微小RNA-26a通过抑制铁死亡减少高糖诱导的肾小管上皮细胞细胞外基质合成

目的 探究微小RNA-26a(miR-26a)对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)细胞外基质(ECM)合成的作用及可能机制。方法 通过HG诱导RTECs以构建糖尿病肾病(DKD)模型,在HG诱导的RTECs中过表达miR-26a,使用RT-qPCR和Western blot检测ECM合成及铁死亡相关指标以评估miR-26a对HG诱导的RTECs中ECM合成及铁死亡的作用。使用ferrostatin(Fer-1)抑制DKD模型中铁死亡的发生并进一步评估其对ECM合成的影响。RT-qPCR和Western blot检测铁死亡的相关指标,荧光显微镜观察活性氧(ROS)荧光强度。结果 与Control相比,HG组细胞中miR-26a表达量降低,ECM合成相关指标fibronectin和collagenⅠ表达量升高,过表达miR-26a后,与HG组相比,HG+miR-26a组细胞miR-26a表达量升高,fibronectin和collagenⅠ表达量降低。在铁死亡方面,与Control组相比,HG组SLC7A11和GPX4的蛋白和mRNA表达量降低,TFR-1和ACSL4表达量升高,ROS荧光强度增强。抑制铁死亡后,HG+Fer-1组铁死亡及ECM合成相关指标表达水平较HG组均改变。再次过表达miR-26a后,HG+miR-26a组铁死亡相关指标表达水平较HG组均变化,ROS荧光强度降低。结论 在HG诱导的RTECs中,miR-26a抑制铁死亡的发生进而减少ECM合成。

微小RNA-26a在胃癌患者血清中的表达及其对该病的诊断价值

目的探究微小RNA(miR)-26a在胃癌患者血清中的表达及其对该病的诊断价值。方法选取2017年1月至2019年1月于石家庄市第一医院就诊的胃癌患者120例作为观察组,选择同期于本院进行健康体检诊断为良性肿瘤者120例作为对照组,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测2组患者血清中miR-26a的表达量,分析miR-26a表达量与胃癌临床病理特征的相关性,同时构建观察组患者受试者工作特征曲线,分析miR-26a在诊断胃癌方面的临床价值。结果观察组患者血清中miR-26a表达量明显低于对照组患者[(1.03±0.09)比(5.38±0.23)],差异有统计学意义(P <0.05)。miR-26a表达量与肿瘤TNM分期、淋巴结转移以及局部浸润深度相关(均P <0.05),与患者性别、年龄、家族史、肿瘤直径、分化程度无关(均P> 0.05);血清中miR-26a诊断胃癌的受试者工作特征曲线下面积为0.831(95%置信区间0.631-0.879),敏感度为0.720,特异度为0.823。结论 miR-26a在胃癌患者血清中呈现低表达,且其表达量与肿瘤TNM分期、淋巴结转移以及局部浸润深度相关,其在胃癌诊断方面具有一定的临床应用价值。

微小RNA-26b在乳腺癌中的作用及其分子机制研究

目的研究微小RNA-26b(miR-26b)在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达以及对乳腺癌MBA-MD-231细胞增殖的影响,并分析其可能的机制。方法选取上海市同济大学附属第十人民医院甲乳外科2010年1月—2012年5月行手术治疗的38例女性乳腺癌患者的乳腺癌组织,并取距离肿瘤组织>5 cm正常乳腺组织。运用荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中miR-26b的表达量。运用MTT法分析miR-26b对乳腺癌MBA-MD-231细胞增殖的影响,采用50、100 nmol/L miR-26b mimics转染为50 nmol/L组和100nmol/L组,脂质体处理为空对照组,小分子RNA片段转染为负对照组,转染后24、48、72、96 h分别测定细胞相对增殖情况。通过TargetScan软件寻找miR-26b可能靶基因〔前列腺素内过氧化物酶2(PTGS-2)〕,并应用荧光素酶报告实验和Western blotting技术进行验证。结果乳腺癌组织中miR-26bΔCt为(15.25±0.98),正常乳腺组织中为(12.37±1.23),正常乳腺组织中miR-26b表达水平为乳腺癌组织的7.33倍,乳腺癌组织中miR-26b表达低于正常乳腺组织(t=12.21,P=0.007)。MTT实验结果显示,50 nmol/L组、100 nmol/L组、空对照组和负对照组转染后72、96 h相对细胞增殖比较,差异均有统计学意义(F值分别为11.037和5.470,P值分别为0.003和0.024);其中转染后96 h 50 nmol/L组较空对照组降低(q=-3.048,P=0.038);转染后72 h和96 h 100 nmol/L组较空对照组降低(q值分别为-3.248和-4.254,P值分别为0.031和0.013)。荧光素酶报告实验结果显示,PTGS-2组、突变体对照组及空载体对照组荧光素酶活性比较,差异有统计学意义(F=99.88,P=0.000);其中PTGS-2组较突变体对照组和空载体对照组降低(q值分别为-10.314和-12.108,P值分别为0.000和0.000)。Western blotting结果显示,与空对照组和负对照组相比,实验组PTGS-2 mRNA和蛋白的表达量明显减少。结论 miR-26b在乳腺癌组织中呈低表达,其可能通过作用于下游基因PTGS-2抑制乳腺癌细胞的增殖,miR-26b在肿瘤发生发展中可能担任着抑癌基因的角色。

血清血管紧张素转化酶2及微小RNA-26b-5p对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗术后心肌损伤的预测价值

目的探讨血清血管紧张素转化酶2(ACE2)、微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌损伤的预测价值。方法选取2019年11月至2021年1月在华北石油管理局总医院行PCI手术的急性冠状动脉综合征患者122例,根据PCI术后6个月是否发生心肌损伤,分为心肌损伤组39例和心肌未损伤组83例。收集所有患者临床资料,采用酶联免疫吸附法检测血清ACE2水平、实时荧光定量PCR法检测血清miR-26b-5p水平,Pearson法分析血清ACE2与miR-26b-5p水平的相关性,受试者工作特征曲线评价血清ACE2、miR-26b-5p水平对急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的预测价值。结果与心肌未损伤组相比,心肌损伤组术后6个月肌钙蛋白I(cTnI)、术后6个月肌酸激酶同工酶(CK-MB)较高,差异有统计学意义(t=40.656、27.486,P<0.05)。与心肌未损伤组相比,心肌损伤组血清ACE2水平较高,血清miR-26b-5p水平较低,差异均有统计学意义(t=11.159、14.842,P<0.05);血清miR-26b-5p与ACE2水平呈负相关(r=-0.567,P<0.05);血清ACE2、miR-26b-5p水平预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.796、0.878,敏感度分别为87.20%、85.50%,特异度分别为60.20%、82.10%;两者联合预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的AUC为0.916,敏感度、特异度分别为89.70%、79.50%。结论急性冠状动脉综合征PCI术后心肌损伤患者血清ACE2呈高表达,血清miR-26b-5p呈低表达,ACE2、miR-26b-5p可预估急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤,两者联合预测价值较好。

微小RNA-26a高表达调控PTEN并促进哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖

目的探讨微小RNA-26a (miR-26a)对气道平滑肌细胞(ASMC)中PTEN的表达以及细胞增殖的影响和机制。方方法 20只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组和哮喘模型组,每组10只。予卵蛋白腹腔注射并雾化吸入制作SD大鼠支气管哮喘模型。苏木精-伊红染色法染色观察2组大鼠肺部组织病理变化。利用荧光定量聚合酶链反应检测2组大鼠气道ASMC中miR-26a的表达。预混10只正常大鼠ASMC细胞,根据不同处理方法分为:空白对照组、转染对照miRNA的阴性对照组、miR-26a转染模拟组、miR-26a抑制剂转染组、PTEN-pGC-Fu-GFP组、pGC-Fu-GFP组和Ly294002组。转染后48 h收集细胞,MTT法检测细胞增殖情况。荧光定量PCR和Western blotting检测空白对照组、阴性对照组、miR-26a转染模拟组和miR-26a抑制剂转染组细胞中PTEN的基因表达和蛋白表达,同时检测PTEN-pGC-FuGFP组、pGC-Fu-GFP组和Ly294002组细胞中细胞周期相关蛋白CyclinD1、p21以及通路相关蛋白p-Akt、JNK1的表达。结果哮喘模型组大鼠ASMC中miR-26a呈现高表达,肺部组织损伤严重。与空白对照组相比,抑制miR-26a表达能够抑制ASMC细胞增殖,上调PTEN表达,过表达miR-26a能够促进ASMC细胞增殖,抑制PTEN表达。与空白对照组比较,过表达PTEN能够抑制ASMC细胞增殖,抑制细胞周期相关蛋白CyclinD1表达,上调细胞周期素依赖性激酶抑制因子p21表达,同时抑制通路蛋白p-Akt和JNK1的表达。结论 miR-26a能够通过影响PTEN的表达,调控ASMC细胞增殖以及PI3K/Akt信号通路。

微小RNA-26a对食管癌Eca109细胞增殖、迁移、凋亡及细胞周期的影响

目的探讨微小RNA-26a(miR-26a)对食管癌Eca109细胞增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响。方法将正常培养的人食管鳞状细胞癌Eca109细胞随机分为正常对照组(正常培养的不加任何类型慢病毒的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列慢病毒)及miR-26a过表达组(转染miR-26a过表达慢病毒)。分别采用四甲基偶氮唑盐实验、细胞划痕实验、流式细胞术检测细胞增殖、迁移、细胞周期和凋亡情况。结果转染后72、96 h,miR-26a过表达组细胞增殖能力低于正常对照组和阴性对照组(P <0. 05);阴性对照组与正常对照组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。转染后72 h,miR-26a过表达组细胞划痕愈合率低于正常对照组和阴性对照组(P <0. 05);阴性对照组与正常对照组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。转染后48 h,miR-26a过表达组G_1、G_2期细胞所占比例高于正常对照组和阴性对照组,S期细胞所占比例低于正常对照组和阴性对照组(P <0. 05)。阴性对照组与正常对照组细胞G_1、S和G_2期细胞所占比例比较差异无统计意义(P> 0. 05)。结论 miR-26a可以抑制人食管鳞状细胞癌Eca109细胞增殖和迁移,阻断细胞由G_1期向S期过渡,但对细胞的凋亡无明显影响。

6-姜烯酚通过调控微小RNA-26a-5p/DAPK1减轻脑缺血/再灌注损伤的机制研究

目的探讨6-姜烯酚(6-SH)是否通过促进微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)表达并抑制死亡相关蛋白激酶1(DAPK1),减轻氧糖剥夺/复氧(OGD/R)神经细胞自噬及神经细胞钙超载,并探究其潜在机制。方法取体外培养的对数生长期小鼠海马神经元HT22细胞,用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,寻找Na2S2O4的最佳制模浓度。将HT22细胞分为空白对照组(NC组)、OGD/R组(无糖培养基+10 mmol/L Na2S2O4处理1.5 h后换正常培养基培养4 h)、6-SH干预组(OGD后用10μmol/L 6-SH培养4 h)、阴性对照抑制剂预处理组(阴性对照抑制剂转染48 h后行OGD,再用6-SH培养4 h)、miR-26a-5p抑制剂预处理组(miR-26a-5p抑制剂转染48 h后行OGD,再用6-SH培养4 h)。采用CCK-8法检测各组细胞活性;透射电镜下观察细胞超微结构;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DAPK1、miR-26a-5p基因表达;分子对接验证6-SH与miR-26a-5p的相互作用;双荧光素酶验证DAPK1与miR-26a-5p的靶向关系;流式细胞仪测定细胞内Ca2+水平;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测磷酸化谷氨酸受体2B(p-NMDAR2B)Ser1303、DAPK1、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p-DAPK1 Ser308蛋白表达;免疫荧光法检测LC3和Beclin1的表达。结果CCK-8法检测结果显示,6-SH干预组细胞活性较OGD/R组明显升高,miR-26a-5p抑制剂预处理组细胞活性较6-SH干预组明显降低。透射电镜下显示,6-SH干预组自噬小体较OGD/R组明显减少,miR-26a-5p抑制剂预处理组自噬小体较6-SH干预组明显增多。RT-qPCR检测结果显示,与OGD/R组比较,6-SH干预组miR-26a-5p表达明显上调,DAPK1 mRNA表达明显下调;与6-SH干预组比较,miR-26a-5p抑制剂预处理组miR-26a-5p表达明显下调,DAPK1 mRNA表达明显上调。分子对接验证6-SH与miR-26a-5p可互相作用。双荧光素酶报告基因检测显示,与阴性对照组比较,mmu-miR-26a-5p显著下调m-DAPK1-3UTR-WT的荧光素酶表达,说明两者之间存在结合作用。流式细胞仪检测结果显示,与OGD/R组比较,6-SH干预组细胞内Ca2+水平明显降低;与6-SH干预组比较,miR-26a-5p抑制剂预处理组Ca2+水平明显升高。Western blotting检测结果显示,与OGD/R组比较,6-SH干预组p-NMDAR2B Ser1303、DAPK1、Beclin1、LC3蛋白表达均明显降低(p-NMDAR2B Ser1303/β-actin:2.34±0.27比4.78±0.39,DAPK1/β-actin:1.40±0.13比2.37±0.21,Beclin1/β-actin:2.61±0.32比4.32±0.29,LC3/β-actin:2.52±0.45比5.09±0.18,均P<0.05),p-DAPK1 Ser308蛋白表达明显升高(p-DAPK1 Ser308/β-actin:0.66±0.09比0.40±0.02,P<0.05);与6-SH干预组比较,miR-26a-5p抑制剂预处理组p-NMDAR2B Ser1303、DAPK1、Beclin1、LC3蛋白表达明显升高(p-NMDAR2B Ser1303/β-actin:4.08±0.14比2.34±0.27,DAPK1/β-actin:1.96±0.15比1.40±0.13,Beclin1/β-actin:3.92±0.31比2.61±0.32,LC3/β-actin:4.33±0.33比2.52±0.45,均P<0.05),p-DAPK1 Ser308蛋白表达明显降低(p-DAPK1 Ser308/β-actin:0.33±0.12比0.66±0.09,P<0.05);免疫荧光法检测显示,与OGD/R组比较,6-SH干预组LC3、Beclin1荧光强度明显降低;与6-SH干预组比较,miR-26a-5p抑制剂预处理组LC3、Beclin1荧光强度明显升高。结论6-SH可通过调控miR-26a-5p/DAPK1减轻细胞自噬及钙超载,从而减轻神经细胞损伤。

孟鲁司特钠片联合糠酸氟替卡松治疗支气管哮喘患儿的疗效及对miRNA-21、miRNA-26a水平的影响

目的探究孟鲁司特钠片联合糠酸氟替卡松治疗对支气管哮喘患儿血清微小RNA(miRNA)-21及miRNA-26a水平的影响。方法选择2020年3月至2022年3月陕西省人民医院儿童病院收治的支气管哮喘患儿120例,按照随机数字表法分为两组,每组60例。在常规方法的基础上,对照组使用布地奈德雾化吸入治疗,观察组使用孟鲁司特钠片联合糠酸氟替卡松治疗。比较两组治疗后临床疗效和不良反应。检测并比较两组患儿肺功能指标、血清炎症因子以及miRNA-21、miRNA-26a表达水平。结果治疗后两组第1秒用力呼气容积(FEV_(1))和最大呼气流量(PEF)均显著升高(P<0.05),且观察组FEV1和PEF均显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组超敏C感应蛋白(hs-CRP)和白细胞介素6(IL-6)水平均显著降低(P<0.05),且观察组hs-CPR和IL-6水平均显著低于对照组(P<0.05)。治疗后两组miRNA-21和miRNA-26a表达水平均显著降低(P<0.05),且观察组均显著低于对照组(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论糠酸氟替卡松联合孟鲁斯特钠片对儿童支气管哮喘具有更好的临床疗效,可提高肺功能,并具有一定的安全性。并且联合治疗可能通过下调miRNA-21和miRNA-26a的表达水平抑制炎症因子。

平均血小板体积与血小板计数比值、微小RNA-26b相对表达量、微小RNA-195相对表达量与高血压性左心室肥厚的关系及其对患者预后的预测价值研究

背景左心室肥厚是高血压导致的常见靶器官损伤,血小板的黏附、聚集及细胞因子释放在其发生、发展过程中发挥着重要作用,且大体积常较小体积的血小板代谢更为活跃。此外,微小RNA(miRNA)作为各种细胞活动的强大调节剂,包括细胞的生长、分化、发育及凋亡,同样在心肌重构、增殖及分化过程中具有重要的调控作用。然而目前关于平均血小板体积与血小板计数比值(MPV/PLT)、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量在高血压性左心室肥厚诊断中的相关报道较少。目的探讨MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量与高血压性左心室肥厚的关系及其对患者预后的预测价值。方法选取2017年4月—2019年12月唐山市人民医院收治的高血压性左心室肥厚患者102例,根据左心室心肌质量指数(LVMI)分为低LVMI组(≤110 g/m2)52例和高LVMI组(>110 g/m2)50例。比较两组患者临床资料、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量、预后及不同预后患者的临床资料、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量;采用多元线性回归分析探讨高血压性左心室肥厚患者LVMI的影响因素,并采用多因素Logistic回归分析探讨高血压性左心室肥厚患者预后的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量及其联合对高血压性左心室肥厚患者预后的预测价值。结果高LVMI组患者24 h动态收缩压、24 h动态脉压、左心室心肌质量(LVM)、miRNA-195相对表达量高于低LVMI组,MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量低于低LVMI组,预后良好发生率低于低LVMI组(P<0.05)。多元线性回归分析结果显示:LVM、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量是高血压性左心室肥厚患者LVMI的独立影响因素(P<0.05)。预后不良的高血压性左心室肥厚患者LVMI、miRNA-195相对表达量高于预后良好者,MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量低于预后良好者(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示:24 h动态收缩压、24 h动态脉压、LVM、LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量及miRNA-195相对表达量是高血压性左心室肥厚患者预后的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量联合预测高血压性左心室肥厚患者预后的曲线下面积(AUC)大于各指标单独预测(P值均<0.001)。结论LVM、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量是高血压性左心室肥厚的独立影响因素,且LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量联合对高血压性左心室肥厚患者预后具有较高的预测价值。

微小RNA-26b对前列腺癌细胞迁移和侵袭行为的影响

目的观察上调微小RNA（miRNA，miR）-26b表达对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测miR-26b在5种前列腺癌细胞株和良性前列腺组织中的表达。将miR-26b模拟物和阴性对照miRNA分别转染至miR-26b表达最低的LNCaP细胞。噻唑蓝（MTT）法检测miR-26b表达对LNCaP细胞的增殖能力，流式细胞仪检测其细胞凋亡率，细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验分别检测其细胞迁移和侵袭能力。结果与良性前列腺组织比较，miR-26b在5种前列腺癌细胞株中均呈低表达，以LNCaP细胞株（0．214-t-O．019）最为明显。同阴性对照组比较，转染miR-26b的LNCaP细胞miR-26b表达（65．597±11．426）增强310倍，其迁移细胞数[（29±3）个]和细胞穿膜数[（30±2）个]均较对照组的（158±16）个和（147±15）个显著减少，差异有统计学意义（P〈0．05），而其细胞增殖能力、细胞凋亡率和细胞周期则变化不明显。结论miR-26b在前列腺癌细胞株低表达，上调前列腺癌细胞miR-26b的表达能够抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

微小RNA-26a对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用

目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-26a在三阴性乳腺癌中的表达并观察miR-26a对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 通过对三阴性乳腺癌及癌旁组织样本进行miRNA测序,筛选出癌组织及癌旁组织中差异表达的miRNAs。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-26a在三阴性乳腺癌组织样本及细胞株中的表达。采用Transwell小室法及划痕实验检测miR-26a对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 miRNA测序分析,共21个miRNAs在三阴性乳腺癌组织及癌旁组织中存在差异表达,其中12个miRNAs在癌组织中表达上调,包括miR-26a在内的9个miRNAs在癌组织中表达下调。在9例三阴性乳腺癌手术切除标本中,癌组织中miR-26a的表达水平较癌旁组织明显降低(1.08±0.12比78.62±1.44、3.60±0.49比36.57±0.86、5.22±0.76比27.64±0.89、0.59±0.02比26.32±0.69、2.05±0.23比19.36±0.74、1.88±0.13比14.49±0.80、1.03±0.07比8.92±0.37、4.69±0.35比6.75±0.52、0.81±0.05比2.89±0.17,P<0.01)。7种细胞株(MDA-MB-231、BT474、MDA-MB-468、T47D、SKBR3、MCF10A、MCF-7)中,三阴性乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、MDA-MB-468)中miR-26a的表达水平明显低于MCF-10A(0.61±0.05比1.50±0.11、0.09±0.01比1.50±0.11,P<0.01)。Transwell迁移实验显示,miR-26a模拟物(mimic)转染组细胞的穿膜细胞数量显著低于miR-mimic阴性对照(NC)转染组的细胞[(613.33±18.04)个比(701.33±6.11)个;(191.33±9.02)个比(269.33±8.33)个,P<0.01];划痕实验显示,miR-26a mimic转染组的细胞较miR-mimic NC转染组的细胞更慢地靠近划痕区域。结论 miR-26a在三阴性乳腺癌中低表达,并具有抑制三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用。

微小RNA-26a通过靶向调控E2F7表达影响乳腺癌细胞增殖与迁移

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-26a通过靶向调控核转录因子(E2F7)表达影响乳腺癌细胞增殖与迁移。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法及Western blot分别检测miR-26a、E2F7在乳腺癌细胞BT549、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MCF-7及人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中的表达。脂质体Lipofectamine?3000将miR-26a mimics和miR-26a NC转入乳腺癌细胞中,并检测miR-26a表达、细胞活力、细胞凋亡率、细胞迁移能力、E2F7蛋白及mRNA表达,同时进行荧光素酶报告基因分析。结果miR-26a在BT549(0.40±0.04)、MDA-MB-231(0.35±0.02)、MDA-MB-435(0.42±0.03)、MCF-7(0.55±0.05)乳腺癌细胞中的表达量显著低于MCF-10A细胞(1.46±0.14)(P<0.01)。E2F7蛋白在BT549(1.25±0.12)、MDA-MB-231(3.10±0.31)、MDA-MB-435(2.18±0.21)、MCF-7(0.36±0.02)乳腺癌细胞中的表达量显著高于MCF-10A细胞(0.15±0.01)(P<0.01)。miR-26a mimics组中miR-26a表达量(1.84±0.18)高于miR-26a NC组(0.36±0.03)(P<0.01);miR-26a mimics组细胞活力(0.383±0.036)低于miR-26a NC组(0.589±0.060)(P<0.01);miR-26a mimics组细胞早期凋亡率[(16.51±1.65)%]和晚期凋亡率[(23.47±2.35)%]均高于miR-26a NC组[(2.58±0.26)%、(3.20±0.32)%](P<0.01)。miR-26a mimics组细胞迁移能力(42.36±4.23)低于miR-26a NC组(189.53±15.64)(P<0.01)。miR-26a mimics组中E2F7蛋白及mRNA表达量均较miR-26a NC组下调(P<0.01),且荧光素酶报告基因结果证实E2F7是miR-26a下游靶蛋白。结论miR-26a能够通过负性调控E2F7表达抑制MDA-MB-231细胞增殖与迁移。

微小RNA-26a通过靶向癌基因c-Myc抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-26a对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法通过噻唑蓝(MTT)实验及集落形成实验检测miR-26a对细胞增殖能力的影响,应用流式细胞技术检测miR-26a对细胞周期的影响。利用数据库miRTarBase预测miR-26a靶基因,在数百种靶基因中,筛选出与细胞周期及肿瘤转移密切相关的靶基因c-Myc作为研究对象。通过Western blot实验检测miR-26a过表达后细胞中c-Myc及其下游靶基因细胞周期蛋白D2(Cyclin D2)、细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)蛋白水平的表达。结果MTT实验显示,miR-26a模拟物(mimic)转染组细胞的增殖活力显著低于miR-mimic阴性对照(NC)转染组的细胞。集落形成实验显示,miR-26a mimic转染组细胞的克隆增殖能力显著低于miR-mimic NC转染组的细胞[(55.67±5.86)个比(144.33±5.03)个;(62.00±3.00)个比(107.67±2.52)个,P<0.01]。流式细胞技术显示,miR-26a mimic转染组细胞处于G1期的细胞比例明显高于miR-mimic NC转染组的细胞[(59.39±1.04)%比(46.91±1.04)%;(76.91±1.43)%比(63.21±1.61)%,P<0.01]。Western blot实验显示,细胞中miR-26a表达上调后,c-Myc及其下游靶基因Cyclin D2、Cyclin E1的蛋白表达水平显著降低。结论 miR-26a可抑制三阴性乳腺癌的增殖,其机制可能是miR-26a通过靶向癌基因c-Myc来发挥抑癌作用。

血清微小miR-92a、miR-26b、miR-320对老年冠心病患者PCI术后不良心血管事件的预测价值

目的 探究血清微小RNA(miR)-92a、miR-26b、miR-320对老年冠心病患者PCI术后不良心血管事件的预测价值。方法 前瞻性选取2021年10月至2023年10月于安阳市人民医院行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术治疗的172例冠心病患者作为研究组,根据患者术后6个月是否出现主要不良心血管事件(MACE)将其分为MACE组36例和非MACE组136例,另选取同期健康体检者172例作为对照组;比较研究组和对照组受检者的血清miR-92a、miR-26b、miR-320水平,比较MACE组和非MACE组患者的一般资料、血清miR-92a、miR-26b、miR-320水平和生化指标;采用多因素Logistic回归分析老年冠心病患者PCI术后MACE的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-92a、miR-26b、miR-320对老年冠心病患者PCI术后MACE的预测价值。结果 研究组患者的血清miR-92a、miR-320水平分别为2.13±0.40、2.44±0.45,明显高于对照组的1.02±0.27、1.01±0.26,miR-26b水平为0.40±0.09,明显低于对照组的1.00±0.26,差异均有统计学意义(P<0.05);MACE组患者的血清miR-92a、miR-320水平分别为4.65±0.61、5.67±0.71,明显高于非MACE组的1.46±0.34、1.58±0.38,miR-26b水平为0.19±0.04,明显低于非MACE组的0.46±0.10,差异均有统计学意义(P<0.05);MACE组患者的总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、心肌肌钙蛋白I (cTnI)、N端脑钠肽前体(NT-proBNP)分别为(4.68±1.15) mmol/L、(2.97±0.43) mmol/L、(1.05±0.26)μg/L、(1 265.31±46.38) ng/L,明显高于非MACE组的(4.09±1.14) mmol/L、(2.42±0.39) mmol/L、(0.30±0.05)μg/L、(772.35±32.25) ng/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-92a、miR-320、TC、LDL-C、c TnI、NT-proBNP均是影响老年冠心病患者PCI术后MACE的危险因素(P<0.05),miR-26b为保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-92a、miR-26b、miR-320预测老年冠心病患者PCI术后MACE的AUC为0.848、0.824、0.743,三者联合预测老年冠心病患者PCI术后MACE的AUC为0.888,三者联合优于各自单独预测(Z联合vs miR-92a=2.675、Z联合vs miR-26b=2.681、Z联合vs miR-320=2.712,P<0.05)。结论 老年冠心病患者血清miR-92a、miR-320水平显著升高,miR-26b显著降低,三者联合可有效提高老年冠心病患者PCI术后MACE的预测价值。

血清微小RNA-26a、微小RNA-21、微小RNA-192在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨血清微小RNA(miR)-26a、miR-21、miR-192在胃癌中的表达及相关性分析。方法:选取2021年1月至2021年12月诊治的102例胃癌患者作为研究对象,并设立其为观察组,按照1∶2配对原则选取51例健康体检者设立为对照组。对比不同组别患者血清miR-26a、miR-21、miR-192,并分析其在不同病理特征胃癌患者中的表达。采用Logistic回归模型构建miR-26a、miR-21、miR-192联合诊断胃癌模型,采用ROC曲线模型分析miR-26a、miR-21、miR-192及三项联合诊断胃癌的曲线下面积(AUC)值、敏感度、特异度。结果:观察组的miR-26a、miR-21、miR-192(20.43±5.96、36.74±12.47、0.15±0.04)均高于对照组(15.23±3.63、23.45±5.25、0.22±0.08,t=5.718、7.286、6.396,P<0.01)。不同TNM分期、肿瘤浸润深度的miR-26a、miR-21、miR-192比较(17.52±4.93、33.82±10.64、0.17±0.03比26.79±0.85、43.13±13.89、0.11±0.01;16.29±4.01、33.79±11.17、0.18±0.03比26.59±0.85、41.13±13.12、0.11±0.01),差异有统计学意义(t=10.534、3.717、11.476、16.177、3.030、15.897,P<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-26a、miR-21、miR-192及三项联合诊断胃癌的AUC值分别为0.734、0.844、0.776、0.956(P<0.05);敏感度分别为50.00%、71.60%、100.00%、90.20%;特异度分别为100.00%、90.20%、56.90%、90.20%。结论:血清miR-26a、miR-21、miR-192在胃癌患者中呈异常表达趋势,监测其水平变化有助于为及时发现胃癌提供依据。

血清微小RNA-26b和3-羧基-4-甲基-5-丙基呋喃戊酮酸表达预测妊娠期糖脂代谢异常的价值分析

目的探讨血清微小RNA-26b(miR-26b)、3-羧基-4-甲基-5-丙基呋喃戊酮酸(CMPF)表达预测妊娠期糖脂代谢异常的价值。方法选取2017年6月—2020年6月于台州市恩泽医疗中心(集团)恩泽医院妇产科就诊的妊娠期糖脂代谢异常孕妇102例为观察组,选择同期在院进行孕检的正常孕妇102例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-26b表达水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清CMPF表达水平;采用Pearson法分析血清miR-26b、CMPF表达水平与妊娠期糖脂代谢指标的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-26b、CMPF水平预测妊娠期糖脂代谢异常的价值。结果观察组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及空腹血糖(FBG)水平、糖化血红蛋白(HbA1C)、miR-26b及CMPF水平均显著高于对照组(t=12.160、15.471、12.426、27.203、34.188、9.187、11.906,均P<0.001),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著低于对照组(t=18.827,P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-26b、CMPF水平与TC、TG、LDL-C、FBG及HbA1C均呈正相关(P<0.05),与HDL-C均呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-26b、CMPF预测妊娠期糖脂代谢异常的曲线下面积分别为0.819、0.877,截断值分别为1.384、379.554 ng/ml,灵敏度分别为67.6%、50.0%,特异度分别为87.3%、97.1%;miR-26b、CMPF联合预测妊娠期糖脂代谢异常的曲线下面积为0.924,灵敏度为66.7%,特异度为97.1%。结论妊娠期糖脂代谢异常孕妇血清miR-26b、CMPF表达水平均显著升高,与妊娠期的糖脂代谢异常过程有关,对其具有一定的预测价值。

外周血miRNA-146a、miRNA-26a在重症急性胰腺炎预后中的价值探讨

目的 探究外周血微小RNA-146a(miR-146a)、微小RNA-26a(miR-26a)在重症急性胰腺炎预后中的价值。方法 选择器工业五二一医院2019年4月—2021年3月收治的119例重症急性胰腺炎患者作为研究对象,根据临床病历资料收集患者的临床一般资料,于患者入院24 h内对患者外周血miRNA-146a、miRNA-26a相对表达量及血常规指标进行检测。根据患者治疗28 d内病情转归情况将其分为生存组和死亡组。通过Logistic多因素回归分析影响重症急性胰腺炎患者预后的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积评估外周血miR-146a及miR-26a水平对患者临床预后的预测价值。结果 死亡组胰周感染所占比例及APACHEⅡ评分、miR-146a相对表达量、miR-26a相对表达量均高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,胰周感染、APACHEⅡ评分、外周血miR-146a及miR-26a相对表达水平偏高均为重症急性胰腺炎患者预后死亡的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示,外周血miR-146a、miR-26a水平单一及联合对重症急性胰腺炎患者预后死亡的ROC预测的曲线下面积(AUC)分别为0.793、0.780、0.883,且外周血miR-146a、miR-26a水平对重症急性胰腺炎患者死亡预后的单一预测效能低于两者联合(P<0.05)。结论 合并胰周感染、APACHEⅡ评分、外周血miR-146a及miR-26a相对表达水平偏高的重症急性胰腺患者死亡率较高,外周血miR-146a、miR-26a相对表达水平均可有效预测重症急性胰腺炎患者的死亡预后。

miR-26a-5p调控PTEN/PI3K/Akt信号通路对高糖诱导视网膜Müller细胞活化及凋亡的影响

目的检测微小RNA-26a-5p(microRNA-26a-5p,miR-26a-5p)对PTEN/PI3K/Akt信号通路及高糖刺激的视网膜Müller细胞凋亡的影响,探讨糖尿病视网膜神经损伤的潜在机制。方法采用不同浓度的葡萄糖刺激视网膜Müller细胞构建糖尿病视网膜神经损伤模型,采用CCK-8及流式细胞仪观察细胞增殖及凋亡情况,细胞转染过表达miR-26a-5p模拟物,Real-time PCR检测miR-26a-5p、PTEN、PI3K、Akt的表达情况,ELISA测定细胞上清液中IL-1β及IL-6的水平,采用Graphpad 8.0软件处理数据。结果高糖刺激视网膜Müller细胞生长活跃,与对照组相比,50 mmol/L高糖刺激Müller细胞活力在12 h、24 h时逐渐增加,48 h时活力减弱,细胞凋亡增加,组间差异有统计学意义(P<0.05)。高糖刺激后视网膜Müller细胞中miR-26a-5p水平下降,PTEN的表达显著升高,PI3K及Akt水平下降,IL-1β及IL-6的水平明显升高,过表达miR-26a-5p后,PTEN水平降低,PI3K/Akt及炎性因子降低,细胞凋亡减少(P<0.01)。结论miR-26a-5p通过调控PTEN/PI3K/Akt的表达,影响炎症因子释放,减轻高糖诱导的视网膜Müller细胞凋亡。

温阳通络方基于miR-26b-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的机制研究

目的:探讨温阳通络方基于微小RNA(miR)-26b-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭的作用。方法:SD大鼠随机分为温阳通络方组和空白血清组。温阳通络方组大鼠给药剂量为4.05 g·kg^(-1)·d^(–1),2次/d,间隔12 h,连续给药3 d,末次给药后1 h腹主动脉取血分离血清;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验筛选温阳通络方含药血清最佳浓度和干预时间;在人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A中分别转染inhibitor NC、miR-26b-3p inhibitor、mimic NC、miR-26b-3p mimic片段,并用温阳通络方含药血清干预,设置正常关节成纤维样滑膜细胞为对照组,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测MH7A细胞中miR-26b-3p的表达;CCK-8实验检测各组细胞的增殖情况;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭情况。结果:不同浓度温阳通络方含药血清均能上调miR-26b-3p的表达(P<0.05),miR-26b-3p的表达呈浓度依赖性升高。温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。miR-26b-3p过表达后,MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05);干扰miR-26b-3p的表达后,MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强(P<0.05)。在干扰miR-26b-3p表达的基础上,温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。结论:温阳通络方通过上调miR-26b-3p的表达抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移、侵袭。

血清miR-26a、miR-4491在胃癌患者中的水平及意义

目的分析胃癌患者血清微小RNA-26a(miR-26a)、微小RNA-4491(miR-4491)的水平及意义。方法选取2022年1月至2023年1月该院收治的90例胃癌患者作为研究组,选取同期收治的90例胃良性肿瘤患者作为对照组。比较两组患者血清miR-26a、miR-4491水平,以及不同临床病理特征胃癌患者血清miR-26a、miR-4491水平。所有胃癌患者均行精准治疗,比较不同疗效患者治疗前后血清miR-26a、miR-4491水平,分析治疗前血清miR-26a、miR-4491水平预测胃癌精准治疗疗效的价值。结果研究组血清miR-26a水平低于对照组,miR-4491水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组不同临床分期、局部浸润深度、淋巴结转移情况的患者血清miR-26a、miR-4491水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。疗效不良患者治疗前、治疗1个月后血清miR-26a水平均低于疗效良好患者,miR-4491水平均高于疗效良好患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前血清miR-26a、miR-4491单项及联合检测预测胃癌精准治疗疗效不良的曲线下面积(AUC)分别为0.774(95%CI:0.674~0.856)、0.728(95%CI:0.624~0.817)、0.923(95%CI:0.847~0.969),联合检测预测的AUC大于2项指标单项检测(P<0.05)。结论胃癌患者血清miR-26a水平降低、miR-4491水平升高,二者血清水平可能与淋巴结转移、胃癌临床分期、局部浸润深度有关,血清miR-26a、miR-4491联合检测对胃癌精准治疗疗效具有良好的预测价值。