微小RNA-26a-5p对氧化型低密度脂蛋白处理的血管平滑肌细胞增殖、迁移和泡沫化的影响

目的探究微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)对动脉粥样硬化(AS)过程中血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和泡沫化的影响。方法使用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理VSMCs,模拟AS过程中的VSMCs细胞模型,向细胞中转染miR-26a-5p模拟物(miR-26a-5p mimic)及其阴性对照(NC mimic),将细胞分为对照组、ox-LDL组、ox-LDL+NC mimic组、ox-LDL+miR-26a-5p mimic组。通过qRT-PCR检测细胞miR-26a-5p表达水平,采用CCK-8和EDU染色检测细胞活力和增殖,通过划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,使用油红O染色观察细胞中脂滴聚集情况,采用免疫荧光实验检测细胞中α-SMA的表达。结果VSMCs中miR-26a-5p水平随着ox-LDL浓度的增加和作用时间的延长而降低。与对照组比较,ox-LDL组VSMCs细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增强,脂滴聚集增多,α-SMA信号减弱,泡沫化程度增强。与oxLDL+NC mimic组比较,ox-LDL+miR-26a-5p mimic组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著减弱,脂滴聚集减少,α-SMA信号增强,泡沫化程度减弱。结论过表达miR-26a-5p可以下调血管平滑肌细胞的增殖、迁移和泡沫化,miR-26a-5p可能成为AS治疗的新靶点。

胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的实验研究

目的:探究胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的作用。方法:通过缺氧/复氧(H/R)诱导H9C2细胞建立心肌细胞损伤模型,细胞分为空白对照组、模型组、胡黄连提取物低浓度(250μg/mL)组、胡黄连提取物中浓度(500μg/mL)组、胡黄连提取物高浓度(1000μg/mL)组、miR-NC组、miR-26a-5p组、anti-miR-NC+胡黄连提取物高浓度组、anti-miR-26a-5p+胡黄连提取物高浓度组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;Western Blot检测cleaved Caspase-3、Bax、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达;ELISA检测MDA、SOD、CAT水平;qRT-PCR检测miR-26a-5p表达。结果:与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率、MDA、p-NF-κB/NF-κB水平及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,细胞增殖能力、SOD、CAT水平及miR-26a-5p表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,胡黄连提取物可显著降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡率及MDA、p-NF-κB/NF-κB水平和cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达,显著升高细胞增殖能力及SOD、CAT水平和miR-26a-5p表达(P<0.05)。抑制anti-miR-26a-5p可逆转胡黄连提取物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。结论:胡黄连提取物可能通过调控miR-26a-5p/NF-κB通路抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激。

微小RNA-199a-5p保护大鼠脑缺血后血-脑屏障完整性

目的探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制。方法通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组12只。应用Ludmila Belayev 12分评分法评估大鼠的神经行为学表现;采用Evans蓝染色检测脑缺血后BBB的完整性;免疫荧光染色检测脑缺血后细胞凋亡;Western blotting技术检测claudin-5、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、p-Akt、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)-A的蛋白表达;利用Real-time PCR检测脑缺血半暗带、梗死区miR-199a-5p、claudin-5及VEGF-A表达水平。结果MiR-199a-5p mimic干预增强MCAO大鼠本体感觉和运动能力。MiR-199a-5p降低脑缺血后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,并增加缺血半暗带中claudin-5和VEGF-A的表达。此外,miR-199a-5p减轻了脑缺血后的炎症。MiR-199a-5p降低脑缺血后BBB渗透性,减少神经细胞凋亡。结论MiR-199a-5p可降低缺血性脑卒中后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,降低炎性细胞因子的表达,减轻缺血性脑卒中对BBB的破坏。

血清微小RNA-499a-5p、成纤维细胞生长因子9、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤患者病情严重程度和预后的关系

目的探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系。方法选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例)。根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例)。以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例)。另外,选取同期体检健康者151例为健康组。分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能。结果轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症并发ALI患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P<0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P<0.05)。miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关。miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估。

非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜神经组织中miR-26a-5p/PTEN表达的影响

目的:研究非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜神经损伤的保护作用并观察其对miR-26a-5p及其靶基因PTEN的影响。方法:构建糖尿病小鼠模型,并进行非诺贝特灌胃,H&E及透射电镜观察视网膜神经损伤情况,Real-time PCR检测视网膜组织中miR-26a-5p的表达,Western blotting检测同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在视网膜组织中的表达,并观察NF-κB及IL-1β的水平及视网膜神经上皮的结构变化。结果:与糖尿病组相比,非诺贝特治疗组糖尿病小鼠视网膜神经节细胞损伤及神经纤维层萎缩明显减轻,视网膜中miR-26a-5p表达升高,PTEN mRNA和蛋白表达下降,炎性介质NF-κB及IL-1βmRNA表达水平下降(P<0.05)。结论:非诺贝特通过上调miR-26a-5p抑制PTEN的表达,降低炎症因子水平,减轻视网膜细胞损伤,发挥糖尿病视网膜神经保护作用。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

原发性肝癌组织长链非编码RNA JPX、微小RNA-371a-5p表达水平及其与患者术后5年预后关系研究

目的:探讨原发性肝癌组织长链非编码RNA(lncRNA)JPX、微小RNA-371a-5p(miR-371a-5p)表达水平及其与患者术后5年预后的关系。方法:选取行根治术治疗的105例原发性肝癌患者的癌组织以及距离癌组织3 cm的癌旁正常组织。RT-qPCR检测组织中lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA JPX与miR-371a-5p的靶向关系。术后随访5年根据生存情况将患者分为生存组(64例)和病死组(41例)。比较肝癌组织和癌旁正常组织lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平。比较生存组和病死组临床病理特征及lncRNA JPX、miR-371a-5p水平。Pearson法分析lncRNA JPX、miR-371a-5p水平与肝内转移、肿瘤分化程度、中国肝癌分期(CNLC)、血管侵犯的相关性。多因素Cox回归分析原发性肝癌患者术后5年预后影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析肝癌组织lncRNA JPX、miR-371a-5p对患者术后5年生存的预测价值。结果:肝癌组织中lncRNA JPX、miR-371a-5p表达水平较癌旁正常组织升高(均P<0.05)。lncRNA JPX可正向调控miR-371a-5p表达。lncRNA JPX、miR-371a-5p高表达患者5年总生存率分别低于lncRNA JPX、miR-371a-5p低表达患者(均P<0.05)。生存组无肝内转移、肿瘤高/中分化、CNLCⅠ-Ⅱ期、无血管侵犯患者比例高于病死组,且lncRNA JPX和miR-371a-5p表达水平低于病死组(均P<0.05)。有肝内转移、肿瘤低分化、CNLCⅢa期、有血管侵犯、lncRNA JPX高表达、miR-371a-5p高表达是原发性肝癌患者术后5年生存的独立危险因素(均P<0.05)。肝癌组织lncRNA JPX与miR-371a-5p呈正相关,两者与肝内转移、CNLC分期、血管侵犯呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关(均P<0.05)。lncRNA JPX、miR-371a-5p联合预测患者术后5年生存的曲线下面积(AUC)大于lncRNA JPX及miR-371a-5p单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:原发性肝癌组织lncRNA JPX、miR-371a-5p呈高表达,lncRNA JPX可正向调控miR-371a-5p,两者是患者术后5年生存的独立危险因素,对术后5年生存的预测价值较高。

miR-26a-5p调控PTEN/PI3K/Akt信号通路对高糖诱导视网膜Müller细胞活化及凋亡的影响

目的检测微小RNA-26a-5p(microRNA-26a-5p,miR-26a-5p)对PTEN/PI3K/Akt信号通路及高糖刺激的视网膜Müller细胞凋亡的影响,探讨糖尿病视网膜神经损伤的潜在机制。方法采用不同浓度的葡萄糖刺激视网膜Müller细胞构建糖尿病视网膜神经损伤模型,采用CCK-8及流式细胞仪观察细胞增殖及凋亡情况,细胞转染过表达miR-26a-5p模拟物,Real-time PCR检测miR-26a-5p、PTEN、PI3K、Akt的表达情况,ELISA测定细胞上清液中IL-1β及IL-6的水平,采用Graphpad 8.0软件处理数据。结果高糖刺激视网膜Müller细胞生长活跃,与对照组相比,50 mmol/L高糖刺激Müller细胞活力在12 h、24 h时逐渐增加,48 h时活力减弱,细胞凋亡增加,组间差异有统计学意义(P<0.05)。高糖刺激后视网膜Müller细胞中miR-26a-5p水平下降,PTEN的表达显著升高,PI3K及Akt水平下降,IL-1β及IL-6的水平明显升高,过表达miR-26a-5p后,PTEN水平降低,PI3K/Akt及炎性因子降低,细胞凋亡减少(P<0.01)。结论miR-26a-5p通过调控PTEN/PI3K/Akt的表达,影响炎症因子释放,减轻高糖诱导的视网膜Müller细胞凋亡。

血清血管紧张素转化酶2及微小RNA-26b-5p对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗术后心肌损伤的预测价值

目的探讨血清血管紧张素转化酶2(ACE2)、微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌损伤的预测价值。方法选取2019年11月至2021年1月在华北石油管理局总医院行PCI手术的急性冠状动脉综合征患者122例,根据PCI术后6个月是否发生心肌损伤,分为心肌损伤组39例和心肌未损伤组83例。收集所有患者临床资料,采用酶联免疫吸附法检测血清ACE2水平、实时荧光定量PCR法检测血清miR-26b-5p水平,Pearson法分析血清ACE2与miR-26b-5p水平的相关性,受试者工作特征曲线评价血清ACE2、miR-26b-5p水平对急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的预测价值。结果与心肌未损伤组相比,心肌损伤组术后6个月肌钙蛋白I(cTnI)、术后6个月肌酸激酶同工酶(CK-MB)较高,差异有统计学意义(t=40.656、27.486,P<0.05)。与心肌未损伤组相比,心肌损伤组血清ACE2水平较高,血清miR-26b-5p水平较低,差异均有统计学意义(t=11.159、14.842,P<0.05);血清miR-26b-5p与ACE2水平呈负相关(r=-0.567,P<0.05);血清ACE2、miR-26b-5p水平预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.796、0.878,敏感度分别为87.20%、85.50%,特异度分别为60.20%、82.10%;两者联合预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的AUC为0.916,敏感度、特异度分别为89.70%、79.50%。结论急性冠状动脉综合征PCI术后心肌损伤患者血清ACE2呈高表达,血清miR-26b-5p呈低表达,ACE2、miR-26b-5p可预估急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤,两者联合预测价值较好。

SCN2A基因突变相关癫痫患儿外周血miRNA-15a-5p表达变化及其与病情的关系

目的观察SCN2A基因突变相关癲痫患儿外周血miRNA-15a-5p水平变化,分析外周血miRNA-15a-5p相对表达量与SCN2A基因突变相关癲痫患儿病情的相关性。方法纳入同期住院癫痫患儿20例,其中SCN2A基因突变的癫痫患儿10例(突变组)、非SCN2A基因突变的癫痫患儿(非突变组)10例;突变组中,癫痫控制良好4例、难治性癫痫6例;SCN2A基因突变位点在钠离子通道的关键区6例、连接区4例。另择同期体检健康儿童10例作为对照组。采用qRT-PCR检测上述三组外周血miRNA-15a-5p。采用Spearman相关分析外周血miRNA-15a-5p水平与癫痫患儿病情的相关性。结果与非突变组和对照组相比,突变组患儿外周血miRNA-15a-5p相对表达量升高(P<0.001);在突变组中,与SCN2A基因突变位点在钠离子通道的连接区患儿相比,在关键区的患儿外周血miRNA-15a-5p表达升高,且表达量与突变位点是否在关键区相关(r=0.71,P<0.05)。与癫痫控制良好患儿相比,难治性癫痫患儿外周血miRNA-15a-5p相对表达量升高,且表达量与患儿病情相关(r=0.85,P<0.05)。结论SCN2A基因突变相关癫痫患儿外周血中miRNA-15a-5p相对表达量升高,其表达量高的癫痫患儿病情重。

微小RNA-133a-5p在丙泊酚防治大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及作用机制

目的观察微小RNA-133a-5p(miR-133a-5p)在丙泊酚防治大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中的作用,并探讨其可能作用机制。方法①丙泊酚对I/R大鼠肝功能及肝组织miR-133a-5p、有丝分裂原激活蛋白激酶6(mitogen-activated protein kinase 6,MAPK6)mRNA表达的影响观察:取18只大鼠分为丙泊酚组、模型组及对照组,每组6只。丙泊酚组及模型组对肝脏组织进行缺血再灌注操作,丙泊酚组在缺血再灌注操作的同时注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)。再灌注结束时采集各组大鼠下腔静脉血4 mL,采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT),采血后处死各组大鼠分离肝脏组织,采用qRT-PCR法检测大鼠肝组织miR-133a-5p、MAPK6 mRNA。②miR-133a-5p抑制剂联合丙泊酚对I/R大鼠肝功能及肝组织miR-133a-5p、MAPK6mRNA表达的影响观察:另取24只大鼠分为甲、乙、丙、丁组,每组6只。四组均对肝脏组织进行缺血再灌注操作,甲组在缺血再灌注操作的同时注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)及miR-133a-5p抑制剂,乙组、丙组在缺血再灌注操作的同时分别注射丙泊酚0.6 mg/(kg·min)、丙泊酚+等量生理盐水,丁组不做任何处理。再灌注结束时采集各组大鼠下腔静脉血4 mL,采用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST,采血后处死各组大鼠分离肝脏组织,采用qRT-PCR法检测四组大鼠肝组织miR-133a-5p、MAPK6mRNA。结果与对照组相比,模型组大鼠血清AST、ALT活性升高,肝脏组织miR-133a-5p相对表达量降低、MAPK6mRNA相对表达量升高(P均<0.01);与模型组相比,丙泊酚组大鼠血清AST、ALT水平降低,肝组织miR-133a-5p相对表达量升高、MAPK6mRNA相对表达量降低(P均<0.05)。与乙组相比,甲组大鼠血清ALT和AST水平高,肝组织MAPK6mRNA相对表达量高(P均<0.01);与乙和丙组相比,丁组大鼠血清ALT和AST水平升高,肝组织MAPK6mRNA相对表达量高(P均<0.01)。结论注射丙泊酚后肝脏I/R大鼠的肝损伤程度减轻,肝脏组织miR-133a-5p表达升高、MAPK6 mRNA表达降低。抑制miR-133a-5p表达可逆转丙泊酚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的防治作用。丙泊酚可能通过促进肝脏组织miR-133a-5p表达,抑制肝组织MAPK6 mRNA表达,减轻大鼠的肝脏I/R损伤。

微小RNA-34a-5p通过靶向鼠双微体4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用

目的探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)通过靶向鼠双微体4(MDM4)抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用。方法THP-1人单核细胞复苏后,培养分化为巨噬细胞。设立空白对照组。剩余细胞加入人源氧化低密度脂蛋白,孵育48 h,分化为巨噬泡沫细胞。设立动脉粥样硬化(AS)对照组。miR-34a-5p质粒转染,设为miR-34a-5p质粒转染组。每组24个重复。比较三组巨噬细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)蛋白及活性氧(ROS)水平,MDM4阳性率。结果空白对照组凋亡率为(2.55±0.32)%,AS对照组凋亡率为(28.16±4.23)%,miR-34a-5p转染组为(13.48±1.66)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AS对照组高于空白对照组与miR-34a-5p转染组,miR-34a-5p转染组高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组MDA、SOD蛋白及ROS水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);AS对照组MDA、ROS水平最高,SOD水平最低,其次为miR-34a-5p转染组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组MDM4阳性率为(8.33±0.35)%,AS对照组为(29.26±3.48)%,miR-34a-5p转染组为(14.26±1.59)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-34a-5p可下调MDM4,进而抑制巨噬细胞氧化应激损伤。

妊娠期糖尿病患者血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平表达对妊娠结局预测价值研究

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码RNA (long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小RNA-33a-5p (miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值。方法 选取2021年8月~2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素。结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p (1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34%)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=14.835,15.140,23.011,均P<0.05)。不良妊娠结局组血清LncRNADANCR水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p (2.00±0.58),FBG (8.97±0.66mmol/L),FINS (18.63±1.31pmol/ml)和HOMAIR (7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895~17.961,均P<0.05)。LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897。GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P<0.05),miR-33a-5p与FBG,FINS,HOMA-IR呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均P<0.05)。LncRNA DANCR是影响GDM患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95%CI:0.693~0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95%CI:1.444~5.225,P=0.002)。结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素。

结直肠癌患者血浆lncRNA-FER1L4、miR-18a-5p水平与临床特征及术后复发的关系

目的探讨血浆长链非编码RNA-FER1样家族成员4(lncRNA-FER1L4)、微小RNA-18a-5p(miR-18a-5p)水平与结直肠癌患者临床特征及术后复发的关系。方法选取2019年6月至2022年6月在江苏省宿迁市第一人民医院住院并进行手术的110例结直肠癌患者作为研究对象,根据结直肠癌是否复发分为复发组和无复发组。收集患者临床特征资料,检测血浆lncRNA-FER1L4、miR-18a-5p水平,进行生物信息学分析。采用Pearson相关分析结直肠癌术后复发患者血浆lncRNA-FER1L4水平与miR-18a-5p水平的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆lncRNA-FER1L4、miR-18a-5p对结直肠癌患者术后复发的预测价值。采用多因素Logistic回归分析结直肠癌患者术后复发的危险因素。结果低肿瘤分化、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移和脉管浸润患者血浆lncRNA-FER1L4水平低于中高肿瘤分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移和无脉管浸润患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。低肿瘤分化、TNM分期为Ⅲ期有淋巴结转移和脉管浸润患者血浆miR-18a-5p水平高于中高肿瘤分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移和无脉管浸润患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。无复发组有72例患者,复发组有38例患者。复发组血浆lncRNA-FER1L4水平低于无复发组,miR-18a-5p水平高于无复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析结果显示,lncRNA-FER1L4与miR-18a-5p可能存在靶向关系。Pearson相关分析结果显示,结直肠癌术后复发患者血浆lncRNA-FER1L4水平和miR-18a-5p水平呈负相关(r=-0.488,P=0.002)。ROC曲线分析结果显示,lncRNA-FER1L4、miR-18a-5p单独及2项指标联合预测结直肠癌患者术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.899、0.843、0.944。2项指标联合预测的AUC高于lncRNA-FER1L4、miR-18a-5p单独预测的AUC(Z=2.859、3.311,P<0.05)。复发组低肿瘤分化、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移和脉管浸润的患者比例高于无复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血浆miR-18a-5p水平升高、lncRNA-FER1L4水平降低是结直肠癌患者术后复发的危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌患者血浆lncRNA-FER1L4水平降低,miR-18a-5p水平升高,二者与结直肠癌患者临床特征和术后复发有关,且可作为结直肠癌患者术后复发的辅助预测指标。

免疫性血小板减少症患儿 T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p 和微小RNA-181a-5p表达水平检测及临床意义

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)患儿T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)和微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及临床意义。方法:以158例ITP患儿为ITP组,依据临床分型不同分为慢性ITP组(34例)、持续性ITP组(60例)和新诊断ITP组(64例)。另选取同期健康儿童102例为对照组。所有患儿均给予静脉滴注人免疫球蛋白及口服醋酸泼尼松片等常规治疗,均治疗5 d。比较ITP组与对照组全血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))细胞及血清甲状腺自身抗体[甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较慢性ITP组、持续性ITP组和新诊断ITP组患儿全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较ITP患儿治疗前、治疗5 d后全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。结果:与对照组比较,ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平更低,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平更高(均P<0.05)。慢性ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平低于持续性ITP组和新诊断ITP组,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平高于持续性ITP组和新诊断ITP组(均P<0.05)。与治疗前比较,治疗5 d后ITP患儿全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平升高,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平降低(均P<0.05)。结论:ITP患儿存在T淋巴细胞亚群失衡、甲状腺自身抗体和miR-106b-5p高表达以及miR-181a-5p低表达情况。治疗期间积极检测患儿全血T淋巴细胞亚群及血清甲状腺自身抗体、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平,有助于患儿的疗效评估。

LncRNA SNHG5/miR-26a-5p/MTDH信号轴促进结直肠癌转移的机制研究

背景与目的:长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5(long non-coding RNA small nucleolar RNA host gene 5,lncRNA SNHG5)在多种癌症中发挥促癌作用,但其对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的影响和调节机制尚不清楚。本研究旨在探究lncRNA SNHG5/miR-26a-5p/异粘蛋白(metadherin,MTDH)信号轴促进CRC转移的机制。方法:分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的数据,探索CRC中异常表达的lncRNA并进行生存分析。收集2020年10月—2021年10月经手术切除的100例CRC、癌旁组织样本及患者的完整临床资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lncRNA SNHG5、miR-26a-5p表达水平,采用免疫组织化学法检测MTDH的表达水平,分析lncRNA SNHG5在CRC中的相对表达水平与临床病理学特征及生存期的关系。通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测、克隆形成、划痕、transwell实验及体内异种移植实验检测lncRNA SNHG5对CRC细胞增殖、迁移及侵袭的影响,通过蛋白质印迹法(Western blot)和免疫组织化学检测CRC细胞转移、上皮-间充质转化相关分子表达水平与lncRNA SNHG5表达水平的关系。通过RNA下拉实验、双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫共沉淀实验探究SNHG5与miR-26a-5p、MTDH与miR-26a-5p在物理上的相互作用,通过CCK-8、EdU、transwell实验验证三者在功能上的相互关系,采用Western blot检测分析SNHG5、miR-26a-5p、MTDH表达对迁移、侵袭相关分子的影响。结果:TCGA数据库分析结果显示,lncRNA SNHG5在CRC中显著上调。RTFQ-PCR和免疫组织化学检测结果显示,CRC组织中lncRNA SNHG5、MTDH水平显著上调(P<0.05),miR-26a-5p水平下降(P<0.05),SNHG5高表达的样本中MTDH水平也较高。浆膜及浆膜外浸润、远处转移、淋巴结转移、TNMⅢ期的CRC组织lncRNA SNHG5表达量高于浆膜下浸润、无远处转移、无淋巴结转移、TNMⅠ~Ⅱ期的组织,差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析结果显示,lncRNA SNHG5高表达与总生存率显著相关(P<0.05)。过表达lncRNA SNHG5能够提升CRC细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,促进移植瘤生长和肺转移,提高Ki-67增殖指数和波形蛋白(vimentin)的相对表达水平(P<0.05),降低E钙粘蛋白(E-cadherin)的相对表达水平(P<0.05),而抑制lncRNA SNHG5表达后CRC细胞的发展受到抑制。RNA下拉实验、双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫共沉淀实验证实SNHG5与miR-26a-5p、MTDH及miR-26a-5p存在物理上的相互作用,在lncRNA SNHG5过表达细胞中上调miR-26a-5p或下调MTDH表达可部分逆转lncRNA SNHG5对CRC细胞增殖、迁移、侵袭及相关分子表达水平的影响。结论:LncRNA SNHG5在CRC组织和细胞中表达上调,其高表达与肿瘤进展及生存不良有关,可作为miR-26a-5p的分子海绵调节MTDH表达促进SW620细胞增殖和转移。

miR-26a-5p调控SLC26A4挽救听力减退在耳聋中的作用

目的检测miR-26a-5p和SLC26A4在耳聋小鼠和听力损失小鼠中的表达变化,以此研究miR-26a-5p调控SLC26A4挽救听力减退的作用。方法通过构建小鼠听力损失模型和小鼠耳聋模型,使用听性脑干反应测试检测小鼠右耳的听力来鉴定模型的构建是否成功。使用qPCR实验检测miR-26a-5p和SLC26A4在小鼠听力损失和耳聋后的相对表达量,通过TargetScan网站预测miR-26a-5p靶向结合SLC26A4的具体位点,对小鼠注射miR-26a-5p和SLC26A4的干扰和过表达载体,继续检测miR-26a-5p和SLC26A4的表达变化。结果在小鼠听力损失和耳聋后,miR-26a-5p表达显著降低(P<0.05),而SLC26A4表达明显升高(P<0.05),在小鼠注射antagomir后,miR-26a-5p明显下调(P=0.047),同时SLC26A4显著上调(P=0.014),同时小鼠听力阈值明显降低(P<0.05),而在注射miR-26a-5p agomir后结果恰恰相反。结论miR-26a-5p可以通过SLC26A4从而降低听力减退以此抑制耳聋的发生。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

血清微小RNA-7a-5p及前蛋白转化酶枯草溶菌素9水平与急性胰腺炎患者病情严重程度及预后的关系

目的分析血清微小RNA-7a-5p(miR-7a-5p)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)水平与急性胰腺炎(AP)患者病情严重程度及预后的关系。方法选取2020年1月至2022年1月重庆医科大学附属巴南医院收治的185例AP患者为AP组,另选取同期本院体检健康者53例为对照组。AP患者根据病情严重程度分为轻症组(81例)、中度重症组(53例)、重症组(51例)。收集AP患者的临床资料,检测所有受试者血清miR-7a-5p、PCSK9水平。分析AP患者预后不良的危险因素以及血清miR-7a-5p、PCSK9水平单独与联合预测AP患者预后不良的价值。结果AP组血清miR-7a-5p、PCSK9水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。轻症组、中度重症组、重症组血清miR-7a-5p、PCSK9水平逐渐升高[miR-7a-5p:(2.12±0.43)、(2.51±0.33)、(3.00±0.43);PCSK9:(36.1±2.6)、(38.6±2.2)、(41.3±2.2)μg/L],差异均有统计学意义(均P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,重症AP、重症监护病房停留时间延长和红细胞体积分布宽度、血肌酐、C反应蛋白、miR-7a-5p、PCSK9水平升高为AP患者预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。受试者工作特征曲线分析显示,血清miR-7a-5p、PCSK9水平单独与联合预测AP患者预后不良的曲线下面积分别为0.780、0.773、0.877,二者联合预测AP患者预后不良的曲线下面积大于单独预测(均P<0.05)。结论AP患者血清miR-7a-5p、PCSK9水平升高与病情严重程度和预后不良有关,二者联合对AP患者预后不良的辅助预测价值较高。

微小RNA-199a-5p对非小细胞肺癌紫杉醇耐药性的影响及其机制

目的 探讨微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞紫杉醇(PTX)耐药性的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析人NSCLC细胞株A549和耐药NSCLC细胞株A549/PTX中miR-199a-5p相对表达水平;采用细胞增殖试剂盒(CCK-8)分析A549和A549/PTX细胞对PTX的耐药性;双荧光素酶实验验证miR-199a-5p与热休克因子-1(HSF-1)的靶向关系。采用CCK-8和TUNEL分别检测细胞增殖、凋亡情况;采用Western blotting检测细胞中HSF-1、热休克蛋白(HSP)90、HSP60、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果 A549/PTX细胞对PTX的耐药性显著高于A549细胞(P<0.05),且A549/PTX细胞对PTX的半数抑制浓度(IC_(50))高于A549细胞。耐药细胞株A549/PTX中miR-199a-5p表达显著下调,HSF-1 mRNA显著上调(P<0.05)。在耐药细胞株A549/PTX中miR-199a-5p负靶向调控HSF-1表达(P<0.05)。在A549/PTX细胞中过表达miR-199a-5p或抑制HSF-1可降低PTX的IC_(50)值,促进细胞凋亡,下调HSF-1、HSP90、HSP60和P-gp蛋白水平(P<0.05);而过表达HSF-1则可在一定程度上逆转上调miR-199a-5p对A549/PTX细胞的影响(P<0.05)。结论 miR-199a-5p通过抑制HSF-1减弱NSCLC细胞PTX耐药性。