微小RNA-25在肺癌患者中的临床诊断和应用价值

目的探索血清微小RNA-25(miRNA-25)在肺癌中的表达差异,研究其在肺癌早期诊断中的应用价值,为肺癌的早期诊断提供一定的参考依据。方法收集160例肺部疾病患者资料,根据患者的影像学检查和病理学检查等资料确诊为肺癌的患者共80例作为肺癌组,同时选取同期收治的肺部良性疾病患者80例作为对照组。通过医院门诊或住院系统收集研究对象的年龄、性别、体重指数(BMI)等一般人口学特征资料,并对所有患者进行实验室检测miRNA-25。采用ROC曲线对资料进行数据分析。结果对于对照组和肺癌组miRNA-25表达的ROC分析,截断点为4.12,曲线下面积为0.742,灵敏度为62.2%,特异度为89.8%;对于对照组和非小细胞肺癌组,截断点为2.21,曲线下面积为0.721,灵敏度为66.7%,特异度为72.8%;对于对照组和小细胞肺癌组,截断点为5.46,曲线下面积为0.789,灵敏度为64.5%,特异度为94.2%。结论 miRNA-25在肺癌患者中的表达相比肺部良性疾病患者有明显的升高,尤其是在小细胞肺癌的表达中,对于肺癌患者的早期发现和预后治疗具有重要的参考价值。

血浆微小RNA-21和微小RNA-25水平对食管鳞癌的诊断价值研究

目的探讨血浆微小RNA-21(miR-21)和微小RNA-25(miR-25)水平诊断食管鳞癌(ESCC)的可行性及临床价值。方法收集2016年6月至2017年12月的56例ESCC患者和49例良性食管疾病患者的血浆标本,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测两组的血浆miR-21和miR-25水平。分析血浆miR-21和miR-25水平与ESCC临床病理特征(性别、年龄、吸烟史、分化程度和TNM分期)的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价血浆miR-21和miR-25对ESCC的诊断效能。结果 ESCC患者血浆的中位miR-21水平为10.375,中位miR-25水平为9.152,均高于良性食管疾病患者的1.236和3.002,差异有统计学意义(P<0.05)。ESCC患者的血浆miR-21水平与TNM分期有关(P=0.003),血浆miR-25水平与分化程度有关(P=0.001)。56例ESCC患者的血浆miR-21和miR-25水平无相关性(r=0.185,P=0.215)。ROC曲线显示miR-21和miR-25用于诊断ESCC的临界值分别为8.326和6.952,ROC曲线下面积为0.857和0.808,敏感度分别为80.4%和78.6%,特异度分别为87.8%和81.6%,miR-21和miR-25联合诊断的敏感度和特异度分别为87.5%和75.5%。结论 ESCC患者血浆miR-21和miR-25水平升高,且两者诊断ESCC有较好效能,有望成为ESCC诊断的新标志物。

血清微小RNA-25表达与急性脑梗死恢复期血管内皮功能及神经功能障碍的相关性

目的 分析血清微小RNA(miR)-25表达与急性脑梗死恢复期血管内皮功能及神经功能障碍的相关性。方法 选取本院收治的272例急性脑梗死患者为疾病组(其中急性期组和恢复期组各136例),同期选取129例健康体检者为对照组。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将恢复期组患者再分为轻度组(63例)、中度组(42例)和重度组(31例)。比较各组患者miR-25表达水平和血管内皮功能相关指标。采用Pearson相关分析评估miR-25表达水平与血管内皮功能及神经功能障碍的关系。结果 急性期组、恢复期组和对照组受试者血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素-1(ET-1)水平依次降低,一氧化氮(NO)、血清miR-25表达水平依次升高(P<0.05)。急性期组患者NIHSS评分高于恢复期组(P<0.05)。轻度组、中度组和重度组患者血清miR-25表达水平依次降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,疾病恢复期患者血清miR-25表达水平与VEGF、ET-1、NIHSS评分均呈负相关,与NO成正相关(P<0.05)。结论 miR-25在急性脑梗死恢复期患者机体内异常低表达,并与患者血管内皮功能和神经功能均呈正相关,对急性脑梗死患者病情严重程度和预后评估具有一定指导意义。

微小RNA-25靶向大型肿瘤抑制因子2对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-25靶向大型肿瘤抑制因子2（LATS2）对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法选取人结肠癌细胞HT29，转染Neg-miR、pre-miR-25、anti-miR-25，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测miR-25表达，Western blot检测LATS2蛋白表达，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验验证miR-25与LATS2的靶向关系。结果与Neg-miR组比较，pre-miR-25组miR-25表达上调（0.37±0.08比0.78±0.14）（t=3.871，P=0.028），LATS2蛋白表达降低（157.32±32.11比56.47±11.35） （t=4.012，P=0.026）；anti-miR-25组miR-25表达降低（0.37±0.08比0.11±0.04）（t=4.275，P=0.025），LATS2蛋白表达增高（157.32±32.11比382.74±55.28）（t=4.663，P=0.021）。与Neg-miR组比较，pre-miR-25组细胞增殖活性增高（0.37±0.04比0.48±0.02，0.62±0.05比0.90±0.02，0.89±0.03比1.10±0.04）（t=2.998、3.372、3.012，P=0.045、0.035、0.041），同时凋亡率降低[（8.52±1.11）%比（2.94±0.81）%，t=4.425，P=0.018]；anti-miR-25组细胞增殖活性降低（0.37±0.04比0.30±0.03，0.62±0.05比0.42±0.04，0.89±0.03比0.50±0.05）（t=2.895、3.237、4.002，P=0.048、0.038、0.021），同时凋亡率降低[（8.52±1.11）%比（15.01±2.53）%，t=4.518，P=0.016]。miRNA靶基因预测软件检测结果显示，miR-25能作用于LATS2 3’端非编码区域（3’UTR）。与转染Neg-miR比较，共转染pre-miR-25与LATS2-wt可使HT29荧光素酶活性降低（t=3.285，P=0.033）。结论miR-25可通过靶向LATS2调控结肠癌细胞增殖及凋亡。

microRNA25、CA199联合CT在胰腺癌诊断及预后中的价值分析

目的分析沉默微小RNA-25(microRNA25)、糖类抗原199(Carbohydrate antigen199,CA199)联合电子计算机断层扫描(Computer Tomography,CT)在胰腺癌诊断及预后中的价值。方法选取2019年6月至2022年6月中国中医科学院广安门医院收治的215例疑似胰腺癌患者为研究对象,对患者进行CT检查,确诊为胰腺癌的110例患者为观察组,剩余105例非胰腺癌者为对照组。结果与对照组相比,观察组CT参数血流量(blood flow,BF)、血流血容量(Blood bleeding volume,BV)、血流容积(Blood flow volume,PBV)下降,达峰时间(time to peak,TTP)上升,差异具有统计学意义(P<0.05);与胰腺癌Ⅰ级患者相比,Ⅱ级、Ⅲ级患者CT参数BF、BV、PBV下降,TTP上升,差异具有统计学意义(P<0.05);与Ⅱ级患者相比,Ⅲ级患者CT参数BF、BV、PBV下降,TTP上升,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,观察组microRNA25、CA199表达上升,差异具有统计学意义(P<0.05);与胰腺癌Ⅰ级患者相比,Ⅱ级、Ⅲ级患者microRNA25、CA199表达水平上升,且Ⅲ级患者microRNA25、CA199表达水平最高(P<0.05);与预后良好患者相比,预后不良患者microRNA25、CA199水平上升、TTP升高,BF、BV、PBV下降(P<0.05)。结论CT参数在胰腺癌的诊断中具有较强的参考价值,且和microRNA25、CA199有着一定的相关性,可用于对不同分期的胰腺癌患者进行对应性治疗。

慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞微小RNA-25的表达水平及其意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞微小RNA(miR)-25的表达水平及其意义。方法纳入于我院就诊的COPD患者127例,其中稳定期患者65例作为稳定期组,急性加重期患者62例作为急性加重期组,同时选取50例健康者作为对照组。检测所有受试者的肺功能和外周血单个核细胞miR-25表达水平并进行比较。采用Pearson相关分析评估COPD患者外周血单个核细胞miR-25与肺功能指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血单个核细胞miR-25诊断AECOPD的价值。结果3组患者第1秒用力呼气容积(FEV,)、用力肺活量(FVC)及FEV1/FVC比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。急性加重期组和稳定期组FEV1、FVC、FEV1/FVC及外周血单个核细胞miR-25表达水平低于对照组(P<0.05);急性加重期组FEV1、FVC、FEV/FVC外周血单个核细胞miR-25表达水平低于稳定期组(P<0.05).Pearson相关分析结果显示,急性加重期组患者外周血单个核细胞miR-25与FEV]呈正相关(P<0.05),而与FVC、FEV1/FVC无相关性(P>0.05)。稳定期组患者外周血单个核细胞miR-25与FEV1、FVC、FEV1/FVC均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血单个核细胞miR-25诊断COPD急性加重期(AECOPD)的ROC曲线下面积(AUC)为0.810(95%CI0.722~0.898),敏感度和特异度分别为91.2%和71.4%,约登指数为0.63。结论COPD患者外周血单个核细胞miR-25水平低于健康者,且其与肺功能指标相关,有望成为AECOPD患者早期诊断的参考指标。

敲低微小RNA-25表达对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响

目的探讨敲低微小RNA-25(miRNA-25)表达对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响。方法将预处理的H9C2心肌细胞分为4组:空白对照组、模型组、阴性组和敲低组。敲低组转染miRNA-25-shRNA干扰质粒0.1μL,空载组转染等量无义干扰序列,空白对照组和模型组分别加入等体积生理盐水。预处理后,除空白对照组外,其他3组细胞构建缺氧/复氧细胞模型。以逆转录-PCR法检测细胞miRNA-25基因表达水平,酶联免疫吸附实验检测培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果空白对照组、模型组、阴性组和敲低组的miRNA-25基因表达水平分别为1.31±0.42,0.82±0.33,0.75±0.24和0.27±0.05;这4组的LDH表达水平分别为(49.73±12.54),(109.78±30.74),(112.85±36.44)和(124.63±40.75)U·L^(-1);这4组于72 h的细胞存活率分别为(92.73±6.18)%,(31.82±14.56)%,(29.17±13.38)%和(15.45±6.24)%;这4组的细胞凋亡率分别为(2.37±0.58)%,(46.52±13.56)%,(43.27±8.95)%和(72.78±10.62)%。上述指标:模型组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);阴性组、敲低组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);敲低组与阴性组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论敲低miRNA-25表达加剧缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤,可能与加剧细胞炎症反应有关。

miR-25靶向DKK3基因对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨miR-25靶向调控Dickkopf相关蛋白3(DKK3)基因对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其作用机制。方法:选取确诊并进行前列腺癌根治手术治疗的前列腺癌病人组织标本24例为研究对象,选择同期因良性前列腺增生行电切手术病人组织标本24例为对照组,采用HE染色观察2组前列腺组织形态学变化,实时定量PCR检测组织中miR-25的相对表达水平,免疫组织化学法检测组织中DKK3表达情况。体外培养人前列腺癌PC-3细胞,通过Lipofectamine 2000法将miR-25 NC(NC组)、miR-25 inhibitors(miR-25 inhibitors组)转染入PC-3细胞中,通过MTT实验检测miR-25对细胞增殖的影响,通过Transwell实验检测miR-25对PC-3细胞迁移能力的影响,通过流式细胞术检测miR-25对PC-3细胞凋亡的影响,Western blotting法检测转染后PC-3细胞中DKK3的蛋白表达水平。结果:前列腺癌组织较前列腺增生组织中miR-25表达水平显著升高(P<0.05),DKK3基因表达明显降低(P<0.05)。与NC组相比,miR-25 inhibitors组细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞迁移能力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),DKK3的蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论:miR-25通过靶向调控DKK3基因促进前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡。

微小RNA-25过表达对食管癌TE-1、KSYE-150细胞株增殖与侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-25过表达对食管癌TE1、KSYE-150细胞增殖与侵袭的影响。方法实验样本均来自青岛市中医院2016年1月至2017年6月45例食管癌患者肿瘤组织、癌旁正常组织(距肿瘤边缘>5 cm,且病理检查无癌细胞浸润)。实验分为空白对照组、阴性对照组、模拟物转染组、抑制物转染组,分别将miR-25模拟物、抑制物转入食管癌TE1、KSYE-150细胞株,检测miR-25表达水平、TE1、KSYE-150细胞增殖能力及细胞周期变化。多组间比较行单因素方差分析,两组比较行配对t检验。结果(1)食管癌组织miR-25表达(1.288±0.214)明显高于正常组织miR-25表达(t=33.058,P<0.01);(2)TE1细胞模拟物转染组miR-25表达(2.452±0.360)明显高于阴性对照组,抑制物转染组miR-25表达(0.576±0.110)明显低于阴性对照组(t=8.212、7.553,P<0.05,P<0.01);KSYE-150细胞模拟物转染组miR-25表达(3.124±0.450)明显高于阴性对照组,抑制物转染组miR-25表达(0.624±0.120)明显低于阴性对照组(t=10.297、6.452,P<0.05,P<0.01),差异有统计学意义;(3)转染24、48、72、96 h,模拟物转染组TE-1细胞活性(35.25±5.24、96.45±8.21、165.36±18.24、223.45±20.24)明显高于阴性对照组(t=11.137、9.216、7.575、10.547,P<0.05,P<0.01),抑制物转染组TE-1细胞活性(4.21±0.72、22.36±4.21、52.15±7.36、63.45±7.36)明显低于阴性对照组(t=4.874、8.940、6.830、7.368,P<0.05,P<0.01);模拟物转染组KSYE-150细胞活性(42.36±6.36、102.65±13.45、172.36±22.45、242.31±25.35)明显高于阴性对照组(t=12.449、7.381、7.110、10.464,P<0.05,P<0.01);抑制物转染组KSYE-150细胞活性明显低于阴性对照组(5.42±0.75、25.12±7.24、62.45±8.36、67.36±8.45)(t=5.827、6.699、4.872、6.689,P<0.05),差异均有统计学意义;(4)模拟物转染组TE-1细胞G0/G1期(46.52±6.20)明显低于阴性对照组,S期(46.96±7.12)明显高于阴性对照组(t=4.096,5.044,P<0.05),抑制物转染组TE-1细胞G0/G1期(84.52±7.54)明显高于阴性对照组,S期(6.05±0.78)明显低于阴性对照组(t=4.352,13.715,P<0.05,P<0.01);模拟物转染组KSYE-150细胞G0/G1期(44.36±6.32)明显低于阴性对照组,S期(49.25±6.58)明显高于阴性对照组(t=4.544,5.009,P<0.05,P<0.01),抑制物KSYE-150细胞G0/G1期(81.25±7.43)明显高于阴性对照组,S期(8.78±1.12)明显低于阴性对照组(t=4.577,10.127,P<0.05,P<0.01)。结论miR-25过表达将促进食管癌细胞株TE-1、KSYE-150增殖与侵袭,抑制miR-2表达会抑制食管癌细胞株TE-1、KSYE-150增殖,促进癌细胞凋亡。

miRNA-25对人食管鳞状细胞癌细胞株TE1增殖的影响

目的:探讨过表达/沉默微小RNA-25(microRNA-25,miRNA-25)对人食管鳞状细胞癌细胞株TE1增殖能力的影响及其作用机制。方法:RT-PCR检测各临床样品组织中miRNA-25的表达水平。建立miRNA-25过表达/沉默的TE1细胞株,采用CCK-8法、Brd U实验和流式细胞术检测TE1细胞增殖能力的变化及细胞周期状态;Western blot法和RT-PCR法检测细胞周期调控因子细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的蛋白与mRNA表达水平。结果:miRNA-25在食管黏膜组织中具有特异性表达并在TE1细胞中呈高表达。CCK-8法和Brd U实验结果显示过表达miRNA-25的TE1细胞的增殖能力显著增加(P<0.05),而沉默miRNA-25抑制TE1细胞的增殖;流式细胞术检测结果显示过表达miRNA-25可明显促进TE1细胞从G0/G1期向S期转换,沉默miRNA-25则抑制其转换。同时Western blot和RT-PCR实验结果显示过表达miRNA-25后,cyclin E1和CDK2的蛋白和mRNA表达水平均显著增加(P<0.05),沉默miRNA-25后则显著减少(P<0.05)。结论:miRNA-25能够促进人食管鳞状细胞癌细胞株TE1的增殖,其作用机制可能与促进细胞周期转换及上调cyclin E1和CDK2的表达水平有关,提示miRNA-25可作为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在靶点。

胶质瘤miRNA-25与NF-кB表达相关性分析

目的探讨胶质瘤微小RNA-25(mi RNA-25)和核因子kappa B(NF-кB)表达变化及其相关性。方法选取2012年7月至2012年9月手术切除胶质瘤标本29例,其中WHOⅠ级5例、Ⅱ级6例、Ⅲ级9例、Ⅳ级9例;选取同期去骨瓣内减压切除正常脑组织8例作为对照组。采用实时PCR检测mi RNA-25表达水平,采用免疫印迹法和免疫组化染色检测NF-кB表达水平。结果相比正常组织,Ⅰ级胶质瘤mi RNA-25表达水平显著降低(P<0.05),Ⅱ级胶质瘤无明显变化(P>0.05),而Ⅲ、Ⅳ胶质瘤均明显增高(P<0.01);随胶质瘤病理级别增高其表达水平显著增高(P<0.01)。正常脑组织NF-кB呈阴性表达,胶质瘤组织均呈阳性表达;而且,随胶质瘤病理级别增高,其表达水平显著增高(P<0.05)。胶质瘤mi RNA-25表达水平与NF-κB表达水平呈显著正相关(r=0.92;P<0.05)。结论胶质瘤mi RNA-25和NF-кB表达均上调,且随病理级别增高显著增高;两者表达呈显著正相关。

依达拉奉通过microRNA-25抑制高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

目的:探讨依达拉奉通过微小RNA-25(microRNA-25,miR-25)对高糖诱导的人神经母细胞瘤SHSY5Y细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法:将SH-SY5Y细胞用含高浓度葡萄糖的DMEM培养基和依达拉奉的联合培养液共同培养24 h。MTT比色法测定SH-SY5Y细胞存活率;DCFH-DA荧光探针法检测SH-SY5Y细胞中活性氧簇(ROS)的水平;采用流式细胞术检测SH-SY5Y细胞的凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平;实时定量PCR检测细胞中miR-25的表达水平。为进一步阐明依达拉奉抑制高糖诱导的神经细胞凋亡的作用靶点,我们将miR-25抑制剂应用于细胞,之后采用caspase-3凋亡试剂盒检测细胞的凋亡率。结果:与对照组相比,高糖诱导后细胞存活率明显降低,细胞中的ROS水平和细胞凋亡率明显升高,Bax的表达明显增加,Bcl-2的表达明显降低,miR-25的表达水平也明显降低。给予依达拉奉治疗之后,细胞存活率明显升高,ROS含量和细胞凋亡率明显降低,Bax的蛋白水平明显降低,Bcl-2蛋白水平明显升高,miR-25的表达水平亦明显升高。进一步给予miR-25抑制剂后,caspase-3的水平明显升高,此时同时给予依达拉奉后并不能抑制高糖引起的神经细胞的凋亡。结论:依达拉奉对高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有抑制作用,其作用靶点可能是miR-25。

miR-25调控Notch信号通路对中枢神经系统感染小鼠记忆容量和脑损伤的影响

目的探讨miR-25调控Notch信号通路对中枢神经系统(CNS)感染小鼠记忆容量和脑损伤的影响。方法采用生物学预测网站(www.targetscan.org)分析微小RNA-25(miR-25)和Notch1的结合位点,将1个Rellina质粒和2个报告质粒分别与miR-25质粒、空载体质粒共同转染入人类胚肾细胞HEK293T细胞,采用双萤光素酶报告基因系统验证miR-25和Notch1的关联;70只健康雄性C57BL/6小鼠分为正常对照组(不作处理,n=10)和实验组(建立CNS感染模型,n=60),实验组小鼠造模成功后随机均分为模型组(无处理)、空载体组(注射空载体)、miR-25模拟物组(注射miR-25模拟物)、miR-25抑制剂组(注射miR-25抑制剂)、(2S)-N-[N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰]-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)组(注射DAPT)及miR-25抑制剂+DAPT组(注射miR-25抑制剂+DAPT);采用莫里斯水迷宫检测各组小鼠的学习、记忆容量(逃生潜伏期、平台停留时间及经过次数);麻醉处死各组小鼠后取脑组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组小鼠大脑海马CA1区miR-25、Notch1及Hes家族BHLH转录因子5(Hes5)的表达,采用Western blot检测各组小鼠大脑海马CA1区Notch1、Hes5、环加氧酶2(COX-2)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,采用水溶性四氮唑(WST-1)法和硫代巴比妥酸实验检测各组小鼠海马组织中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。结果miR-25与Notch1的3′UTR结合序列为UGCAAU,双萤光素酶报告基因结果提示miR-25可以负调控Notch1的表达;和正常对照组比较,实验组小鼠大脑海马CA1区miR-25、COX-2及iNOS的表达升高,Notch1和Hes5表达下降,海马组织中SOD水平降低、MDA水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-25模拟物组和DAPT组小鼠大脑海马组织中Notch1和Hes5表达下降,学习、记忆容量降低,海马组织中SOD水平降低、MDA水平升高,COX-2和iNOS表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-25下调可靶向激活调控CNS感染小鼠的Notch信号通路,从而起到增强记忆容量和保护脑损伤神经的作用。

血清miR-483-5p、miR-21和miR-25检测在非小细胞肺癌诊断中的价值

目的探讨血清微小RNA-483-5p(miR-483-5p)、miR-21和miR-25在非小细胞肺癌(NSCLC)诊断中的价值。方法选取NSCLC患者(NSCLC组)32例、非肿瘤性良性肺病(NCPD组)患者22例和健康查体者(Control组)20例,采用PCR-荧光探针法检测血清miR-483-5p、miR-21和miR-25水平,采用电化学发光法检测血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和非小细胞肺癌相关抗原21-1(CYFRA21-1)水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价各指标的敏感度和特异度。结果NSCLC组血清CEA、NSE、CYFRA21-1水平均高于Control组(P分别为0.015、0.000、0.001)。CEA、NSE、CYFRA21-1及CEA+NSE+CYFRA21-1联合检测诊断NSCLC的敏感度分别为56.25%、68.75%、71.88%及90.65%,特异度分别为95.00%、90.00%、70.00%、60.00%。NSCLC组miR-483-5p、miR-21表达均高于NCPD组及Control组(P均<0.05),NSCLC组miR-25表达低于NCPD组及Control组(P均<0.05)。miR-483-5p、miR-21和miR-25诊断NSCLC的敏感度分别为93.80%、84.40%、81.25%,特异度分别为90.00%、100%、95.00%。经χ^2检验,miR-483-5p、miR-21、miR-25诊断NSCLC的敏感度均达到了CEA+NSE+CYFRA21-1联合诊断的敏感度(χ^2=0.217,P=0.641;χ^2=0.571,P=0.450;χ^2=1.164,P=0.281)。结论血清miR-483-5p、miR-21和miR-25可以作为非侵入性的肿瘤标志物用于NSCLC的辅助诊断,且具有很高的敏感度。

miR-25对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡的作用

目的:探讨微小RNA-25(miR-25)在缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡过程中的作用及机制。方法:构建miR-25高表达H9c2细胞系,行缺氧/复氧损伤处理,real-time PCR检测miR-25及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA的表达,Western blot检测HMGB1及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化,明确miR-25的高表达对缺氧/复氧所诱导的H9c2细胞凋亡及HMGB1表达的影响。然后通过双萤光素酶报告基因验证miR-25与HMGB1的靶向关系,并构建转染HMGB1 shRNA的H9c2稳定细胞系,行缺氧/复氧损伤处理,验证HMGB1是否参与缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡的调控。结果:与对照组相比,高表达miR-25组的H9c2细胞在缺氧/复氧诱导后HMGB1表达下调,Bcl-2表达上调,cleaved caspase-3蛋白水平下调,流式细胞术提示处于S期的细胞增多,G1期减少(P<0.01)。双萤光素报告基因显示,转染miR-25 mimic+野生型HMGB1-3’UTR报告基因载体组萤光素酶活性明显下降;转染miR-25 inhibitor+野生型HMGB1-3’UTR和转染miR-25 mimic+突变型HMGB1-3’UTR报告基因载体组萤光素酶活性没有变化。转染HMGB1-shRNA的H9c2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,凋亡蛋白cleaved caspase-3蛋白水平下调,流式细胞术分析提示细胞凋亡减少,处于S期的细胞增多,G1期减少(P<0.05)。结论:miR-25减少缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡,期作用机制可能与靶向调控HMGB1表达有关。

circRNA001131通过结合miR-25-3p抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达

目的:研究环形RNA(circRNA)001131对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)纤维化表型的影响及分子机制。方法:采用Masson三色染色法对腹主动脉缩窄(AAC)手术诱导的心肌重构大鼠心肌进行胶原纤维的染色观察。利用芯片检测AAC手术诱导的大鼠心肌中circRNA表达谱的变化。RT-qPCR检测AAC大鼠心肌及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的大鼠CFs中circRNA001131的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA001131的稳定性。利用重组circRNA001131腺病毒(rAd-circRNA001131)感染大鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)的mRNA和蛋白表达。双萤光素酶报告基因实验验证circRNA001131与miR-25-3p的结合作用。结果:RT-qPCR结果证实,circRNA001131在AAC手术诱导的大鼠心肌和Ang-Ⅱ处理的大鼠CFs中表达增强。放线菌素D和RNase R实验结果显示,circRNA001131与其宿主基因--第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(Pten)mRNA相比,降解水平明显降低。过表达circRNA001131可显著抑制大鼠CFs中纤维化相关基因Col1a1和Col3a1的表达。双萤光素酶报告基因实验证实circRNA001131与miR-25-3p间存在结合作用,miR-25-3p可以减弱circRNA001131对大鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论:circRNA001131在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-25-3p发挥抑制心肌纤维化的作用。

非吸烟女性肺腺癌患者肿瘤组织EGFR基因突变、miR-25表达与生理生育特征的关系

目的分析非吸烟女性肺腺癌患者肿瘤组织EGFR基因突变、miR-25表达与生理生育特征的关系。方法130例非吸烟女性肺腺癌患者,收集患者的生理生育信息（年龄、初潮年龄、绝经状态、绝经年龄、活产次数、行经时间）,采用DNA测序技术检测患者肿瘤组织EGFR基因,采用实时荧光定量PCR法检测miR-25表达,采用χ2检验及Logistics回归分析EGFR基因突变与女性生理生育特征的关系,采用Wilcoxon秩和检验分析肿瘤组织miR-25表达与女性生理生育特征关系。结果 130例非吸烟女性肺腺癌患者中71例EGFR基因出现突变,59例仍为野生型EGFR。EGFR基因突变与非吸烟女性肺腺癌患者年龄、绝经状态、绝经年龄、活产次数、行经时间无关（P均〉0.05）,与初潮年龄有关（P=0.041）;经多因素调整Logistics回归分析显示,初潮年龄≥14岁的非吸烟女性肺腺癌患者较初潮年龄〈14岁者更不易反生EGFR基因突变（OR=0.376,95%CI：0.146~0.970）。肿瘤组织中miR-25的表达与患者年龄及女性生理生育因素均无关。结论非吸烟女性肺腺癌患者肿瘤组织EGFR基因突变与初潮年龄有关;miR-25表达与上述女性生理生育因素均无关。

miR-25-3p和ZEB2在宫颈癌中表达的临床意义及对宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用探讨

背景微小RNA-25-3p(microRNA-25-3p,miR-25-3p)是与肿瘤密切相关的miRNA,锌指E盒结合的同源盒蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)是miR-25-3p的靶基因,而miR-25-3p能否通过靶向ZEB2在宫颈癌进展中发挥作用尚不清楚。目的探讨miR-25-3p、ZEB2在宫颈癌组织中表达的临床意义及对宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用。方法选取四川大学华西三亚医院2013年1月-2014年12月治疗的宫颈癌患者84例,获取病理组织,另收集因良性疾病切除的正常宫颈组织40例作为对照,检测宫颈癌组织和正常宫颈组织中miR-25-3p、ZEB2 mRNA及蛋白的表达情况;分析miR-25-3p、ZEB2 mRNA及蛋白的表达与宫颈癌患者临床病理参数及预后的关系。Pearson线性相关分析miR-25-3p与ZEB2 mRNA及蛋白在宫颈癌组织中表达的相关性。常规培养宫颈癌细胞HeLa,分为NC组、miR-25-3p mimic组和miR-25-3p+oe-ZEB2组,MTS实验检测各组细胞的增殖能力,Boyden实验检测各组细胞的侵袭能力。结果miR-25-3p在宫颈癌组织中的表达显著低于其在正常宫颈组织中的表达(P<0.05),ZEB2 mRNA及蛋白在宫颈癌组织中的表达显著高于其在正常宫颈组织中的表达(P<0.05)。miR-25-3p在宫颈癌组织中的表达水平与淋巴结转移、肌层浸润深度和FIGO分期相关(P<0.05)。ZEB2 mRNA及蛋白在宫颈癌组织中的表达水平与组织学分级、淋巴结转移和FIGO分期相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,miR-25-3p低表达组宫颈癌患者5年总生存率低于miR-25-3p高表达组患者(P<0.05),ZEB2 mRNA及蛋白高表达的宫颈癌患者5年总生存率低于ZEB2低表达组患者(P<0.05)。宫颈癌组织中miR-25-3p与ZEB2 mRNA及蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。Target Scan7.1软件预测及双荧光素酶报道基因实验结果显示ZEB2为miR-25-3p的靶基因。与NC组相比,miR-25-3p mimic组和miR-25-3p+oe-ZEB2组细胞增殖和侵袭能力降低(P<0.05);与miR-25-3p mimic组相比,miR-25-3p+oe-ZEB2组细胞增殖和侵袭能力增加(P<0.05)。结论miR-25-3p、ZEB2与宫颈癌患者的不良病理参数和预后相关,miR-25-3p靶向负调控ZEB2抑制宫颈癌的增殖和侵袭。miR-25-3p和ZEB2有可能成为宫颈癌预后新的标志物和治疗靶标。

miR-25表达对糖尿病肾病形成调控的分子机制研究

目的 探讨microRNA-25（miR-25）表达调控糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）形成的分子机制.方法 分别采用链脲佐菌素和高糖诱导法构建糖尿病肾病模型（Dia组）小鼠和模型HK-2细胞,采用荧光定量PCR检测正常小鼠（Con组）和Dia组小鼠肾脏质量指数（LVWI）和肾脏miR-25、DAB2IP、P38-MAPK、P-AKT mRNA表达水平,并检测HK-2细胞miR-25、DAB2IP、P38-MAPK、P-AKT mRNA表达水平.采用miR-25 mimics在HK-2细胞中过表达miR-25,采用Western blot技术检测DAB2IP、P38-MAPK、P-AKT蛋白表达水平.结果 Dia组小鼠建模全部成功.Dia组小鼠肾脏质量指数、P38-MAPK、P-AKT、DAB2IP mRNA相对表达水平显著高于Con组,肾脏miR-25相对表达水平显著低于Con组（P＜0.05）.模型组HK-2细胞miR-25相对表达水平显著低于正常HK-2细胞（P＜0.05）,模型组HK-2细胞P38-MAPK、P-AKT、DAB2IP mRNA相对表达水平均显著高于正常HK-2细胞（P＜0.05）.用miR-25 mimics转染HK-2细胞和模型HK-2细胞,Western blot结果显示模型HK-2细胞中P-AKT和P38-MAPK表达显著下调（P＜0.05）.结论 miR-25高表达可抑制P-AKT和P38-MAPK表达,可能通过JNK信号通路促进DN的发生.

miR-25在乳腺癌组织、细胞的表达及对细胞增殖的影响

目的探讨miR-25在乳腺癌组织和细胞系中表达及对细胞增殖的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测miR-25在乳腺癌组织、癌旁组织及乳腺癌细胞系SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231和人乳腺上皮细胞系HBL-100中的表达,分析miR-25表达与患者临床病理特征的关系。分别将miR-25 inhibitor和inhibitor-NC转染至SK-BR-3细胞,转染后的SK-BR-3细胞分为miR-25 inhibitor组和inhibitor-NC组,通过CCK-8试验检测乳腺癌细胞增殖能力。结果 miR-25在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.01),miR-25在各乳腺癌细胞系中的表达高于正常乳腺上皮细胞系(P均<0.01)。乳腺癌组织中miR-25表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.01),而与年龄、肿瘤最大直径、ER、PR、C-erb B-2及组织学分级等无关(P均>0.05)。miR-25 inhibitor组和inhibitor-NC组细胞中miR-25的相对表达量分别为0.38±0.11、1.01±0.03,两组比较,P<0.01。CCK-8实验结果显示,miR-25inhibitor组SK-BR-3细胞的增殖速度较inhibitor-NC组下降(P<0.05)。结论 miR-25在乳腺癌组织和细胞系中呈高表达,下调miR-25表达能明显抑制乳腺癌细胞增殖。