Pearson相关分析和Logistic回归进行相关性分析。，结果侧支不良组血浆中微小RNA-221和微小RNA-222水平明显高于侧支良好组（0．25±0．04比0．13±0．03；0．21±0．06比0．12±0．02，P=0．001和P=0．003）。侧支不良组血清c-kit和eNOS水平低于侧支良好组[（3．8±1．3）μg／L比（6．2±2．3）μg／L；（18．7±5．5）μg/L比（24．9±8．0）μg／L，二者均P〈0．05]。侧支良好组和侧支不良组血液中微小tlNA-22l和微小RNA-222与c-kit和eNOS明显负相关[（侧支良好组微小RNA-221与c-kit：r=-0．581，P=0．012；微小RNA-221与eNOS：r=-0．534，P=0．019；侧支不良组微小RNA-221与c-kit：r=-0．653，P=0．021；微小RNA-221与eNOS：r=-0．061，P=0．028）、（侧支良好组微小RNA-222与c-kit：r=-0．495，P=0．004；微小RNA-222与eNOS：r=-0．483，P：0．022；侧支不良组侧支良好组微小RNA-222与c-kit：r=-0．638，P=0．035；微小ItNA-222与eNOS：r=-0．623，P=0．015]，而健康对照组中微小RNA-221／微小RNA-222与c-kit和eNOS没有明显相关性（微小IINA-221与c-kjt：r=-0．075，P=0．676；微小RNA-222与c-kit：r=-0．058，P=0．722；微小RNA-221与eNOS：r=-0．084，P=0．342；微小RNA-222与eNOS：r=-0．045，P=0．812）．，微小RNA-221和微小RNA-222是冠状动脉侧支循环形成的独立预测因子[比值比（OR）=2．246，P=0．012；OR=2．373，P=0．003）]。结论血浆微小RNA-221和微小RNA-222水平与冠状动脉侧支循环形成明显负相关，是冠状动脉侧支循环形成的独立预测因素。

微小RNA-221作用蓬乱蛋白2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能研究

目的:探讨微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)在前列腺癌细胞系中的表达,对神经内分泌样(NE)转化及其侵袭功能的影响。方法:以Northern blot检测雄激素依赖性前列腺癌(LNCa P)细胞系,雄激素非依赖性前列腺癌(LNCa P-AI)细胞系中miRNA的表达;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCa P和LNCa P-AI细胞系中miR-221的作用;细胞增殖检测法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;定量逆转录聚合酶链反应和Western blot检测转染细胞中神经元特异性烯醇化酶及蓬乱蛋白2(DVL2)表达的变化。结果:与LNCa P相比,miR-221在LNCa P-AI中明显高表达。通过转染使miR-221在LNCa P中高表达可促进细胞的神经元特异性烯醇酶的表达,加速NE转化。而在LNCa P-AI中下调miR-221水平可增强靶基因DVL2的表达,并增强LNCa P-AI的迁移和侵袭能力(P<0.01)。结论:LNCa P和LNCa P-AI中miR-221表达有差异。miR-221可促进前列腺癌细胞的NE转化,可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因。MiR-221可通过作用DVL2调节前列腺癌细胞的转移和侵袭。

血清微小RNA-221、微小RNA-214在帕金森病中的表达及其与帕金森综合评分的相关性研究

目的探究血清微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)和血清微小RNA-214(micro RNA-214,miR-214)在帕金森病(parkinson disease,PD)中的表达及其与帕金森综合评分量表(unified parkinson disease rating scale,UPDRS)评分的相关性。方法选取2016年7月至2019年7月海南省海口市第四人民医院收治的154例PD患者和120例同期健康体检者为研究对象,采集一般资料并检测血清miR-221和miR-214表达水平,比较两组各项指标差异,分析血清miR-221和miR-214表达水平与PD患者UPDRS评分和Hoehn-Yahr(H-Y)分期相关性,并研究两者对PD诊断的价值。结果PD患者血清miR-221和miR-214表达水平明显高于对照组(P<0.05);随着H-Y分期增加,血清miR-221和miR-214水平明显升高,各组间差异均有显著性(P<0.05);血清miR-221和miR-214表达水平与UPDRS评分和H-Y分期均有明显相关性(P<0.05);血清miR-221和miR-214用于PD诊断的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.896和0.910(P>0.05),且miR-221表达水平>28.61和miR-214表达水平>29.17时灵敏度分别为80.52%和68.83%,特异度分别为85.83%和97.50%,两者联合检测诊断灵敏度和特异度分别为89.61%和93.33%,AUC为0.967,较单独诊断明显升高(P<0.05)。结论PD患者血清miR-221和miR-214表达水平明显下调,且与患者UPDRS评分和H-Y分期具有明显相关性,两者对PD诊断均具有较高价值,且联合检测可进一步提升诊断准确率。

微小RNA-221靶向组织金属蛋白酶抑制因子2介导Akt/mTOR信号通路对非小细胞肺癌移植瘤小鼠模型的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-221对非小细胞肺癌(NSCLC)移植瘤模型小鼠肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响,初步分析其通过靶向组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)调控Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对NSCLC模型小鼠肿瘤细胞可能的作用机制。方法 将A549细胞分为对照组、模拟物(mimic)组、TIMP-2组和Mimic+TIMP-2组。Mimic组和TIMP-2组分别转染miR-221 mimic以及TIMP-2过表达质粒。Mimic+TIMP-2组同时转染miR-221 mimic和TIMP-2过表达质粒。对照组转染等量的阴性对照质粒。转染后,将各组的细胞在左前肢经皮下注射,从而构建相应的4组NSCLC小鼠模型。通过免疫组织化学染色检测增殖蛋白(Ki67)水平以测定其对细胞增殖的影响。通过Western blotting检测和比较各组基质金属蛋白酶2(MMP-2)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的蛋白表达评估细胞的迁移和侵袭能力。通过Real-time PCR或Western blotting检测骨髓和肿瘤组织中miR-221、TIMP-2和Akt/mTOR通路的水平。结果 当共同转染野生型(WT)-TIMP-2和miR-221 mimic后,细胞中的相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与对照组比较,mimic组的肿瘤组织质量、体积、Ki67、MMP-2和N-cadherin表达水平,miR-221和Akt/mTOR通路水平显著升高,而TIMP-2 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05)。与对照组比较,TIMP-2组的TIMP-2 mRNA和蛋白水平显著升高,而其余指标显著降低(P<0.05)。Mimic+TIMP-2组的肿瘤组织质量、体积、Ki67、MMP-2和N-cadherin蛋白表达水平及miR-221、Akt/mTOR通路水平显著低于mimic组且显著高于TIMP-2组,而TIMP-2 mRNA和蛋白水平显著高于mimic组且显著低于TIMP-2组(P<0.05)。结论 MiR-221可能通过靶向抑制TIMP-2蛋白介导Akt/mTOR信号途径,促进NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力。

微小RNA-221-3p通过DDIT4抑制镉诱导的TM3细胞凋亡机制

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)中的miR-221-3p靶向DNA损伤诱导转录本4(DNA-damage-inducible transcript 4,DDIT4)对镉诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响和机制。方法小鼠睾丸间质细胞(mouse testicular stromal cells,TM3)经不同浓度的镉(0、10、20、30和40μmol/L)染毒后,使用CCK-8检测细胞活性。提取镉染毒TM3细胞的总RNA,以差异倍数(fold change,FC)>1.2,P<0.05作为标准筛选显著差异表达miRNA。TM3细胞分为空白对照组、阴性对照组、镉染毒组(CdCl2,20μmol/L)和镉染毒+miR-221-3p模拟物组,其中对镉染毒+miR-221-3p模拟物组,先将miR-221-3p模拟物转染进TM3细胞,再联合镉染毒24 h。Hoechst染色检测细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡率,实时荧光定量PCR和Western blot免疫印迹法检测DDIT4表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-221-3p与DDIT4的结合,生物信息学分析DDIT4的功能及与细胞凋亡的关联,过表达miR-221-3p后观察B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)的表达水平。结果镉染毒可降低TM3细胞活性且存在剂量-效应关系。细胞形态学发现,与对照组相比,镉染毒组细胞皱缩、细胞核浓染,凋亡率升至19.66%±0.45%(P<0.01);与镉染毒组相比,镉染毒+miR-221-3p模拟物组正常形态细胞增多,凋亡率降至13.76%±0.37%(P<0.05)。镉染毒组miR-221-3p表达水平下调(P<0.01),DDIT4表达水平上调(P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶报告分析发现DDIT4为miR-221-3p的靶基因之一。与镉染毒组相比,镉染毒+miR-221-3p模拟物组DDIT4表达水平下调(P<0.05),Bcl-2/BAX比值由0.54±0.03增加为0.71±0.04。结论miR-221-3p通过靶向DDIT4进而抑制镉诱导的TM3细胞凋亡。

微小RNA-221微小RNA-34a及微小RNA-3614-5p在妊娠期肝内胆汁淤积症中的表达及相关性

目的分析微小RNA-221(miR-221)、微小RNA-34a(miR-34a)及微小RNA-3614-5p(miR-3614-5p)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)中的表达及相关性。方法选取2019年12月—2020年12月厦门大学附属第一医院收治的ICP患者144例为ICP组,另选取同期在该院正常产检的产妇95例为正常组。检测两组研究对象miR-221、miR-34a及miR-3614-5p水平,分析其在ICP中的表达及相关性。结果ICP组外周血单个核细胞、胎盘组织中miR-221、miR-34a及miR-3614-5p相对表达量[轻度组:外周血单个核细胞(1.13±0.26)、(1.26±0.29)及(1.30±0.34),胎盘组织(2.01±0.29)、(1.98±0.28)及(2.13±0.38);重度组:外周血单个核细胞(2.86±0.54)、(2.71±0.46)及(2.35±0.42),胎盘组织(3.24±0.68)、(3.35±0.59)及(3.58±0.64)]均高于正常组[外周血单个核细胞(0.67±0.21)、(0.52±0.19)及(0.89±0.22),胎盘组织(1.15±0.27)、(1.29±0.29)及(1.22±0.21)],差异均有统计学意义(F=53.921、62.601、43.230、40.713、44.169及50.312,均P<0.05)。随着ICP组患者疾病程度的加深,miR-221、miR-34a及miR-3614-5p相对表达量升高加剧,差异均有统计学意义(均P<0.05)。logistic回归模型分析显示,miR-221、miR-34a及miR-3614-5p为ICP发生的影响因素(均P<0.05)。相关性分析结果显示,miR-221与miR-34a呈正相关(r=0.174,P<0.05),miR-221与miR-3614-5p呈正相关关系(r=0.243,P<0.05),miR-34a与miR-3614-5p呈正相关(r=0.199,P<0.05)。结论miR-221、miR-34a及miR-3614-5p在ICP中表达升高,随着患者疾病严重程度加深其表达升高加剧,且三者呈正相关,可能共同参与ICP的发生、发展,可用于临床ICP的诊断。

微小RNA-221对结直肠癌中CDKN1C/P57表达调控的研究

目的 观察结直肠癌组织和细胞中微小RNA-221（miR-221）和CDKN1C/P57表达情况,并探讨特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖、凋亡及CDKN1C/P57表达的影响.方法 应用实时荧光定量PCR检测34例结直肠癌组织和相应癌旁组织、以及4种人结直肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miR-221表达情况;采用半定量RT-PCR和Western-blot法分析CDKN1C/P57mRNA及蛋白表达情况;将miR-221和anti-miR-221寡核苷酸通过脂质体转染Caco2细胞系,通过MTT法及流式细胞仪观察细胞的增殖及凋亡情况.结果 miR-221在结直肠癌组织中的相对表达量为2.041±1.401,明显高于癌旁组织（0.806±0.341,P＜0.01）;同样,miR-221在4种人结直肠癌细胞系中的表达亦高于正常对照细胞.CDKN1C/P57 mRNA水平在结直肠癌与癌旁组织中差异并不显著;但其蛋白相对表达量结直肠癌组织显著高于癌旁组织（3.019±1.708比0.972±0.316,P＜0.01）.癌细胞转染anti-miR-221后,CDKN1C/P57蛋白表达上调,细胞增殖受抑,细胞凋亡率增高,G0/G1期细胞比例增加同时S期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C/P57蛋白表达水平下降,从而促进结直肠癌发生发展;anti-miR-221可通过抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,以抑制结直肠癌细胞生长;miR-221有可能成为结直肠癌生物治疗的新靶点.

微小RNA-221靶向HMBOX1对胃癌细胞生物学功能影响

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-221p的靶点及其对胃癌细胞生物学功能的影响。方法通过生物信息学预测miR-221的可能靶点,并构建plenti-miR-221过表达载体,包装慢病毒,通过感染高转移胃癌细胞GC9811P建立miR-221稳定表达细胞株(观察组),同时建立对照细胞株(对照组)。采用Western blot检测对照组和观察组细胞miR-221靶基因蛋白表达水平,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测对照组和观察组细胞增殖能力,采用Transwell检测对照组和观察组细胞侵袭能力,采用流式细胞术分析对照组和观察组细胞的凋亡水平,采用体内移植瘤实验分析对照组和观察组细胞肿瘤生长以及转移。 结果生物信息学分析显示miR-221可能的靶基因是HMBOX1。与对照组(1.12±0.23)比较,观察组细胞HMBOX1蛋白表达水平(0.32±0.12)显著下调,差异有统计学意义(t=3.976,P<0.01)。与对照组比较,观察组细胞增殖能力明显增加,差异有统计学意义(F=3.102,P<0.01)。Transwell定量分析显示观察组细胞侵袭能力[(125.43±15.32)个]显著高于对照组细胞侵袭能力[(57.40±9.81)个],差异有统计学意义(t=3.190,P<0.01)。观察组细胞凋亡水平[(12.78±3.56)%]明显低于对照组细胞凋亡水平[(25.43±7.54)%],差异有统计学意义(t=2.918,P<0.01)。观察组细胞在裸鼠体内生长速度明显高于对照组,差异有统计学意义(F=3.012,P<0.01)。观察组体内成瘤后腹膜内转移病灶数量(15.26±3.29)明显高于对照组小鼠(6.19±2.01),差异有统计学意义(t=2.991,P<0.01)。结论 miR-221可靶向作用于HMBOX1,促进肿瘤细胞增殖和侵袭,降低细胞凋亡,进而促进肿瘤发生和转移。

恶性胶质瘤患者预后与微小RNA-221和微小RNA-222表达的关系

目的探讨微小RNA（miRNA）-221和miRNA-222表达与胶质瘤病理分级及胶质瘤患者预后的关系。方法收集手术切除的胶质瘤标本120例，病理学分级I级19例、Ⅱ级31例、Ⅲ级38例、Ⅳ级32例；采用实时聚合酶链反应（Real—timePCR）及荧光原位杂交（FISH）法检测miRNA-221和miRNA-222的表达。对进行标准治疗的胶质瘤患者进行4年随访。结果肿瘤病理级别随miRNA-221和miRNA-222表达的升高而增加，组间比较差异有统计学意义（x2=43．53，P〈0．01）；生存时间随miRNA-221和miRNA-222表达升高而减少，各组间差异有统计学意义（x2=55．63，P〈0．01）。结论miRNA-221和miRNA-222的表达与胶质瘤的病理学分级及预后密切相关，可以作为独立的预后因素。

微小RNA-221靶向凋亡蛋白酶活化因子1对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-221对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法选取2015年6月到2018年9月期间南阳市中心医院和河南中医药大学第一附属医院手术切除的脑胶质瘤和相应的癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织中miR-221的表达水平。在脑胶质瘤细胞株U251建立miR-221沉默细胞株(miR-221沉默组)和对照细胞株(miR-control组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色测定miR-control组和miR-221沉默组细胞的增殖能力。体外移植瘤实验测定两组细胞在裸鼠体内的生长速度。采用凋亡检测试剂盒测定两组细胞的凋亡水平。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-221的靶基因。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.21±0.16)比较,脑胶质瘤组织中miR-221表达水平(3.01±0.19)显著增加,差异有统计学意义(t=2.991,P<0.05)。与miR-control组细胞(1.89±0.22)比较,miR-221沉默组细胞增殖能力(1.16±0.18)明显下降,差异有统计学意义(F=2.618,P<0.05)。与miR-control组细胞EdU染色阳性率(56.33±9.18)%比较,miR-221沉默组细胞EdU染色阳性率(22.12±7.10)%显著下降,差异有统计学意义(F=2.418,P<0.05)。miR-control组细胞在裸鼠体内生长速度明显高于miR-221沉默组细胞,差异有统计学意义(F=2.011,P<0.05)。与miR-control组细胞凋亡率(3.17±0.78)%比较,miR-221沉默组细胞凋亡水平(21.33±3.09)%明显增加,差异有统计学意义(t=3.712,P<0.05)。生物信息学分析显示凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)是miR-221的靶基因。与miR-control组(0.78±0.13)比较,miR-221沉默组细胞APAF1蛋白表达水平(2.39±4.91)显著增加,差异有统计学意义(t=3.991,P<0.05)。结论miR-221通过靶向凋亡激活蛋白APAF1,调节脑胶质瘤细胞的增殖和凋亡。

微小RNA-221对HepG2细胞增殖及其凋亡的影响

目的探讨微小RNA-221（miR-221）对肝癌细胞株HepG2细胞增殖与凋亡的影响。方法将miR-221阻遏物及模拟物转染至HepG2后，用实时荧光定量RT-PCR检测miR-221的表达水平；用细胞增殖试剂盒、Hoechst 33342及碘化丙啶（PI）双重染色、流式细胞仪及caspase3／7活性试剂盒检测HepG2细胞增殖与凋亡情况。对数据进行多样本的单因素方差分析，两两比较采用LSD法；相关性比较用Pearson检验。结果RT-PCR结果显示，转染miR-221阻遏物后其表达受到抑制，而转染miR-221模拟物可促进其表达。细胞增殖试剂盒及Hoechst 33342／PI染色结果显示，48h后miR-221阻遏物明显抑制HepG2细胞增殖（P〈0．05），而miR-221模拟物促进HepG2细胞增殖（P〈0．05），两种方法结果呈正相关（r=0．993，P〈0．01）。流式细胞仪检测细胞周期显示，miR-221模拟物组G1期细胞比例（47．67％±1．53％）明显低于空白对照组（59．00％±1．00％）及阴性对照组（58．00％±1．00％，F=81．77，P〈0．01）；S期细胞比例（20．33％±1．15％）明显高于空白对照组（11．00％±1．00％）及阴性对照组（12．00％±1．00％，F=70．90，P〈0．01）。Hoechst 33342／PI染色、流式细胞仪膜联蛋白V凋亡试剂盒检测均显示，转染miR-221阻遏物48h后，细胞凋亡和坏死增加（P〈0．05），差异有统计学意义。Caspase-3／7试剂盒检测caspase-3／7活性变化结果显示，转染miR-221阻遏物24h后，细胞caspase3／7涪陡明显增高（P〈0．05），差异有统计学意义。结论miR-221可促进肝癌细胞生长增殖，抑制miR-221表达可诱导细胞凋亡。miR-221有望成为治疗肝癌新的分子靶点之一。

急性心肌梗死大鼠中微小RNA-221的表达及相关机制

目的探讨急性心肌梗死(AMI)大鼠中微小RNA(miRNA,miR)-221的表达及相关机制。方法通过冠状动脉左前降支结扎大鼠来建立AMI模型,将构建成功的36只AMI大鼠随机分为AMI组、对照组及抑制组,另外设立假手术组采用冠状动脉左前降支穿线不结扎,每组12只。其中抑制组及对照组分别采用心肌组织局部注射慢病毒转染的miR-221 inhibitor及miR-221阴性对照(NC),AMI组和假手术组每天给予等量生理盐水。测定每组大鼠miR-221表达、心肌凋亡指数(AI)、天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3及Caspase-9活性、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂p27、p57蛋白表达及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)信号通路激活情况,采用t检验分析组间差异。结果与AMI组及对照组比较,抑制组中AI(t=5.874,P<0.01)及Caspase-3(t=6.219,P<0.01)及Caspase-9(t=5.942,P<0.01)活性显著降低,差异有统计学意义,bax(t=8.512,P<0.01)、p27(t=5.878,P<0.01)、p57(t=11.244,P<0.01)及PTEN(t=6.063,P<0.01)表达量下调,差异有统计学意义,bcl-2(t=5.971,P<0.01)及p-Akt(t=9.140,P<0.01)表达量上调,差异有统计学意义。结论miR-221低表达能显著抑制AMI大鼠心肌损伤,与调控PTEN/Akt信号通路有关。

微小RNA-221对肝细胞癌第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因的调节及其对生物学特性的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-221在正常肝细胞和肝癌细胞株中的表达，检测miR-221在正常肝组织和肝癌组织中的表达，并干预肝癌细胞中miR-221水平探讨其对第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）的调控和对肝癌细胞生物学特性的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应法检测miR-221在正常肝细胞和肝癌细胞株中的表达，收集28例伴有门静脉癌栓的肝细胞癌手术患者正常肝组织、癌栓、癌组织和癌旁组织并检测其表达；采用miR-221抑制剂（inhibitor）和拟似物（mimic）靶向干预miR-221在肝癌细胞中的表达，Westernblot法检测其对PTEN的调控，以及细胞计数试剂盒（CCK-8）法、流式细胞仪和Transwell法检测其对肝癌细胞的增殖、凋亡和迁移的影响。结果肝癌HepG2、BEL-7402和Hep3B细胞的miR-221相对表达量分别为0．783±0．021、0．954±0．021、0．837±0．026，显著高于正常肝102细胞的0．081±0．007（P〈0．05），且肝癌组织和癌栓的相对表达量为0．897±0．048、0．984±0．048，亦显著高于正常肝组织和癌旁组织的0．067±0．007、0．063±0．008（P〈0．05），而肝癌细胞的PTEN的表达水平显著低于正常肝细胞（P〈0．05），且肝癌组织和癌栓亦低于正常肝细胞（P〈0．05）；与对照组比较，miR-221inhibitor和mimic转染肝癌细胞后，PTEN表达水平分别上调和下调263％和32％（P〈0．05），转染miR-221inhibitor肝癌细胞的增殖和迁移活性降低，凋亡率增加（P〈0．05），而转染miR-221mimie肝癌细胞则增殖和迁移活性增加，凋亡率降低（P〈0．05）。结论肝癌细胞和肝癌组织、癌栓中miR-221呈高表达，降低其水平能上调VrEN的表达，有效降低细胞增殖和迁移活性，诱导细胞凋亡，是肝细胞癌的潜在治疗靶点。

肝素结合性表皮生长因子样生长因子对大鼠肝星状细胞-T6表达微小RNA-221、微小RNA-222的影响

目的观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）激活大鼠肝星状细胞（HSC—T6）过程中微小RNA（miRNA，miR）-221、miR-222表达的变化，探讨miR-221／222在肝星形细胞（HSC）活化过程中的作用。方法培养、接种HSC—T6，分别以HB—EGF和细胞外信号调节激酶（ERK）特异性抑制剂PD98059＋HB—EGF共处理HSC—T624、48h，采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）法检测miR-221／222表达水平。结果对照组、HB—EGF组及共处理组（48h）miR-221表达水平分别为0．90±0．14、1．08±0．09和0．71±0．14，miR-222表达水平分别为0．82±0．10、1．04±0．09和0．68±0．16。说明HB—EGF可促进miR-221、miR-222的表达，ERK抑制剂可使miR-221、miR-222表达下降（P〈0．01）。结论HB—EGF通过激活HSC—T6的Ras／ERK信号通路，继而促进miR-221、miR-222的表达，参与HSC活化的调控。

miRNA-221-3p和IGF-1在妊娠期糖尿病患者血清中的表达及与妊娠结局的相关性

目的探究微小RNA-221-3p(miR-221-3p)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中的表达水平及其与妊娠结局的关系。方法收集2020年5月至2022年5月于濮阳市妇幼保健院足月分娩的血糖控制良好的80例GDM患者为GDM1组,血糖控制不良的80例GDM患者为GDM2组,另选取同期足月分娩的糖代谢正常的80例健康孕妇为健康人对照组。qRT-PCR和ELISA法检测各组血清miR-221-3p、IGF-1的表达水平;Pearson法分析GDM患者血清miR-221-3p、IGF-1水平的相关性以及二者与稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)的相关性;进一步分析GDM患者血清miR-221-3p、IGF-1表达水平与妊娠结局的关系。结果GDM1组、GDM2组患者血清IGF-1、FBG、FINS、HOMA-IR水平及产后出血、羊水过多、胎膜早破、巨大儿、胎儿窘迫发生率显著高于健康人对照组(P<0.05),而血清miR-221-3p的表达水平低于健康人对照组(P<0.05);且GDM2组患者除血清miR-221-3p水平低于GDM1组(P<0.05)外,其余上述指标高于GDM1组。GDM1组和GDM2组患者血清miR-221-3p水平与IGF-1呈负相关(P<0.001),血清FBG、FINS、HOMA-IR与miR-221-3p水平均呈负相关(P均<0.001),而与IGF-1水平呈正相关(P均<0.001)。与未发生产后出血、羊水过多、胎膜早破、巨大儿、胎儿窘迫的GDM患者相比,发生以上不良妊娠结局的GDM患者血清miR-221-3p的表达水平降低(P<0.001),而IGF-1的表达水平升高(P<0.001)。结论GDM患者血清miR-221-3p水平较低,IGF-1水平升高,且与不良妊娠结局密切相关。